Skillnaden mellan fenyletanolglykosider i tabellcistancher Herba från 2 värdar.
May 30, 2025
Cistanche deserticolaär en flerårig holoparasitisk växt som tillhör familjen Orobanchaceae. Det är den torkade köttiga stjälken täckt med fjällliknande blad avCistanche deserticola YC Ma[1-2]. Denna växt är huvudsakligen distribuerad i Inre Mongoliet, Xinjiang och Gansu, där den parasiterarHaloxylon ammodendron (CA Mey.) Bunge, en Chenopodiaceae xerofytisk ökenväxt [3-4]. De primära aktiva komponenterna iCistanche deserticolainkluderar fenyletanoidglykosider, iridoider och polysackarider [5-7], som uppvisar egenskaper som reproduktionsfunktionsskydd, antioxidation och leverskydd [8-10]. Med över 2 000 års användning i Kina, rankas den först i recept på traditionell kinesisk medicin som syftar till att stärka vitalitet och på andra plats i anti-aging formuleringar [11]. Men på grund av överskörd och miljöförstöring, vilda resurser avCistanche deserticolaär på randen av utrotning, vilket leder till att den klassificeras som en nationellt skyddad växt (kategori II) och att den inkluderas iInternationell lista över vilda växtskydd[12]. För att komma till rätta med obalansen mellan utbud och efterfrågan på läkemedelsmarknaden har konstgjord odling blivit avgörande för en hållbar utveckling avCistanche deserticolaindustri.
Cistanche deserticola extrakt till salu
Nyligen genomförda studier har rapporterat framgångsrik ympning avCistanche deserticolapåAtriplex canescens[13], en vintergrön buske från familjen Chenopodiaceae. Vanligtvis kallad den "biologiska avsaltaren",Atriplex canescensär ett högkvalitativt trädslag för salt-alkalisk jordförbättring [14]. OdlaCistanche deserticolapåAtriplex canescenserbjuder betydande fördelar, såsom hög avkastning och överlägsen kvalitet. Som ett resultat, utvärdera kvaliteten påAtriplex canescens-Cistanche deserticolahar blivit en forskningshotspot [15-16]. Tidigare forskning har främst fokuserat på de medicinska egenskaperna hos torkadCistanche deserticola, medan studier av de aktiva komponenterna i sin färska form förblir knappa. Särskilt efter införandet avCistanche deserticolasom ett livsmedel och läkemedelssubstans under prövningshanteringssystemet (Meddelande nr. 9 från National Health Commission, 2023), har dess utveckling och användning som en medicinsk ört med dubbla ändamål fått stor uppmärksamhet inom området traditionell kinesisk medicin [17]. FärskCistanche deserticolaär gynnad för sin utmärkta smak och bekvämlighet, vilket gör den mycket lovande för utveckling. Färska medicinska material avser obearbetade färska växt-, djur- eller svampämnen med terapeutiska eller hälsofrämjande egenskaper. Bland de 2 000 vanliga kinesiska medicinörterna är 486 färska sorter [18].
Metoden med ultrapresterande vätskekromatografi-trippelkvadrupol tandemmasspektrometri (UPLC-QQQ-MS) är mycket känslig, vilket gör den lämplig för att detektera lågkoncentrations- och komplexa komponenter [19]. För att ta itu med frågan om högt vatteninnehåll iCistanche deserticola, där fenyletanoidglykosider är benägna att enzymatisk hydrolys vilket resulterar i minskat innehåll, bevarar en enzyminaktiverande torkningsmetod effektivt innehållet av fenyletanoidglykosid [20]. Denna studie använder UPLC-QQQ-MS för att utvärdera 8 fenyletanoidglykosider, inklusive echinakosid och acteosid, som viktiga aktiva komponenter i färskaCistanche deserticolafrån två värdväxter [21-22]. Studien undersöker skillnader i komponentinnehållet i juice och rester från färskaCistanche deserticolaodlas på två värdar. Dessutom utsattes återstoden för enzyminaktiveringsbehandling vid 80 grader i 5 minuter, följt av torkning, för att ytterligare jämföra retentionen av aktiva komponenter iCistanche deserticola. Resultaten syftar till att tillhandahålla vetenskapliga bevis och tekniskt stöd för det dubbla värdet av färskCistanche deserticolaoch optimering av dess bearbetningstekniker.
1 Instrument och material
1.1 Instrument
1290-6460 ultrapresterande vätskekromatografi-trippel kvadrupol tandemmasspektrometer (Agilent Technologies, USA).
AL104 elektronisk analytisk våg (Mettler-Toledo, Schweiz).
H-2050R centrifug (Changsha Xiangyi Centrifuge Instrument Co., Ltd.).
SB25-12DTD ultraljudsrengörare (Ningbo Xinzhi Biological Technology Co., Ltd.).
1.2 Material
DeAtriplex canescens-Cistanche deserticolaochHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolaprover samlades in i mars, april och maj 2024 frånCistanche deserticolaodlingsbas i Xiquan Town, Jingtai County, Gansu-provinsen. Proverna identifierades av professor Sun Xuegang från Gansu Agricultural University som köttiga stjälkar avCistanche deserticola YC Mamed fjällblad.
Referensstandarder:
Echinakosid (batchnummer: 23031605; renhet: 99,74%).
Akteosid (satsnummer: 21102103; renhet: 98,83%).
Cistanosid A (satsnummer: 23041703; renhet: 98,30%).
Isoakteosid (satsnummer: 23052508; renhet: 99,90%).
2'-acetylakteosid (satsnummer: 210053102; renhet: 97,12%).
Salidroside (batchnummer: 22051208; renhet: 98,43%).
Cistanoside B (batchnummer: 20120903; renhet: 98,57%).
Tubulosid A (satsnummer: 21060302; renhet: 93,24%).
Alla köptes från Chengdu Pfeide Biotechnology Co., Ltd.
Reagens:
Metanol (satsnummer: O1140576, kromatografiskt ren).
Acetonitril (satsnummer: S3641440, kromatografiskt ren). Båda köptes från Shanghai Anpu Experimental Technology Co., Ltd.
Myrsyra (batchnummer: 20230710, kromatografiskt ren) köptes från Tianjin Kermio Chemical Reagent Co., Ltd.
Renat vatten (Hangzhou Wahaha Group Co., Ltd.).
2 Metoder och resultat
2.1 Metoder
2.1.1 Provberedning
Tre partier avAtriplex canescens-Cistanche deserticola(batchnummer: 20240330-1, 20240420-1, 20240510-1) och tre batcher avHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticola(batchnummer: 20240330-2, 20240420-2, 20240510-2), totalt sex batcher, med fem plantor per batch, samlades in. Plantorna tvättades rena med vatten.
Bearbetning:
Proverna krossades och pressades, vilket resulterade i juice och rester från de två värdhärleddaCistanche deserticola.
Återstoden torkades under två betingelser:
Utan enzyminaktivering.
Med enzyminaktivering (5 minuter vid 80 grader i ugn).
De torkade återstoderna lagrades för ytterligare analys. Varje sats av medicinskt material delades in i fyra grupper, som visas i tabell 1.
Fliken. 1 Exempel på information om gruppering
| Grupp | Typ | Atriplex canescens-Cistanche deserticola | Haloxylon ammodendron-Cistanche deserticola |
|---|---|---|---|
| ① | Återstod | C1 | S1 |
| ② | Juice | C2 | S2 |
| ③ | Enzyminaktiverad rest (5 min torkning, krossad) | C3 | S3 |
| ④ | Icke-enzym-inaktiverad rest (torkad och krossad) | C4 | S4 |
2.1.2 Kromatografiska förhållanden
Kolumn: Agilent Zorbax Eclipse Plus C18-kolonn (2,1 mm × 150 mm, 1,8 μm).
Flödeshastighet: 0,3 ml/min.
Injektionsvolym: 1 μL.
Kolumntemperatur: 35 grader.
Mobil fas: 0,1 % myrsyra i vatten (A) och acetonitril (B).
Analystid: 12 minuter.
Elueringsgradient:
0–1,5 min: 10 % → 20 % B.
1,5–3 min: 20 % → 30 % B.
3–5 min: 30 % → 32 % B.
5–8 min: 32 % → 38 % B.
8–9,6 min: 38 % → 10 % B.
9,6–12 min: 10 % B.
Kromatogrammen för de blandade referensstandarderna och testproverna visas i figur 1.(Bekräfta om den mobila fasen är 0,01 % myrsyra i vatten (A) och acetonitril (B).)
Fig. 1 Kromatogram av referensämnen(A) och prov(B) 1−salidrosid; 2−echinakosid; 3−cistanosidA; 4−tubulosidA; 5-akteosid; 6-isoakteosid; 7-2'-acetylakteosid; 8-tubulosid B.
2.1.3 Masspektrometriförhållanden
Typ jonkälla: Elektrosprayjonisering (ESI).
Läge: Multipel reaktionsövervakning (MRM) i negativ jonläge.
Jonkällans temperatur: 350 grader.
Nebulisatortryck: 35 psi.
Kollisionsgas: Kväve, inställt på medelhög nivå.
Masspektrometriparametrarna för komponenterna som ska analyseras visas i tabell 2.
2.1.4 Beredning av blandad standardlösning
Väg noggrant lämpliga mängder av referensstandardernaechinakosid, akteosid, cistanosid A, isoakteosid, 2'-acetylakteosid, salidroside, cistanosid B, ochtubulosid A, och placera dem i 10 ml bärnstensfärgade reagensflaskor. Tillsätt 50 % metanol för att framställa en blandad standardlösning med en koncentration av 0,2 mg·mL⁻¹ och förvara den för senare användning.
2.1.5 Beredning av testlösningar
Väg noggrant 0,2 g färskAtriplex canescens-Cistanche deserticolaåterstod (Cl), färskHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolaåterstod (SI), torkadesAtriplex canescens-Cistanche deserticolaåterstoder (C3, C4) och torkadesHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolarester (S3, S4). Placera proverna i 10 mL bärnstensfärgade mätkolvar, tillsätt 50 % metanol, ställ till volymen och registrera massan. Blötlägg i 0,5 timmar, ultraljudsbehandling i 40 minuter (250 W, 35 kHz), kyl till rumstemperatur och registrera massan igen. Använd 50 % metanol för att kompensera för eventuell viktminskning, blanda väl, centrifugera och låt lösningen sedimentera. Filtrera supernatanten genom ett 0,22 μm mikroporöst membran för att erhålla filtratet.
För färskaAtriplex canescens-Cistanche deserticolajuice (C2) och färskHaloxylon ammodendron-Cistanche deserticolajuice (S2), ta 10 mL av varje, väg noggrant, blanda väl, centrifugera och låt lösningen sedimentera. Filtrera supernatanten genom ett 0,22 μm mikroporöst membran för att erhålla filtratet.
2.1.6 Linjäritetsstudie
Lämpliga mängder av den blandade standardlösningen framställd i avsnitt 2.1.4 späddes för att skapa en koncentrationsgradient på51,2, 128,0, 320,0, 800,0, 4 000,0 och 20 000,0 ug·L⁻¹. Prover injicerades sekventiellt från låga till höga koncentrationer enligt de förhållanden som beskrivs i avsnitt 2.1.2 och 2.1.3. En linjär regression utfördes med användning av injektionskoncentrationen som X-axeln och topparean som Y-axeln. De linjära sambanden mellan de åtta komponenterna visas i tabell 3.
Tab. 3 Linjära relationsundersökningsresultat av 8 komponenter i tabellen Cistanches Herba
| Komponent | Regressionsekvation | r | Linjärt område (ug·L⁻¹) |
|---|---|---|---|
| Echinacoside | Y = 16.410 × X − 0.804 | 0.9996 | 51.2–20,000.0 |
| Akteosid | Y = 102.794 × X − 55.793 | 0.9998 | 51.2–20,000.0 |
| Isoakteosid | Y = 31.007 × X − 45.169 | 0.9999 | 51.2–20,000.0 |
| 2'-acetylakteosid | Y = 110.235 × X − 8.953 | 0.9992 | 51.2–20,000.0 |
| Salidroside | Y = 19.678 × X − 0.557 | 0.9993 | 51.2–20,000.0 |
| Tubulosid A | Y = 26.785 × X − 13.630 | 0.9997 | 51.2–20,000.0 |
| Tubulosid B | Y = 71.810 × X − 0.993 | 0.9998 | 51.2–20,000.0 |
| Cistanoside A | Y = 0.578 × X + 1.531 | 0.9994 | 51.2–20,000.0 |
2.1.7 Precisionstest
Den blandade standardlösningen framställd under betingelserna i avsnitt 2.1.4 späddes med 50 % metanol och injicerades sex på varandra följande gånger under betingelserna i avsnitt 2.1.2 och 2.1.3. De relativa standardavvikelserna (RSD) för toppområdena förechinakosid, akteosid, isoakteosid, 2'-acetylakteosid, salidroside, cistanosid B, tubulosid A, ochcistanosid Avar 0,95 %, 1,47 %, 0,56 %, 1,05 %, 0,93 %, 1,08 %, 1,19 % respektive 0,91 %, vilket indikerar god precision.
2.1.8 Stabilitetstest
Ett enda prov avCistanche deserticola(S4) framställdes under de förhållanden som beskrivs i avsnitt 2.1.5. Testlösningen injicerades och analyserades vid 0, 2, 4, 8, 12 och 24 timmar under de förhållanden som beskrivs i avsnitt 2.1.2 och 2.1.3. RSD:erna för toppområdena förechinakosid, akteosid, isoakteosid, 2'-acetylakteosid, salidroside, cistanosid B, tubulosid A, ochcistanosid Avar 1,46 %, 0,79 %, 0,95 %, 1,29 %, 1,22 %, 0,56 %, 0,49 % respektive 1,18 %, vilket indikerar att provlösningen var stabil inom 24 timmar.
2.1.9 Repeterbarhetstest
En enda sats avCistanche deserticola(S4) prov (batchnummer: 20240420-2) bereddes i sex parallella testlösningar under de förhållanden som beskrivs i avsnitt 2.1.5. Proverna injicerades och analyserades under de förhållanden som beskrivs i avsnitt 2.1.2 och 2.1.3. RSD:erna för innehållet förechinakosid, akteosid, isoakteosid, 2'-acetylakteosid, salidroside, cistanosid B, tubulosid A, ochcistanosid Avar 1,26 %, 0,98 %, 1,55 %, 1,06 %, 1,33 %, 0,99 %, 1,65 % respektive 0,95 %, vilket visar god repeterbarhet.
2.1.10 Återställningstest
Nio prover från samma parti avCistanche deserticola(S4, batchnummer: 20240420-2) framställdes med 0,1 g per prov. Proverna delades in i tre grupper, med tre replikat per grupp. Varje grupp spetsades med 80 %, 100 % och 120 % av referensstandardinnehållet iCistanche deserticolaprov. Testlösningarna framställdes enligt den metod som beskrivs i avsnitt 2.1.5 och analyserades under förhållanden i avsnitt 2.1.2 och 2.1.3. Återvinningen av de åtta fenyletanoidglykosiderna beräknades och resultaten visas i tabell 4.
Tab. 4 Återställer 8 testade komponenter i Cistanches Herba
| Komponent | Exempelinnehåll (mg) | Spetsad (mg) | Uppmätt (mg) | Genomsnittlig återhämtning (%) | RSD (%) |
|---|---|---|---|---|---|
| Echinacoside | 0.513 8 | 0.410 1 | 0.911 2 | 99.85 | 1.37 |
| Echinacoside | 0.513 8 | 0.513 8 | 1.015 2 | 99.88 | 0.95 |
| Echinacoside | 0.513 8 | 0.616 5 | 1.129 4 | 99.85 | 1.06 |
| Akteosid | 0.421 5 | 0.337 2 | 0.759 6 | 99.90 | 1.02 |
| Akteosid | 0.421 5 | 0.421 5 | 0.843 5 | 99.87 | 1.18 |
| Akteosid | 0.421 5 | 0.505 8 | 0.926 7 | 99.84 | 1.24 |
| Isoakteosid | 0.327 1 | 0.261 7 | 0.588 6 | 99.85 | 0.86 |
| Isoakteosid | 0.327 1 | 0.327 1 | 0.654 2 | 99.86 | 1.05 |
| Isoakteosid | 0.327 1 | 0.392 5 | 0.719 1 | 99.84 | 1.13 |
| 2'-acetylakteosid | 0.110 2 | 0.088 2 | 0.198 3 | 99.87 | 1.15 |
| 2'-acetylakteosid | 0.110 2 | 0.110 2 | 0.220 1 | 99.86 | 1.09 |
| 2'-acetylakteosid | 0.110 2 | 0.132 2 | 0.242 4 | 99.85 | 1.21 |
| Salidroside | 0.081 6 | 0.065 3 | 0.146 7 | 99.84 | 1.18 |
| Salidroside | 0.081 6 | 0.081 6 | 0.163 1 | 99.85 | 1.02 |
| Salidroside | 0.081 6 | 0.097 9 | 0.179 7 | 99.84 | 1.17 |
| Tubulosid B | 0.072 3 | 0.057 9 | 0.130 0 | 99.86 | 1.09 |
| Tubulosid B | 0.072 3 | 0.072 3 | 0.144 1 | 99.86 | 1.05 |
| Tubulosid B | 0.072 3 | 0.086 8 | 0.159 2 | 99.84 | 1.24 |
| Tubulosid A | 0.043 8 | 0.035 0 | 0.078 5 | 99.86 | 1.16 |
| Tubulosid A | 0.043 8 | 0.043 8 | 0.087 5 | 99.86 | 1.02 |
| Tubulosid A | 0.043 8 | 0.052 5 | 0.096 2 | 99.84 | 1.15 |
