Abstrakt

MålFör att undersöka mekanismen för Cistanche fenyletanolglykosider (CPhGs) på medfödd immunfunktion, tumörtillväxt och tumörcellsapoptos hos nakna möss som bär läkemedelsresistent osteosarkom.MetoderHuman osteosarkom MG-63 läkemedelsresistent cellinje etablerades med gradientkoncentrationsmetod och en naken musmodell av läkemedelsresistent osteosarkom konstruerades (36 möss totalt, 6 per grupp). Modellgruppen gavs normal koksaltlösning genom sondmatning; metotrexatgruppen (MTX) fick intraperitoneal injektion av MTX (20 mg/kg) var tredje dag; kombinationsgruppen fick intraperitoneal injektion av MTX var tredje dag kombinerat med daglig sondmatning av medeldos CPhGs (250 mg/kg); hög-, medel- och lågdos-CPhGs-grupperna gavs daglig sondmatning av CPhGs vid höga (500 mg/kg), medel- (250 mg/kg) respektive låga (125 mg/kg) doser. Tumörstorleksförändringar i nakna möss observerades, kurvor för medeltumörvolymen över tiden plottades och tumörinhiberingshastigheten beräknades; serumnivåer av IL-2 och TNF- i nakna möss detekterades med ELISA; tumörcellapoptos mättes med flödescytometri; Western blot användes för att detektera uttrycket av apoptosrelaterade proteiner Bcl-2, Bax och uttrycket av p-AKT, p-mTOR, p-PI3K i tumörvävnader.ResultatJämfört med modellgruppen minskade tumörvolymen och vikten i alla behandlingsgrupper signifikant (P < 0,001); jämfört med modellgruppen och MTX-gruppen ökade serumnivåerna av IL-2 och TNF- i nakna möss i alla CPhGs-grupper och kombinationsgruppen signifikant (P < 0,01); jämfört med modellgruppen var Bax-uttryck i alla behandlingsgrupper signifikant uppreglerat (P < 0,001) och Bcl-2-uttryck i hög- och medeldoserade CPhGs-grupper och kombinationsgruppen var signifikant nedreglerad (P < 0,001); jämfört med modellgruppen och MTX-gruppen ökade tumörapoptosfrekvensen i nakna möss av alla CPhGs-grupper och kombinationsgruppen signifikant, medan nivåerna av p-AKT, p-mTOR och p-PI3K minskade signifikant (P < 0,05).SlutsatsCPhGs kan avsevärt förbättra immunfunktionen hos nakna möss som bär läkemedelsresistent osteosarkom och främja tumörcellapoptos genom att reglera PI3K/AKT/mTOR-signalvägen och uttrycket av Bax och Bcl-2 apoptotiska proteiner, och därigenom effektivt hämma tumörtillväxt.

Nyckelordosteosarkom;Cistanche fenyletanolglykosider; MG-63; tumörceller; apoptos; verkningsmekanism; PI3K/AKT/mTOR signalväg

 

CISTANCHE TUBULOSA FÖRDELAR

 

 

 

 

 

 

Osteosarkom (OS)är en mycket maligna primär bentumör, med den högsta förekomsten bland ungdomars primära maligna bentumörer, åtföljd av extremt höga invaliditets- och dödlighetstal. För närvarande kan högdos metotrexat (MTX) ensamt eller i kombination med andra kemoterapeutiska medel efter operation effektivt förbättra överlevnaden för OS-patienter [1]. Vissa OS-patienter är dock okänsliga för kemoterapi på grund av läkemedelsresistens, vilket leder till tumörprogression. Dessutom är undergrupper av T-lymfocyter hos tumörpatienter ofta i ett tillstånd av immunobalans, och kemoterapi kan ytterligare förvärra immunstörningar och immunsuppression på kort sikt [2]. Studier har visat att förstärkning av mänskliga immunsvar kan förbättra prognosen för OS-patienter ur perspektivet av biologiska egenskaper hos OS [3]. Kemoterapiresistens är ett av de vanligaste och svårlösta problemen som leder till behandlingsmisslyckande hos OS-patienter, och immunsuppression är också en av nyckelfaktorerna som orsakar snabb tumörprogression [4].

Signalvägen fosfatidylinositol 3-kinas (PI3K)/proteinkinas B (AKT)/däggdjursmålet för rapamycin (mTOR) anses vara en av de viktigaste onkogena vägarna i humana cancerformer. Denna väg är ofta överaktiverad i OS, vilket kan driva OS-cellproliferation, invasion, metastasering och angiogenes, hämma apoptos och ytterligare leda till OS-resistens mot kemoterapeutiska läkemedel [5]. Studier har bekräftat att Cistanche fenyletanolglykosider (CPhGs), huvudkomponenten iCistanche deserticola, kan förbättra immunfunktionen och hämma tumörtillväxt hos hepatombärande möss [6].In vitrostudier har visat att CPhGs avsevärt kan hämma spridningen av HepG2-hepatomceller och inducera deras apoptos [7]. Att inducera cellapoptos är huvudmekanismen för nuvarande antitumörläkemedel och även en forskningshotspot inom OS-behandling de senaste åren. Nakna möss delar många likheter med människor i anatomi, fysiologi och biologi, och har hög acceptans för transplanterade tumörer, vilket tillåter xenotransplantation av vissa heterologa tumörceller, och används således i stor utsträckning för att etablera tumörmodeller [8-9]. Denna studie avser att konstruera en naken musmodell av läkemedelsresistent osteosarkom, observera effekterna av CPhGs på immunfunktionen och PI3K/AKT/mTOR-vägen i denna modell, såväl som dess hämmande effekt på tumörtillväxt och farmakologisk mekanism, för att ge referenser för att bredda kliniska behandlingsidéer och grundforskning av OS.

 

CISTANCHE TUBULOSA FÖRDELAR FÖR BENTILLVÄXT

 

CISTANCHE TILL SALU

Supportive Service Of Wecistanche - Den största cistanche-exportören i Kina:
E-post:wallence.suen@wecistanche.com
WhatsApp/Tel:+86 15292862950

 

 

1 Material och metoder

1.1 Försöksdjur

Trettiosex nakna möss av SPF-grad (6–8 veckor gamla, vägande 19–25 g) köptes från Changzhou Cavens Laboratory Animal Co., Ltd., med djurcertifikat nr 202367524. Detta experiment godkändes av Laboratory Animal Ethics Committee vid Northwest Minzu University (Xbmu-3m-202306).

1.2 Celllinje

MG-63 celler köptes från Cell Bank of the Chinese Academy of Sciences i Shanghai.

1.3 Läkemedel och reagenser

Fetalt bovint serum, DMEM-medium med hög glukoshalt, 0,25 % trypsin-EDTA, MTX (Dalian Meilun Biotechnology Co., Ltd., batchnummer PWL001, MA0212, MA0233-1, MB1156-1 respektive); CPhGs (Shaanxi Senyuan Biotechnology Co., Ltd., batchnummer SY20231212605); anti-p-mTOR-antikropp, anti-p-PI3K-antikropp, anti-p-AKT-antikropp, anti-Bcl-2-antikropp, anti-Bax-antikropp (Hangzhou Huaan Biotechnology Co., Ltd., batchnummer HA600094, HA721673, ET1607-73, ET1702-3, respektive-3, 3, 503, 3, 503, 3, 503, 3, 503, 3, 503, respektive-); ELISA-kit för TNF- och IL-2 (Hangzhou Lianke Biotechnology Co., Ltd., batchnummer EK282, EK202, respektive).

1.4 Instrument

CT14RD stationär höghastighets kyld centrifug (Shanghai Tianmei Biochemical Instrument Co., Ltd.); SW-CJ-1FD ren bänk (Suzhou Purification Co., Ltd.); CO-5AC cellinkubator (Sanyo, Japan); AE31 fluorescens inverterat mikroskop (Xiamen Motic Industrial Group Co., Ltd.); RT-6100 mikroplattläsare (Shenzhen Rayto Life Sciences Co., Ltd.); PowerPoc gelelektroforessystem, ChemiDoc™ gelbildanalysator (Bio-Rad, USA).

 

1.5 Experimentella metoder

1.5.1 Etablering av human osteosarkom MG-63 läkemedelsresistent cellinje (MG-63/MTX)

MG-63 celler odlades till logaritmisk tillväxtfas med 80 % cellkonfluens. Förberedd cellodlingsmedium innehållande 100 ng/ml MTX tillsattes och mediet byttes efter 48 timmar. När cellerna nådde 80 % konfluens igen, tillsattes samma koncentration av MTX-innehållande medium. Ovanstående steg upprepades för att möjliggöra för MG-63 osteosarkomceller att växa stabilt i medium innehållande 100 ng/ml MTX. Sedan ökades koncentrationen av MTX i mediet gradvis med samma metod, med användning av 200 ng/ml, 500 ng/ml, 1000 ng/ml, 2000 ng/ml, 5000 ng/ml och 10000 ng/ml i följd. Efter 5 månaders odling valdes osteosarkomläkemedelsresistent cellinje (MG-63/MTX) stabilt växande i 10000 ng/mL MTX ut för efterföljande experiment.

 

 

1.5.2 Etablering av nakenmusmodell som bär läkemedelsresistent osteosarkom

Osteosarkom-djurmodellen etablerades med hänvisning till litteratur [10]. MG-63/MTX-celler preparerades till en cellsuspension på 4×10⁶/100 μL, och 100 μL injicerades subkutant i axillen på nakna möss för att observera tumörbildning.

1.5.3 Djurgruppering och intervention

Tumörbärande nakna möss delades slumpmässigt in i modellgrupp, MTX-grupp, MTX kombinerad med CPhGs (MTX-CPhGs) grupp, högdos CPhGs (CPhGs-H) grupp, medeldos CPhGs (CPhGs-M) grupp och lågdos CPhGs (CPhGs) grupp i varje m-L, 6 grupp. Gavage startades på dag 6 efter modellering. Möss i modellgruppen fick 10 μL/g normal koksaltlösning dagligen genom sondmatning; MTX-gruppen fick en intraperitoneal injektion av 20 mg/kg MTX var tredje dag; MTX-CPhGs-gruppen fick daglig sondmatning på 250 mg/kg CPhGs kombinerat med intraperitoneal injektion av 20 mg/kg MTX var tredje dag; CPhGs-H-gruppen fick daglig sondmatning på 500 mg/kg CPhGs; CPhGs-M-gruppen fick daglig sondmatning på 250 mg/kg CPhGs; CPhGs-L-gruppen fick daglig sondmatning på 125 mg/kg CPhGs. Alla nakna möss behandlades kontinuerligt i 15 dagar.

1.5.4 Mätning av tumörvolym och vikt hos nakna möss som bär läkemedelsresistent osteosarkom

Tumörvolym av nakna möss i varje grupp observerades och registrerades, och tumörtillväxtkurvor plottades. Tjugofyra timmar efter den sista administreringen avlivades möss genom cervikal dislokation, tumörer dissekerades och vägdes och tumörinhiberingshastigheten beräknades. Formlerna är följande: Tumörvolym=1/2 (lång tumördiameter × kort tumördiameter²) Tumörhämningshastighet=[(medeltumörvikt för modellgrupp − medeltumörvikt för behandlingsgrupp)/medeltumörvikt för modellgrupp] × 100 %

1.5.5 Detektion av serum-IL-2- och TNF-nivåer med ELISA

Serum extraherades från nakna möss i varje grupp, och serumnivåer av IL-2 och TNF- detekterades med ELISA enligt tillverkarens instruktioner.

1.5.6 Detektion av tumörcellapoptos genom flödescytometri

Tumörvävnader från varje grupp maldes, maldes, filtrerades, centrifugerades och röda blodkroppar lyserades för att framställa encellssuspensioner i centrifugrör. Cellkoncentrationen justerades till 1×10⁶/ml, cellerna återsuspenderades i 100 μL bindningsbuffert, tillsattes med 5 μL AV-FITC och PI, inkuberades i mörker i 15 minuter, centrifugerades, återsuspenderades och tillsattes 400 μL bindningsbuffert. Efter blandning detekterades prover med flödescytometri.

1.5.7 Detektion av p-AKT, p-mTOR, p-PI3K och apoptotiska proteiner Bcl-2, Bax med Western blot

Tumörvävnader från varje grupp maldes och placerades i en homogenisator, lyserades med proteinlysbuffert och homogeniserades. Efter lys uppsamlades supernatanten genom centrifugering vid 12000 r/min. Elektroforetisk gel framställdes för proteinseparation, följt av membranöverföring och blockering. Membran inkuberades med primära antikroppar vid 4 grader över natten, tvättades och inkuberades med sekundära antikroppar vid rumstemperatur under 1 timme. Efter tvättning med TBST-buffert på en skakapparat tillsattes ECL-luminiscerande lösning för framkallning. Efter fixering utfördes gelbildanalys och proteinbandsgråvärden analyserades med hjälp av programvaran Image J.

1.6 Statistisk analys

Statistisk analys utfördes med GraphPad Prism 7 och SPSS 25.0 programvara. Mätdata uttrycktes som medel ± standardavvikelse (x ± s). Envägs ANOVA användes för jämförelse mellan grupper med normalfördelning och homogen varians, och icke-parametriskt test användes för icke-normalfördelningsdata. Parat t-test användes för att analysera tumörinhiberingshastigheten. P < 0,05 ansågs vara statistiskt signifikant.

 

 

Figur 1. Morfologisk jämförelse av MG-63- och MG-63/MTX-celler (×200)

2 resultat

2.1 Osteosarkom MG-63 läkemedelsresistent cellinje (MG-63/MTX)

Ursprungliga MG-63-celler växte fast med medelstora, mestadels spindelformade, ibland oregelbundna, med stora kärnor och klara nukleoler (Figur 1-A). MG-63/MTX-celler var långsträckta, spindelliga eller oregelbundna, med uppenbar pseudopodi (Figur 1-B).

2.2 Jämförelse av tumörtillväxt hos möss i varje grupp

Från dag 6 av sondmatning var tumörvolymen i behandlingsgrupper signifikant mindre än den i modellgruppen. På dag 21 av sondmatning jämfördes tumörer från 3 nakna möss i varje grupp (Figur 2-A). Tumörvolymen i alla behandlingsgrupper var mindre än den i modellgruppen (P < 0,001). Tumörvolymen i grupperna CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L och MTX-CPhGs var mindre än den i MTX-gruppen (P < 0,001). Bland CPhGs-grupper minskade tumörvolymen gradvis med ökande läkemedelskoncentration, och skillnaden från modellgruppen blev mer signifikant (Figur 2-B). Resultaten indikerade att CPhGs signifikant kunde hämma tumörtillväxt hos läkemedelsresistenta tumörbärande möss, och den hämmande effekten var positivt korrelerad med CPhGs-koncentrationen.

Jämfört med modellgruppen minskade den genomsnittliga tumörvikten i grupperna MTX, CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L och MTX-CPhGs signifikant (P < 0,001). Jämfört med MTX-gruppen ökade tumörhämningshastigheten i grupperna CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L och MTX-CPhGs signifikant, och i grupperna CPhGs-H, CPhGs-M och CPhGs-L ökade tumörhämningshastigheten på ett dosberoende sätt med ökande läkemedelskoncentration 1.

2.3 Effekter av CPhG på serum IL-2 och TNF-nivåer i läkemedelsresistenta tumörbärande nakna möss

Jämfört med modellgruppen ökade serum-TNF-nivån i MTX-gruppen signifikant (P < 0,05), och serum-TNF- och IL-2-nivåerna i MTX-CPhGs-gruppen ökade signifikant (P < 0,01). Dessutom var serum-TNF-nivåerna i CPhGs-H-, CPhGs-M- och CPhGs-L-grupperna signifikant högre än de i modellgruppen (P < 0,001), serum-IL-2-nivån i CPhGs-M-gruppen ökade (P < 0,01), och serumnivåerna av IL-2 CPhG-CPhG-CPh-G-grupperna ökade signifikant i CPhGs-M-gruppen. (P < 0,001). Jämfört med MTX-gruppen ökade serum-TNF- och IL-2-nivåerna i grupperna CPhGs-H, CPhGs-M, CPhGs-L och MTX-CPhGs signifikant (P < 0,001) (tabell 2). Detta tyder på att CPhG kan förbättra den medfödda immunfunktionen hos läkemedelsresistenta OS-tumörbärande möss genom att reglera uttrycket av TNF- och IL-2.

 

Figur 2. Jämförelse av tumörvolymer i nakna möss med tumörer i varje grupp efter intervention (x ± s, n=3, mm3)

Obs: Modellgrupp; MTX-grupp; CPhGs-L-grupp; lågdos Cistanche deserticola fenyletanol total glykosidegrupp; CPhGs-M-grupp; medeldos Cistanche deserticola fenyletanol total glykosidergrupp; CPhGs-H-grupp; hög dos Cistanche deserticola fenyletanol total glykosidegrupp; MTX-CPhGs grupp; jämfört med modellgruppen, ***P<0.001; compared with the MTX group, ###P<0.001

Tabell 1. Effekt av Cistanche-fenyletanoidglykosider på tumörvikt hos tumörbärande nakna möss (n=3)

Grupp	Genomsnittlig tumörvikt (g)	Hämningshastighet (%)
Modell	0.79 ± 0.04	-
MTX	0.49 ± 0.03	35.73 ± 4.61
CPhGs–L	0.33 ± 0.01	58.55 ± 4.02
CPhGs–M	0.31 ± 0.02	60.50 ± 0.98
CPhGs–H	0.28 ± 0.01	64.58 ± 1.77
MTX–CPhGs	0.18 ± 0.01	75.77 ± 1.78

*Obs: Gruppen "Modell" har ingen hämningsfrekvens rapporterad i källtabellen (visas som em-streck). Om du vill kan jag också lägga till signifikansmarkörerna (t.ex. *, ##, etc.) som fotnoter precis som i figuren.

2.4 Effekter av CPhG på tumörcellapoptos hos läkemedelsresistenta tumörbärande nakna möss

Jämfört med modellgruppen ökade tumörapoptosfrekvensen i MTX- och CPhGs-L-grupper signifikant (P < 0,05), och den i CPhGs-H-, CPhGs-M- och MTX-CPhGs-grupper ökade mer signifikant (P < 0,001). Jämfört med MTX-gruppen ökade tumörapoptosfrekvensen i CPhGs-H-, CPhGs-M- och MTX-CPhGs-grupper (P < 0,001) (Figur 3, Tabell 3). Ovanstående resultat visar att CPhGs kan främja tumörcellapoptos i läkemedelsresistenta tumörbärande nakna möss.

2.5 Effekter av CPhGs på uttrycket av p-AKT, p-mTOR och p-PI3K i tumörvävnader hos läkemedelsresistenta tumörbärande nakna möss

Jämfört med modellgruppen minskade p-AKT-uttrycket i tumörvävnader hos läkemedelsresistenta nakna möss i MTX-gruppen signifikant (P < 0,001). Expressionsnivåerna av p-AKT, p-mTOR och p-PI3K i tumörvävnader hos nakna möss i MTX-CPhGs, CPhGs-H och CPhGs-M-grupper minskade signifikant (P < 0,001), p-AKT-uttrycket i CPhGs-L-gruppen minskade (P < 0,01 och p-p-PI3KTOR minskade signifikant (P < 0,01 och p-p-PI3KTOR minskade signifikant) 0,001). Jämfört med MTX-gruppen minskade också uttrycksnivåerna av p-AKT, p-mTOR och p-PI3K i tumörvävnader hos nakna möss i MTX-CPhGs och CPhGs-H-grupper signifikant (P < 0,001), p-AKT-uttrycket i CPhGs-M-gruppen minskade något (P <- 0,0mKTOR-uttrycket var mer signifikant och pPI-uttrycket minskade mer och mer) 0,001), p-AKT-uttryck i CPhGs-L-gruppen minskade (P < 0,01), och uttryck av p-mTOR och p-PI3K minskade mer signifikant (P < 0,001) (Figur 4-A till 4-D).

 

Tabell 2. Serum-TNF- och IL-2-uttrycksnivåer i varje grupp (n=3)

Grupp	TNF- (pg/ml)	IL-2 (pg/ml)
Modell	79.90 ± 3.60	28.36 ± 2.35
MTX	93.71 ± 2.86*	28.87 ± 1.60
MTX–CPhGs	118.00 ± 3.78***###	40.92 ± 1.54***###
CPhGs–H	122.76 ± 2.97***###	45.03 ± 4.95***###
CPhGs–M	117.52 ± 3.60***###	41.44 ± 3.87***###
CPhGs–L	124.19 ± 8.37***###	44.77 ± 2.31***###

 

Anmärkningar (som visas i bilden):Modell=modellgrupp; MTX=metotrexatgrupp; CPhGs–L/M/H=låg/medel/hög dos Cistanche fenyletanoid glykosider grupp; MTX–CPhGs=kombinationsgrupp. Betydelse kontra modell: * P<0.05P<0.05P<0.05, ** P<0.01P<0.01P<0.01, *** P<0.001P<0.001P<0.001. Significance vs. MTX: ### P<0.001P<0.001P<0.001.

2.6 Effekter av CPhG på uttrycket av Bcl-2 och Bax i tumörvävnader hos läkemedelsresistenta tumörbärande nakna möss

Jämfört med modellgruppen ökade Bax-uttrycket i tumörvävnader hos läkemedelsresistenta nakna möss i alla behandlingsgrupper signifikant (P < 0,001), Bcl-2-uttrycket i MTX-gruppen ökade (P < 0,05), och Bcl-2-uttrycket i MTX-CPhGs, CPhGs-H och CPhGs-M-grupper var signifikant minskat (0). Jämfört med MTX-gruppen minskade Bcl-2-uttrycket i tumörvävnader av CPhGs-H-, CPhGs-M-, CPhGs-L- och MTX-CPhGs-grupperna signifikant (P < 0,001), och Bax-uttrycket i CPhGs-H- och CPhGs-M-grupperna ökade signifikant (P < 4,001)- (Fi, 001)- (Fi. 4-F). Det indikerar vidare att CPhGs kan främja tumörcellapoptos i läkemedelsresistenta tumörbärande nakna möss genom att reglera uttrycket av Bcl-2 och Bax.

 

 

3 Diskussion

Kemoterapiresistens och immunsuppression hos OS-patienter är flaskhalsar i klinisk behandling av OS. För närvarande är huvudmekanismen för antitumörläkemedel att främja tumörcellapoptos, vilket direkt återspeglar effekten av kemoterapi; å andra sidan är kroppsimmunitet en stark garanti för patienter att tolerera kemoterapeutiska läkemedel. Därför är det avgörande att studera hur man effektivt främjar apoptos av läkemedelsresistenta OS-celler och minskar kemoterapi-inducerad immunförsämring.

Figur 3. Apoptoshastigheten för tumörvävnadsceller i varje grupp av möss (n=3, %)

Obs: A. Modellgrupp; B. Metotrexat (MTX) grupp; C. Metotrexat kombinerat med Cistanche deserticola fenyletanol totalglykosider (MTX-CPhGs) grupp; D. Högdos Cistanche deserticola fenyletanol totalglykosider (CPhGs-H) grupp; E. Medium-dos Cistanche deserticola fenyletanol totala glykosider (CPhGs-M) grupp; F. Lågdos Cistanche deserticola fenyletanol totalglykosider (CPhGs-L) grupp.

Tabell 3. Apoptosfrekvens för tumörvävnadsceller i varje grupp (n=3)

Grupp	Apoptosfrekvens (%)
Modell	14.47 ± 1.10
MTX	19.77 ± 1.32*
MTX–CPhGs	29.21 ± 0.77***###
CPhGs–H	31.66 ± 1.93***###
CPhGs–M	30.13 ± 2.16***###
CPhGs–L	22.49 ± 3.02**

Anmärkningar (som visas i bilden):Modell=modellgrupp; MTX=metotrexatgrupp; CPhGs–L/M/H=låg/medel/hög dos Cistanche fenyletanoid glykosider grupp; MTX–CPhGs=kombinationsgrupp. Betydelse kontra modell: * P<0.05P<0.05P<0.05, ** P<0.01P<0.01P<0.01, *** P<0.001P<0.001P<0.001. Significance vs. MTX: ### P<0.001P<0.001P<0.001.

 

 

Cistanche deserticolahar farmakologiska effekter för att värma njurarna och fylla på essensen, fukta tarmarna, antioxidation och förbättra immuniteten. Zhang et al. [11] rapporterade 1988 att vattenextrakt avCistanche deserticolakan förbättra immunförsvaret och stimulera utvecklingen av immunorgan som tymus hos möss. Senarein vivostudier fann det vidareCistanchepolysackarider hade antilungcancer och anti-sarkomeffekter [12]. Studier har visat att CPhGs, huvudkomponenten iCistanche deserticola, har farmakologiska effekter såsom antioxidation, anti-aging, neuroprotection, immunförstärkning, leverskydd och behandling av spermatogena sjukdomar [13], och utövar även antitumör- och immunförstärkande effekter på olika maligna tumörer inklusive levercancer, lungcancer, bröstcancer och äggstockscancer [14]. Vår tidigare studie fann detCistanche deserticolakan främja apoptos av läkemedelsresistenta OS-cellerin vitrogenom att minska uttrycket av MRP1 och mutanta P53-proteiner [15]. Denna studie fann att tumörvolymen och vikten i behandlingsgrupperna var mindre än de i modellgruppen, och tumörvolymen i olika CPhGs-koncentrationsgrupper och MTX-CPhGs-gruppen var också mindre än den i MTX-gruppen, med ökad tumörhämningshastighet. Detta indikerar att CPhGs avsevärt kan hämma tumörtillväxt hos läkemedelsresistenta OS-tumörbärande möss, och den hämmande effekten är positivt korrelerad med CPhGs-koncentrationen, vilket i princip överensstämmer med studien av Hou et al. [16] om den hämmande effekten av CPhGs på subkutana transplanterade tumörer i H22-hepatom-bärande möss.

Immunfunktionen är nära relaterad till tumörförekomst och utveckling. IL-2 är en typ av celltillväxtfaktor i immunsystemet, som kan förbättra kroppens immunfunktion genom att främja T-cellsproliferation och differentiering, och producera immunceller med antitumöraktivitet [17]. TNF- utövar antitumöreffekter genom att binda till receptorer för att inducera tumörcellapoptos, förbättra värdens immunfunktion, verka på tumörvaskulära endotelceller, öka vaskulär permeabilitet, inducera programmerad död och därefter orsaka tumörblödning och nekros [18]. Analys av serum IL-2 och TNF-uttryck i möss i varje grupp visade att uttrycksnivåerna av serum TNF- och IL-2 i tumörbärande modellmöss av olika CPhGs-koncentrationsgrupper och MTX-CPhGs-grupp ökade signifikant. Detta tyder på att CPhGs kan förbättra immunfunktionen hos läkemedelsresistenta OS-tumörbärande möss genom att reglera uttrycket av TNF- och IL-2, hämma proliferationen av läkemedelsresistenta osteosarkomceller och därmed utöva antitumöreffekter.

 

Figur 4. Elektroforesresultatdiagram av p-mTOR-, p-PI3K-, p-AKT-, Bcl-2- och Bax-proteiner i tumörvävnad hos nakna möss (x ± s, n=3, mm3)

Obs: Modell, modellgrupp; MTX, metotrexatgrupp; MTX-CPhGs, metotrexat kombinerat med Cistanche deserticola fenyletanol totalglykosidergrupp; CPhGs-L, lågdos Cistanche deserticola fenyletanol total glykosidegrupp; CPhGs-M, medeldos Cistanche deserticola fenyletanol total glykosidegrupp; CPhGs-H, högdos Cistanche deserticola fenyletanol total glykosidegrupp; A. Western Blot-resultat av p-mTOR-, p-PI3K-, p-AKT-, Bcl-2- och Bax-proteiner; B. p-mTOR; C. p-PI3K; D. p-AKT; E. Bcl-2; F. Bax; Jämfört med modellgruppen, * P < 0,05, ** P < 0,01, *** P < 0,001; Jämfört med MTX-gruppen, # P < 0,05, ## P < 0,01, ### P < 0,001.

 

AKT-fosforylering i PI3K/AKT/mTOR-signalvägen kan direkt eller indirekt reglera en serie apoptosrelaterade faktorer såsom Bcl-2-familjen, X-länkad hämmare av apoptosprotein (XIAP), mus dubbel minut 2 (MDM-2) och Bcl-2-associerat [X1-protein (Bax). Onormalt aktiverad PI3K/AKT/mTOR-signalväg kan uppreglera uttrycket av membrantransportörerna ABCB1 och ABCC1, och därigenom minska kemoterapins effekt och förmedla OS-resistens mot kemoterapeutiska läkemedel [20]. En mängd olika monomerer för traditionell kinesisk medicin kan främja OS-cellapoptos genom att hämma signalvägen PI3K/AKT/mTOR, såsom procyanidin B2, quercetin, luteolin ochLactarius deliciosuspolysackarider [21]. Denna studie fann att under den enda verkan av MTX minskade p-AKT-proteinuttrycket signifikant, medan p-mTOR- och p-PI3K-proteinuttrycket inte visade någon signifikant skillnad, vilket indikerar att MTX har liten effekt på PI3K/AKT/mTOR-signalvägen i tumörvävnader hos läkemedelsresistenta tumörbärande nakna möss. Uttrycket av p-AKT-, p-mTOR- och p-PI3K-proteiner i tumörvävnader hos läkemedelsresistenta OS-tumörbärande nakna möss i olika CPhGs-koncentrationsgrupper och MTX-CPhGs-grupper var dock lägre än det i modellgruppen, och också signifikant lägre än det i MTX-gruppen, vilket avslöjar att CPhGs har en signifikant hämmande effekt på vägen hämmande/PITOR3K-signalen. läkemedelsresistenta OS-celler. Flödescytometridetektering av tumörcellapoptos visade att tumörapoptoshastigheten i varje grupp ökade signifikant efter läkemedelsintervention. Detektion av Bax- och Bcl-2-proteinuttryck visade att Bax-uttryck i tumörvävnader hos läkemedelsresistenta OS-tumörbärande nakna möss i olika CPhGs-koncentrationsgrupper och MTX-CPhGs-grupp ökade signifikant, medan Bcl-2-uttryck i tumörvävnader hos modellmöss i MTX-CPhGs, CPhGs-H och CPhGs-M-grupper minskade signifikant. Detta tyder på att en viss koncentration av CPhG kan främja apoptos av läkemedelsresistenta OS-cellerin vivogenom att hämma PI3K/AKT/mTOR-signalvägen, nedreglera Bcl-2-uttryck och uppreglera Bax-uttryck.

Sammanfattningsvis kan CPhG främja apoptos av läkemedelsresistenta OS-celler och hämma tumörtillväxtin vivo, och dess mekanism kan uppnås genom att hämma signalvägen PI3K/AKT/mTOR och reglera uttrycket av Bcl-2 och Bax. Samtidigt kan CPhG förbättra immunfunktionen hos läkemedelsresistenta OS-tumörbärande möss genom att uppreglera uttrycksnivåerna av TNF- och IL-2, och därigenom utöva synergistiska antitumöreffekter. Dess kliniska tillämpningspotential behöver dock fortfarande utforskas och forskas.

 

Referenser

1 Zhang C, Hu J, Zhu K, et al. Överlevnad, komplikationer och funktionella resultat av cementerade megaproteser för höggradigt osteosarkom runt knäet[J]. Int Orthop, 2018, 42(4):927-938. DOI:10.1007/s00264-018-3770-9.2 Liu Q, Xu R, Xu X, et al. Egenskaper och betydelse för T-lymfocytundergrupper i perifert blod från osteosarkommöss [J]. Transl Cancer Res, 2022, 11(6):1503-1509. DOI:10.21037/tcr22-264.3 Wu W, Jing DD, Cao L, et al. Nuvarande status och utsikter för immunterapi för osteosarkom [J]. Cancer Research on Prevention and Treatment, 2022, 49(7):721-726. DOI:10.3971/j.issn.1000-8578.2022.21.1281.4 Wang CZ, Liu YF, Zhang XQ, et al. Forskningsframsteg om mekanismen för astragalosid Ⅳ som reglerar antitumörverkan hos immunceller [J]. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine, 2024, 42(11):145-149. DOI:10.13193/j.issn.1673-7717.2024.11.029.5 Zhang J, Yu XH, Yan YG, et al. PI3K/Akt-signalering vid osteosarkom[J]. Clin Chim Acta, 2015, 444:182-192. DOI:10.1016/j.cca.2014.12.041.6 Hu Q, You SP, Liu T, et al. En undersökning av effekten mot levercancer av cistanche[J]. Carcinogenesis, Teratogenesis & Mutagenes, 2018, 30(3):194-199. DOI:10.3969/j.issn.1004-616x.2018.03.006.7 Qi XX, You SP, He ZX, et al. Effekt av Cistache deserticola fenyletanolglykosid på proliferation och apoptos av HepG2-celler in vitro [J]. Journal of Xinjiang Medical University, 2021, 44(9):1041-1047. DOI:10.3639/j.issn.1009-5551.2021.09.012.8 Panaampon J, Sasamoto K, Kariya R, et al. Etablering av nakna möss som saknar NK-celler och deras tillämpning för humana tumörxenotransplantat [J]. Asian Pac J Cancer Prev, 2021, 22(4):1069-1074. DOI:10.31557/APJCP.2021.22.4.1069.9 Yu CB, Sun P, Zhang XW, et al. Djurmodellstudien av pankreascancer xenograft i nakna möss [J]. Progress in Modern Biomedicine, 2012, 12(9):1648-1650. DOI:10.13241/j.cnki.pmb.2012.09.017.10 Xu XR, Wang N, Sun MM, et al. Olika effekter i osteosarkommodellmöss med akupunktur vid en enda punkt och kompatibilitet med akupunkter[J]. China Journal of Traditional Chinese Medicine and Pharmacy, 2020, 35(5):2271-2276. DOI:10.13241/j.cnki.pmb.2012.09.017.11 Zhang HQ, Zhang AX, Du NS, et al. Effekter av Cistanche deserticola på immunfunktionen hos möss [J]. Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine, 1988, (12):736-737, 710. https://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTotal-ZZXJ198812019.htm.12 Zhang HQ, Xu AH, Li DD. Farmakologiska effekter av Cistanche-polysackarider på tumörer och tumörbärande möss [J]. Chinese Journal of Integrated Traditional and Western Medicine, 1997, (S1):155-156, 294. https://kns.cnki.net/kcms2/article/abstract?v=mg_qcPBBapnmsDqon66yc8-zI2VqwJgixywPNSnAl0qboPnZqB4FNuT0bsHSSvs0Dn72KZye__Q8SvxLic -S-Wcbp5ClislhRETaTYT6KGBMKP3_EreGXg3-BH52Itk0rqWiNksajNxzld06uvdfRzCDj-utLfgfANyySxJMHM-g==&uniplatform=}ålderCHS.13NZKPT&langu Xue HY, Jiao CY, Yao J. Aktuell status för farmakologiska effekter av glykosider av Cistanches Herba[J]. The Chinese Journal of Clinical Pharmacology, 2018, 34(4):486-488. DOI:10.13699/j.cnki.1001-6821.2018.04.026.14 Tang Y, Wu JQ. Antitumöreffekter av fenyletanoidglykosider berövade från Cistanche deserticola[J]. Current Biotechnology, 2023, 13(3):399-405. DOI:10.19586/j.2095-2341.2023.0040.15 Xu W, Ding JX, Xie XW, et al. Effekt av Cistanche deserticola på kemoterapiresistenta osteosarkomceller och uttryck av MRP1 och P53[J]. Journal of Li-shizhen Traditional Chinese Medicine, 2021, 32(3):551-554. DOI:10.3969/j.issn.1008-0805.2021.03.11.16 Hou XT, Liu T, Su DQ. Antitumöreffekt av fenyletanolglykosider från Cistanche deserticola på H22-tumörbärande möss [J]. Journal of Toxicology, 2021, 35(3):231-235, 240. DOI:10.16421/j.cnki.1002-3127.2021.03.010.17 Zhang XY, Wang D, Fu CX, et al. Forskningsframsteg kring behandling av tumörer med interleukin-2[J]. Oncology Progress, 2024, 22(6):581-585, 618. DOI:10.11877/j.issn.1672-1535.2024.22.06.01.18 Gao SY, Li D. Forskningsframsteg inom tumörnekrosfaktor och cancer[J]. Chinese Pharmacological Bulletin, 2020, 36(9):1209-1213. DOI:10.3969/j.issn.1001-1978.2020.09.006.19 Zhou H, Hai GF, Zhang T, et al. Forskningsframsteg för PI3K/AKT/mTOR-vägen och dess riktade hämmare vid cancerbehandling [J]. China Pharmaceuticals, 2023, 32(5):127-135. DOI:10.3969/j.issn.1006-4931.2023.05.030.20 Liu YJ, Cao YH, Kuang R. Forskning framsteg för mekanismen för tumörresistens mot multiläkemedel och reversering av traditionell kinesisk medicin[J]. Chinese Pharmaceutical Journal, 2024, 59(7):561-570. DOI:10.11669/cpj.2024.07.001.21 Yang HD, Li N, Xie XW, et al. Kinesisk medicinmonomerer vid behandling av osteosarkom genom att reglera PI3K/Akt/mTOR-signalvägen: en översikt[J]. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae, 2023, 29(3):254-262. DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.20221527.