Forskning om multi-index omfattande kvalitetsutvärdering av cistancher Herba baserat på CRITIC-viktmetoden

WEI Wei, QI Yuning, CHEN Weiying, ZHU Shunjuan, HOU Jianzhong
(Jiuquan kvalitetsinspektions- och testcenter i Gansu-provinsen, Jiuquan, Gansu 735000, Kina)

Abstrakt:Syftet var att etablera en multiindex omfattande utvärderingsmetod för att bedöma kvaliteten på Cistanche deserticola, och att vetenskapligt utvärdera kvalitetsskillnaderna mellan Cistanches Herba från olika källor (Cistanche deserticola och Cistanche tubulosa) och olika produktionsområden. Innehållet av fem fenyletanoidglykosider (echinakosid, verbaskosid, tubulosid A, isoakteosid och 2'-acetylakteosid) bestämdes med hjälp av högpresterande vätskekromatografi (HPLC). Viktningsmetoden CRITIC användes för att beräkna vikten av varje komponent, och de omfattande poängen för proverna beräknades. Klusteranalys användes för att analysera mönstren av kvalitetsskillnader mellan proverna. Resultaten visade att kvalitetsskillnader observerades mellan Cistanche deserticola och Cistanche tubulosa. Utvärderingspoängen för Cistanche tubulosa var generellt högre än för Cistanche deserticola. Klusteranalys grupperade Cistanche deserticola och Cistanche tubulosa i distinkta kategorier. Kvaliteten på Cistanche deserticola visade minimal variation, medan kvaliteten på Cistanche tubulosa varierade mellan olika produktionsområden. Modellen som etablerats i denna studie kan objektivt kvantifiera kvalitetsskillnaderna mellan Cistanches Herba från olika ursprung och produktionsområden, vilket ger en vetenskaplig grund för kvalitetsutvärderingen av Cistanche.

Nyckelord: Cistanches Herba;CRITIC viktmetod; klusteranalys;kvalitetsutvärdering

Cistanche örtextrakt till salu

 

 

 

 

 

Cistanches Herba består av de torkade, fjällande saftiga stjälkarna av Cistanche deserticola YC Ma eller Cistanche tubulosa (Schenk) Wight, den tidigare allmänt känd som ökencistanche. Cistanches Herba är varm till sin natur och söt och salt i smaken. Det tonifierar njurens yang, gynnar essens och blod och fuktar tarmarna för att lindra förstoppning. Det används för njure yang-brist, brist på essens och blod, impotens och infertilitet, ömhet och svaghet i midja och knän, svaghet i muskler och ben, och torr tarm med förstoppning. Dess farmakologiskt aktiva komponenter - såsom fenyletanoidglykosider, polysackarider och iridoider - har bekräftats ha antioxidant, anti-aging, immunmodulerande och neuroprotektiva aktiviteter. Som ett välkänt traditionellt kinesiskt medicinskt material är det listat som en ört av högsta kvalitet i Shennongs Classic of Materia Medica och är känd som "öknens ginseng". Den är huvudsakligen distribuerad i de nordvästra regionerna i Inre Mongoliet, Gansu, Xinjiang och Ningxia.

Med den ökande efterfrågan på marknaden närmar sig vilda resurser utarmning och konstgjord odling har blivit mainstream. 2005 års upplaga av Folkrepubliken Kinas farmakopé utökade Cistanche tubulosa som en laglig botanisk källa för Cistanches Herba. De två källorna har separata testgränser, men endast för extrakter och innehållet av echinacoside och verbascoside, som inte heltäckande kan återspegla multikomponent-, multi-target-egenskaperna hos traditionell kinesisk medicin. Den kemiska sammansättningen av Cistanches Herba varierar beroende på produktionsområde, skördetid och bearbetningsmetoder. Därför är inrättandet av ett vetenskapligt och systematiskt kvalitetsutvärderingssystem av stor betydelse för att säkerställa läkemedelsmaterialens säkerhet och effektivitet och främja en hållbar industriell utveckling. I denna studie analyserades 20 partier Cistanches Herba från olika produktionsområden i Jiuquan. HPLC användes för att samtidigt bestämma fem fenyletanoidglykosider - echinakosid, tubulosid A, verbaskosid, isoakteosid och 2'-acetylakteosid. Viktningsmetoden CRITIC användes för att tilldela vikter till varje indikator för en omfattande kvalitetsutvärdering av de två botaniska källorna, och klusteranalys (CA) användes för att tolka skillnader efter botaniskt ursprung och produktionsområde, i syfte att ge en vetenskaplig grund för kvalitetsutvärdering av Cistanches Herba.

1 Instrument och material av cistanche

1.1 Instrument och utrustning

Agilent 1260 Infinity HPLC-system [inklusive en kvartär pump, autosampler, kolonnugn och DAD-detektor; Agilent Technologies (China) Co., Ltd.]; XP205DR elektronisk analytisk våg (Mettler-Toledo Instruments Co., Ltd.); KQ-500DE ultraljudsrengörare (Kunshan Ultrasonic Instruments Co., Ltd.).

 

1.2 Reagens

Referensstandarder: verbascoside (sats nr. 111530-201914, renhet 95,2 %) och echinakosid (sats nr. 111670-201706, renhet 89,7 %) köptes från National Institutes for Food and Drug Control; tubulosid A (batchnr B20471, renhet större än eller lika med 98%), isoacteosid (batchnr B21535, renhet större än eller lika med 98%) och 2'-acetylakteosid (batchnr B21779, renhet större än eller lika med 98% BioTech Ltd.Yan %) köptes från BioTech Ltd.Yan. Metanol var av HPLC-kvalitet (Merck). Ultrarent vatten bereddes internt. Andra reagens var av analytisk kvalitet.

 

1.3 Prover

Tio partier Cistanche deserticola och tio partier Cistanche tubulosa samlades in från Cistanches Herba-odlingsbaser och apotek i Jiuquan-området, märkta R1–R20 (se tabell 1). De identifierades av biträdande direktör och TCM-apotekare Hou Jianzhong vid Jiuquan Quality Inspection and Testing Center som de torkade, fjällande saftiga stjälkarna av Cistanche deserticola YC Ma eller Cistanche tubulosa (Schenk) Wight. Kupongprover deponeras på Drug and Cosmetics Testing Institute vid Jiuquan Quality Inspection and Testing Center.

Tabell 1 Källinformation för Cistanches Herba-prover

R1|Cistanche deserticola|Dazhuangzi Town, Jinta County, Jiuquan City

R2|Cistanche deserticola|Jiashan New Town, Suzhou District, Jiuquan City

R3|Cistanche deserticola|Xiqu Town, Jinta County, Jiuquan City

R4|Cistanche deserticola|Zhonghe Town, Jinta County, Jiuquan City

R5|Cistanche deserticola|Shuanglong Town, Suzhou District, Jiuquan City

R6|Cistanche deserticola|Hongliu Town, Guazhou County, Jiuquan City

R7|Cistanche deserticola|Hongshagang Town, Dunhuang City, Jiuquan

R8|Cistanche deserticola|Yumen City, Jiuquan

R9|Cistanche deserticola|Tashi Town, Guazhou County, Jiuquan City

R10|Cistanche deserticola|Zongtai Township, Yumen City, Jiuquan

R11|Cistanche tubulosa|Dazhuangzi Town, Jinta County, Jiuquan City

R12|Cistanche tubulosa|Suzhou-distriktet, Jiuquan City

R13|Cistanche tubulosa|Suzhou-distriktet, Jiuquan City

R14|Cistanche tubulosa|Suzhou-distriktet, Jiuquan City

R15|Cistanche tubulosa|Suzhou-distriktet, Jiuquan City

R16|Cistanche tubulosa|Hongshagang Town, Dunhuang City, Jiuquan

R17|Cistanche tubulosa|Hongshagang Town, Dunhuang City, Jiuquan

R18|Cistanche tubulosa|Hongshagang Town, Dunhuang City, Jiuquan

R19|Cistanche tubulosa|Liangzhong Township, Yumen City, Jiuquan

20 kr|Cistanche tubulosa|Liugou Township, Anxi County, Jiuquan

 

2 Metoder och resultat

2.1 Beredning av blandad referenslösning

Väg noggrant upp verbascoside 10,45 mg, echinacoside 11,56 mg, tubulosid A 10,59 mg, isoacteosid 19,63 mg och 2'-acetylacteosid 9,03 mg i separata 50 ml mätkolvar, lös upp till 5 volymprocent metanol. Blanda väl för att erhålla stamlösningsreferenslösningarna. Pipettera sedan noggrant 1,00 mL av varje stamlösning i en 10 mL mätkolv, späd till volym med 50 % metanol och blanda för att erhålla den blandade referenslösningen.

Supportive Service Of Wecistanche-För mer information om samarbete
E-post:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950

 

2.2 Beredning av testlösningar

Passera provpulver genom en No. 3 sikt; väg upp cirka 1 g noggrant i en 100 ml brun mätkolv. Tillsätt 80 ml 50 % metanol, propp, skaka, väg, blötlägg i 30 minuter och sonikera i 40 minuter (250 W, 35 kHz). Kyl till rumstemperatur, väg igen, tillsätt 50 % metanol för att kompensera för viktminskning, skaka ordentligt, låt stå, dekantera supernatanten och filtrera. Samla upp det efterföljande filtratet som testlösning.

 

2.3 Kromatografiska förhållanden

Använd en InertSustain C18-kolonn (4,6 mm × 250,0 mm, 5 μm). Mobil fas: metanol (A) och 0,1 % fosforsyralösning (B). Gradient för fas A: 0–6 min, 20 %; 6–18 min, 20 %→30 %; 18–35 min, 30 %→45 %. Flödeshastighet: 1,0 ml/min; kolonntemperatur: 35 grader; detektionsvåglängd: 330 nm; injektionsvolym: 10 μL. Teoretiska plattor för varje komponent var inte mindre än 5 000. Kromatogrammen för den blandade referenslösningen och testlösningarna visas i figur 1.

 

2.4 Metodvalidering för innehållsbestämning

2.4.1 Precisionstest

Injicera den blandade referenslösningen från avsnitt 2.1 sex gånger i följd under villkoren i avsnitt 2.3. RSD för toppareor för alla analyter var mindre än eller lika med 0,86 %, vilket tyder på god instrumentprecision.

 

2.4.2 Repeterbarhetstest

Väg noggrant sex portioner av prov R2 (ca 1,0 g vardera) och förbered sex testlösningar per avsnitt 2.2. Analysera under villkoren i avsnitt 2.3. RSD för toppareor var mindre än eller lika med 1,12 %, vilket indikerar god metodupprepningsbarhet.

 

2.4.3 Stabilitetstest

Bered en testlösning från prov R1 enligt avsnitt 2.2. Injicera vid 0, 2, 4, 8, 12 och 24 timmar under villkoren i avsnitt 2.3. RSD för toppareor var mindre än eller lika med 1,20 %, vilket tyder på god lösningsstabilitet inom 24 timmar.

 

2.4.4 Linjäritet

Bered en serie blandade referenslösningar genom att noggrant pipettera 0,2, 0,4, 0,6, 0,8, 1,0 och 2,0 ml av varje stamlösning i 10 ml mätkolvar och späda till volymen med 50 % metanol. Injicera enligt villkoren i avsnitt 2.3. Rita koncentration kontra topparea för att erhålla kalibreringsekvationer och linjära intervall (tabell 2). Resultaten visade god linjäritet för echinakosid, tubulosid A, verbaskosid, isoakteosid och 2'-acetylakteosid inom sina respektive intervall.

Tabell 2 Resultat av linearitetsstudien

Echinacoside|y=2397.4x − 15,363|r=0.9987|linjärt område: 0,0046–0,0462 mg·L−1

Tubulosid A|y=9428.7x − 7,104|r=0.9984|linjärt område: 0,0024–0,0242 mg·L−1

Verbascoside|y=12609.5x − 8,507|r=0.9986|linjärt område: 0,0024–0,0418 mg·L−1

Isoakteosid|y=11600.3x − 11,359|r=0.9985|linjärt område: 0,0079–0,0786 mg·L−1

2'-acetylakteosid|y=10901.8x − 5,216|r=0.9985|linjärt område: 0,0036–0,0362 mg·L−1

2.4.5 Återställning
Förbered nio portioner av ett prov med känt innehåll (R1), cirka 0,5 g vardera. Spetsa vid 50 %, 100 % och 150 % av det nominella innehållet med lämpliga mängder verbaskosid, echinakosid, tubulosid A, isoakteosid och 2'-acetylakteosid. Bered testlösningar enligt avsnitt 2.2 och analysera enligt avsnitt 2.3. Genomsnittliga återhämtningar var 99,58 %, 99,24 %, 100,26 %, 99,84 % och 100,46 %, med RSD på 1,26 %, 1,67 %, 1,03 %, 1,39 % respektive 1,71 %, vilket tyder på god noggrannhet.

 

2.4.6 Innehållsbestämning

Väg noggrant cirka 1 g Cistanche deserticola och Cistanche tubulosa-pulver, förbered testlösningar enligt avsnitt 2.2, analysera enligt avsnitt 2.3 och beräkna innehållet av verbascosid, echinacosid, tubulosid A, isoacteosid och 2'-acetylacteosid. Resultaten visas i tabell 3.

Tabell 3 Bestämningsresultat av innehållet i fem komponenter i Cistanches Herba (mg·g−1)

R1: Echinacoside 4,81|Tubulosid A 0,16|Verbascoside 0,58|Isoakteosid 0,26|2'-acetylakteosid 0,49

R2: 5.02 | 0.13 | 0.70 | 0.30 | 0.61

R3: 6.62 | 0.24 | 0.67 | 0.21 | 0.43

R4: 5.25 | 0.18 | 0.82 | 0.34 | 0.67

R5: 5.63 | 0.17 | 0.75 | 0.21 | 0.39

R6: 6.85 | 0.24 | 0.91 | 0.29 | 0.44

R7: 6.08 | 0.23 | 0.63 | 0.20 | 0.54

R8: 5.17 | - | 0.49 | 0.18 | 0.24

R9: 6.78 | 0.28 | 0.73 | 0.27 | 0.37

R10: 5.44 | 0.19 | 0.68 | 0.24 | 0.26

R11: 16.77 | 0.97 | 1.20 | 1.19 | -

R12: 13.80 | 1.22 | 2.07 | 1.98 | 0.08

R13: 17.06 | 2.09 | 4.82 | 2.08 | 0.14

R14: 18.56 | 2.86 | 4.76 | 2.89 | 0.16

R15: 20.47 | 3.62 | 5.17 | 1.84 | 0.21

R16: 15.38 | 3.16 | 3.86 | 1.09 | 0.18

R17: 16.23 | 2.97 | 4.43 | 1.44 | 0.17

R18: 15.02 | 2.40 | 3.59 | 1.38 | 0.18

R19: 17.56 | 3.06 | 4.91 | 1.52 | 0.19

R20: 14.87 | 2.64 | 4.05 | 1.26 | 0.20

 

2.5 Kvalitetsutvärdering med viktningsmetoden CRITIC

2.5.1 Datastandardisering

Eftersom det uppmätta innehållet i indikatorerna varierade avsevärt, behandlades varje indikator som en indikator av förmånstyp och standardiserades till intervallet [0, 1] med hjälp av formel (1).

 

2.5.2 Bestämning av vikter

De standardiserade resultaten av de 20 satserna importerades till SPSSPROs onlinedatabehandlingsplattform och CRITIC-metoden användes för att beräkna vikter (tabell 4). Som framgår av tabell 4 var informationsinnehållet (1,936) av 2'-acetylakteosid signifikant högre än för andra indikatorer (0,683–0,758), främst på grund av dess mycket höga konfliktmått (6,786), vilket tyder på mycket låg korrelation med andra indikatorer. Således gav den unik information i utvärderingssystemet och stod för 40,112 % av den totala vikten och blev den dominerande indikatorn. Vikterna för de andra fyra indikatorerna (echinakosid, tubulosid A, verbaskosid och isoakteosid) var relativt balanserade.

Tabell 4 Beräkningsresultat av viktningsfaktorer

Indikator: Echinacoside|Variabilitet 0,367|Konflikt 2.064|Information 0,758|Vikt 15,705 %

Indikator: Tubulosid A|0,352|1,940|0,683|14,150 %

Indikator: Verbascoside|0,392|1,881|0,737|15,275 %

Indikator: Isoacteosid|0,330|2,157|0,713|14,759 %

Indikator: 2′-acetylakteosid|0,285|6,786|1,936|40,112 %

 

2.5.3 Omfattande utvärdering

Baserat på de fastställda vikterna, beräknades de omfattande utvärderingspoängen för de 20 satserna med hjälp av formel (2). Resultaten visas i tabell 5. Markerade poängskillnader hittades mellan de två botaniska källorna. Cistanche tubulosa hade generellt högre halter av echinacosid och verbascoside, vilket ledde till högre heltäckande poäng än Cistanche deserticola.

Tabell 5 CRITIC omfattande utvärderingspoäng för Cistanches Herba

R1: 0,307 (ranking 14)

R2: 0,386 (ranking 10)

R3: 0,292 (ranking 15)

R4: 0,432 (ranking 8)

R5: 0,258 (ranking 17)

R6: 0,313 (ranking 13)

R7: 0,351 (ranking 12)

R8: 0,147 (ranking 20)

R9: 0,265 (ranking 16)

R10: 0,179 (ranking 19)

R11: 0,236 (ranking 18)

R12: 0,335 (ranking 12)

R13: 0,533 (ranking 4)

R14: 0,632 (ranking 2)

R15: 0,667 (ranking 1)

R16: 0,497 (ranking 6)

R17: 0,530 (ranking 5)

R18: 0,469 (ranking 7)

R19: 0,565 (ranking 3)

R20: 0,425 (ranking 9)
 

 

2.6 Klusteranalys

Det uppmätta innehållet i de 20 satserna importerades till SPSS 20.0. Metoden längst bort och det euklidiska avståndet i kvadrat användes som mätvärden, och länkning mellan grupper tillämpades för klustring (se figur 2). Resultaten indikerade skillnader i kvalitet mellan de två botaniska källorna: Cistanche deserticola och Cistanche tubulosa grupperade i separata grupper. Cistanche deserticola uppvisade liten variation inom gruppen, medan Cistanche tubulosa uppvisade kvalitetsskillnader mellan produktionsområdena och kunde delas upp ytterligare i tre undergrupper, vilket generellt överensstämde med den CRITIC-baserade omfattande utvärderingen.