Analys av bioaktiva ämnen och ursprungsskillnader för Cistanche Tuberosa i Xinjiang
Dec 15, 2022
Sammanfattning: De sex producerande områdena förCistanche tubulosai Taklamakanöknen valdes ut som forskningsobjekt och de bioaktiva substanserna och antioxidantaktiviteterna i olika delar (rot, mitt och topp) bestämdes och multivariat statistisk analys utfördes. Resultaten visade att skillnaderna i produktionsområden hade betydande effekter på de bioaktiva substanserna i Cistanche tubulosa (totalt antal polyfenoler,
Innehållet av totala flavonoider, totala triterpener, totala polysackarider, totala proantocyanidiner, echinakosid och verbaskosid) ochantioxidant aktivitetalla hade en betydande inverkan, och det fanns betydande skillnader ibioaktiva ämneni olika delar.Cistanche tubulosafrån olika ursprung har starkantioxidant aktivitetin vitro är IC50 för DPPH-fångningshastigheten för fria radikaler (IC50 DPPH ) mindre än 7 mg/ml, och IC50 för ABTS-friradikal-fångningshastigheten (IC50 ABTS) är mindre än 3 mg/ml mL. Korrelationsanalys visade att IC50 DPPH av Cistanche tubulosa var signifikant negativt korrelerad med totala polyfenoler ochechinakosidinnehåll; IC50 ABTS var extremt signifikant negativt korrelerad med totala polyfenoler, totala polysackarider, echinakosid ochverbascosideinnehåll. Huvudkomponentanalys extraherade 3 huvudkomponenter, vars varians kumulativa bidragsgrad var 80. 57 procent; klusteranalys delade in proverna i 3 grupper. Ordningen för omfattande poängsättning av Cistanche tubulosa från olika produktionsområden är Kashi Jiashi County (0. 445), Alar City (0. 313), Hotan Moyu County (0. 051), Turpan Shanshan County (-0. 057), Hotan Yutian County (-0. 071), Bayingolengolengqiemo County (-0. 680).
Nyckelord: Cistanche tubulosa; bioaktiva ämnen; skillnader i produktionsområden; omfattande utvärdering
Klicka för att veta mer Cistanche Tubulosa Extract Introduktion
Introduktion
Cistanche tubulosa(Schrenk) Wight, även känd som Red Willow Dayun[1], tillsammans med Cistanche deserticola, ingick i Folkrepubliken Kinas farmakopé som ursprungsväxten för Cistanche deserticola, och ingick i katalogen "Mat och medicin" Homolog" av National Health Commission 2018[2].Cistanche tubulosaInnehåller en mängd olika biologiskt aktiva substanser, såsom polyfenoler, polysackarider, fenyletanolglykosider, iridoider och deras glykosider etc. Sänkning av blodfettet [6], immunreglering [7], nervskydd [8], förebyggande av osteoporos [{{3 }}], laxermedel [11-12], minnesförbättring [13] och andra funktionella aktiviteter, den har ryktet om att vara "ökenginseng".
Cistanche tubulosaparasiterar uteslutande på rötterna av Tamarix-växter, och distribueras i Hetian, Kashgar, Aksu och andra områden runt Taklamakan-öknen i Xinjiang, mitt land. Forskning [14] fann att olika geografiska platser har olika ljus, nederbörd, temperatur och markförhållanden, vilket kommer att ha olika grad av inverkan på växternas tillväxt, utveckling och inneboende kvalitet."Folkrepubliken Kinas farmakopé" använder huvudsakligen innehåll av echinacoside och verbascoside som index för att utvärdera kvaliteten på Cistanche tubuloside[2], men de bioaktiva substanserna i Cistanche tubatus är mer komplicerade. , totala mängden flavonoider, totala polysackarider, totala triterpener, totala proantocyanidiner, etc. har ett brett spektrum av farmakologiska effekter. Därför kan multi-index kvalitetsutvärderingsmetoden mer omfattande utvärdera kvaliteten på Cistanche tubulosa medicinska material [1]. Baserat på detta avser denna uppsats att fokusera på Taklamakan-öknen i Xinjiang TaringCistanche tubulosasom forskningsobjekt, typerna, innehållet och antioxidantaktiviteterna av bioaktiva ämnen iCistanche tubulosafrån olika producerande områden undersöktes, och korrelationsanalys, principal komponentanalys och systematisk klustringsanalys användes för omfattande utvärdering, för att klargöra de olika producerande områdena i Xinjiang. Kvalitetsskillnaderna hos Cistanche tubulosa ger teoretiskt stöd och referens för att stärka kvalitetskontrollen av Cistanche tubulosa och dess produkter, samt främja den djupgående bearbetningen och omfattande utveckling och användning av Cistanche tubulosa.
1. 1. 3 Huvudinstrument och utrustning Pilot3-6 m typ frystorkning
Centrifuge, producerad av Beijing Boyikang Experimental Instrument Co., Ltd.; TGL-20B-centrifug, tillverkad av Shanghai Anting Scientific Instrument Co., Ltd.; 756 typ UV-synlig spektrofotometer, tillverkad av Shanghai Qinghua Technology Instrument Co., Ltd.; LC-20AB högeffektiv vätskekromatografi producerades av Shimadzu Corporation i Japan; Synergy H1 multifunktionell mikroplattläsare producerades av Porton Instruments Co., Ltd.
1.2 Bestämning av biologiskt aktiva ämnen
1. 2. 1 Bestämning av totalt polyfenolinnehåll Se metoden enligt FH Li et al. [17]. Beredning av provlösning: Väg 0,50 g prov, använd 70 procent (om inte specificerat, procentsatserna i texten hänvisar till volymfraktion) etanollösning som extraktionslösningsmedel, och förhållandet fast till vätska är 1 :40 (g/ml, samma nedan.), extraherades i 60 grader, 250 W ultraljudsanordning under 40 minuter, kyldes och centrifugerades vid 4000 r/min under 10 minuter, samlade upp supernatanten och späddes till 50 ml, ställdes åt sidan. Ta 1 mL av provlösningen, tillsätt 5 mL 10-procentig folinollösning, oscillera och skaka väl, efter att ha stått i 15 minuter, tillsätt 4 mL 7,5-procentig Na2CO3-lösning, oscillera och skaka väl och låt den stå i mörker i 20 minuter. Efter 1 min, mät dess absorbans (A765), och resultatet uttrycks i gallussyraekvivalent (mg GAE/g DW).
1. 2. 2 Bestämning av total flavonoidhalt
Se metoden enligt Zhang Wenye et al. [18]. Ta 1 mL av provlösningen (samma som 1.2.1) i en 10 mL brun mätkolv, tillsätt 0,3 mL NaNO2-lösning med en massfraktion på 5 procent, oscillera och skaka väl, låt stå i 15 minuter, tillsätt sedan 0,3 ml Gör ml av 10 procent Al(NO3)3-lösning och 4 ml av 4 procent NaOH-lösning, späd till 10 ml med 50 procent etanollösning, skaka
Skaka väl och efter att ha stått i mörker i 20 minuter, mät dess absorbans (A510), resultatet
Frukter uttrycks i rutinekvivalenter (mg RE/g DW).
1. 2. 3 Bestämning av total triterpenhalt
Se metoden enligt He Ce et al. [19]. Ta 0,4 mL av provlösningen (samma som 1.2.1), indunsta den till torrhet i ett vattenbad, tillsätt sedan 0,4 mL 1,5-procentig vanillin-isättikalösning och 1,6 mL perklorsyra, 70 graders vattenbad i 15 minuter, efter kylning, tillsätt 5 mL etylacetat, efter att ha stått i 10 minuter, mät dess absorbans (A560), och resultatet uttrycks i oleanolsyraekvivalent (mg OAE) /g DW).
1. 2. 4 Bestämning av total polysackaridhalt
Se metoden enligt Zhang Yadan et al. [20]. Beredning av provvätska: 1.00 g prov vägdes, avjoniserat vatten användes som extraktionslösningsmedel, förhållandet mellan fast material och vätska var 1:30, extraherades i 60 grader, 250 W ultraljudsanordning i 50 minuter, kyldes och extraherades sedan under villkoret 4000 r/min Centrifugera i 10 minuter, samla upp supernatanten, tillsätt 4 gånger volymen 95 procent etanollösning, låt stå vid 4 grader i 12 timmar, centrifugera sedan vid 5000 r/min, samla upp fäll ut och tvätta med aceton, eter och utan Tvätta med vatten och etanol två gånger, tillsätt en lämplig mängd avjoniserat vatten för att återupplösas, utför sedan deproteinisering (Sevage-metoden) och depigmentering (aktivt kol-metoden) och späd till 10 ml för testning. Ta 1 mL av provlösningen, tillsätt 0,6 mL 6-procentig fenollösning och 3 mL koncentrerad H2SO4 i följd, oscillera och skaka väl, lägg i ett kokande vattenbad i 10 minuter och mät absorbansen efter kylning (A490) , och resultatet uttrycks som glukosekvivalent (mg DE/g DW).
1.2.5 Bestämning av proantocyanidinhalt
Se metoden enligt Lu Xiao et al. [21]. Beredning av provlösning: Väg 0,50 g prov, tillsätt 80 procent etanol
Lösningen användes som extraktionslösningsmedel med ett fast-vätskeförhållande av 1:30. Den extraherades i en ultraljudsanordning vid 50 grader och 250 W under 40 min. Efter kylning centrifugerades den vid 4000 r/min under 10 min. Supernatanten uppsamlades och volymen justerades till 50 ml. ,reserv.
Ta 0,5 mL av provlösningen, tillsätt 3 mL 4 procent vanillin-metanollösning och 1,5 mL koncentrerad HCl i följd och reagera i 15 minuter, mät sedan dess absorbans (A500 ), och resultaten uttrycks som proantocyanidinekvivalent (mg PCE/g DW)express.
1. 2. 6 Bestämning av echinakosid- och verbaskosidinnehåll
Se metoden enligt Xu Mingjun et al. [22]. Beredning av provvätska: Väg 1,00 g prov, använd 80 procent etanollösning som extraktionslösningsmedel, förhållandet fast till vätska är 1:30, extrahera i 60 grader, 250 W ultraljud enheten i 40 minuter, efter kylning, extrahera vid 4000 r Centrifugera i 10 minuter under betingelserna 1/min, samla upp supernatanten, späd till 50 ml och ställ åt sidan. Den kromatografiska kolonnen var en Alltima C18-kolonn (4,6 mm × 250 mm × 5 μm), den mobila fasen var 0,4 procent vattenhaltig myrsyra (A)-acetonitril (B), kolonntemperaturen var 25 grader och flödeshastigheten var 1,00 ml/min, injektionsvolymen var 10 μL och detektionsvåglängden var 330 nm. Kvantitativ analys utfördes med extern standardmetod.
1.2.7 Bestämning av antioxidantaktivitet in vitro Beredning av provlösning: väg
1. 20 g prover extraherades med 60% etanollösning som extraktionslösningsmedel, och förhållandet mellan fast material och vätska var 1:25. De extraherades i en ultraljudsanordning vid 60 grader och 250 W under 40 min. Efter kylning centrifugerades de vid 4500 r/min under 15 min. samla upp supernatanten; ta flera lämpliga mängder supernatant, späd med 60 procent etanollösning för att prova en vätskekoncentration på 1 mg/ml, 3 mg/ml, 5 mg/ml, 10 mg/ml, 20 mg/ml, 30 mg/ml, 40 mg /ml, ska testas.
1) DPPH-förmåga att avlägsna fria radikaler. Se metoden för Xu Chunping [23]. Ta 1{{10}} μL av provlösningen, tillsätt 250 μL DPPH-lösning, blanda väl, lägg till mikrotiterplattan, håll borta från ljus i rumstemperatur i 25 minuter, använd 60 procent etanollösning som blindkontroll, mät dess absorbans (A517) och beräkna DPPH enligt följande formel Rengöringshastighet för fria radikaler. DPPH-fångningshastighet för fria radikaler=1-A1-A2A0( ) × 100 procent I formeln: A0 är absorbansen för 60 procent etanollösning istället för provlösning (blankkontroll); A1 är absorbansen av provlösning blandad med DPPH-lösning; A2 är Absorbans av absolut etanol istället för DPPH-lösning.
2) ABTS förmåga att avlägsna fria radikaler. Se metoden enligt Kong Yuting et al. [24]. Moderluten för ABTS var en blandad lösning av kaliumpersulfat (slutkoncentration: 2,45 mmol/L) och ABTS (slutkoncentration: 7 mmol/L) framställd i avjoniserat vatten och stod vid 25 grader i 12 timmar i mörker. Innan du använder ABTS-moderlösningen, späd den med avjoniserat vatten så att absorbansen (A734) är 0.7{{10}}±0.05, vilket är ABTS-arbetslösningen. Ta 10 μL provlösning (1 ~ 40 mg/ml), tillsätt den till mikrotiterplattan, tillsätt sedan 200 μL ABTS arbetslösning, förvara den mörkt i 30 minuter vid rumstemperatur, använd 60 procent etanollösning som blindkontroll , och mät dess A734 enligt följande formel för att beräkna ABTS-hastigheten för eliminering av fria radikaler. ABTS-fångningshastighet för fria radikaler=1-A′1-A′2A0( ) × 100 procent där: A′1 är absorbansen efter blandning av provlösningen och ABTS-lösningen; A′2 är absorbansen av avjoniserat vatten istället för ABTS-lösning.
1.3 Dataanalys
Alla data mättes parallellt tre gånger, och resultaten uttrycktes som (medelvärde ± standardavvikelse). Origin 2019 användes för huvudkomponentanalys och systematisk klusteranalys, och SPSS Statistics 26 användes för variansanalys. P<0. 05 indicated a significant difference.
