Anti-melanogenes och anti-tyrosinasegenskaper hos Pistacia atlantica subsp. mutica-extrakt på B16F10 murina melanomceller

Kontakt: ali.ma@wecistanche.com

Samira Eghbali-Feriz1, Akram Taleghani2, Hadi Al-Najjar3, Seyed Ahmad Emami1, Homa Rahimi4, Javad Asili1, Samira Hasanzadeh1 och Zahra Tayarani-Najaran5,*

Abstrakt:Pistacia atlantica (P. atlantica) subsp. mutica har använts i traditionell medicin och är känt för sina medicinska egenskaper. Syftet med denna studie var att utvärdera effekten av metanol (MeOH), n-hexan, diklormetan (CH2Cl2), n-butanol (BuOH), etylacetat (EtOAc), vattenextrakt och eterisk olja av P. atlantica subsp. mutica på melaninsyntes och oxidativ stress i B16F10 melanomcellinje. B16F10-cellernas livsduglighet efter behandling med ökande koncentrationer av olika extrakt av växten (0,2-200 µg/ml) mättes med användning av resazurin. Eterisk oljesammansättning identifierades genom gaskromatografi-masspektrometri (GC-MS) analys och hämmande effekt på syntesen av melanin, svamptyrosinasaktivitet, cellulärt tyrosinas och oxidativ stress utvärderades med kolorimetriska och fluorometriska metoder. Data visade extrakt i koncentrationerna 0.2-200 µg/ml, visade inte signifikant toxicitet på melanomceller men koncentrationer på 200 µg/ml eterisk olja hade cytotoxisk effekt. Pistacia atlantica subsp. mutica kunde hämma svampentyrosinasaktivitet. Mängden melanin i B16F10-celler minskade också. Dessutom har förmågan hos P. atlantica subsp. mutica-extrakt för att minska mängden reaktiva syrearter i melanomceller avslöjade anmärkningsvärtantioxidantaktivitet. Dessutom hade alla koncentrationer av eterisk olja ingen signifikant effekt i denna studie. Demelanogeneshämmande ochantioxidanteffekter av P. atlantica subsp. mutica på B16F10-celler kan antyda växtens potentiella blekningsaktivitet för användning i dermatologiska hudvårdsprodukter och för att förhindra åldrande av huden i kosmetisk industri.Nyckelord:anti-tyrosinas; Melanogenes; P. atlantica subsp. mutica.

Klicka tillcistanche fördelar för antioxidanter

INTRODUKTION

Melanin är ett hudpigment som syntetiseras i melanosomer och överförs till keratinocyter under hela den fysiologiska process som kallasmelanogenes. Melanin spelar en viktig roll i skyddet mot UV-skador och bestämmer färgen på hud, hår och ögon. Överskottsproduktion av melanin tillskrivs melanom och onormal pigmentering av huden (1-3). Nyckelenzymet i melaninbiosyntesen är tyrosinas som katalyserar två separata reaktioner, oxidation av 3,4-dihydroxi-fenylalanin (DOPA) till dopakinon och hydroxylering av L-tyrosin till DOPA (4).Tyrosinaseller polyfenoloxidas är ett kopparinnehållande enzym med blandad funktion som finns i mikroorganismer, djur och växter (5). Tyrosinas är den mest påverkande faktorn för bryning av frukt och grönsaker. Överproduktion och ackumulering av melanin kan resultera i ett stort antal hudsjukdomar inklusive melasma, fräknar, solar melanos och åldersfläckar (6). Därför,tyrosinasinhibitorer har tilldragit sig stort intresse inom livsmedels- och kosmetikindustrin. I många levande organismer är oxidation avgörande för produktionen av energi för att underblåsa biologiska processer.

Emellertid orsakar väteperoxid (H2O2) och andra -reaktiva syrearter (ROS) - celldöd och vävnadsskada i många fysiologiska och patologiska fenomen inklusive ROS-ökning efter UV-bestrålning under melanogenesprocessen. Det är också välkänt att UV-inducerad produktion av ROS är involverad i patogenesen av flera hudtillstånd inklusive åldrande, rynkor, ljuskänslighet och malignitet (7). Alltså att hitta naturliga källor tillantioxidantermed ett anti-tyrosinasaktivitet hjälper till att modifiera hudskador relaterade till överskottmelanogenes (4).

Släktet Pistacia är en medlem av familjen Anacardiaceae som omfattar cirka 9 arter och är mestadels distribuerat i Medelhavsområdet, Europa och vissa delar av Asien (8,9). Pistacia atlantica (P. atlantica)Desf. har 3 underarter nämligen: P. atlanticasubsp. kurdica (Zohary) Rech. f., P. atlanticasubsp. mutica (Fischer & CA Meyer) Rech. f. och P. atlantica subsp. cabulica (aktier) Rech. f. De tre nämnda underarterna av P. atlantica, P. khinjuk Stocks och P. vera L. odlas i Iran (10). Frukterna av P. atlanticasubsp. mutica nämligen Baneh är rund till oval med 0.5-0,7 cm i diameter. Antioxidant- och anticanceraktiviteten hos skrovet på P. atlantica har varit relaterad till växtens höga totala fenolhalt. P. atlantica har traditionellt använts för att lindra obehag och smärta i övre buken, dyspepsi och magsår (11-13). Det finns dock inga studier på melanogeneshämmande aktivitet hos P. atlantica subsp. mutica. Så i detta projekt väljer vi B16F10 melanomceller för att studera antioxidant- och anti-melanogena egenskaper hos P. atlantica subsp. mutica-extrakt. Syftet med denna studie var att undersöka den hämmande effekten av metanol (MeOH), n-hexan, diklormetan (CH2Cl2), n-butanol (BuOH), etylacetat (EtOAc), vatten (H2O) extrakt och eterisk olja av P. atlanticasubsp. mutica frukt påmelanogenesoch att utvärdera potentialenantioxidantanläggningens kapacitet på B16F10 melanomceller.

MATERIAL OCH METODER

Kemikalier

Svamptyrosinasfrån Agaricus bisporus, kojinsyra, resazurin, L-3,4-dihydroxifenylalanin (L-DOPA), diklordihydrofluoresceindiacetat (DCFH-DA), egtazinsyra (EGTA), dimetylsulfoxid (DMSO) ), fenylmetylsulfonylfluorid, glycerofosfat, -merkaptoetanol, fosfatbuffrad saltlösning (PBS), natriumortovanadat, trisbuffrad saltlösning tween 20 (TBST) köpt från Sigma (USA). Fetalt bovint serum (FBS), penicillin, streptomycin och trypsin-EDTA erhölls från GibcoBRL (Grand Island, USA). Melanomcellinje (B16F10, Kat. nr C540) köptes från Pasteur Institute of Iran (Teheran, IR Iran). Alla andra kemikalier och lösningsmedel kom från Merck (Tyskland).

Beredning av extrakt

P. atlantica subsp. mutica samlades in i maj 2014 från Bardaskanbergen, Khorasan Razavi-provinsen, nordost om Iran och identifierades av Mrs. M. Souzani. Ett kupongprov (nr:13069) deponerades i herbariet vid School of Pharmacy, Mashhad University of Medical Sciences, Mashhad, IR Iran. Omogen frukt av P. atlantica subsp. mutica (200 g) maldes med en mixer (Toos chekan Co, IR Iran) och perkolerades sedan med MeOH vid rumstemperatur i 24 timmar enligt det tidigare rapporterade protokollet (14). Efter extraktion avdunstades lösningsmedlet med användning av rotationsindunstare och frystorkades sedan. Metanolextraktet (94 g) fraktionerades ytterligare genom lösningsmedel-lösningsmedelsfördelning för att ge fem olika fraktioner inklusive MeOH, n-hexan, CH2Cl2, BuOH, EtOAc och H2O.

Isolering av den eteriska oljan

Den omogna frukten av P. atlantica subsp.mutica (150 g) utsattes för hydrodestillation med användning av en apparat av Clevenger-typ under 3 timmar. Den färglösa oljan erhölls med ett utbyte av 0,8 % (v/w). Den erhållna eteriska oljan torkades över vattenfritt natriumsulfat och lagrades vid 4 grader i mörker tills ytterligare testning.

Gaskromatografi och gaskromatografi-masspektrometri

Gaskromatografianalysen (GC) utfördes med användning av en Varian CP{{0}} utrustad med en FID-detektor, kopplad till en sammansmält kiseldioxidkolonn (CP-Sil 8CB, 50 m × 0,25 mm, filmtjocklek 0,12 µm) under följande förhållanden: ugnstemperatur 50-250 grad med hastigheten 3 grader/min; injektortemperatur 260 grader, uppdelningsförhållande 1:5, med bärgas, N2-flöde 2 ml/min; detektortemperatur 280 grader.

Gaskromatografi-massanalyser (GC-MS) utfördes med användning av en Agilent 5975-apparat utrustad med en HP-5 MS-kolonn (30 m × 0.25 mm id, {{ 14}}.25 µm filmtjocklek) ansluten till en fyrdubbel massdetektor och en dator utrustad med Wiley 7n.L-bibliotek. Ugnstemperatur 50-250 grad med hastigheten 3 grader/min, injektortemperatur 250 grader, injektionsvolym: 0,1 µL, delad injektion med splitförhållande på 1:50, med bärgasens (helium) flödeshastighet 1 mL/ min, jonkälla: 70 eV, joniseringsström: 150 µA och skanningsområde: 35-465. Identifiering av komponenterna i den eteriska oljan baserades på retentionsgaskromatografi erhållen med hänvisning till n-alkanserier (C6-C20) på HP-5MS-kolonn, jämförelse av deras masspektra och fragmenteringsmönster rapporterade i litteraturen och datormatchning med Wiley 7n.L-biblioteket (15). Kvantifiering av den relativa mängden av de individuella komponenterna av omogen frukt utfördes enligt arealprocentmetoden utan hänsyn till kalibreringsfaktor.

Cell kultur

Melanomcellinje, B16F10, hållen vid 37 grader i en fuktad atmosfär (90 procent) innehållande 5 procent CO2. Celler odlades i RPMI-1640 (Bioidea, Iran) med 10 procent (v/v) FBS, 100 IE/ml penicillin och 100 µg/ml streptomycin. Stamlösningen av P. atlantica subsp. mutica framställdes vid 50 µg/ml i DMSO och hölls vid -40 grad. Kojinsyra (2 och 4 mM) användes som positiv kontroll i alla experiment. Celler odlades i 96-brunnsplattor i en densitet av 105 celler/ml. Aktiviteten för extraktet i varje experiment beräknades med användning av följande ekvation:

🎁 procent av aktiviteten=Absorbans av provet/Absorbans av kontrollen*100

Cellviabilitetsanalys

Resazurin är en cellhälsoindikator som använder den reducerande kraften hos levande celler och omvandlas till resorufin. Resazurin är en blå, icke-toxisk, icke-fluorescerande och cellgenomsläpplig förening som omvandlas till röd färg och högfluorescerande resorufin i levande celler (16). Cirka 104 B16F10-melanomceller såddes i varje brunn på 96-mikrobrunnsplattan och behandlades med olika koncentrationer av extrakt och eterisk olja av P. atlantica subsp. mutica (0,2-200 µg/ml). Efter 4 timmars inkubation mättes absorbansen av resazurin och resorufin vid 570 nm och 600 nm med hjälp av H4 Hybrid Multi-Mode mikroplattläsare (BioTek, Winooski, USA). Varje experiment utfördes i tre exemplar. Den halvmaximala hämmande koncentrationen (IC50) beräknades med hjälp av GraphPad-programvaran från koncentration-effektkurvan: log koncentration vs respons.

Svamptyrosinasaktivitetsanalys

Svampens aktivitettyrosinasi oxidationen av L-DOPA mättes spektrofotometriskt såsom beskrivits tidigare (17), med vissa modifieringar. Kortfattat, 160 µL 5 mM L-DOPA (i 100 mM natriumfosfatbuffert pH 6,8) och 20 µL av samma buffert med och utan P. atlanticasubsp. mutica-extrakt och eterisk olja (10-1000 µg/ml) blandades med 20 µL svamptyrosinas (200 enheter/ml) och inkuberades sedan vid 37 grader i 30 minuter. Absorbansen mättes vid 475 nm med Synergy H4 Hybrid Multi-Mode mikroplattläsare (BioTek, Winooski, USA).

Bestämning av melaninhalt i melanomceller

Melanomceller, B16F10, såddes med en densitet av 105 celler per brunn i 96-brunnsodlingsplattor och inkuberades i 24 timmar. De inkuberades sedan med olika koncentrationer (0,2-200 µg/mL) av P. atlantica subsp. mutica-extrakt och eterisk olja i 24 timmar. Melaninhalten mättes som beskrivits tidigare (18). Efter behandling uppsamlades cellerna med användning av trypsin. De tvättades med PBS. Cellpelletarna solubiliserades i 50 µL lösning av natriumhydroxid (2 M) under 60 minuter vid 60 grader. Melaninhalten mättes genom att mäta absorbansen vid 405 nm med Synergy H4 Hybrid Multi-Mode mikroplattläsare (BioTek, Winooski, USA).

Cellulär tyrosinasaktivitetsanalys

Oxidationen av DOPA till DOPA-krom analyserades med spektrofotometri som indikator påtyrosinasaktivitet (18). 106 celler av B16F10-melanom ströks ut i varje brunn på 96-brunnsplattan över natten. Efter behandling av cell med olika koncentrationer (0.2-200 µg/mL) av P. atlantica subsp. mutica-extrakt och eterisk olja i 24 timmar. Cellerna lossades med trypsin; tvättades med PBS och lyserades med 50 µL natriumfosfatbuffert (pH 6,8, 100 mM) innehållande 1 procent triton X-100 och 0,1 mM fenylmetylsulfonylfluorid. Lysaten centrifugerades vid 10,000 rpm i 20 minuter vid 4 grader. 100 µL av varje lysat (vardera innehållande 100 mg protein) blandades med 30 µL 5 mM DOPA i 96-brunnars platta och inkuberades vid 37 grader i 2 timmar, absorbansen mättes vid 475 nm med Synergy H4 Hybrid Multi-Mode mikroplattläsare (BioTek, Winooski, USA).

Bestämning av nivån av cellulärt reaktivt syrearter

Nivån av reaktiva syreämnen mättes som beskrivits tidigare med mindre modifieringar (19). Melanomceller, B16F10, (2 × 104) såddes i 96-brunnsplattor över natten och behandlades sedan med olika koncentrationer (0,2-200 µg/mL) av P. atlantica subsp . mutica-extrakt och eterisk olja i 24 timmar. Därefter inkuberades celler med 50 µL H2O2 (24 mM) vid 37 grader i 30 minuter. Sedan tillsattes 50 µL DCFH-DA till cellerna och fluorescensintensiteten för DCF mättes vid 504 nm emission och 524 nm excitation med användning av en Synergy H4 mikroplattläsare (BioTek, USA).

Western blotting-analys

Melanomceller, B16F10, odlades i 75 cm3 kolvar med och utan metanolextrakt (0.{5}} µg/ml) under 24 timmar. Cellerna lyserades sedan i en buffert (50 mM tris-HCl, pH 7,4, 2 mM EGTA, 1 mM fenylmetylsulfonylfluorid, 10 mM glycerofosfat, 10 mM -merkaptoetanol, 1 mM natriumortovanadat, 0,1 procent deoxikolsyra natriumsalt). En lika stor mängd proteiner (50 µg) laddades på 12 procent natriumdodecylsulfat (SDS)-polyakrylamidgelelektrofores och överfördes till polyvinylidendifluoridmembran. Membranen blockerades under 2 timmar i 10 procent skummjölk i TBST (20 mM tris-HCl pH 7,4, 100 mM NaCl och 0,1 procent tween 20) buffert vid rumstemperatur. Efter tvättning med TBST-buffert inkuberades membranet sedan över natten med en primär antikropp: 1:300 (kanin-anti-tyrosinasantikropp (Santa Cruz Biotechnology, CA)). Efter sköljning 3 gånger med TBST-buffert, inkuberades membranen sedan i 2 timmar med anti-kanin-IgG (1:2000) som sekundär antikroppen (cellsignalering). Sköljning 3 gånger med TBST-buffert upprepades och proteinbanden detekterades med hjälp av det förbättrade kemiluminescerande (ECL) prime western blotting-detektionssystemet (BioRaD, USA) (20). Anti- -aktinantikropp användes som laddningskontroll.

Statistisk analys

De relativa resultaten av experimenten presenterades som medelvärdet ± SD för de tre oberoende mätningarna. Variansanalys och IC50-beräkning utfördes med GraphPad Prism 6.0 med ett envägs ANOVA-test och medelvärdena jämfördes med Dunnett-tester. P < 0,05="" står="" för="" en="" statistiskt="" signifikant="" skillnad="" mellan="" extraktbehandlade="" celler="" och="" kontroll.="" ett="" tvåvägs="" anova-test="" och="" bonferroni-jämförelse="" efter="" test="" användes="" för="" att="" jämföra="" effekten="" av="" olika="" extrakt="" i="" varje="">

RESULTAT

Eterisk olja sammansättning

Gaskromatografi har använts för kvantifiering och Gc-Mass för identifiering av föreningarna. Resultaten av både GC- och GC-MS-analys presenteras i den kvantitativa och kvalitativa identifieringstabellen för föreningarna. När det gäller P. atlanticasubsp. mutica, 68 beståndsdelar identifierades i den eteriska oljan och stod för 99,8 procent av den totala oljesammansättningen (tabell 1). De grupperade föreningarna i den eteriska oljan bestämdes som monoterpenkolväten 86,5 procent, syresatta monoterpener 3,7 procent, seskviterpenkolväten 8,7 procent, syresatta seskviterpener 0,1 procent och de övriga 0 ,8 procent . Huvudkomponenterna i den eteriska oljan var -E-ocimene 29,7 procent, myrcen 17,1 procent, -Z-ocimene 17,0 procent, -pinen 10,2 procent och E-caryophyllene 7,1 procent.

Effekt av extrakt på cellöverlevnad

Cellernas livsduglighet övervakades med resazurin. Melanomceller, B16F10, såddes i en 96-brunnsplatta. Efter 24 timmar behandlades celler med olika koncentrationer (0.2-200 µg/mL) av P. atlantica subsp. mutica-extrakt visade resultaten att extrakten inte hade någon signifikant cytotoxisk effekt på B16F10-celler vid de koncentrationer som användes i denna studie (Fig. 1). Doxorubicin som positiv kontroll inducerade signifikant celldöd (P <>

Effekt av extrakt på svamptyrosinasaktivitet

Effekten av P. atlantica på hämning av svamptyrosinas i oxidationen av L-DOPA utvärderades. Resultaten visade att svamptyrosinasaktiviteten hämmades av alla olika extrakt, men koncentrationen på 1000 µg/mL n-hexanextrakt hade ingen signifikant effekt i detta test. Kojinsyra (2 och 4 mM) användes som en positiv kontroll (P < 0,05)="" (fig.="">

Effekt av extrakt och eterisk olja på syntesen av melanin

Att studera effekten av olika extrakt och eterisk olja av P. atlantica subsp. mutica på melaninsyntes, utvärderades melaninhalten i extraktbehandlade B16F10 melanomceller. Kojinsyra (2 och 4 mM) användes som en positiv kontroll.

Resultaten visade att MeOH, CH2Cl2 och EtOAc extrakt (0.2-200 µg/mL), n-hexan (2-200 µg/ml) och H2O-extrakt (2{{9) }} och 200 µg/ml) hade hämmande effekt på melaninsyntes (P < 0,05)="" (fig.="" 3).="" emellertid="" hade="" alla="" koncentrationer="" av="" eterisk="" olja="" och="" buoh-extrakt="" ingen="" signifikant="" hämmande="" effekt="" på="" melaninsyntesen.="" resultaten="" av="" eterisk="" olja="" visas="" inte="" i="">

Effekt av extrakt på cellulär tyrosinasaktivitet

För att utvärdera mekanismen för den hämmande effekten av P. atlantica subsp. mutica extrakt påmelanogenesi synnerhet utvärderade vi det intracelluläratyrosinasaktivitet i B16F10 melanomceller. Resultaten visade att MeOH, EtOAc och BuOH extraherar (0.2-200 µg/mL), n-hexan (0,2 µg/ml) och CH2Cl2 (20 och 200) µg/ml) extrakt av P. atlantica subsp. mutica kunde signifikant hämma cellulär tyrosinasaktivitet (P < 0,05)="" (fig.="" 4)="" men="" vattenextrakt="" hade="" ingen="" hämmande="" effekt="" på="" cellulär="">

Effekt av extrakt på cellulär reaktiva syrearter nivå

Den intracellulära ROS-nivån som en indikation påantioxidantkapaciteten hos P. atlantica subsp.mutica mättes i celler behandlade med 24 mM H2O2 enbart eller med olika extrakt i B16F10 melanomceller. Resultaten visade att alla extraktkoncentrationer av P. atlanticasubsp. mutica förutom 0.2 µg/mL CH2Cl2-extrakt kunde signifikant undertrycka den oxidativa stress som induceras av H2O2 (P < 0,05)="" (fig.="">

Effekt av extrakt på cellulär tyrosinasproteinnivå

Den intracellulära effekten av P. atlanticasubsp. mutica på melanogena relaterade proteiner såsom tyrosinas som en indikator påmelanogenesutvärderades med western blot. Som visas i fig. 6,tyrosinasproteinnivåerna minskade signifikant av P. atlantica subsp. mutica-extraktbehandling vid koncentrationen {{0}},5 och 10 µg/ml (P < 0,05).="" -actin="" användes="" som="" intern="">

Effekter av eterisk olja på olika parametrar

Eterisk olja vid 0.2-200 µg/mL visade ingen signifikant effekt på alla ovan nämnda parametrar, förutom vid koncentrationen 200 µg/ml, som uppvisade cytotoxisk effekt på melanomceller. Därför ingår inte resultaten av eterisk olja i resultatavsnittet eftersom inga hämmande effekter observerades.

DISKUSSION

Naturbaserade kosmetiska produkter marknadsförs i stor utsträckning av kommersiella byråer för deras säkerhet och multifunktionella aktivitet. Att hitta nya anti-melanogena medel medantioxidantaktivitet från naturliga källor är ett av intressena i formuleringen av de produkter som används för hyperpigmenteringsrubbningar. I medicinska och kosmetiska produkter som används som hudblekningsmedel, hämning av melaninbildningen, eliminering av fria radikaler och hämning avtyrosinasaktivitet som är viktig för behandling av relaterade hudsjukdomar (21).

I denna studie har antioxidantaktiviteten hos olika extrakt av P. atlantica subsp. mutica utvärderades och deras effekter på tyrosinasaktiviteten och melaninsyntesen analyserades. MeOH- och EtOAc-extrakten av P. atlantica subsp. mutica visade signifikantantioxidantaktivitet vid 2, 20 µg/ml och 20 200 µg/ml, vilket kan tillskrivas de polyfenoler och flavonoider som finns allmänt i växten. Resultaten visade att alla extrakt, särskilt MeOH-, EtOAc- och H2O-extrakt, avsevärt kunde hämma svampentyrosinasaktivitet. MeOH-, EtOAc- och BuOH-extrakten kunde också minska den cellulära tyrosianaktiviteten, vilket var i enlighet med minskningen av melaninproduktionen i celler. I denna studie hade alla koncentrationer av eterisk olja ingen signifikant hämmande effekt mot cellulär tyrosians, melaninsyntes ochantioxidantaktivitet. På grund av MeOH-extraktets mer aktivitet i olika experiment i jämförelse med andra extrakt har vi valt det nämnda extraktet för western blot-analys. Sammanfattningsvis bekräftades den anti-melanogena effekten av detta extrakt i alla analyser i B16F10-celler, och var jämförbar med den positiva kontrollen kojinsyra (tabell 2).

MeOH-, CH2Cl2- och EtOAc-extrakten har minskat cellulärttyrosinasaktivitet, melaninhalt och ROS. Semipolära naturfraktioner kan extrahera fytokemikalier som är ansvariga för antilanogen aktivitet såsom polyfenoler och flavonoider. n-hexanfraktionen och eterisk olja var mindre aktiva, vilket tyder på att växtfytokemikalier med opolär och flyktig natur inte har någon signifikant effekt påmelanogenesprocess (22,23).

Polyfenoler och flavonoider fungerar som hämmare av ROS-produktion och kan vara ansvariga för de anti-melanogena egenskaperna hos växtextrakt (24-27). Huvudföreningarna i extraktet av P. atlantica subsp. mutica är quercetin, luteolin, isoquercetin, rutin, luteolin 7-laktat och fenolföreningar såsom p-kumarsyra, koffeinsyra och gallussyra som är ansvariga förantioxidantaktivitet (28). Rutin har rapporterats hämma aktiviteten av tyrosinas och är ett potent antipigmentmedel på grund av närvaron av hydroxylgrupper (29). Intressant nog har quercetin, luteolin och isoquercetin också många hydroxylgrupper i sin struktur, vilket gör dem lämpliga för interaktion med tyrosinas vilket resulterar i antityrosinasaktiviteten (21,30). Nyligen har det visat sig att effekterna av flavonoider som luteolin och quercetin huvudsakligen medieras via moduleringen av transkriptionsfaktorn avmelanogenes-associerad transkriptionsfaktor (MITF) och/eller melanogenesenzymernatyrosinas, DCT eller tyrosinasrelaterat protein 1 (TYRP-1) (31). P-kumarsyra och koffeinsyra hämmade svamptyrosinasaktiviteten och var 10- och 3-faldigt mer potenta än kojinsyra (32).

Gallsyra uppvisar tyrosinashämmande aktivitet och reducerar dopakinon tillbaka till L-DOPA genom redoxcykling, liknande askorbinsyra (33). På liknande sätt har P. atlantica subsp. mutica minskade nivån av tyrosinasprotein i celler, vilket är starkt korrelerat med närvaron av quercetin, luteolin, isoquercetin, rutin och andra polyfenoler i växten.

Det finns många rapporter om att växter har en anti-melanogen och antioxidant aktivitet som minskar oxidativ stress, vilket kan ha en hög potential för behandling av hudsjukdomar. Till exempel minskade de olika extrakten av luftdelar av P. atlantica oxidativ stress, vilket kan tillskrivas polyfenoler, flavonoider och antocyaner som finns allmänt i växten (34). I en annan studie minskade MeOH-extraktet av P. vera melaninutsöndringen som tillskrevs vissaantioxidantföreningar i denna växt. Denna studie visade att kojinsyra, som en positiv kontroll, visade ett IC50-värde på 0,05 mg/mL och högre koncentrationer av P. vera kan användas som ett effektivt medel för behandling av hudsjukdomar såsom melanomcancer (35 ). Gourine, et al. visade att luftdelarna av P. atlantica har kraftfulla antioxidantegenskaper (36). MeOH och CH2Cl2-fraktioner av Nepeta satureioide indikerade också potentiella effekter mot melaninproduktion i B16F10-melanomceller och kan bidra till kosmetiska formuleringar av hudvårdsprodukter (37). Derivaten av kojinsyra hade hämmande aktivitet påtyrosinas. Det verkar som att närvaron av fri hydroxylgrupp och metylersättning i denna förening bekräftade hämmande aktivitet. I denna studie indikerade kojinsyra (positiv kontroll) ett IC50-värde på 0.28 mM (38). Fenylpropanoidglykosiderna och flavonoiderna isolerade från Teucrium polium L. var. gnaphalodes visade antioxidant- och tyrosinashämmande aktiviteter. Författarna visade att jaranol visade den högsta tyrosinashämmande aktiviteten (IC50 0.041 mM) och poliumosid var den bästa antioxidanten bland de testade föreningarna. Kojinsyra visade ett ICso-värde på 0,02 mM (39).

Minskad proteinnivå avtyrosinasav P. atlantica subsp. mutica ochantioxidantegenskaper och reducerad ROS har bekräftat användningen av detta medel som ett medel mot melanogenes. Denna studie har för första gången fastställt den hämmande effekten av P. atlanticasubsp. mutica påmelanogenesi B16F10 melanomceller. För att förhindra ackumulering och överproduktion av melanin i huden, hämning avtyrosinashar en viktig roll. Med hänsyn till den rapporterade antioxidanteffekten av P. atlantica subsp.mutica, är flavonoid- och fenolföreningar därför viktiga komponenter i växten som är ansvariga för anti-melanogenes och antityrosinasaktiviteter hos P. atlantica subsp. mutica. Både antioxidant och anti-melanogen aktivitet hos P. atlantica subsp. mutica kan erbjuda ett lämpligt medel för hudblekningsformuleringar och kan ingå i kosmetiska produkter för hudvårdsformuleringar.

SLUTSATS

Sammanfattningsvis visade denna studie för första gången att MeOH- och EtOAc-extrakt av P. atlantica subsp. mutica har starktyrosinashämmande aktivitet som är i enlighet med melaninreduktion. Dessutom har P. atlanticasubsp. mutica visade också hög rensningsaktivitet ochantioxidantegenskaper, vilket främst kan tillskrivas dess höga nivåer av flavonoider och totala polyfenoler. Resultaten antydde att förmågan hos P. atlanticasubsp. mutica för att minska melaninproduktionen kan korrelera med utarmning av cellulärt ROS och dess hämmande verkan på signalvägen som reglerartyrosinasaktivitet. Eftersom det semipolära extraktet hade betydande antityrosinas och anti-melanogeneffekter, därför drar vi slutsatsen att föreningarna som är ansvariga för dessa effekter ackumuleras i extraktet, inte i eteriska oljor.