Kemiska Egenskaper Hos En Mannoglukan Från Cistanche Deserticola
Mar 06, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com
1. Material
Orala pastor för hästar från två olika tillverkare användes innehållande 10 mg/g (A) respektive 20 mg/g (B) ivermektin. Den kvantitativa analysen för ivermektin utfördes och halten var 104,4–107,7 procent av den deklarerade koncentrationen.
2. Upplösningstest
Testet utfördes med en Ph. Eur. paddelapparat (Pharma Test, Heinberg, Tyskland), vid omrörning av 75 rpm eller 50 rpm, vid 37 -0,5 C. Natriumlaurylsulfat (BDH Chemicals, Poole, England) 0,5 % (vikt) /v) vattenhaltig lösning användes som ett upplösningsmedium (900 ml). Pastan (4 g A eller 2 g B) placerades i kärlet med en spruta med en kanyl (A) eller genom att droppa provet på ytan av upplösningsmediet (B). Efter tidsintervallen (15, 30, 45, 60 min och 2 timmar) togs ett prov av upplösningsmediet (2 ml), filtrerades genom ett glasfilter och analyserades.
3. HPLC-analys
Bestämningen av ivermektin utfördes med en modifierad HPLC-metod som beskrivs i Ph. Eur. De analyserade lösningarna späddes med metanol (1:10). HPLC-systemet bestod av en oktadecylkolonn (250 -4 mm; 5 mm; Lichrospher RP-18; Merck), en integrator D-12500 A, en detektor UV-Vis L{{7} }, pump L-6200A (Merck-Hitachi, Darmstadt, Tyskland). En blandning av acetonitril:metanol:vatten (64:24:16) användes som den mobila fasen med en flödeshastighet av 1,9 ml/min. Volymen av det injicerade provet var 20 ml och detektion utfördes vid 254 nm.
4. Löslighetsstudier
En tillgång av substansen skakades i tätt slutna glaskolvar med ett lämpligt lösningsmedel (tabell 1) under 20 timmar vid 37 0.1 C. Suspensionerna filtrerades och filtratet, efter utspädning i metanol, analyserades med HPLC .
5. Stabilitet i sur lösning
Lösningar av ivermektin i HCl {{0}}.1 M förvarades i tätt slutna glasflaskor vid 20 C och 37 C. Kromatogram av lösningarna registrerades vid t ¼ 0 och efter 1, 2 och 6 timmar. Arean av ivermektin (retentionstid 10,5 min) och ytterligare toppar beräknades.
Referenser
FDA-vägledning för industrin: SUPAC-SS icke-sterila halvfasta doseringsformer. Uppskalning och förändringar efter godkännande: kemi, tillverkning och kontroller; in vitro frisättningstestning och in vivo bioekvivalensdokumentation. Maj 1997. FIP riktlinjer för upplösningstestning av fasta orala produkter (1997) Dissolute. Technol. 4:5–14. Siewert M, Dressman J, Brown C, Shah VP (2003) FIP/AAPS riktlinjer för upplösning/in vitro frisättningstestning av nya/speciella doseringsformer, AAPS PharmSciTech, 4 (1) artikel 7 Modern Research Center for Traditional Chinese Medicine, School of Pharmaceutical Sciences, Peking University Health Science Center, Peking, Kina
Xiang mei Wu, Pengfei Tu Mottaget 13 februari 2004, accepterad 4 april 2004, Prof. Dr. Pengfei Tu, Modern Research Center for Traditional Chinese Medicine, School of Pharmaceutical Sciences, Peking University Health Science Center, nr 38, Xueyuan Road , Haidian District, Beijing 100083, Kina Pengfeitu@bjmu.edu.cn Pharmazie 59: 815–816 (2004)
En ny mannoglukan frånCistanche deserticolafrån Kina kännetecknas. Föreningen är ansvarig för en mild stimulering av mitogeninducerad T- och B-lymfocytproliferation.
Cistanche deserticolaYC Ma är en holoparasit som växer på rötterna av den tvåhjärtbladiga växten Haloxylon ammodendron Bunge som är utbredd i nordvästra Kina. Eftersom det är en viktig tonic inom orientalisk medicin, har många aktiva komponenter och farmakologiska aktiviteter hävdats (Karasawa et al. 1986; Yoshizawa et al. 1990). Dessa egenskaper kan vara associerade med några av polysackaridkomponenterna iCistanchesom ännu inte har utretts. Mitogena pektiska polysackarider och neutrala polysackarider har isolerats och karakteriserats frånCistanche deserticolafrån Mongoliet (Radna et al. 1996; Anna et al. 1997; Bozena et al. 1999). Här redovisar vi de kemiska egenskaperna hos en ny mannoglukan frånCistanche deserticolafrån Kina, som är ansvarig för mild stimulering av mitogeninducerad T- och B-lymfocytproliferation. Efter stjälkarna avCistanche deserticolaYC Ma extraherades med 95 procent etanol, kallt destillerat vatten användes för att extrahera återstoden. Kallvattenextraktet fälldes ut med EtOH, proteinet avlägsnades och dialyserades, vilket gav den råa polysackariden CCDP. Den råa polysackariden fraktionerades på en DEAE-kolonn och en Sephadex G-150-kolonn för att ge en proteinfri polysackarid (CDP-6), som bestod av glukos (89,2 procent) och mannos (1{{58} },4 procent ), och varav den genomsnittliga Mr uppskattades till 6.8 -104. Polysackariden CDP-6 visade [a 20 D 42 (c 1, H2O). De absoluta konfigurationerna av sockerarterna bestämdes med GC för TMS (– )-2-butylglykosider. CDP-6 metylerades (Needs et al. 1993), hydrolyserades, omvandlades till alditolacetaterna och analyserades med GC och GC-MS (tabell). Detta resultat tillsammans med molförhållandedata från metyleringsanalys antydde att CDP-6 har en övervägande 1,6-länkad Glcp och en ryggrad 1,6- länkad i mindre utsträckning grenad vid O{{ 24}} av mannos. Metyleringsanalysen av två polymerer (CDP-6-1, CDP-6–2) från partiell hydrolys bekräftade att CDP-6 har en ryggrad bestående av 1,6-kopplad glukosylrester och 1,6-kopplade mannosylrester, som är substituerade vid O-3 av mannos med grenar bestående av den terminala, 1,6- kopplade glukosylrester, och 1,3,{{38} }kopplade mannosylrester. Enligt molförhållanden och litteraturen (Bozena et al. 1999; Bacon et al. 1996) visade 13C NMR-spektrumet för CDP-6 signaler på grund av anomera kol i a-d-Glcp (C{{45) }} vid 98,4 ppm), bd-Map (C-1 vid 104,3–104,9 ppm) och ad-Map (C-1 vid 100,0 ppm). 1H NMR-spektrumet för CDP-6-2 i D2O visade protonsignaler motsvarande ad-Glcp (H-1 vid 4,94–4,95 ppm) och a-d-Map (H-1 vid 4,96–5,00 ppm). 13C NMR-spektrumet för CDP-6-2 i D2O visade protonsignaler motsvarande aD-Glcp (C-1 vid 98,6 ppm) och ad-Map (C-1 vid 98,4 ppm). Mannoglukaner rapporteras ha en 1,4-länkad glukopyrannan och 1,4-kopplad mannopyrannan-ryggrad (Radjabi Nassab et al. 1984; Tanabe et al. 2000). CDP-6 har några olika strukturella egenskaper genom sin a-1,6-länkade Glcp och b-1,6-länkade Map-ryggrad, och den ersätts av mannoglukangrenar (Fikon.). För att undersöka användningen avCistanche deserticolainom folkmedicin utvärderades effekten av CDP-6 på T- och B-cellssystemen. Det visade sig milt stimulera mitogeninducerad T- och B-lymfocytproliferation.
Experimentell
1. Allmänna rutiner
Optisk rotation mättes med en W22-1S automatisk polarimeter. IR-spektra bestämdes på en Perkin-Elmer 599B spektrometer. GC-analys utfördes på ett Agilent HP6890N-instrument, utrustat med en FID-detektor. GC-MS utfördes på ett Finnigan Trace GC-MS-instrument. Homogenitet och Mr of CDP-6 uppskattades från kalibreringskurvan för elueringsvolymen för standarddextraner, som utfördes på
en Agilent 1100-serieapparat med en Shodex KS-805-kolumn.1H NMR- och 13C NMR-spektra registrerades med ett INOVA-500-instrument. Proteininnehåll analyserades med metoden enligt Bradford (Andre et al. 1975). Monosackarider analyserades med avseende på deras alditolacetat efter att de hade hydrolyserats (2 M TFA, 2 timmar, 110 C), reducerats och acetaterats. Hydrolysaten analyserades med hjälp av TLC på en kiselgelplatta innehållande 5 procent natriumdivätefosfat i BuOH-EtOAc-isopropylalkohol-HOAC--H2Opyridin (3,5: 10: 6: 3,5 : 3 : 3) och socker detekterades genom sprayning med orcinol -H2SO4. De resulterande alditolacetaterna analyserades med GLC med användning av en HP-5 kapillärkolonn (30 m 0,32 mm). CDP-6 metylerades med Ciucanu-metoden, följt av hydrolys, och analyserades som partiellt metylerade alditolacetater med GC-MS. Efter partiell hydrolys dialyserades och separerades produkterna, vilket gav två polymerer, CDP-6-1 och CDP-6–2.
2. Växtmaterial
Växten samlades in från provinsen Inner Mongolia i Kina i augusti 2001 och identifierades av Hu-Biao Chen, Institutionen för naturmedicin, School of Pharmaceutical Sciences, Peking University Health Science Center. Ett kupongexemplar [E-1-(9)] av denna växt deponerades vid School of Pharmaceutical Sciences, Peking University. 3. Extraktion, isolering och rening av polysackarid CDP-6 stammen avCistanche deserticolaYC Ma (1500 g) extraherades med 95 procent etanol (6 L) under återflöde. Den torkade etanololösliga återstoden macererades tre gånger med kallt destillerat vatten per 12 timmar. Kallvattenextraktet filtrerades och filtratet centrifugerades. Efter utfällning med fyra volymer EtOH (omröring och stående i 24 timmar vid 4 C) erhölls fällningsprodukten (35,5 g). Proteinet i fällningen avlägsnades med Savages metod. Efter upplösning i destillerat vatten dialyserades återstoden (25,5 g) och lyofiliserades (utbyte: 10,6 g). Den råa polysackariden (8 g) löstes i destillerat vatten (100 ml, 8 procent vikt/volym) och separerades med användning av en DEAE-kolonn (70 5 cm, gradienten 0–2 M NaCl, per 1,5 L). En vatteneluerad fraktion (600 mg) erhölls. Ett prov (250 mg) renades genom kolonngelpermeationskromatografi på en Sephadex G- 150-kolonn (4 - 80 cm, 1600 ml, 5 ml per fraktion). Fraktioner av CDP-6 (1500–1600 ml) slogs samman, dialyserades och frystorkades. Efter att ha avsaltats av Sephadex G-25 (60 1 cm). CDP-6 (110 mg) erhölls och bestämdes som en enda topp med HPSGC.
Bekräftelse:Författaren tackar Dr. Baomei Shao och professor Xiaoming Gao, School of Basic Medical Sciences, Peking University Health Science Center, för att de mätte den immunmodulerande aktiviteten hos CDP-6.
