Cistanche-baserade kapslar lindrar kronisk icke-bakteriell prostatit hos råttor genom att modulera tarmmikrobiota, serummetaboliter och SPHK1/S1P1/PI3K/Akt-signalvägen

3.5 Serummetabolomisk analys av CBC i EAP-råttor

3.5.1 Multivariat statistisk analys av fekal metabolomik

Huvudkomponentanalys (PCA) avslöjade tydliga gruppseparationer under positivt jonläge blandnormala, modell- och högdos CBC-grupper, medCBC-grupp kluster närmare den normala gruppenoch längre från modellgruppen. Under negativ jonläge observerades partiell överlappning mellan normal- och modellgrupperna, medan CBC-behandlade prover fortfarande uppvisade god särskiljning (Figur 5).

Partiell minsta kvadraters diskriminantanalys (PLS-DA) bekräftade en stark klassificeringseffekt över alla tre grupperna under båda joniseringslägena. De200 gångers permutationstestvaliderade modellens tillförlitlighet, med enQ² skärningspunkt under 0,05, vilket indikerar ingen överanpassning. En nedåtgående trend iR² och Q² värdenlängs X-axeln bekräftade ytterligare modellens stabilitet (Figur 6).

CISTANCHE-BASERAT FORMELTE

Köp nu

 

 

 

 

 

3.5.2 Identifiering av differentiella metaboliter som påverkas av CBC

Differentiella serummetaboliter filtrerades baserat påVIP > 1från PLS-DA,veckändring Större än eller lika med 1, ochp < 0,05. Efter att ha uteslutit exogena föreningar,10 signifikanta endogena metaboliteridentifierades (tabell 9).

 

3.5.3 KEGG Pathway Anrichment Analysis

KEGG anrikningsanalys av de differentiella metaboliterna indikerade detCBC-behandling kan modulera viktiga metaboliska vägarinvolverad i kronisk prostatit. De berikade vägarna inkluderade:

Sfingolipidmetabolism

Retinolmetabolism

Glycin-, serin- och treoninmetabolism

Glycerofosfolipidmetabolism

Arakidonsyrametabolism(Figur 7)

Dessa vägar är kända för att spela viktiga roller iimmunreglering, oxidativ stress och inflammation.

3.5.4 Korrelation mellan differentiella metaboliter och tarmmikrobiota

Spearman korrelationsanalys utfördes mellan de 10 differentiella metaboliterna och signifikant förändrade bakteriella taxa. Noterbara samband inkluderar:

PA(6-keto-PGF1 /i-20:0): positivt korrelerad medLaktobacillusochRomboutsia ilealis, negativt medNeglectibacter timonensis

SM[d16:2/20:4-2OH]: positivt korrelerad medParaprevotella claraochRomboutsia ilealis

PS[18:1/20:0]: positivt korrelerad medRomboutsia ilealis, negativt medOscillospiraceae

lysoPA(0:0/18:0): negativt korrelerad medLaktobacillusochRomboutsia ilealis, positivt medNeglectibacter timonensis

Ureidoisosmörsyra: negativt korrelerad medParaprevotella clara

16(R)-HETEoch(2R,3R)-2-aminooktadekan-1,3-diol: positivt korrelerad medNeglectibacter timonensis

Sfingosin: negativt korrelerad medRomboutsia ilealis, positivt medNeglectibacter timonensis

lysoPA(18:0/0:0)ochRetinoyl-glukuronid: negativt korrelerad medBifidobacterium animalisochRomboutsia ilealis(Figur 8)

Dessa samband tyder påen stark koppling mellan CBC-inducerade metabolomiska förändringar och tarmmikrobiotamodulering.

 

3.6 Reglering av SPHK1/S1P1/PI3K/Akt Pathway av CBC

Western blot-analys visade detSPHK1 och S1P1 proteinuttryck var signifikant förhöjda i modellgruppenjämfört med normalgruppen. CBC (högdos) signifikantnedreglerade SPHK1- och S1P1-proteinnivåer. Ingen signifikant skillnad observerades i SPHK2-uttryck bland grupperna (Figur 9, Tabell 10).

Dessutom,PI3K och Aktuttrycksnivåer reducerades signifikant i modellgruppen, medanp-PI3K och p-Aktnivåerna ökade signifikant, vilket tyder på aktivering av vägen. CBC-behandlingåterställda PI3K- och Akt-nivåerochhämmade deras fosforylering, vilket minskarförhållanden p-Akt/Akt och p-PI3K/PI3K.

Dessa resultat tyder på detCBC hämmar SPHK1/S1P1/PI3K/Akt-signalvägen, vilket bidrar till dess antiinflammatoriska effekt.

4. Diskussion

Kronisk icke-bakteriell prostatit (CNP) står för över90 % av alla prostatitdiagnoseroch är förknippad med en komplex etiologi, inklusivepatogen mikrobiell infektion, oxidativ stress, immunförstöring och autoimmuna reaktioner [20–21].

Nya bevis tyder på detinflammation och autoimmunitetär centrala för CNP-patogenes [22-24]. Deexperimentell autoimmun prostatit (EAP) råttmodell, som efterliknar human CNP i histopatologi och immunsvar, valdes därför [25].

I våra tidigare farmakokemistudier i serum hittades CBC-komponenter ihögre förekomst i avföring än i serum, antyderintestinal interaktion som en primär verkningsväg(se CNKI Enhanced Publication Materials).

CBC förbättrar prostatapatologi och inflammatoriska index

HE-färgning visade att CBC lindradelymfocytinfiltration, återställdacinar strukturoch ökadekörtelsekret. CBC avsevärtminskat antal leukocyteri prostata homogeniserar och återställslecitinkroppstäthet-båda viktiga CNP-diagnostiska markörer [26–28]. Inflammation leder till epitelskador och minskad lecitinutsöndring, medan aktiverade makrofager uppslukar lecitinkroppar [29]. CBC vände effektivt dessa patologiska förändringar.

CBC ocksåminskade pro-inflammatoriska cytokiner(TNF-, IL-1, IL-6, IL-8, IL-2, iNOS) ochförhöjda antiinflammatoriska IL-10, som stöder dess potenta antiinflammatoriska verkan.

 

CBC reglerar tarmmikrobiota dysbios

CNP är nära kopplat tilltarmmikrobiota obalans, vilket kan minskakortkedjiga fettsyror (SCFA)och äventyra tarmbarriären, vilket tillåterLPS-translokationoch utlöser prostatainflammation viamikrobiellt associerade molekylära mönster (MAMPs) [30].

Det visar studierCistanche polyfenolerförbättra mikrobiota obalans och modulera viktiga taxa involverade iinflammatorisk tarmsjukdom (IBD)[31]. I denna studie,Lactobacillus och Bifidobacterium animalisvar utarmade i EAP-råttor men återhämtade sig efter CBC-behandling. Dessa probiotika är kända för att lindra urogenital inflammation [32–33]. DäremotVeillonella, ofta berikad i autoimmuna tillstånd [34], var förhöjd hos EAP-råttor och minskade efter CBC-administrering. Liknande,Prevotellaceae, associerad med prostatacancer [35], berikades i EAP-gruppen och reducerades av CBC.

 

CBC modulerar viktiga metaboliska vägar

Metabolomiken avslöjadsfingosinförhöjningi EAP-råttor, signifikant reducerad av CBC, vilket tyder på involvering isfingolipidmetabolism. Sfingolipider är viktiga strukturella och signalerande molekyler som är involverade icelltillväxt, apoptos och immunreglering [36].

Sfingosin-1-fosfat (S1P), syntetiserad avSPHK1/2, är en potent lipidmediator som binder tillS1P-receptorer (S1PR)för att reglera handel med immunceller och är inblandad iinflammatoriska och autoimmuna sjukdomar[37–39]. S1PR-modulatornFTY720 (fingolimod)har visat sig minska inflammation och vävnadsskada i EAP-modeller [40].

S1P aktiverar också nedströms vägar somPI3K/Akt, som är förknippade med kronisk inflammation. I vår studie, CBCnedreglerade SPHK1 och S1P1, och hämmasPI3K och Akt fosforylering, vilket tyder på en reglerande effekt på denna kritiska axel.

 

Slutsats

Denna studie, integreratarmmikrobiotasekvensering och oriktad metabolomik, visar detCistanche-baserade kapslar (CBC)effektivt:

Förbättraskada på prostatavävnaden

Dämpainflammatoriska cytokiner

Återställavälgörande tarmflora

Reglerasfingolipidmetabolism

HämmaSPHK1/S1P1/PI3K/Akt signalering

Dessa fynd gerövertygande bevisför CBC:s potential som enmulti-target örtterapi för kronisk icke-bakteriell prostatit, och erbjuda envetenskaplig grund för dess utökade kliniska tillämpning.