Cistanche Deserticola-polysackarider lindrar kognitiv nedgång i åldrande modellmöss genom att återställa tarmmikrobiota-hjärnaxeln

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Yuan Gao 1,*, Bing Li 1,*, Hong Liu 1, Yajuan Tian 2, Chao Gu 1, Xiaoli Du 1, Ren Bu 1, Jie Gao 1, Yang Liu 1, Gang Li 1

ABSTRAKT

Nya bevis tyder på att förändringar i tarmmikrobiota-hjärnaxeln kan leda till kognitiv försämring med åldrande. I den aktuella studien observerade vi att långvarig administrering av D-galaktos till möss inducerade kognitiv nedgång, tarmmikrobiell dysbios, perifer inflammation och oxidativ stress. I denna modell av åldersrelaterad kognitiv nedgång,Cistanche deserticola polysackarider(CDPS) förbättrade kognitiv funktion hos D-galaktosbehandlade möss genom att återställa tarmmikrobiell homeostas, och därigenom minska oxidativ stress och perifer inflammation. De fördelaktiga effekterna av CDPS i dessa åldrande modellmöss avskaffades genom ablation av tarmmikrobiota med antibiotika eller immunsuppression med cyklofosfamid. Serummetabolomisk profilering visade att nivåerna av kreatinin, valin, L-metionin, o-toluidin, N-etylanilin, urinsyra och prolin alla förändrades i åldrande modellmöss, men återställdes av CDPS. Dessa fynd visade att CDPS förbättrar kognitiv funktion i en D-galaktos-inducerad åldrandemodell hos möss genom att återställa homeostas av tarmmikrobiotabjärnaxeln, vilket lindrade en aminosyraobalans, perifer inflammation och oxidativ stress. CDPS visar således terapeutisk potential för patienter med minnes- och inlärningsstörningar, särskilt de som är relaterade till mikrobiell dysbios i tarmen.

Cistanche deserticolapolysackarider

INTRODUKTION

Långvarig administrering av D-galaktos (D-gal) och berylliumsalter inducerar åldrande i experimentella djurmodeller och in vitro primära cellkulturer och används för att identifiera mekanismer som ligger bakom den naturliga åldrandeprocessen [1–4]. Tidigare studier visar att kognitiv nedgång hos D-galaktos-inducerad åldrande modellmöss är relaterad till minskade proteinnivåer av nervtillväxtfaktor (NGF) och ökade reaktiva syrearter (ROS) i hjärnan, som båda orsakar degeneration av hippocampus neuroner och minskar neurogenes [3, 4]. Nyligen genomförda studier har också visat att sammansättningen och antalet av människans tarmmikrobiota förändras signifikant under åldringsprocessen [5].

Cistanche deserticolaär en ört som växer främst i den nordvästra ökenregionen i Kina och används i traditionell kinesisk medicin. Det är allmänt känt som "öknens ginseng." Cistanche deserticola-extrakt innehåller flera farmakologiskt aktiva föreningar, inklusive fenyletanoidglykosider, iridoider, lignos, oligosackarider, polysackarider och aminosyror; dessa föreningar är associerade med antiinflammatoriska, antioxidativa, anti-åldrande, neuroprotektiva och immunmodulerande egenskaper [6, 7]. Till exempel har polysackarider utvunna från Cistanche deserticola använts i traditionell kinesisk medicin för att behandla kolorektal cancer [8]. Ett brett utbud av svagt giftiga polysackarider med användbara bioaktiviteter har isolerats från flera organismer, såsom Chuanqiong polysackarid, Ganoderma lucidum polysackaride och Lycium barbarum polysackaride [9–11]. CDA-

0.05 är en galaktoglukan isolerad från Cistanche deserticola som främjar tillväxten av flera nyttiga tarmbakterier, inklusive flera arter av Bacteroides och Lactobacillus [12].

De underliggande mekanismerna för den normala åldrandeprocessen är också inblandade i flera mänskliga sjukdomar såsom neurodegenerativa störningar, koronar ateroskleros, typ 2-diabetes (T2DM) och hypertoni [13, 14]. Nyligen genomförda studier har visat att förändringar i tarmfloran spelar en betydande roll för människans åldrande [15]. Flera studier har visat att långvarig administrering av D-galaktos i experimentella möss och råttor efterliknar den normala åldrandeprocessen och är en användbar modell för att studera åldringsrelaterade fenotyper såsom kognitionsnedgång [16]. Dessutom visar D-galaktos-inducerade åldrande modellmöss förändringar i sammansättningen av tarmmikrobiota [17]. Därför antog vi att förändringar i tarmmikrobiotans sammansättning kan orsaka kognitiv nedgång hos D-galaktosinducerade åldrande modellmöss, och undersökte om Cistanche deserticola polysaccharides (CDPS) kan lindra kognitiv nedgång genom att återställa tarmmikrobiota dysbios.

Cistanche deserticola

RESULTAT

D-galaktos-inducerade åldrande modellmöss visar kognitiv nedgång och tarmmikrobiell dysbios

Vi analyserade beteendeprestandan hos vildtypsmöss (WT) och de som behandlats med 150 mg D-gal per kg kroppsvikt i 2 månader (modell eller Mod) med hjälp av nya objektigenkänning och Morris water labyrint (MWM) tester. De föredragna indexvärdena i det nya objektigenkänningstestet reducerades signifikant i Mod-gruppmöss jämfört med WT-gruppmöss (Figur 1A, 1B). MWM-testresultat visade att flyktlatenstiden efter sjätte dagen ökade signifikant i Mod-gruppen jämfört med WT-gruppen (Figur 1C, 1D). Dessutom reducerades målplattformskorsningar och simtider inom målkvadranten signifikant i Mod-gruppen jämfört med WT-gruppen (Figur 1E, 1F). Dessa resultat visade en signifikant minskning av inlärnings- och minnesförmågan hos D-gal-inducerade åldrande modellmöss.

Vi analyserade sedan skillnaderna i överflöd och sammansättning av tarmmikrobiella fyla, släkten och arter i fekala prover av Mod- och WT-grupperna av möss med hjälp av 16S ribosomalt RNA (rRNA) sekvenseringsdata från fekala prover. Den dominerande tarmfloran i WT- och Mod-gruppens möss var Firmicutes och Bacteroides. Men mängden Bacteroides minskade signifikant och förekomsten av Firmicutes ökade signifikant i Mod-gruppen jämfört med WT-gruppen (Figur 2A). Därefter utförde vi linjär diskriminantanalys (LDA) för att bestämma LDA-effektstorlek (LEfSe) poäng följt av Kruskal-Wallis och Wilcoxon-tester för att utvärdera det relativa överflöd av olika taxa i WT- och Mod-gruppmössen. LDA-resultaten visas i figur 2B. Dessutom konstruerade vi kladogram som visar differentiell anrikning av olika släkten och arter som tillhör Bacteriodes och Firmicutes phyla i WT och modellgrupper (Figur 2C). Sammantaget visade våra resultat försämrad kognitiv förmåga och tarmmikrobiell dysbios hos D-galaktosinducerade åldrande modellmöss.

CDPS-behandling förbättrar den kognitiva förmågan hos D-gal-inducerade åldrande modellmöss

Vi analyserade om CDPS-behandling lindrar kognitiv nedgång hos D-gal-inducerade åldrande modellmöss. Under

2 månaders administrering mättes kroppsvikten varannan dag. Kroppsvikterna för modellen och CDPS-grupperna av möss var likartade (Figur 3A). Utför beteendeexperiment efter den sista dosen. Nya objektigenkänning och Morris vattenlabyrinttestresultat visade att korttidsminnet var signifikant högre i CDPS-grupperna av möss jämfört med modellgruppen av möss; Långtidsminnet i CDPS-gruppen av möss var högre men statistiskt insignifikant jämfört med modellgruppen av möss (Figur 3B, 3C). Detta antydde att CDPS-behandling upphävde förlusten av korttidsobjektigenkänningsminne hos D-gal-behandlade möss.

Den rumsliga inlärningen och minnet för dessa möss utvärderades med Morris vattenlabyrinttest, och resultaten visade att flyktlatenstiderna för CDPS-gruppen av möss var jämförbara med WT-gruppen av möss och signifikant kortare än Mod-gruppens möss (Figur 3D) ). Dessutom var flyktlatenstider signifikant lägre den sjätte dagen efter CDPS-administration jämfört med modellgruppen (Figur 3E). Simtiden inom målkvadranten var signifikant högre i CH- och CM-grupperna jämfört med modellgruppen. CL-gruppen är högre än modellgruppen men ingen statistisk signifikans (Figur 3F). Dessutom var antalet plattformskorsningar betydligt högre i CM- och CL-grupperna jämfört med modellgruppen. CH-gruppen är dock högre än modellgruppen och ingen statistisk signifikans (Figur 3G). Dessa resultat visade att CDPS-behandling förbättrade rumslig inlärning och minne hos D-gal-inducerade åldrande modellmöss.

CDPS-behandling återställer homeostas av tarmmikrobiotasammansättningen i modellmössen med D-galaktosåldrande

Monosackarider och polysackarider är de nödvändiga näringsämnena som krävs för tillväxten av bakterier [18–21]. Det rapporteras också att CDPS reglerar sammansättningen av tarmmikrobiota [22]. Därför analyserade vi om CDPS-behandlingar lindrade tarmmikrobiella dysbios i modellgruppens möss genom att utvärdera16S rRNA-sekvenseringsdata från avföringsprover från WT-, modell- och CDPS-grupper av möss.

Först beräknade vi alfa-diversitetsindex för att utvärdera den övergripande fekala mikrobiotarikedomen och strukturella skillnaderna mellan dessa grupper. Vi analyserade alfa-diversitetsindex (-diversity) såsom observerade arter, Shannon, Chao 1, ACE och Simpson indexvärden för att bestämma förändringar i sammansättningen av olika bakteriearter i avföringsproverna från olika murina grupper. -diversitetsindexen (observerade arter, Shannon, Chao 1, ACE och Simpson-index) var högre i WT- och CDPS-grupperna av möss jämfört med modellgruppen, men statistisk signifikans observerades endast för Chao 1-indexvärdena mellan CM grupp och Mod-grupp. Det indikerade att administrering med CDPS ökar mikrobiomrikedomen (Figur 4A–4E). Därefter analyserade vi -diversitetsindex för att identifiera skillnader i tarmmikrobiella arter mellan WT-, modell- och CDPS-grupperna av möss med hjälp av icke-metrisk multidimensionell skalning (NMDS), Principal Coordinates Analysis (PCoA) och Principal Component Analysis ( PCA). PCA visade variationer i tarmmikrobiella sammansättningen hos modellgruppens möss under åldringsprocessen, inklusive dimensionsminskning och underhåll av mönster och trender (Figur 4F). Skillnaderna i fekal mikrobiota mellan WT-, modell- och CDPS-grupperna identifierades baserat på PCoA för de ovägda UniFrac-avstånden för 16S rRNA-generna (Figur 4G). Klustringsanalys visade signifikanta skillnader i NMDS mellan modellgruppen och WT- och CDPS-grupperna (Figur 4H).

Vi utvärderade de 10 bästa phyla av tarmmikrobiotan och fann att förekomsten av Bacteroides phyla var signifikant högre i CH-, CM- och CL-gruppen jämfört med modellgruppen (Figur 4I). Detta antydde att CDPS återställde homeostasen av tarmmikrobiotan i D-gal-behandlade möss. Kladogrammen visade differentiell anrikning av olika släkten och arter som tillhör Bacteriodes och Firmicutes phyla i WT, modellen och CDPS-grupperna (Figur 4J). Som framgår av värmekartorna minskade CDPS-behandlingar de relativa förekomsterna av Thermoplasmata, Baciller, oidentifierade Actinobacteria, Fusobacteriia och oidentifierade Elusimicrobia och ökade de relativa förekomsterna av Methanobacteria, Spirochaetia, Deltaproteobacteria, oidentifierade_Deferribacteria, Nitrolinesfaeribakterier, Nieroline-deferribacter, , Erysipelotrichia och oidentifierade_cyanobakterier jämfört med modellgruppen (Figur 4K). Dessa resultat visade att CDPS-behandling signifikant återställde homeostas av tarmmikrobiotan i D-gal-inducerade åldrande modellmöss.

CDPS-behandling lindrar neurodegeneration i de D-gal-inducerade åldrande modellmössen genom att minska oxidativ stress

Vi analyserade därefter effekterna av CDPS på inflammation genom att analysera serumnivåerna av pro-inflammatoriska cytokiner (IL-2 och TNF-) och antiinflammatoriska cytokiner (IL-4 och IL-10 ) i olika grupper av möss. Serumnivåerna av IL-2 och TNF- var signifikant lägre och serumnivåerna av IL-4 och IL-10 var signifikant högre i CH-, CM- och CL-gruppen jämfört med modellen grupp. Det visas att CDPS har antiinflammatoriska effekter (Figur 5A–5D).

Oxidativ stress orsakas av den ökade produktionen av reaktiva syreämnen (ROS) och är en av huvudfaktorerna som främjar åldrande [23]. Därför analyserade vi effekterna av CDPS på oxidativ stress i den D-gal-inducerade åldrande musmodellen genom att utvärdera serumnivåer av antioxidantenzymet, SOD, och lipidperoxidationsprodukten, malondialdehyd (MDA). Serumnivåerna av MDA var signifikant högre och serumnivåerna av SOD reducerades signifikant i Mod-gruppen jämfört med WT-gruppen, men CDPS-behandling vände dessa effekter (Figur 5E, 5F). Dessa resultat visade att oxidativ stress var förhöjd hos D-gal-inducerade åldrande modellmöss, men reducerades genom CDPS-behandling.

Vidare bedömde vi nivåerna av oxidativ stress i hjärnvävnaderna genom att analysera nivåerna av den avancerade oxiderade proteinprodukten (AOPP), direkt lipidperoxidation (LPO) och MDA samt aktiviteter av antioxidantenzymer som glutationperoxidas (GSH-Px) ) och superoxiddismutas (SOD) i hjärnvävnadshomogenaten. Hjärnan hos Mod-gruppmöss visade signifikant minskade aktiviteter av SOD och GSH-PX och signifikant ökade nivåer av AOPP, LPO och MDA jämfört med WT-gruppen, men dessa effekter var omvända i CH-, CM- och CL-gruppen (Figur 6A– 6E).

Dessutom utförde vi histologisk färgning av hjärnsektionen med H&E- och Nissl-färger för att bedöma de skyddande effekterna av CDPS på hjärnorna hos D-gal-inducerade åldrande modellmöss. Mod-gruppens möss visade en signifikant minskning av neuronantal och volym, ökat gap mellan neuroner, oregelbundet arrangemang av neuroner och nukleär pyknos i hippocampus CA1-regionen jämfört med WT-gruppen, men dessa patologiska förändringar reducerades signifikant av CDPS-behandlingar ( Figur 6F). Dessa resultat visade att CDPS-behandlingar signifikant minskade oxidativ stress och hjärnpatologi hos D-gal-inducerade åldrande modellmöss.

CDPS-behandling minskar perifer inflammation och oxidativ stress genom att upprätthålla tarmmikrobiell homeostas i D-gal-inducerade modellmöss

Därefter analyserade vi om förändringarna i sammansättningen av tarmmikrobiotan var associerade med ökad perifer inflammation och oxidativ stress under åldrande. Mot detta använde vi en trippel-antibiotisk cocktail (ABX-grupp) eller cyklofosfamid (Cy-grupp; se även Material och metoder) för att ta bort tarmmikrobiotan eller inducera immunsuppression i de CDPS-behandlade åldrande modellmössen. Antibiotikabehandlingen upphävde de fördelaktiga effekterna av CDPS-behandling i de åldrande mössmodellerna. Vi observerade försämrad inlärning och minne (Figur 7A) och förändringar i sammansättningen av tarmmikrobiota (Figur 7B, 7C) i ABX-gruppens möss jämfört med den CDPS-behandlade gruppen. Ovanstående resultat indikerar att inte ens administrering av CDPS kan öka inlärnings- och minnesförmågan hos möss efter förändring av tarmfloran. Dessutom observerade vi ökade nivåer av pro-inflammatoriska cytokiner i hjärnan och serumet från ABX-gruppmöss jämfört med CDPS-gruppen (Figur 7D-7N). Resultaten från ABX-gruppen och CY-gruppen visade att efter att tarmfloran och immunfunktionen förstörts kunde inte ens administrering av CDPS förbättra inlärnings- och minnesförmågan hos möss. Dessa resultat antydde att CDPS-behandling minskade perifer inflammation, oxidativ stress och kognitiv försämring hos D-gal-inducerade åldrande modellmöss genom att förhindra tarmdysbios.

Vi använde sedan det immunsuppressiva läkemedlet, cyklofosfamid [24] för att bestämma rollen av inflammation i de gynnsamma effekterna av CDPS. Cyklofosfamidbehandlade CDPS-möss (Cy-grupp) visade nedsatt inlärnings- och minnesförmåga, förändringar i tarmmikrobiotans sammansättning och avvikande nivåer av pro- och antiinflammatoriska cytokiner i hjärnan och serum jämfört med möss av vildtyp och CDPS-grupp. Det finns dock ingen betydelse att jämföra med modell och ABX-grupp. (Figur 7A–7N). Dessa data visar att förändringar i sammansättningen av tarmmikrobiotan ökar perifer inflammation hos D-gal-inducerade åldrande modellmöss.

CDPS förhindrar D-gal-inducerat åldrande genom att reglera aminosyrametabolismen

Värdens immunsystem påverkas av metaboliter som genereras av tarmmikrobiotan [25]. De fekala metaboliterna representerar en funktionell avläsning av tarmmikrobiella metabolism och tarmmikrobiella sammansättning [26]. Dessutom kommer metaboliter från tarmmikrobiotan in i blodcirkulationen och påverkar värdens metabolism och hälsa [26, 27]. Totalt 1058 metaboliter identifierades i serumprover från fWT-, Mod- och CDPS-möss. Sedan analyserade vi dessa metaboliter med BioCyc, Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) och Human Metabolome Database (HMDB) och fann att 65 metaboliter uttrycktes differentiellt i Mod-gruppen jämfört med WT-gruppen. Dessutom fann vi att nivåerna av 8 metaboliter (kreatinin, valin, L-(-)-metionin, o-toluidin, N-etylanilin, urinsyra, prolin och fenylalanin) skilde sig signifikant mellan WT-, Mod- och CDPS-grupperna . Bananrikningsanalys av dessa 8 metaboliter med MetaboAnalyst [28, 29] visade att dessa metaboliter var relaterade till arginin, histidin, arginin, prolin och purinmetabolism (Figur 8A, 8B). 7 olika metaboliter av MOD-gruppen och CDPS-gruppen i WT-gruppen.

Vi analyserade sedan om förändringar i aminosyrametabolism var relaterade till förändringar i sammansättningen av tarmmikrobiotan. Vi observerade att 7 olika metaboliter av WT-, Mod- och CDPS-grupper (kreatinin, valin, L-(-)-Metionin, o-Toluidin, N-Ethylanilin, urinsyra och prolin) minskade signifikant i ABX, Cy, och Mod-grupper jämfört med WT- och CDPS-grupperna. Dessutom finns det ingen betydelse mellan ABX- och Cy-grupper (Figur 8C). Slutligen, för att utforska finns det ett samband mellan differentiell metabolism och andra åldranderelaterade sjukdomar. Vi analyserade korrelationen mellan dessa sju differentiellt uttryckta metaboliter och mänskliga sjukdomar med hjälp av MetaboAnalyst-databasen och fann att dessa metaboliter var associerade med Alzheimers sjukdom (p=0.00173; Figur 8D, 8E). Sammantaget antydde dessa data att CDPS skyddar mot D-gal-inducerat åldrande genom att reglera aminosyrametabolism.

DISKUSSION

En progressiv nedgång i kognitiv funktion är ett karakteristiskt kännetecken för åldrande. Tidigare studier visade att CDPS-behandling signifikant förbättrade inlärning och minne hos åldrande modellmöss [30-33]. I denna studie visade vi att CDPS-behandling förbättrade kognitiv funktion genom att hämma perifer inflammation och oxidativ stress genom återställande av tarmmikrobiell homeostas i de D-gal-inducerade åldrande modellmössen (Figur 9). Sprague-Dawley-råttor som matats med Cistanche-polysackarider visade ökad tillväxt av nyttiga tarmbakterier och förbättrad tarmmikrobiell mångfald [34]. CDA-0.05, en Cistanche-neutral polysackarid, förbättrade tillväxten av probiotiska laktobaciller [22]. Dessa data antydde att Cistanche-polysackarider förbättrade homeostasen hos tarmbakterier.

I denna studie visade vi att CDPS har antiinflammatoriska effekter och förbättrar den kognitiva förmågan hos åldrande modellmöss genom att modulera överflödet av tarmbakteriegener som Bacteroidetes, Firmicutes och Proteobacteria. Därför kan CDP vara terapeutiskt fördelaktigt för åldranderelaterade sjukdomar genom att omforma sammansättningen av tarmmikrobiotan [35, 36]. Dessutom har tidigare studier visat att nivåerna av inflammatoriska cytokiner i serum och kolon är associerade med det relativa överflöd av bakteriesläkten som Bacteroidetes, Firmicutes och Proteobacteria [37, 38]. Dessutom reglerar tarmmikrobiella sammansättning hjärnans funktion genom att modulera cirkulerande nivåer av flera cytokiner [39-43]. Våra resultat visade att CDPS-behandling minskade den relativa förekomsten av Thermoplasmata, Baciller, oidentifierade Actinobacteria, Fusobacteriia och oidentifierade Elusimicrobia, och ökade den relativa förekomsten av Methanobacteria, Spirochaetia, Deltaproteobacteria, oidentifierade_Deferribacteres, Mollicutes, Nistro, Mollicutes. Erysipelotrichia och oidentifierade_cyanobakterier.

Mikrobiella metaboliter i tarmen frisätts i blodomloppet och reglerar värdens hälsa och metabolism [26, 27]. De mikrobiella metaboliterna i tarmen kan uppskattas genom att utvärdera fekal metabolitsammansättning, som förändras med förändringar i sammansättningen av tarmmikroberna [44]. Nyligen genomförda studier har visat att plasmanivåer av citrullin, prolin, arginin, asparagin, fenylalanin och treonin är associerade med neurodegenerativa störningar inklusive Alzheimers sjukdom [45, 46]. Vår studie visade att serumnivåer av kreatinin, valin, L-metionin, o-toluidin, N-etylanilin, urinsyra och prolin var associerade med D-gal-inducerat åldrande hos möss.

Immunsystemets medfödda och adaptiva armar spelar en betydande roll för att upprätthålla värdmikrobiell homeostas i den intestinala luminala ytan [47]. Den intestinala mikrobiotan spelar också en betydande roll för att reglera det centrala nervsystemet (CNS) och immunitet genom att frisätta cytokiner och metaboliter i blodomloppet [48, 49]. De proinflammatoriska cytokinerna spelar en nyckelroll i flera neurodegenerativa sjukdomar [50–52]. Till exempel är åldersrelaterad makuladegeneration (AMD) och glaukom associerade med extracellulär ackumulering av amyloid (A ) och intracellulär deposition av hyperfosforylerad tau (p-tau) och järn i retinala ganglieceller (RGC) [44]. Dessutom spelar inflammation en betydande roll i patogenes associerad med glaukom [53]. Synnedsättning är ett tidigt symptom på Alzheimers sjukdom (AD) och manifesteras innan kognitiv försämring börjar [54]. Vår studie visade att CDPS skyddar mot kognitiv nedgång och perifer inflammation genom att upprätthålla homeostasen i tarmmikrobiotan.

Det finns flera begränsningar för denna studie. För det första är förhållandet mellan aminosyrametabolism och sammansättningen av tarmmikrobiotan inte välkänt. För det andra är sammansättningen och molekylstrukturen för CDPS inte känd. Därför krävs framtida studier för att ytterligare utforska den reglerande rollen för CDPS för att lindra AD genom tarmmikrobiota-hjärnans signaleringsaxel.

Sammanfattningsvis visade vår studie att CDPS förbättrade den kognitiva förmågan hos D-gal-inducerade åldrande modellmöss genom att återställa homeostasen av tarmmikrobiota, och därigenom återställa aminosyraobalans, perifer inflammation och oxidativ stress. Dessa fynd tyder på att CDPS är ett potentiellt terapeutiskt medel för patienter med inlärnings- och minnesstörningar, särskilt de som är associerade med tarmdysbios.

MATERIAL OCH METODER

Förberedelse av CDPS

Cirka 1.0 kg rengjord Cistanche deserticola lufttorkades i ugnen vid 40 grader C och pulveriserades till råpulver. Pulvret extraherades i varm etanol under 3 timmar. Återstoden filtrerades genom gasväv för att avlägsna filtratet och späddes sedan med vatten (8X) och återloppskokades i tur och ordning under 2 timmar, 1,5 timmar och 1 timme vid 90 grader C. Vid varje tidpunkt centrifugerades lösningen för att separera ut supernatanten och kombineras med det brunröda filtratet. Därefter koncentrerades filtratet under reducerat tryck, kyldes till rumstemperatur, sattes långsamt till 95 % etanol (3X) och fick stå vid 4 grader C i 24 timmar. Därefter centrifugerades lösningen vid 6000 r/min under 20 minuter vid 4 grader C. Fällningen samlades upp efter upprepad vattenextraktion och alkoholutfällning tre gånger. Fällningen rekonstituerades i vatten, avproteiniserades, dialyserades och frystorkades för att få rå Cistanche deserticola-polysackarid (CDP). Polysackaridinnehållet var mer än 90 procent, utvärderat med ultraviolett spektrofotometri.

Djurgruppering och behandlingar

Åtta veckor gamla Kunming-hanmöss (SCXK licensnr. 2019-0010) köptes från SPF Biotechnology Co. Ltd (Beijing, Kina), inhystes i ett ljust och temperaturkontrollerat rum och matades med mat och vatten. Alla djurexperiment utfördes enligt protokoll som godkänts av Institutional Animal Care and Use Committee of Inner Mongolia Medical University. Experimenten utfördes enligt National Institutes of Health (NIH) Guide for the Care and Use of Laboratory Animals.

Efter 1 veckas anpassning till den nya omgivningen delades 120 möss upp i följande 7 grupper: (1) vildtypskontroll (WT); modellgrupp (150 mg/kg/dag D-gal; Mod); (3) CH: D-gal plus 100 mg/kg CDPS; (4) CM: D-gal plus 50 mg/kg CDPS; (5) CL: D-gal plus 25 mg/kg CDPS; (6) ABX-grupp: antibiotika plus D-gal plus 50 mg/kg CDPS; (7) Cy-grupp: cyklofosfamid plus D-gal plus 50 mg/kg CDPS.

Mössen från modell-, ABX-, Cy- och CDPS-grupperna fick subkutana injektioner av koksaltlösning

150 mg/kg D-gal varje dag i 2 månader. WT-gruppen injicerades subkutant med lika volym saltlösning under 2 månader. CDPS-gruppens möss administrerades också dagligen med intragastriska injektioner innehållande 1{{10}}0 mg/kg, 50 mg/kg eller 25 mg/kg CDPS under 2 månader . ABX-gruppens möss fick dricksvatten med 0,1 mg/ml ampicillin och 0,5 mg/ml streptomycin under 2 månader utöver D-gal- och CDPS-injektioner. Före administrering av D-gal fick mössen injektioner innehållande 0,1 mg/ml ampicillin, 0,5 mg/ml streptomycin och 0,1 mg/ml kolistin under 7 dagar i ABX-gruppen. Cy-gruppens möss fick intraperitoneala injektioner av 20 mg/kg cyklofosfamid varannan dag (qod) under 2 månader utöver dagliga injektioner av D-gal och CDPS.

Nytt objektigenkänningstest

Utför beteendeexperiment efter den sista dosen. Objektigenkänningstestet involverade bekantskaps-, tränings- och teststadier. Under bekantskapsstadiet vändes möss i en tom testkammare i 10 minuter under två dagar. Sedan, på den tredje dagen (träningsdagen), placerades två föremål av samma storlek, form och färg (A1 och A2) på motsatta ändar av kammaren. Varje mus fick sedan 10 minuter att utforska de två liknande föremålen. Efter 1-timmars (på den tredje dagen) och 24-timmars (på den fjärde dagen) tränings-till-testintervall ersattes ett av de liknande objekten (A1 eller A2) med ett B eller C föremål som är olika i storlek, färg och form på testdagen. Under teststadiet testades varje mus i 5 minuter och preferensindexet beräknades för att bestämma minnet för igenkänning av nya objekt (B eller C) med hjälp av följande formel: Preferentiellt index=Tid på objekt B eller C/( Tid på objekt B eller C plus Tid på objekt A)×100 procent .

Morris vattenlabyrint test

Morris vattenlabyrinttest utfördes i en rund pool som var 45 cm djup och 90 cm i diameter. Protokollet som beskrivs av Ruediger S, et al. (2011) [55] och Wood RA, et al. (2018) [56] anställdes här. Vattendjupet i poolen var 30 cm, och vattnets temperatur var 20±1 grad C. Plattformen var 6 cm i diameter och 1 cm under vattnet. Tiden för träning och testning var 60 s vardera. För träning genomförde vi fyra försök på 60 s vardera med en dold plattform varje dag i fem sammanhängande dagar. Om plattformen inte upptäcktes av mössen på 60 s, leddes de till plattformen och placerades på plattformen i 5 s. Under teststadiet registrerades och analyserades fördröjningen för att nå den dolda plattformen i tränings- och sonderingssessioner, antalet korsningar över den borttagna plattformsplatsen och tiden som spenderades i mål-(plattform)kvadranten

ELISA-analyser

Serumnivåerna av pro-inflammatoriska cytokiner som IL-2(), IL-4, IL-10 och TNF- analyserades för varje grupp av möss med hjälp av ELISA-kit köpta från Shanghai Yi Li Biological Technology Co., Ltd. (Shanghai, Kina) enligt tillverkarens instruktioner. Aktiviteten hos ett antioxidantenzym, superoxiddismutas (SOD) och nivåer av lipidperoxidationsprodukt, malondialdehyd (MDA), i serumet från varje grupp av möss analyserades med analyskit köpta från Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (Nanjing, Kina) . Nivåerna av avancerade oxidationsproteinprodukter (AOPP) i de murina hippocampusproverna uppskattades med hjälp av ELISA-kit från Shanghai Yi Li Biological Technology Co. Ltd. (Shanghai, Kina) enligt tillverkarens instruktioner.

Uppskattning av oxidativ stress i murina hjärnor

Vi homogeniserade 100 mg hippocampusvävnad med 0,9 ml iskyld koksaltlösning och homogenatet centrifugerades vid 12000 rpm i 30 minuter vid 4 grader C. Proteininnehållet i supernatanten analyserades med hjälp av BCA Protein Assay Kit ( Beyotime Biotechnology, Shanghai, Kina). Nivåerna av lipidperoxidation (LPO) och malondialdehyd (MDA), och aktiviteterna av GSH-Px och SOD i hippocampusproverna analyserades med kolorimetri med hjälp av kit från Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (Nanjing, Kina) enligt tillverkarens instruktioner.

Tarmmikrobiotasammansättning

Fekala prover samlades in från alla möss och lagrades omedelbart vid -80 grad C. V3 plus V4-regionen av 16S rRNA-genen sekvenserades med Illumina MiSeq (Beijing Novogene Co. Ltd., Peking, Kina) och analyserades med hjälp av QIIME öppen plattform för att bestämma tarmmikrobiotaprofilerna.

LC/MS-analys av serummetaboliter

Serumprover inkuberades under 10 minuter med förkyld metanol i ett förhållande av 1:3 för att fälla ut proteinerna. Proverna centrifugerades vid 12000 r/min i 15 minuter vid 4 grader C. Supernatanterna analyserades med Thermo Scientific Dionex UltiMate3000 Rapid Resolution Liquid Chromatography och QExactive masspektrum. De kromatografiska förhållandena visas i tabell 1. Analyterna separerades i en XBridge BEH Amide kromatografikolonn (2,1×100 mm; Waters Co., Milford, MA, USA) med användning av 0,1 procent myrsyra och acetonitril som mobila faser A och B, respektive. Flödeshastigheten sattes till 0,4 ml/min, injektionsvolymen var 5 ul och kolonntemperaturen inställdes på 25 grader C (tabell 1). Masspektrumsignalerna erhölls med användning av positiva och negativa jonskanningsmoder. Jonsprayspänningen och andra specifika MS-parametrar visas i Tabell 2.

Statistisk analys

Statistical analysis was performed using the SPSS 13.0 software (SPSS Inc., Chicago, Illinois, USA). The data plots were generated using GraphPad Prism 8.0.1 (GraphPad Software, La Jolla, California, USA). Partial least squares discriminant analysis (OPLS-DA) of SIMCA-P+13.0 (Umetrics, AB, Umeå, Sweden) and Principal Components Analysis (PCA) were used to assess normalized GC-MS spectral data. Variable Influence on Projection (VIP) values were used to identify significant variables with VIP values >1.0 och sid< 0.05.="" these="" significant="" variables="" were="" used="" to="" identify="" the="" spectral="" peaks.="" the="" student's="" t-test="" was="" used="" to="" analyze="" differences="" between="" two="" groups="" of="" data.="" the="" taxonomic="" rank="" differential="" between="" groups="" was="" determined="" using="" student's="" test="" (v3.1.2;="" r="" programming="" language).="" the="" correlation="" between="" genera="" abundance="" and="" mouse="" behavior="" was="" calculated="" using="" spearman="" correlation="" coefficients="" (r="" language).="" p="" <="" 0.05="" was="" considered="" statistically="" significant.="" the="" data="" are="" presented="" as="">

reddit cistanche

REFERENSER

1. Coates SS, Lehnert BE, Sharma S, Kindell SM, Gary RK. Beryllium inducerar för tidig åldrande i mänskliga fibroblaster. J Pharmacol Exp Ther. 2007; 322:70–79. https://doi.org/10.1124/jpet.106.118018 PMID:17395767

2. Shwe T, Pratchayasakul W, Chattipakorn N, Chattipakorn SC. Roll av D-galaktos-inducerat hjärnans åldrande och dess potential som används för terapeutiska interventioner. Exp Gerontol. 2018; 101:13–36. https://doi.org/10.1016/j.exger.2017.10.029 PMID:29129736

3. Ho SC, Liu JH, Wu RY. Etablering av den mimetiska åldrandeeffekten hos möss orsakad av D-galaktos. Biogerontologi. 2003; 4:15–18. https://doi.org/10.1023/a:1022417102206 PMID:12652185

4.Sång X, Bao M, Li D, Li YM. Avancerad glykering i D-galaktosinducerad mus åldrande modell. Mech Aging Dev. 1999; 108:239–51.

https://doi.org/10.1016/s0047-6374(99)00022-6 PMID:10405984

5. Yamauchi T, Oi A, Kosakamoto H, Akuzawa-Tokita Y, Murakami T, Mori H, Miura M, Obata F. Tarmbakteriella arter påverkar utmärkande värdpurinmetaboliter under åldrande i Drosophila. iScience. 2020; 23:101477. https://doi.org/10.1016/j.isci.2020.101477 PMID:32916085

6. Chinese Pharmacopoeia Commission, Pharmacopeia of the People's Republic of China Ver. 2015. China Medical Science and Technology Press, Peking, Kina. 2015.

7. Wang N, Ji S, Zhang H, Mei S, Qiao L, Jin X.Herba Cistanches: Anti-åldring. Åldrande Dis. 2017; 8:740–59. https://doi.org/10.14336/AD.2017.0720 PMID:29344414

8. Fu Z, Fan X, Wang X, Gao X.Cistanches Herba: En översikt över dess kemi, farmakologi och farmakokinetiska egenskaper. J Etnopharmacol. 2018; 219:233–47.

https://doi.org/10.1016/j.jep.2017.10.015 PMID:29054705

9. Zhong C, Liu Z, Zhang X, Pu Y, Yang Z, Bao Y. Fysikalisk-kemiska egenskaper hos polysackarider från Ligusticum chuanxiong och analys av deras antitumörpotential genom immunreglering. Matfunktion. 2021; 12:1719–31. https://doi.org/10.1039/d0fo02978e

PMID:33502414

10.Shi YJ, Zheng HX, Hong ZP, Wang HB, Wang Y, Li MY, Li ZH. Antitumöreffekter av olika Ganoderma lucidum-sporpulver i cell- och zebrafiskbaserade bioanalyser. J Integr Med. 2021; 19:177–84. https://doi.org/10.1016/j.joim.2021.01.004 PMID:33495135

11. Zhang Z, Liu H, Yu B, Tao H, Li J, Wu Z, Liu G, Yuan C, Guo L, Cui B. Lycium barbarum polysackarid dämpar hjärtmuskelskada i en dietmatad mikrofon med hög fetthalt genom att manipulera tarmen mikrobiom och fekal metabolom. Food Res Int. 2020; 138:109778. https://doi.org/10.1016/j.foodres.2020.109778 PMID:33288164

12. Newgard CB, Sharpless NE. Åldrande: molekylära drivkrafter bakom åldrande och terapeutiska möjligheter. J Clin Invest. 2013; 123:946–50. https://doi.org/10.1172/JCI68833 PMID:23454756

13. Wang H, Dwyer-Lindgren L, Lofgren KT, Rajaratnam JK, Marcus JR, Levin-Rector A, Levitz CE, Lopez AD, Murray CJ. Åldersspecifik och könsspecifik dödlighet i 187 länder, 1970-2010: en systematisk analys för Global Burden of Disease Study 2010. Lancet. 2012; 380:2071–94.

https://doi.org/10.1016/S0140-6736(12)61719-X PMID:23245603

14. Qabazard B, Stürzenbaum SR. H2S: Ett nytt tillvägagångssätt för livslängdsförbättring och hälsosamt åldrande? Handb Exp Pharmacol. 2015; 230:269–87. https://doi.org/10.1007/978-3-319-18144-8_14 PMID:26162840

15. Walrath T, Dyamenahalli KU, Hulsebus HJ, McCullough RL, Idrovo JP, Boe DM, McMahan RH, Kovacs EJ. Åldersrelaterade förändringar i tarmens immunitet och mikrobiomet. J Leukoc Biol. 2020. [Epub före tryckning]. https://doi.org/10.1002/JLB.3RI0620-405RR PMID:33020981

16. Mishra B, Manmode S, Walke G, Chakraborty S, Neralkar M, Hotha S. Syntes av det hyperförgrenade kärntetrasackaridmotivet av klorovirus. Org Biomol Chem. 2021; 19:1315–28. https://doi.org/10.1039/d0ob02176h PMID:33459320

17. Gao Y, Liu Y, Ma F, Sun M, Song Y, Xu D, Mu G, Tuo Y. Lactobacillus plantarum Y44 lindrar oxidativ stress genom att reglera tarmmikrobiota och kolonbarriärfunktion i Balb/C-möss med subkutan d-galaktos injektion. Matfunktion. 2021; 12:373–86. https://doi.org/10.1039/d0fo02794d

PMID:33325942

18. Francisco ÉC, Franco TT, Wagner R, Jacob-Lopes E. Bedömning av olika kolhydrater som exogen kolkälla vid odling av cyanobakterier. Bioprocess Biosyst Eng. 2014; 37:1497–505. https://doi.org/10.1007/s00449-013-1121-1 PMID:24445336

19. Uhde A, Youn JW, Maeda T, Clermont L, Matano C, Krämer R, Wendisch VF, Seibold GM, Marin K. Glukosamin som kolkälla för aminosyraproducerande Corynebacterium glutamicum. Appl Microbiol Biotechnol. 2013; 97:1679–87. https://doi.org/10.1007/s00253-012-4313-8 PMID:22854894

1. Ladevèze S, Laville E, Despres J, Mosoni P, Potocki-Véronèse G. Mannosidigenkänning och nedbrytning av bakterier. Biol Rev Camb Philos Soc. 2017; 92:1969–90.

https://doi.org/10.1111/brv.12316 PMID:27995767

2. Limoli DH, Jones CJ, Wozniak DJ. Bakteriella extracellulära polysackarider i biofilmbildning och funktion. Microbiol Spectr. 2015; 3:10.1128. https://doi.org/10.1128/microbiolspec.MB-0011-2014 PMID:26185074

3. Zeng H, Huang L, Zhou L, Wang P, Chen X, Ding K. En galaktoglukan isolerad från Cistanche deserticola Y.

C. Ma. och dess bioaktivitet på tarmbakteriestammar. Kolhydrid Polym. 2019; 223:115038. https://doi.org/10.1016/j.carbpol.2019.115038 PMID:31426978

4. Subramanian V, Rodemoyer B, Shastri V, Rasmussen LJ, Desler C, Schmidt KH. Blooms syndrom DNA-helikasbrist är associerad med oxidativ stress och förändringar i mitokondriella nätverk. Sci Rep. 2021; 11:2157.

https://doi.org/10.1038/s41598-021-81075-0 PMID:33495511

5. Mashima K, Oh I, Fujiwara K, Izawa J, Takayama N, Nakano H, Kawasaki Y, Minakata D, Yamasaki R, Morita K, Ashizawa M, Yamamoto C, Hatano K, et al. Jämförelse av alemtuzumab, anti-tymocytglobulin och cyklofosfamid efter transplantation för transplantat-mot-värd-sjukdom och graft-versus-leukemi i murina modeller. PLoS One. 2021; 16:e0245232. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0245232 PMID:33428661

6. Rooks MG, Garrett WS. Tarmmikrobiota, metaboliter och värdimmunitet. Nat Rev Immunol. 2016; 16:341–52. https://doi.org/10.1038/nri.2016.42 PMID:27231050

7. Zierer J, Jackson MA, Kastenmüller G, Mangino M, Long T, Telenti A, Mohney RP, Small KS, Bell JT, Steves CJ, Valdes AM, Spector TD, Menni C. Den fekala metabolomen som en funktionell avläsning av tarmmikrobiom. Nat Genet. 2018; 50:790–95. https://doi.org/10.1038/s41588-018-0135-7 PMID:29808030

8. Wilmanski T, Rappaport N, Earls JC, Magis AT, Manor O, Lovejoy J, Omenn GS, Hood L, Gibbons SM, Price ND. Blodmetabolom förutsäger tarmmikrobiom-diversitet hos människor. Nat Biotechnol. 2019; 37:1217–28.

https://doi.org/10.1038/s41587-019-0233-9 PMID:31477923

9. Chagoyen M, Pazos F. MBRole: anrikningsanalys av metabolomiska data. Bioinformatik. 2011; 27:730–31. https://doi.org/10.1093/bioinformatics/btr001 PMID:21208985

10. Xia J, Wishart DS. Använda MetaboAnalyst 3.0 för omfattande Metabolomics Data Analysis. Curr Protoc Bioinformatik. 2016; 55:14,10. https://doi.org/10.1002/cpbi.11 PMID:27603023

11. Miao X, Zhang H, Wu Y, Liu D, Zhang X, Li G. Den skyddande effekten av Cistanche verbascum-glykosider på D-galaktos-inducerad PC12-nervcellskada. Chinese Pharmaceutical Journal. 2017; 52:2071–78.

12. Wu Y, Zhang H, Bu R, Ma H, Su M, Li G. Forskning om den skyddande effekten av Cistanche deserticola polysackarid på den akuta åldrande modellen inducerad av D-galaktos. Kinesisk Pharmacol Bulletin. 2017; 33:927–33.

13. Yin R, Li G, Yu T, Ma H, Ma T, Guo M. Den skyddande effekten av Cistanche cistanche polysackarider på synaptisk plasticitet hos möss med skopolamininducerad inlärnings- och minnesnedsättning. Kinesisk Pharmacol Bulletin. 2014; 30:801–07.

14. Ma H, Yin R, Guo M, Bao Y, Cui Z, Li G. Effekten av Cistanche cistanche polysackarider på uttrycket av CREB i D-galaktos-inducerade åldrande modellmöss. Chinese Journal of Experimental E-Traditional Chinese Medicine. 2014; 20:137–41.

15. Fu Z, Han L, Zhang P, Mao H, Zhang H, Wang Y, Gao X, Liu E. Cistanche-polysackarider förbättrar echinakosidabsorptionen in vivo och påverkar tarmmikrobiotan. Int J Biol Macromol. 2020; 149:732 40.

https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2020.01.216 PMID:31987946

16. Bajaj JS, Gillevet PM, Patel NR, Ahluwalia V, Ridlon JM, Kettenmann B, Schubert CM, Sikaroodi M, Heuman DM, Crossey MM, Bell DE, Hylemon PB, Fatouros PP, Taylor-Robinson SD. En longitudinell systembiologianalys av laktulosabstinens vid hepatisk encefalopati. Metab Brain Dis. 2012; 27:205–15. https://doi.org/10.1007/s11011-012-9303-0 PMID:22527995

17. Qian Y, Yang X, Xu S, Wu C, Song Y, Qin N, Chen SD, Xiao Q. Förändring av fekal mikrobiota hos kinesiska patienter med Parkinsons sjukdom. Brain Behav Immun. 2018; 70:194–202. https://doi.org/10.1016/j.bbi.2018.02.016 PMID:29501802

18. Sjögren YM, Tomicic S, Lundberg A, Böttcher MF, Björkstén B, Sverremark-Ekström E, Jenmalm MC. Inverkan av tidig tarmmikrobiota på mognaden av barndomens slemhinna och systemiska immunsvar. Clin Exp Allergi. 2009; 39:1842–51. https://doi.org/10.1111/j.1365-2222.2009.03326.x PMID:19735274

20.Ladevèze S, Laville E, Despres J, Mosoni P, Potocki-Véronèse G. Mannosidigenkänning och nedbrytning av bakterier. Biol Rev Camb Philos Soc. 2017; 92:1969–90. https://doi.org/10.1111/brv.12316 PMID:27995767

21. Limoli DH, Jones CJ, Wozniak DJ. Bakteriella extracellulära polysackarider i biofilmbildning och funktion. Microbiol Spectr. 2015; 3:10.1128. https://doi.org/10.1128/microbiolspec.MB-0011-2014 PMID:26185074

22. Zeng H, Huang L, Zhou L, Wang P, Chen X, Ding K. En galaktoglukan isolerad från Cistanche deserticola YC Ma. och dess bioaktivitet på tarmbakteriestammar. Kolhydrid Polym. 2019; 223:115038. https://doi.org/10.1016/j.carbpol.2019.115038 PMID:31426978

23.Subramanian V, Rodemoyer B, Shastri V, Rasmussen LJ, Desler C, Schmidt KH. Blooms syndrom DNA-helikasbrist är associerad med oxidativ stress och förändringar i mitokondriella nätverk. Sci Rep. 2021; 11:2157.

https://doi.org/10.1038/s41598-021-81075-0 PMID:33495511

24.Mashima K, Oh I, Fujiwara K, Izawa J, Takayama N, Nakano H, Kawasaki Y, Minakata D, Yamasaki R, Morita K, Ashizawa M, Yamamoto C, Hatano K, et al. Jämförelse av alemtuzumab, anti-tymocytglobulin och cyklofosfamid efter transplantation för transplantat-mot-värd-sjukdom och graft-versus-leukemi i murina modeller. PLoS One. 2021; 16:e0245232. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0245232 PMID:33428661

25. Rooks MG, Garrett WS. Tarmmikrobiota, metaboliter och värdimmunitet. Nat Rev Immunol. 2016; 16:341–52. https://doi.org/10.1038/nri.2016.42 PMID:27231050

26. Zierer J, Jackson MA, Kastenmüller G, Mangino M, Long T, Telenti A, Mohney RP, Small KS, Bell JT, Steves CJ, Valdes AM, Spector TD, Menni C. Den fekala metabolomen som en funktionell avläsning av tarmmikrobiom. Nat Genet. 2018; 50:790–95. https://doi.org/10.1038/s41588-018-0135-7 PMID:29808030

27. Wilmanski T, Rappaport N, Earls JC, Magis AT, Manor O, Lovejoy J, Omenn GS, Hood L, Gibbons SM, Price ND. Blodmetabolom förutsäger tarmmikrobiom-diversitet hos människor. Nat Biotechnol. 2019; 37:1217–28.

https://doi.org/10.1038/s41587-019-0233-9 PMID:31477923

28. Chagoyen M, Pazos F. MBRole: anrikningsanalys av metabolomiska data. Bioinformatik. 2011; 27:730–31. https://doi.org/10.1093/bioinformatics/btr001 PMID:21208985

29. Xia J, Wishart DS. Använda MetaboAnalyst 3.0 för omfattande Metabolomics Data Analysis. Curr Protoc Bioinformatik. 2016; 55:14,10. https://doi.org/10.1002/cpbi.11 PMID:27603023

30. Miao X, Zhang H, Wu Y, Liu D, Zhang X, Li G. Den skyddande effekten av Cistanche verbascum-glykosider på D-galaktos-inducerad PC12-nervcellskada. Chinese Pharmaceutical Journal. 2017; 52:2071–78.

31. Wu Y, Zhang H, Bu R, Ma H, Su M, Li G. Forskning om den skyddande effekten av Cistanche deserticola polysackarid på den akuta åldrande modellen inducerad av D-galaktos. Kinesisk Pharmacol Bulletin. 2017; 33:927–33.

32. Yin R, Li G, Yu T, Ma H, Ma T, Guo M. Den skyddande effekten av Cistanche cistanche polysackarider på synaptisk plasticitet hos möss med skopolamininducerad inlärnings- och minnesnedsättning. Kinesisk Pharmacol Bulletin. 2014; 30:801–07.

33. Ma H, Yin R, Guo M, Bao Y, Cui Z, Li G. Effekten av Cistanche cistanche polysackarider på uttrycket av CREB i D-galaktos-inducerade åldrande modellmöss. Chinese Journal of Experimental E-Traditional Chinese Medicine. 2014; 20:137–41.

34. Fu Z, Han L, Zhang P, Mao H, Zhang H, Wang Y, Gao X, Liu E. Cistanche-polysackarider förbättrar echinakosidabsorptionen in vivo och påverkar tarmmikrobiotan. Int J Biol Macromol. 2020; 149:732–40. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2020.01.216 PMID:31987946

35.Bajaj JS, Gillevet PM, Patel NR, Ahluwalia V, Ridlon JM, Kettenmann B, Schubert CM, Sikaroodi M, Heuman DM, Crossey MM, Bell DE, Hylemon PB, Fatouros PP, Taylor-Robinson SD. En longitudinell systembiologianalys av laktulosabstinens vid hepatisk encefalopati. Metab Brain Dis. 2012; 27:205–15. https://doi.org/10.1007/s11011-012-9303-0 PMID:22527995

36. Qian Y, Yang X, Xu S, Wu C, Song Y, Qin N, Chen SD, Xiao Q. Förändring av fekal mikrobiota hos kinesiska patienter med Parkinsons sjukdom. Brain Behav Immun. 2018; 70:194–202. https://doi.org/10.1016/j.bbi.2018.02.016 PMID:29501802

37.Sjögren YM, Tomicic S, Lundberg A, Böttcher MF, Björkstén B, Sverremark-Ekström E, Jenmalm MC. Inverkan av tidig tarmmikrobiota på mognaden av barndomens slemhinna och systemiska immunsvar. Clin Exp Allergi. 2009; 39:1842–51. https://doi.org/10.1111/j.1365-2222.2009.03326.x PMID:19735274

38.Rangel I, Ganda Mall JP, Willén R, Sjöberg F, Hultgren-Hörnquist E. Grad av kolit korrelerar med mikrobiell sammansättning och cytokinsvar i kolon och blindtarm hos möss med G i2-brist. FEMS Microbiol Ecol. 2016; 92:fiw098. https://doi.org/10.1093/femsec/fiw098 PMID:27162181

39. Larbi A, Pawelec G, Witkowski JM, Schipper HM, Derhovanessian E, Goldeck D, Fulop T. Dramatiska förändringar i cirkulerande CD4 men inte CD8 T-cellsubset vid mild Alzheimers sjukdom. J Alzheimers Dis. 2009; 17:91–103.

https://doi.org/10.3233/JAD-2009-1015 PMID:19494434

40.West CE, Rydén P, Lundin D, Engstrand L, Tulic MK, Prescott SL. Tarmmikrobiom och medfödda immunsvarsmönster vid IgE-associerat eksem. Clin Exp Allergi. 2015; 45:1419–29. https://doi.org/10.1111/cea.12566 PMID:25944283

41. Wong ML, Inserra A, Lewis MD, Mastronardi CA, Leong L, Choo J, Kentish S, Xie P, Morrison M, Wesselingh SL, Rogers GB, Licinio J. Inflammasom signalering påverkar ångest- och depressivt beteende och tarm mikrobiomsammansättning. Mol psykiatri. 2016; 21:797–805.

https://doi.org/10.1038/mp.2016.46 PMID:27090302

42. Abildgaard A, Elfving B, Hokland M, Wegener G, Lund S. Probiotisk behandling minskar depressivt beteende hos råttor oberoende av kosten. Psykoneuroendokrinologi. 2017; 79:40–48. https://doi.org/10.1016/j.psyneuen.2017.02.014 PMID:28259042

43. Bercik P, Verdu EF, Foster JA, Macri J, Potter M, Huang X, Malinowski P, Jackson W, Blennerhassett P, Neufeld KA, Lu J, Khan WI, Corthesy-Theulaz I, et al. Kronisk gastrointestinal inflammation framkallar ångestliknande beteende och förändrar det centrala nervsystemets biokemi hos möss. Gastroenterologi. 2010; 139:2102–2112.e1. https://doi.org/10.1053/j.gastro.2010.06.063 PMID:20600016

44. Yoshimoto S, Mitsuyama E, Yoshida K, Odamaki T, Xiao JZ. Berikade metaboliter som potentiellt främjar åldersrelaterade sjukdomar hos personer med tarmmikrobiota av äldre typ. Tarmmikrober. 2021; 13:1–11. https://doi.org/10.1080/19490976.2020.1865705 PMID:33430687

45. Chatterjee P, Cheong YJ, Bhatnagar A, Goozee K, Wu Y, McKay M, Martins IJ, Lim WL, Pedrini S, Tegg M, Villemagne VL, Asih PR, Dave P, et al. Plasmametaboliter associerade med biomarkörbevis för neurodegeneration hos kognitivt normala äldre vuxna. J Neurochem. 2020. [Epub före tryckning]. https://doi.org/10.1111/jnc.15128 PMID:32679614

46. Mahajan UV, Varma VR, Griswold ME, Blackshear CT, An Y, Oommen AM, Varma S, Troncoso JC, Pletnikova O, O'Brien R, Hohman TJ, Legido-Quigley C, Thambisetty M. Dysregulation of multiple metabolic networks. relaterat till hjärntransmetylering och polyaminvägar vid Alzheimers sjukdom: En riktad metabolomik och transkriptomisk studie. PLoS Med. 2020; 17:e1003012. https://doi.org/10.1371/journal.pmed.1003012 PMID:31978055

47.Duerkop BA, Vaishnava S, Hooper LV. Immunsvar mot mikrobiotan vid tarmslemhinnan. Immunitet. 2009; 31:368–76. https://doi.org/10.1016/j.immuni.2009.08.009 PMID:19766080

48. Forsythe P, Bienenstock J. Immunmodulering av kommensala och probiotiska bakterier. Immunol Invest. 2010; 39:429–48. https://doi.org/10.3109/08820131003667978 PMID:20450286

49. Sternberg EM. Neural reglering av medfödd immunitet: ett koordinerat ospecifikt värdsvar på patogener. Nat Rev Immunol. 2006; 6:318–28. https://doi.org/10.1038/nri1810 PMID:16557263

50. Colonna M, Butovsky O. Microglia Funktion i centrala nervsystemet under hälsa och neurodegeneration. Annu Rev Immunol. 2017; 35:441–68. https://doi.org/10.1146/annurev-immunol-051116- 052358 PMID:28226226

51. El Khoury J. Neurodegeneration och det neuroimmuna systemet. Nat Med. 2010; 16:1369–70. https://doi.org/10.1038/nm1210-1369 PMID:21135838

52. Fu W, Vukojevic V, Patel A, Soudy R, MacTavish D, Westaway D, Kaur K, Goncharuk V, Jhamandas J. Roll av mikrogliala amylinreceptorer i att förmedla beta-amyloid (A)-inducerad inflammation. J Neuroinflammation. 2017; 14:199. https://doi.org/10.1186/s12974-017-0972-9 PMID:28985759

53. Yang X, Zeng Q, Tezel G. Reglering av distinkta kaspas- 8-funktioner i retinala ganglieceller och astroglia i experimentell glaukom. Neurobiol Dis. 2021; 150:105258. https://doi.org/10.1016/j.nbd.2021.105258 PMID:33434617

54. Ashok A, Singh N, Chaudhary S, Bellamkonda V, Kritikos AE, Wise AS, Rana N, McDonald D, Ayyagari R. Retinal Degeneration and Alzheimer's Disease: An Evolving Link. Int J Mol Sci. 2020; 21:7290. https://doi.org/10.3390/ijms21197290 PMID:33023198

55. Ruediger S, Vittori C, Bednarek E, Genoud C, Strata P, Sacchetti B, Caroni P. Inlärningsrelaterad feedforward-hämmande anslutningstillväxt krävs för minnesprecision. Natur. 2011; 473:514–18. https://doi.org/10.1038/nature09946 PMID:21532590

56. Wood RA, Bauza M, Krupic J, Burton S, Delekate A, Chan D, O'Keefe J. Bikakelabyrinten tillhandahåller ett nytt test för att studera hippocampus-beroende rumslig navigering. Natur. 2018; 554:102–05. https://doi.org/10.1038/nature25433

Buy cistanche