Abstrakt

Mål:För att undersöka den molekylära mekanismen genom vilkenCistanche-baserad Bushen Kaixuan Tongluo Formulautövar en njurskyddande effekt hos möss med diabetisk njursjukdom (DKD) genom att reglera den cykliska adenosinmonofosfat (cAMP) signalvägen.

Metoder:Trettio specifika patogenfria (SPF) hanmöss db/db matades adaptivt under 3 veckor. Möss med slumpmässiga blodsockernivåer i svansvenen större än eller lika med 11,1 mmol·L⁻1 och ett urinmikroalbumin/kreatininförhållande större än eller lika med 30 mg·g⁻1 ansågs vara framgångsrikt modellerade. De modellerade mössen tilldelades slumpmässigt i fem grupper (n=6 per grupp): modellgrupp, låg-, medel- och högdos Bushen Kaixuan Tongluo Formula-grupper (7, 14 och 28 g·kg⁻¹·d⁻¹) och en irbesartangrupp (20 mg·kg⁻¹¹¹d⁻¹). Sex db/m möss användes som den tomma gruppen.

Behandlingen varade i 12 veckor via intragastrisk administrering. Indikatorer för allmänna tillstånd, kroppsvikt och njurfunktion övervakades. Efter intervention mättes fasteblodsocker (FBG). En automatisk biokemisk analysator användes för att bedöma serumkreatinin (SCr), blodkarbamidkväve (BUN), urinmikroalbumin (uALB), albumin-kreatininförhållande (ACR), aspartataminotransferas (AST), alaninaminotransferas (ALT), totalt kolesterol (TC), triglycerider (TGP), serumglycerider (tg), proteinglykos (tg) och protein (INS).

Njurvävnadshistopatologi utvärderades med användning av HE, PAS och Massons trikromfärgning. Immunhistokemi (IHC) detekterade uttryck av proteinkinas A (PKA) och cAMP-responselementbindande protein (CREB). Western blöt analyserade nivåer av PKA, fosforylerad PKA (p-PKA), CREB, fosforylerad CREB (p-CREB) och Bcl-2. Realtids-PCR användes för att utvärdera mRNA-uttryck av PKA, CREB och Bcl-2.

Resultat:Jämfört med den tomma gruppen visade modellgruppen letargi, minskad aktivitet och signifikant ökad kroppsvikt (P<0.01). Biochemical markers such as BUN, uALB, ACR, AST, ALT, TC, TG, FBG, LEP, GSP, and INS were significantly increased (P<0.01), while SCr showed an upward trend without statistical significance.

Jämfört med modellgruppen visade de formelbehandlade grupperna ett förbättrat allmäntillstånd och en nedåtgående trend i kroppsvikt. BUN, uALB, ACR, TC, GSP och INS reducerades signifikant (P<0.05), while SCr, AST, ALT, TG, and LEP decreased without statistical significance.

Histopatologisk analys avslöjade att modellgruppen visade klassiska DKD-funktioner såsom glomerulär basalmembranförtjockning, mesangial matrisexpansion och kollagenavlagring i tubulointerstitium. Dessa patologiska förändringar lindrades i alla behandlingsgrupper.

IHC-resultat visade signifikant minskade p-PKA- och p-CREB-uttryck i modellgruppen (P<0.01). Compared with the model group, the medium-dose formula group had significantly increased p-PKA (P<0.01) and a non-significant upward trend in p-CREB.

Western blot visade att nivåerna av p-PKA/PKA, p-CREB/CREB och Bcl-2 reducerades signifikant i modellgruppen (P<0.05), but significantly increased in the medium-dose formula group (P<0.01).

Realtids-PCR bekräftade nedreglering av PKA, CREB och Bcl-2 mRNA i modellgruppen (P<0.05), and significant upregulation in the medium-dose formula group (P<0.05).

Slutsatser:DeCistanche-baserad Bushen Kaixuan Tongluo Formulaförbättrar lever- och njurfunktionen, korrigerar lipid- och glukosmetabolismstörningar hos db/db-möss. Dess njurskyddande effekt är förknippad med uppreglering avcAMP/PKA/CREB signalväg, som minskar njurfibros och oxidativ stress, och skyddar därigenom njurfunktionen.

 

 

 

 

Cistanche-baserad Bushen Kaixuan Tongluo Formel förförbättra lever- och njurfunktionen

Klicka på bilden för mer information

Nyckelord

Diabetisk njursjukdom (DKD);
Bushen Kaixuan Tongluo Formel;
Cistanche;
cAMP-signalväg;
Traditionell kinesisk medicin (TCM)

 

Cistanche-baserat medel

 

Bakgrund

Diabetisk njursjukdom (DKD), en av de allvarligaste mikrovaskulära komplikationerna av diabetes, är en ledande orsak till njursjukdom i slutstadiet (ESRD) över hela världen. Dess växande förekomst utgör en betydande utmaning för de offentliga hälsosystemen. DKD-funktioner inkluderar progressiv glomerulär mesangial matrisexpansion, tubulointerstitiell fibros och ihållande proteinuri. Patogenesen involverar komplexa interaktioner mellan glukos- och lipidmetabolismstörningar, oxidativ stress och onormal aktivering av olika signalvägar.

Nuvarande förstahandsbehandlingar inkluderar i första hand renin-angiotensinsystemet (RAS)-hämmare, som hjälper till att minska glomerulär hypertoni och fördröja tidig proteinuri. De är dock mindre effektiva hos patienter med etablerad tubulointerstitiell fibros, med 30–40 % som utvecklas till ESRD.

Därför är det av akut kliniskt och vetenskapligt intresse att utforska nya DKD-mekanismer och hitta effektiva, säkra terapeutiska mål. Traditionell medicin erbjuder reglering av flera mål med färre biverkningar, vilket gör den mer lämpad för långvarig användning vid kronisk njursjukdom. DeCistanche-baserad Bushen Kaixuan Tongluo Formulaär en empiriskt validerad örtblandning för DKD, visad i tidigare kliniska prövningar för att förbättra symtomen och fördröja sjukdomsprogression.

Men dess molekylära mekanism, särskilt dess interaktion med viktiga signalvägar, är fortfarande dåligt förstådd. Bevis tyder påcAMP/PKA/CREBkan lindra njurfibros, men relaterade studier är begränsade. Denna studie fokuserar på denna väg för att belysa hur dettaCistanche-baserad formelförbättrar DKD.

 

Material och metoder

1. Djur

30 db/db hanmöss (7 veckor gamla, SPF-klass, kroppsvikt: 37,58±0,62 g)

6 åldersmatchade db/m möss (kroppsvikt: 24,38±0,35 g)

Säljare: Jiangsu Huachuang Xinnuo Pharmaceutical Technology Co., Ltd.

Licens: SCXK (Su) 2020-0009 och SYXK (Jing) 2020-0033

Etikgodkännande: BUCM2024041506-2090

2. Örtsammansättning

Bushen Kaixuan Tongluo-formeln innehåller (i gram):
Cistanche(ersätter rå Astragalus) 45, Salvia miltiorrhiza 30, Hirudo 6, Saposhnikovia 20, Bombyx batryticatus 15, Cicada slough 15, Polygonatum sibiricum 10, Rehmannia glutinosa 20, Cornus officinalis 20, Rosala 20, Rosala 20 30, Rubus chingii 30, Cnidium monnieri 20, Achyranthes bidentata 30, Dioscorea opposita 20.

Alla örter autentiserades av en licensierad farmaceut och bereddes via vattenavkok, reducerades under vakuum och spraytorkades för att bilda ett pulver. Den slutliga koncentrationen var 1,43 g·mL⁻1 råa örter.

3. Reagens och instrument

(Se originaltexten för detaljerade listor.)

 

Experimentell design

Modellutvärdering

Efter 3 veckors adaptiv matning ansågs möss med slumpmässigt blodsocker högre än eller lika med 11,1 mmol·L⁻¹ och ACR större än eller lika med 30 mg·g⁻1 som framgångsrika DKD-modeller.

Gruppering och dosering

Blank grupp (db/m): vatten

Modellgrupp: vatten

Låg dos: 7 g·kg⁻¹·d⁻¹

Medeldos: 14 g·kg⁻¹·d⁻¹

Hög dos: 28 g·kg⁻¹·d⁻¹

Irbesartangrupp: 20 mg·kg⁻¹·d⁻¹

Varaktighet: 12 veckor under fri matning och drickande.

---

Provtagning och analys

Urin:Uppsamlat under 24 timmar, centrifugerat och lagrat vid –20 grader

Blod:Samlas via orbital extraktion, centrifugeras och lagras vid -80 grader

Njurar:Uppdelad för patologi (formalinfixerad), protein (flytande kväve) och genuttryck (fryst)

---

Detektionsmetoder

Biokemisk analys:SCr, BUN, AST, ALT, TC, TG, INS, LEP, GSP och uALB

Histopatologi:HAN, PAS, Masson färgning

IHC:p-PKA och p-CREB proteinuttryck

Western Blot:p-PKA, PKA, p-CREB, CREB, Bcl-2, -aktin

Realtids-PCR:mRNA-uttryck av PKA, CREB och Bcl-2

---

Tabell 1. Primersekvenser

Gen	Forward Primer (5′–3′)	Reverse Primer (5′–3′)	Längd (bp)
PKA	GCTGGAGATGGTGAAACGGGA	CGTCCTTGAGTCCTCCACATTC	671
CREB	AGCAGCTCATGACACATCATC	AGTCCTTCAGGAAGACTGAACT	152
Bcl-2	GCTACCCTGTGGATGACTTCGC	CCCACCCGAACTCAAAGAAGG	147
GAPDH	AGGTCGGTGTGAACGGATTTG	GGGGTCGTTGATGGCAACA	95