Jämförelse av innehållsskillnader mellan åtta kemiska komponenter i rå- och vinbearbetade produkter av två typer av Cistanche Deserticola baserad på UPLC Ⅱ
Jun 16, 2025
2. Metoder och resultat
2.1 Kromatografiska förhållanden
UPLC-analys utfördes med användning av enWaters ACQUITY UPLC™ BEH C18 kolonn (100 mm × 2,1 mm, 1,7 μm partikelstorlek). Den mobila fasen bestod avmetanol (A)och0,1 % vattenlösning av myrsyra (B)med följande gradienteluering:
0–4 min: 10 % → 26 % A
4–18 min: 26 % → 40 % A
18–20 min: 40 % → 50 % A
Flödeshastighet:0,3 ml/min
Injektionsvolym:3 μL
Kolumntemperatur:35°C
Detektionsvåglängd:330 nm
2.2 Förberedelse av lösningar
2.2.1 Blandad referenslösning
Väg noggrant följande standardföreningar:cistanosid F, echinakosid, cistanosid A, verbascoside, tubulosid A, isoverbaskosid, 2'-acetylverbaskosid, ochtubulosid B. Lös i 50 % metanol för att framställa en referensblandning med följande koncentrationer (µg·mL⁻¹):
Cistanosid F: 32,7
Echinacoside: 102,4
Cistanosid A: 50,2
Verbascoside: 80,6
Tubulosid A: 25,6
Isoverbascoside: 86.3
2'-acetylverbaskosid: 77,3
Tubulosid B: 60,8
2.2.2 Provlösning
Rå Cistanche skivorframställdes genom att mjukgöra örten, skiva och torka.
Vinångad Cistancheframställdes genom att blötlägga råa skivor i 30 % risvin, ångkoka blandningen i 12 timmar, kyla och torka igen.
Cirka0.2 gav torkat pulver (passerat genom en 65-mesh sikt) vägdes upp i en 50 ml bärnstensfärgad mätkolv, extraherades med 25 ml 50% metanol, ultraljudsbehandlades i 40 minuter (250 W, 35 kHz) och fördes tillbaka till vikten. Lösningen filtrerades genom a0,22 μm membranoch filtratet användes för analys.
Anmärkning: H. Desert Cistanche; G. Tubulosa Cistanche; RH. Cistanche deserticola råa skivor; RG. Cistanche tubulosa råa skivor; WH. Cistanche deserticola stuvad med vin; WG. Cistanche tubulosa stuvad med vin; Figurerna 4 till 7 är desamma.
Figur 1 Bilder av Cistanche deserticola och Cistanche tubulosa medicinska material, råa skivor och stuvade med vin
ett berömt cistanchevin som säljs i Kina
Supporttjänst från Wecistanche-The Kontakta oss för att få ett prov eller grossistinformation
E-post:wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/Tel:+86 15292862950
2.3 Kvantitativ analys av 8 huvudföreningar i rå- och vinbearbetad Cistanche
2.3.1 Systemets lämplighet
Under de beskrivna kromatografiska förhållandena, teoretiskt plåtnummer förechinakosid exceeded 6000 with good resolution (>1,5). Kromatogram av blandad standard, rå öken Cistanche och vinbearbetade prover visas i figur 2.
Peak Identifiering:
Cistanoside F
Echinacoside
Cistanoside A
Verbascoside
Tubulosid A
Isoverbascoside
2'-acetylverbaskosid
Tubulosid B
cistanche deserticola
cistanche tubulosa
2.3.2 Linjäritet och detektionsgränser
Standardkalibreringskurvor upprättades med användning av serieutspädningar av referensblandningen vid koncentrationer av 0,1 till 5,0 ml. Kalibreringskurvor genererades genom plottningkoncentration (X)kontra-topparea (Y). Detektionsgränser (LOD, S/N=3) och kvantifieringsgränser (LOQ, S/N=10) bestämdes och bekräftade god linjäritet över de testade intervallen.
2.3.3 Precision
Sex replikatinjektioner av den blandade referenslösningen visadesrelativa standardavvikelser (RSD)av toppområden som sträcker sig från0,48 % till 2,14 %, vilket indikerar utmärkt instrumentprecision.
2.3.4 Stabilitet
Exempel på lösningar avrå Cistanche-pulver (batchnr. 160901)analyserades vid 0, 2, 4, 8, 12 och 24 timmar. RSD för toppareor för alla 8 föreningar varierade från0,71 % till 1,93 %, bekräftarlösningens stabilitet inom 24 timmar.
Tabell 1. Exempelinformation på Cistanche-material
| Källarter | Prov-ID | Ursprung | Batchnummer |
|---|---|---|---|
| Cistanche deserticola | H1 | Inre Mongoliet | 160901 |
| H2 | Xinjiang | 1712301 | |
| H3 | Xinjiang | 1712305 | |
| H4 | Xinjiang | 1712306 | |
| H5 | Xinjiang | 1712307 | |
| H6 | Inre Mongoliet | 1712308 | |
| H7 | Xinjiang | 180710 | |
| H8 | Xinjiang | 180710 | |
| H9 | Xinjiang | 180710 | |
| H10 | Xinjiang | 180711 | |
| Cistanche tubulosa | G1 | Xinjiang | 151201 |
| G2 | Xinjiang | 170301 | |
| G3 | Xinjiang | 1709001 | |
| G4 | Xinjiang | 170601 | |
| G5 | Xinjiang | 1712302 | |
| G6 | Xinjiang | 1712303 | |
| G7 | Xinjiang | 1712304 | |
| G8 | Xinjiang | 180710 | |
| G9 | Xinjiang | 180710 | |
| G10 | Xinjiang | 180712 |
| Echinacoside |
| Cistanoside A |
| Verbascoside |
2.3.5 Repeterbarhet
Sex oberoende framställda replikat av samma Cistanche-sats visade god repeterbarhet. Genomsnittligt innehåll (mg·g⁻¹) och RSD:er var följande:
| Förening | Genomsnittlig Innehåll (mg/g) | RSD (%) |
|---|---|---|
| Cistanoside F | 0.24 | 1.24% |
| Echinacoside | 4.49 | 0.25% |
| Cistanoside A | 0.56 | 1.93% |
| Verbascoside | 2.52 | 1.40% |
| Tubulosid A | 0.59 | 1.15% |
| Isoverbascoside | 1.49 | 0.71% |
| 2'-acetylverbaskosid | 1.23 | 1.94% |
| Tubulosid B | 0.86 | 1.02% |
2.3.6 Återställningstest
Återhämtningen testades genom spikningsex kopior av Cistanche-pulver (0,1 g)med kända koncentrationer av de 8 referensföreningarna. Genomsnittliga återhämtningar varierade från95,56 % till 102,71 %, med RSD mellan1,44 % och 2,97 %, indikerarutmärkt extraktions- och kvantifieringssäkerhet.
Anmärkning: A. Blandad referens; B. Rå Cistanche deserticola; C. Stuvad Cistanche deserticola i vin; 1. Cistancheside F; 2. Echinakosid; 3. Cistancheside A; 4. Verbascoside; 5. Tubulosid A; 6. Isoverbaskosid; 7. 2΄-acetylverbaskosid; 8. Tubulosid B.
2.3.7 Kvantifiering av aktiva föreningar i rå vs. vinbearbetad Cistanche
Varje prov testades i duplikat. De 8 målföreningarna kvantifierades i10 satser Cistanche deserticola(rå och vinbearbetad) och10 satser Cistanche tubulosa. Resultaten sammanfattas i tabell 3 och ger insikter om:
Artspecifika skillnader i sammansättning
Förändringar i fytokemiskt innehåll efter vinbearbetning
Analytisk fingeravtryck för Cistanche kvalitetskontroll
Tabell 2. Kalibreringskurvor, korrelationskoefficienter (r), linjära intervall, LOD och LOQ för åtta föreningar
| Förening | Kalibreringsekvation | r | Linjärt område (µg·mL⁻¹) | LOD (µg·mL⁻¹) | LOQ (µg·mL⁻¹) |
|---|---|---|---|---|---|
| Cistanoside F | Y=4.89 × 10⁹X + 3.31 × 10³ | 0.9999 | 0,327–32,700 | 0.0521 | 0.1300 |
| Echinacoside | Y=3.88 × 10⁹X + 1.71 × 10⁴ | 0.9999 | 1.024–102.400 | 0.0422 | 0.1339 |
| Cistanoside A | Y=5.08 × 10⁹X + 3.45 × 10³ | 0.9999 | 0,502–50,600 | 0.1006 | 0.4035 |
| Verbascoside | Y=3.88 × 10⁹X + 3.43 × 10³ | 0.9999 | 0,806–80,600 | 0.0732 | 0.1871 |
| Tubulosid A | Y=4.42 × 10⁹X + 1.07 × 10³ | 0.9999 | 0,256–25,600 | 0.0865 | 0.2876 |
| Isoverbascoside | Y=4.81 × 10⁹X + 5.29 × 10³ | 0.9999 | 0,863–86.300 | 0.0242 | 0.0734 |
| 2'-acetylverbaskosid | Y=5.30 × 10⁹X + 2.99 × 10³ | 0.9999 | 0,773–77,300 | 0.0317 | 0.1024 |
| Tubulosid B | Y=5.17 × 10⁹X + 3.39 × 10³ | 0.9999 | 0,608–60,800 | 0.1794 | 0.3876 |
2.4 Jämförande analys av kemisk sammansättning mellan Cistanche-arter
För att undersökafytokemiska skillnadermellanCistanche deserticolaochCistanche tubulosa, koncentrationerna av åtta nyckelfenyletanoidglykosiderfrån10 satser av rå- och vinbearbetade proverav varje art visualiserades med hjälp avboxplots (Figur 3). Statistisk analys visade att, med undantag för2'-acetylverbaskosidochtubulosid Bvisade de flesta andra föreningarsignifikanta skillnader (P < 0,05)mellan de två arterna i både rå och bearbetad form.
Speciellt:
Irå Cistanche, innehållet icistanosid F, echinakosid, isoverbaskosid, tubulosid A och verbaskosidvarbetydligt lägreiC. deserticolajämfört medC. tubulosa(P < 0,05).
Devinbearbetade proverspeglade liknande trender.
I synnerhet,cistanosid Ahittades klhögre nivåer iC. deserticolaoch varoupptäckbariC. tubulosa, vilket tyder på att det kan fungera som enpotentiell markörföreningför artdifferentiering.
PLS-DA kemometrisk analys av Cistanche-arter
A Partial Least Squares Discriminant Analysis (PLS-DA)utfördes med användning av koncentrationsdata för de åtta föreningarna. Det resulterandepoängdiagram (Figur 4A)visade att råa och bearbetade prover från båda arterna gjorde detinte grupperas i klart åtskilda grupper.
Dock,slumpmässiga permutationstester (Figur 4B)avslöjade att modellen varinte övermonterad, som de sanna värdena förR²Y och Q²var högre än de för de permuterade modellerna. Den relativtlåga Q²-värdenföreslåbegränsad förutsägbarhet, troligen på grund avvariabilitet inom gruppenochöverlappande föreningsområdenmellan råa och bearbetade former.
Ytterligare PLS-DA-modellering och VIP-analys
Separata PLS-DA-modeller konstruerades för råa och vinbearbetade prover av båda arterna att utforskaartspecifika kemiska skillnader. Följande observerades:
Poängdiagram (figur 5A och 5C)visadedistinkt klustringmellanC. deserticolaochC. tubulosai både rå och bearbetad form.
Modellvalidering (figur 5B och 5D)bekräftad god prediktiv kraft utan överanpassning.
Variabel betydelse i projektionsdiagram (VIP) (figur 6A och 6B)identifierade nyckelföreningar som bidrar till artdiskriminering:
Förråprover: Cistanoside A, cistanosid F, echinakosid, ochverbascosidevar mest informativa.
Förvinbearbetade prover: Cistanoside Aochtubulosid Bspelade dominerande roller.
2.5 Inverkan av vinbearbetning på Cistanche-fytokemi
På grund av avsevärda variationer i föreningsinnehåll mellan partier,parade jämförelservore gjorda mellan råa och vinbearbetade prover avsamma parti. Resultaten, visualiserade med hjälp avfiolplaner (Figur 7), avslöjade följande:
IC. deserticola, nivåer av2'-acetylverbascosid, cistanosid A, cistanosid F, echinacosid, tubulosid A och verbascosid minskat betydligtefterbehandling (P < 0,05), medantubulosid B ökade.
IC. tubulosa, nivåer av2'-acetylverbaskosid, echinakosid och verbaskosidocksåminskat, medanisoverbaskosid och tubulosid B ökadesignifikant (P < 0,05).
Dessa fynd tyder på vinbearbetning kan leda tillhydrolys, isomerisering, ellerkemisk omvandlingav aktiva ingredienser.
3. Diskussion
Enligt2020 års upplaga av den kinesiska farmakopén, Cistanche deserticolafår inte innehålla mindre än0.3%av det sammanlagda innehållet avechinacoside och verbascoside, medanCistanche tubulosafår inte innehålla mindre än1.5%av dessa två föreningar. I denna studie uppfyllde alla råa och bearbetade prover - utom en batch (180710) - dessa standarder.
Trotsbatch-till-batch-variabilitetinom varje art (vissa föreningar skilde sig upp till 10 gånger, såsom tubulosid A och isoverbaskosid), observerades konsekvent statistiskt signifikanta skillnader i föreningsinnehåll mellan de två arterna. Detta bekräftar detarternas ursprung är en viktig faktorpåverkar den fytokemiska sammansättningen.
Dessutom,cistanosid Avarendast upptäckt iC. deserticolaoch frånvarande iC. tubulosa, vilket gör det till envärdefull markör för artautentisering, särskilt i farmakognostiska eller kvalitetskontrollinställningar.
🔬 Effekt av vinbearbetning på kemisk sammansättning
Efter vinbearbetning visade båda arterna en konsekvent trend:
Minskade nivåerav:
Cistanosid F, echinakosid, cistanosid A, verbascosid, tubulosid A och 2'-acetylverbascosid
Ökade nivåerav:
Tubulosid B och isoverbaskosid
Dessa trender kan bero påkemisk hydrolys, degradering, ellerstrukturell omläggningunder ångningsprocessen. Intressant nogstorleken och riktningen av förändringar varierade mellan batcher, troligen på grund av skillnader i:
Initiala koncentrationer av föreningar
Örtmorfologi (storlek, tjocklek)
Känslighet för bearbetningsförhållanden
Detta understryker vikten avstandardisering av bearbetningsparametraroch dirigerabatchspecifika kvalitetsbedömningarunder örtberedning.
