Sammansättningsanalys av Cistanche Tubulosa: Separation och struktur av fenyletanoidglykosid och neolignanglykosid

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com

Beståndsdelarna i Cistanche Tubulosa (Schrenk) Hook. F. II.1) Isolering och strukturer av en ny fenyletanoidglykosid och en ny neolignanglykosid

Fumio Yoshizawa,* a Takeshi Deyama/ Nobuo Takizawa/ Khan UsmanghaniJ och Mansoor Ahmad6

Central Research Laboratories, Yomeishu Seizo Co., Ltd., en 2132-37 Nakaminowa, Minowa-machi, Kamiina-gun, Nagano 399-46, Japan och Department of Pharmacognosy, Farmaceutiska fakulteten, University of Karachi? Karachi-32, Pakistan. Mottaget 9 november 1989

En nyfenyletanoid glykosidbenämnd tubulosid E (I), och en nyneolignanglykosid, dehydrodiconiferylalkohol yO-0-D-glukopyranosid (II), isolerades från hela växter avCistanche tubulosa (Schrenk) Hook. f. (Orobanchaceae), together with dehydrodiconiferyl alcohol 4-O-^-D-glucopyranoside (III), syringalide A 3'-a-L- rhamnopyranoside (IV), isosyringalide S'-a-L-rhamnopyranoside (V), (+ )-syringaresinol O-^-D-glucopyranoside (VI), ( + )-pinoresinol O-^-D-glucopyranoside (VII), liriodendron (VIII), 6-deoxycatalpol (IX), 8-epiIoganic acid (X), 20-hydroxyecdysone (XI), 8-hydroxygeraniol l-j?-D-glucopyranoside (XII) and syringin (XIII). The structure of tubuloside E (I) was established as 2-(3,4-dihydroxy phenyl)ethyl O-a-L-rhamnopyranosyl-(l ->3)-2-O-acetyl-4-Op-cumaroyl-^-D-glukopyranosid på basis av kemiska bevis och spektraldata.

Nyckelord Cistanche tubulosa-, Orobanchaceae;fenyletanoidglykosid;iridoid; tubulosid E; dehydrodiconiferylalkoholglykosid; syringalid rhamnosid;neolignanglykosid; 13C-NMRMOE

fenyletanoidglykosid i cistanche

I ett tidigare dokument rapporterade vi isolering och strukturell bestämning av nyafenyletanoidglykosider, tubulosider A一D från hela växterna avCistanche tubulosa(Schrenk) Krok. f. (Orobanchaceae) i Pakistan.

Denna artikel behandlar isolering och strukturell belysning av en nyfenyletanoid glykosid, benämnd tubulosid E (I), och en nyneolignanglykosid, dehydrodiconiferylalkohol ■/-QgD-glukopyranosid (II), såväl som isoleringen av 11 kända föreningar, dehydrodiconiferylalkohol 4-OgD-glukopyranosid (III), syringalid A 3'-aL-rhamnopyranosid (IV), isosyringalid 3'-aL-rhamnopyranosid (V), (plus )-syringaresinol OgD-glukopyranosid(VI), (plus )-pinoresinol OgD-glukopyranosid (VII), liriodendron (VIII), 6-deoxikatalpol (IX) , 8- epilogansyra (X), 20-hydroxiecdyson (XI), 8-hydroxigeraniol 1-gD-glukopyranosid (XII) och syringin (XIII). Föreningarna VI, VIII一X, XII och XIII isolerades tidigare från Cistanche salsa?'

Tubulosid E (I) isolerades som ett amorft pulver, C31H38O15 -3/2H2O, [a】D -134.0 grad (MeOH). Det infraröda (IR) spektrumet antydde närvaron av hydroxylgrupper (3430cm-1), konjugerad ester (1734cm-x), en dubbelbindning (1634cm-1) och aromatiska ringar ( 1608 och 1518 cm-1). Protonkärnmagnetresonans 0H-NMR)-spektrumet för I visade signaler på grund av en metylgrupp av ramnos 0 1.07 (3H, d, J= 6 Hz)], en acetoxylgrupp {{22} }.98 (3H, s)], bensyliska metylenprotoner 0 2.72 (2H, t, J—1 Hz)], en glukosanomer proton 0 4.54 (1H, d, J{{ 32}} Hz)], en rhamnoseanomer proton 0 5.00 (1H, br s)], två olefiniska protoner [<5 6.34,="" 7.66="" (1h="" each,="" d,="" j="16" hz)]="" and="" aromatic="" protons="" 0="" 6.50—7.46="">

Vid acetylering gav förening I oktaacetatet (la), vars 】H-NMR-spektrum visade fem alifatiska acetoxylgrupper 0 1.87, 1.95, 2.02 (3H vardera, s), 2.10x2 (6H, s)] och tre aromatiska acetoxylgrupper [<5 2.27,="" 2.28,="" 2.31="" (3h="" each,="" s)].="" as="" shown="" in="" table="" i,="" the="" carbon="" nuclear="" magnetic="" resonance="" (13c-nmr)="" spectrum="" of="" i="" was="" almost="" identical="" with="" that="" of="" 2'-acetylacteoside="" (ib)「)except="" for="" the="" signals="" due="" to="" the="" ^-coumaric="" acid="">

Vid metanolys av I med acetylklorid i metanol detekterades metyl-p-kumarat och 3,4-dihydroxifenetylalkohol på tunnskiktskromatografi (TLC) och högpresterande vätskekromatografi (HPLC).

Sur hydrolys av I med 10 procent svavelsyra gav glukos och ramnos i förhållandet 1 till 1.

From the above results, the structure of tubuloside E (I) was established as 2-(3,4-dihydroxy phenyl)ethy 1 O-a-L- rhamnopyranosyl-( 1 -^3)-2-(?-acetyl-4-O-/>-kumaroyl-^-D-glukopyranosid.

Förening III isolerades som ett amorft pulver, [a]D - 56,4 grader (MeOH). Enzymatisk hydrolys av III gav en aglykon (Illb) som ett amorft pulver, [0]270 -11300, [a]D -31,6 grader (MeOH) och glukos. Föreningarna Illb och III identifierades som dehydrodiconiferylalkohol3,4) och dess 4-O-#-D-glukopyranosid,3,4) respektive, genom jämförelse med autentiska prover (TR,】H- och 13C-NMR-spektra) .

Förening II isolerades som ett amorft pulver, [a]D 一 7,4 grader (MeOH), vars IR-spektrum antydde närvaron av en hydroxylgrupp (3430 cm-1) och en aromatisk ring (1614,1522,1502 cm) T). 〔H-NMR av II visade signaler på grund av två aromatiska metoxylgrupper 0 3.74, 3.80 (3H vardera, s)], en bensylisk proton 0 5.45 (1H, d, J{{ 16}}Hz)], två transolefiniska protoner 0 6.17 (1H, dt, J= 16, 7 Hz), d 6,58 (1H, d, J= 16 Hz)] och fem aromatiska protoner 0 6.7一7.1 (5H, m)]. Vid acetylering gav förening II hexaacetatet (Ila), vars 'H-NMR-spektrum visade fem alifatiska acetylsignaler 0 2.01, 2.03, 2.09, 2.06 (3H, 3H, 3H, 6H)]. Enzymatisk hydrolys av II gav aglykonen (lib) och glukos. Förening lib isolerades som ett amorft pulver, [a]D plus 34,8 grader (MeOH), vars IR-, iH- och 13C-NMR-spektra var nästan identiska med de för Illb, förutom [a]D-värden och cirkulär dikroism (CD) ) spektrum.

Den absoluta konfigurationen av lib klargjordes genom jämförelse av dess CD-spektrum med det för Illb och III, vars stereokemi bekräftades i publicerade data.4) CD-spektrumet för lib visade A& plus 14100 (270) och plus 15200 (283) som positiva maxima, å andra sidan, visade Illb A& -11300 (270) och -10990 (283) som negativa maxima. Dessa fakta tyder på att lib och Illb är enantiomerer av varandra. Stereokemin för lib måste vara den som visas i diagram 1.

Således fastställdes förening II vara dehydrodico-niferylalkoholmonoglukosid. Glukosens position

respektive. Skiften av motsvarande kol vid att gå till II från lib var -4,4 och plus 7,3 ppm, vilket indikerade att en glukosyldel i II var kopplad till hydroxylgruppen vid Cy'-atom.5)

Från ovanstående resultat fastställdes förening II som dehydrodiconiferylalkohol y'-O-^-D-glukopyranosid.

Föreningarna IV och V isolerades som ett amorft pulver (IV, C29H36O14 • 5/2H2O; V, C29H36O14- 1/2H2O). IR-spektra antydde närvaron av hydroxylgrupper (3400cm7), en dubbelbindning (1634cm-1) och aromatiska ringar (1606 och 1518cm-1). Vid acetylering gav föreningarna IV och V oktaacetaterna ( IVa, Va), vars IH-NMR-spektra visade fem alifatiska acetoxyl- respektive tre aromatiska acetoxylsignaler. Föreningarna IVa och Va identifierades som syringalid A 3'-aL-rhamnopyranosid-oktaacetat och isosyringalid 3'-aL-rhamnopyranosidoktaacetat, respektive genom jämförelse av (以 IR och 】H-NMR) med autentiska prover.6) 'H- 13C-NMR-spektrum av IV och V stödde dessa strukturer (se Experimentell). Föreningar VI-XIII identifierades som (plus )-sprutor-esinol O-少-D-glukopyranosid (VI),2c) (plus )-pinoresinol O- jS-D-glukopyranosid (VII),7) liriodendrin (VIII),2Z,) 6-de-oxikatalpol (IX),2c) 8-epilogansyra (X),2fl) {{50} }hydroxyecdyson (XI),8) 8-hydroxigeraniol 1-0-D-glukopyranosid (XII) respektive syringin (XIII),2d), i jämförelse med autentiska prover

Experimentell

Smältpunkter bestämdes på en Mitamura mikrosmältpunktsapparat och är okorrigerade. Optiska rotationer mättes med en JASCO DIP-140 digital polarimeter. IR-spektra registrerades med en Hitachi 279-30 IR-spektrofotometer och ultravioletta (UV)-spektra med en Hitachi 200-20-spektrofotometer. CD-spektra registrerades med en JASCO J-20A CD-spektrofotometer och masspektra (MS) med en JEOL JMS-100. 'H-NMR- och 13C-NMR-spektra registrerades med en JEOL FX-90Q-maskin (89,55 respektive 22,5 MHz).

Kemiska skift anges på d (ppm)-skalan med tetrametylsilan (TMS) som intern standard. Förkortningarna som används för kärnmagnetisk resonans (NMR) data är följande; s, singlett; d, dubblett; t, triplett; q, kvartett; br, bred. Gaskromatografi (GC) kördes på en Shimadzu GC-4CM-apparat med en flamjoniseringsdetektor. HPLC utfördes på en Hitachi 655A-11-maskin. Kiselgel (Wako gel C-300) användes för kolonnkromatografi. Silikagel 60 F254 (Merck) förbelagda plattor användes för TLC och detektion utfördes genom att spruta 10 procent H2SO4 följt av upphettning.

Isolering

Hela växter avcistanche tubulosa(7 kg), uppsamlade i december 1986, i Karachi, Pakistan, extraherades med MeOH (20 1 x 2) under återflöde. Extraktet koncentrerades under reducerat tryck och återstoden suspenderades i vatten. Denna suspension extraherades med EtOAc mättad med vatten. Vattenskiktet utsattes för en Diaion HP-20 (Nippon Rensui Co.) kolonn och tvättades med H2O och eluerades sedan med MeOH. MeOH-eluatet (140 g) kromatograferades på en polyamid C-200 (Wako Pure Chemical)-kolonn med användning av H2O och sedan MeOH för att ge två fraktioner (fraktion 1, H2O-eluat; fraktion 2, MeOH-eluat). Fraktion 1 koncentrerades för att ge en återstod. Återstoden kromatograferades på en silikagelkolonn med användning av CHCl3-MeOH-H2O upprepade gånger. Efter upprepad kromatografi av HPLC (kolonn, Develosil ODS-10, 20 x 250 mm; lösningsmedel; H2O-CH3CN eller H2O-MeOH), isolerades 10 föreningar [II (45mg), III (40mg), VI (35mg) VII (43 mg), VIII (12 mg), IX (8 mg), X (10 mg), XI (20 mg), XII (10 mg) och XIII (3,6 mg)]. Fraktion 2 behandlades på samma sätt som fraktion 1 och gav föreningarna I (150 mg), IV (10 mg) och V (10 mg).

Tubulosid E (I)

Amorft pulver, [a]p3 —134.0 grad (c= 1.5, MeOH). Anal. Beräknat för C31H38O15 -3/2H2O: C, 54,98; H, 6,10. Funnet: C, 55,01; H, 5,98. IR cm-1: 3430,1732, 1634, 1608,1518. ]H·NMR (MeOH-4) 3: 1,07 (3H, d, J=6Hz, CH3 av ramnos), 1,98 (3H, s, OAc), 2,72 (2H, t, J{ {37}}Hz, Ar-CH2~), 4,54 (1H, d, J=8Hz, Hl av glukos), 5.00 (1H, brs, Hl av rhamnos), 6,34 ( 1H, d, J= 16Hz, Ar-CH=CH-), 6,5一6,8 (3H, aromatisk H), 6,80 (2H, d, J-9Hz, H{ {65}}; H-5'), 7,46 (2H, d, J=9Hz, H-2; H-6Z), 7,66 (1H, d, J= 16 Hz, Ar—CH=CH—). 13C-NMR: Tabell L

Dehydrodiconiferylalkohol y^-O-^-D-GIucopyranosid (II)

Amorft pulver, [a]^5 —7,4 grader (c= 1.6, MeOH). IR cm"1: 3430, 1614, 1522, 1502. UV h nm: 227 (sh), 280. H·NMR (DMSO-rf6) J: 3,74, 3,80 (3H vardera, s, OCH3), 5,45 (1H, d,丿=6Hz, Ha), 6,17 (1H, dt,丿=16, 7Hz, H-#), 6,58 (1H, d〃= 16Hz; H-az) 6,7-7,1 (5H, m, aromatisk H). 13C-NMR: Tabell I.

Dehydrodiconiferylalkohol 4-Oj8-D-Glukopyranosid (III)

Amorft pulver, [a]^5 -56.4.(c= 1.1, MeOH). IR cm-1: 3400, 1604, 1566, 1502. UV 11 nm; 222, 277. XH-NMR (DMSO-(76) 6: 3,76, 3,82 (3H vardera, s, OCH3), 5,52 (IH, d, J-7 Hz, Ha), 6,18 (IH, dt, J=16, 7 Hz, H-^), 6,49 (IH, d,<7=16 hz,="" h-"),="" 6.7—7.2="" (5h,="" m,="" aromatic="" h).="" 13c-nmr:="" table="">

Syringalid A 3'-(xL-Rhamnopyranoside (IV)

Amorft pulver, Anal. Beräknat för C29H36O14 • 5/2H2O: C, 56,11; H, 5,94. Funnet: C, 56,4{{107}}; H, 6,04. IR cm— procent 3400, 1606, 1518. 】H・NMR (MeOH-J4) d: 1,15 (3H, d, J-6 Hz, CH3 av ramnos), 2,90 (2H, t, J{{27) }} Hz, Ar-CH2-), 4,46 (IH, d, J=8Hz, Hl av glukos), 5,27 (IH, brs, Hl av ramnos), 6,35 (1H, d, J-16Hz, Ar—CH=CH—), 6,6—7,3 (3H, aromatisk H), 7,68 (1H, d, J=16Hz, Ar-CH {{54 }} CH-). 13C-NMR (CD3OD) 8: 130,6 (Cl), 116,1 (C-2), 130,8 (C-3, 156,6 (C-4), 116,1 (C-6 ), 72,1 (Ca, rham-2, 3), 36,2 (C-8), 127,6 (Cr), 114,6 (C2), 149,6 (C・3'), 146,6 (C{{94) }}'),116,4 (C-5'), 123,1 (C-6'),168,2 (C・a'),115,2 (C书),147.0 104.0 (glu-1), 76,0

(glu-2), 81,5(glu-3), 70,3 (glu-4), 75,9 (glu-5), 62,3 (glu-6), 102,8 (rham-1), 73,7 (rham-4), 70,5 (rham-5), 18,3 (rham-6).

Isosyringalid S^aL-Rhamnopyranosid (V)

Amorft pulver, Anal. Beräknat för C29H36O14-1/2H2O: C, 56,31; H, 5,96. Hittades; C, 56,4{{70}}; H, 6,04. IR 唸cm-1: 3420, 1608, 1518. XH-NMR (MeOH-J4) d: 1,09 (3H, d,丿=6Hz, CH3 av ramnos), 2,80 (2H, t, J-6 Hz, Ar-CH2-), 4,40 (1H, d, J=8Hz, Hl av glukos), 5,23 (1H, br s, Hl för ramnos), 6,37 (1H, d, J-18Hz, AsCH=C旦'一),6,6–7,2 (3H, aromatisk H), 7,71 (1H, d, 丿=18Hz, Ar -CH=CH-y 13C-NMR (CD3OD) S: 131,4 (Cl), 116,3 (C-2), 144,5 (C-3X 146,0 (C-4 ), 117,0 (C-5), 121,2 (C-6), 72,2 (Ca), 36,5 (C/), 127,1 (Cr), 116,8 (C-2\ 69, 131,2 (C-3\ 5'),161,2 (C-4'),168,2 (CH), 114,7 (C-^), 147,5 (Cy), 104,1 (glu-1), 76,1 (glu-2), 81,5 (glu-3),

70,2 (glu-4), 75,9 (glu-5), 62,3 (glu-6), 102,8 (rham-1), 72,1 (rham-2, 3 ), 73,7 (rham-4), 70,6 (rham-5), 18,4 (rham-6).

( plus )-Syringaresinol Oj?-D-Glukopyranosid (VI)

Amorft pulver, [a]g5 —14,4.(c=0.1, MeOH). Anal. Beräknat för C28H36O13: C, 57,93; H, 6,25. Funnet: C, 58,01; H, 6,26. IRv^cm-1: 3430, 1600, 1518. ·H·NMR (DMSO"6): 3,78 (12H, s-OCH3 x 4), 6,60, 6,66 (2H vardera, s, aromatiskt H).

(plus)-Pinoresinol O-^-D-Glukopyranosid (VII)

Amorft pulver, [a]^5 plus 38,9 grader (c=0.6, MeOH). Anal. Beräknat för C26H32O11T/2H2O: C, 58,97; H, 6,28. Funnet: 58,94; H, 6,29. IR cm-1: 3425, 1606, 1516. 】H-NMR (C5D5N) W 3,77, 3,80 (3H vardera, s, OCH3), 6,9-7,7 (6H, m, aromatiskt H).

Liriodendron (VIII)

Färglösa nålar (MeOH), smp. 255×257 grader, [a]p5 -9.2 grader (c=L3, pyridin). IR cm-1: 3400, 1598, 1510. XH-NMR (DMSO/6)<5: 3.78="" (12h,="" s,="" och3x4),="" 6.67="" (4h,="" s,="" aromatic="">

6-Deoxycatalpol (IX)

Färglösa nålar (MeOH), smp. 204–206 grader, [a]p5 -50.1 grad (c=0.7, MeOH). Anal, Beräknat för C15H22O9: C, 52,02; H, 6,40. Funnet: C, 52,12; H, 6,41. IR 唸cm-1: 3400, 1658. 】H・NMR (D2O) 3:

l. 3–1,9 (1H, m, H-6), 2,1–2,7 (3H, m, H-5, H-6, H-9), 3,65 (1H, s-liknande, H-7), 3,90, 4,35 (2H, ABsystem, J=13Hz, H-10), 4,92 (1H, d, J=7 Hz, aromerisk H), 5,10 (1H, dd, J=6, 4Hz, H-4), 5,12 (1H, d, J-10Hz, Hl), 6,38 (1H, dd, 1Hz, H-3).

{{0}}Epilogansyra (X) Färglösa nålar (MeOH), mp 147一149 grader, [a]p5 — 135.0 grad (c= 1.0, pyridin ). Anal. Beräknat för C16H24O10 H2O: C, 48,73; H, 6,65. Funnet: C, 48,60; H, 6,70. IR v;cm-1: 3400, 1680, 1640, 1430. 】H・NMR (C5D5N)<5: 1.18="" (3h,="" d,="" j="7Hz," ch3),="" 2.2—2.5="">

m, H-6), 2,60 (1H, m, H-8), 3,08 (1H, dt, J=3, 8,5Hz, H-9), 3,58 ( 1H, m, H-5), 5,40 (1H, d, J=7,5Hz, anomert H), 5,91 (1H, d〃=3Hz, Hl), 7,92 (1H) , s, H-3).

20-Hydroxyecdyson (XI)

Kristallint fast ämne, smp 241×242 grader, [a]p5 plus 70.0 grader (c= LI, MeOH). Anal. Beräknat för C27H44O7: C, 67,47; H, 9,23. Funnet: C, 67,28; H, 9,18. IR cm-1: 3440, 1646. XH-NMR (C5D5N) 1,06 (3H, s, H-19), 1,20 (3H, s, H-18), 1,36 (6H, s, H-26, H-27)? 1,58 (3H, s, H-21), 6,24 (lH,d, J=2Hz, H-7). 13C-NMR (C5D5N): 38,0 (Cl),

68,2 (C-2, C-3), 32,5 (C・4), 51,5 (C-5), 203,7 (C-6), 121,8 (C-7), 166,3 (C-8), 34,6 (C-9), 38,8 (C-10), 21,3 (C-ll), 31,9 (C {{30}}), 48,2 (C-13), 84,4 (C-14), 32,1 (C-15), 21,6 (C-16 ), 50,2 (C-17), 18,0 (C-18), 24,6 (C-19), 77,0 (C-20), 21,8 (C-21 ), 77,7 (C-22), 27,6 (C-23), 42,7 (C-24), 69,8 (C-25), 30,1 (C-26 27).

8-Hydroxygeraniol 1-^-D-GIucopyranosid (XII)

Färglösa nålar (MeOH), smp. 58—60 grader, [a]^5 —40,1.(c=L2, MeOH). Anal. Beräknat för C16H28O71/2H2O: C, 56,29; H, 8,56. Funnet: C, 56,40; H, 8,50. IR cm"1: 3350, 1670, 1446. XH-NMR (C5D5N)<5: 1.72,="" 1.59="" (3h="" each,="" s,="" ch3),="" 2.04="" (4h,="" brm,="" h-4,="" h-5),="" 4.80="" (1h,="" d,="" j="7.5Hz," anomeric="" h),="" 5.56="" (2h,="" brt,="" j="7Hz,">

Syringin (XIII)

Färglösa nålar (MeOH), smp 188×189 grader, [a]^5 — 15,3 grader (c=0.4, MeOH). Anal. Beräknat för C17H24O9: C, 55,13; H, 6,53. Funnet: C, 54,83; H, 6,50. IR cm-1: 3400, 1592, 1514. 'H-NMR (DMSO/6)W 3,78 (6H, s, OCH3 x 2), 6,3—6,5 (2H, m, —CH=CH-), 6,72 (2H, s, aromatisk H).

Acetylering av I Förening I (50 mg) löstes i pyridin (1 ml) och ättiksyraanhydrid (1 ml) och lämnades vid rumstemperatur över natten. Reaktionsblandningen hälldes i isvatten och extraherades sedan med EtOAc. EtOAc-extraktet koncentrerades i vakuum och återstoden kromatograferades på en silikagelkolonn med användning av bensen-aceton (5:1) för att ge oktaacetatet (la) (35 mg). IR cm"1: 1760, 1638, 1604, 1508. iH-NMR(CDC13)(5: 1,02 (3H, d, J=6Hz, CH3 av ramnos), 1,87, 1,95, 2,02 (3H vardera, s, OAc), 2,10 (6H, s, OAc x 2), 2,27, 2,28, 2,31 (3H vardera, s, Ar-OAc), 2,90 (2H, t, J=7Hz, Ar-CH{ {43}}), 6,38 (1H, d, J=16Hz, AR~CH=CH-), 6,80—7,15 (3H, m, aromatisk H), 7,24 (2H, d, J-9 Hz, H-3\ H・5'), 7,55 (2H, d,丿=9Hz, H-2, H-6), 7,72 (IH, d, J=16Hz, Ar-CH=CH-).

Acetylering av II och III

Föreningarna II och III (20 mg vardera) acetylerades på samma sätt som beskrivits för förening I och gav hexaacetaterna [Ila (12 mg), Illa (15 mg)]. Ila: IR 唸顋 cm-1: 1754, 1608, 1506. 】H・NMR (CDC13) 5: 2,01, 2,03, 2,09 (3H vardera, s, OAc), 2,06 (6H, 2, OAc) ), 2,30 (3H, s, OAc), 3,84 (3,95 (3H vardera, s, OCH3), 5,54 (1H, d, 丿=6Hz, Ha), 6,05 (1H5 dt, J{{38} }, 7Hz, H-^), 6,53 (1H, d, «/= 16Hz, H-a'), 6,8x7,1 (5H, m, aromatisk H). Illa: IR v^cm 1: 1760, 1604, 1516. 】H-NMR (CDC13)<5: 2.05="" (9h,="" s,="" oac="" x="" 3),="" 2.08="" (6h,="" s,="" oac="" x="" 2),="" 2.11="" (3h,="" s,="" oac),="" 3.80,="" 3.92="" (3h="" each,="" s,="" och3),="" 5.51="" (1h,="" d,="" j="7Hz," h-a),="" 6.14="" (1h,="" dt,="" j="16," 7hz,="" h-#),="" 6.62="" (1h,="" d,丿="16Hz,">

(5H, m, aromatiskt H).

Acetylering av IV och V

Föreningarna IV och V acetylerades på samma sätt som beskrivits för förening I och gav oktaacetaterna [IVa, Va]. IVa: IR 唸児 cmT: 1754, 1636, 1514. 】H・NMR (CDC,) W 1,03 (3H? d, J=6Hz, CH3 av rhamnos), 1,87, 1,94, 1,99 (vardera) s, OAc), 2,09 (6H, s, OAcx2), 2,28 (6H, s, OAcx2), 2,30 (3H, s, OAc), 2.86 (2H, t, J=6 .6Hz, Ar■-CH?—), 3,67 (2H, t, J=7,2Hz Ar-CH2~CH2-), 6,35 (1H, d, J=16Hz , AsCH=CU—), 6,87—7,35 (3H, m, Ar—7,09 (4H, q, J=8,6Hz, A2/B2/typ), 7,65 (1H, d, J =16Hz, Ar CH=CH ). Va: IR cm-1: 1750, 1636, 1608, 1514. ^-NMR (CDC13) 1,03 (3H, d,<7= 6="" hz,="" ch3="" for="" rhamnose),="" 1.87,="" 1.94,="" 2.02="" (3h="" each,="" s,="" oac),="" 2.09="" (6h,="" s,="" oac="" x="" 2),="" 2.28="" (6h,="" s,="" oac="" x="" 2),="" 2.31="" (3h,="" s,="" oac),="" 2.86="" (2h,="" t,="" j="6.6" hz,="" ar-ch2-),="" 3.73="" (2h,="" t,=""><7=6.6 hz,="" ar="" ch2-ch2-),="" 6.34="" (lh,d,="" j="16" hz,="" ar—ch="" —="" ch—),="" 6.78—7.20="" (3h,="" m,="" ar—h),="" 7.31="" (4h,="" q,=""><7=8.5>

A2zB/typ), 7,71 (1H, d, «/=16Hz, Ar-CH=CH ).

Metanolys av I

Förening I (ca. 1 mg) återloppskokades med metanolisk 5 procent CH3COC1 (2 ml) under 3 0 min, och sedan avdunstades reagenset i vakuum. Närvaron av metyl-p-kumarat och 3,4-dihydroxifenetylalkohol i återstoden detekterades med TLC [CHCl3-MeOH (10:1)] och HPLC [kolonn, Develosil ODS -7 (4,6 x 250 mm); lösningsmedel, 55% MeOH; detektor (UV), 220 nm; flödeshastighet, 1,0 ml/min]. Metyl-p-kumarat; Rf 0,82, ;R (min) 8,8, 3,4-dihydroxifenetylalkohol; ±0,31, tR (min) 3,2.

Syrahydrolys av IA

lösning av förening I (2 mg) i 10 procent H2SO4 (1 ml) upphettades i ett kokande vattenbad under 30 min. Lösningen fick passera genom en Amberlite IR-45-kolonn och koncentrerades för att ge en återstod, som reducerades med natriumborhydrid (ca 3 mg) under 1 timme. Reaktionsblandningen fick passera genom en Amberlite IR-120-kolonn och koncentrerades till torrhet. Borsyra avlägsnades genom destillation med MeOH och återstoden acetylerades med ättiksyraanhydrid (1 droppe) och pyridin (1 droppe) vid 100 grader under 1 timme. Reagensen avdunstades i vakuum. Glucitolacetat och rhamnitolacetat detekterades i ett förhållande av 1 till 1 från förening I genom GC. Skick: kolumn, 1,5 procent OV-17, 3 mm x 1,5 m; kolonntemp., 180 grader; bärargas, N2 (30 ml/min). tR (min): 2,0 (rhamnitolacetat), 5,5 (glucitolacetat).

Enzymatisk hydrolys av II och III förening II

(13 mg) eller III (40 mg) hydrolyserades med cellulas (40 mg) i vatten (1 ml) under 2 timmar vid 37 grader. Reaktionsblandningen extraherades med EtOAc. EtOAc-extraktet koncentrerades i vakuum för att ge återstoden, som kromatograferades på HPLC [kolonn, Develosil ODS-10 (20 x 250 mm); lösningsmedel. II: H2O-CH3CN (77,5:22,5); III: H2O-CH3CN (80:20); detektor (UV), 205 nm; flödeshastighet, 6,0 ml/min] för att ge lib (3,3 mg), Illb (5,7 mg). lib: [a]^5 plus 34,8 grader (c=0.3, MeOH). CD (c=3,3mg/10ml, MeOH) [0]25 (nm): 1740 (330), 15200 (283), 14100 (270), 0 (247), - 16700 (232 ). IR 唸E; cm"1: 3380, 1606, 1520, 1500. UV nm: 276. MS m/z (procent): 358 (M plus, 53), 340 (M plus -H2O, 100), 338 (58), 325 ( 47), 310 (23), 162 (41), 151 (36), 137 (59). XH-NMR (aceton-J6)<5: 3.55="" (1h,="" brt,=""><7=6hz, h-g),="" 3.84,="" 3.87="" (3h="" each,="" s,="" och3),="" 4.19="" (2h,="" brd,="" j-5hz,="" h-yz),="" 5.56="" (1h,="" d,="" j="6," 5="" hz,="" h-a),="" 6.23="" (1h,="" dt,=""><7=16, 5="" hz,="" h-#),="" 6.56="" (1h,="" brd,="" j="16Hz," hh),="" 6.7—7.1="" (5h,="" m,="" aromatich).="" 13c-nmr:="" tablel.iiib:="" [a]-31.6°="" (c="0.6," meoh).="" cd="" (c="2.28mg/lOml," meoh)="" [0]25="" (nm):="" 2200="" (330),="" 0="" (310),="" -10990="" (283),="" -11300="" (270),="" 0="" (242),="" 5650="" (232).="" 0-nmr="" (acetone-j6)=""><5: 3.84,="" 3.87="" (3h="" each,="" s,="" och3="" x="" 2),="" 4.19="" (2h;="" brd,="" j="5Hz," h"'),5.56="" (1h,="" d,丿="6.5" hz,="" h-a),="" 6.23="" (1h,="" dt,丿="16," 5="" hz,="" h・#),="" 6.52="" (1h,="" d,="" j="16" hz,="" h-az),="" 6.7一7.1="" (5h,="" m,="" aromatic="" h).="" 13c-nmr:="" table="" i.="" the="" ir="" and="" uv="" spectra="" were="" similar="" with="" that="" of="">

BekräftelseVi är tacksamma mot Prof. A. Ueno och Dr. T. Miyase, University of Shizuoka, för mätningarna av NMR- och CD-spektra, och för deras värdefulla förslag, och till Dr. M. Kikuchi, Tohoku College of Pharmacy, för att de tillhandahållit autentiska prover.

Referenser och anteckningar

1) H. Kobayashi, H. Oguchi, N. Takizawa, T. Miyase, A. Ueno, K. Usmanghani och M. Ahmad, Chem. Pharm. Bull., 35,3309 (1987).

2) a) H. Kobayashi och J. Komatsu, Yakugaku Zasshi, 103, 508 (1983); b) H. Kobayashi, H. Karasawa, T. Miyase och S. Fukushima, Chem. Pharm, Bull., 33, 1452 (1985); c) Idem, ibid., 33, 3645 (1985); d) H. Karasawa, H. Kobayashi, N. Takizawa, T. Miyase och S. Fukushima, Yakugaku Zasshi. 106, 721 (1986).

3) HD Ludemann och H. Nimz, Die Makromolekulare Chemie., 175, 2393 (1974).

4) a) H. Achenbach, J. Grob, XA Dominguez, G. Cano, JV Star, LC Brussolo, G. Munoz, F. Salgado och L. Lopez, Phytochemistry. 26, 1159 (1987); b) AN Binns, RN Chen, HN Wood och DG Lynn, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 980 (1987); c) DG Lynn, RH Chen, KS Manning och HN Wood, ibid., 84, 615 (1987).

5) T. Deyama, T. Ikawa, S. Kitagawa och S. Nishibe, Chem. Pharm. Bull., 35, 1803 (1987).

6) M. Kikuchi, Y. Yamauchi och F. Tanabe, Yakugaku Zasshi, 107, 350 (1987).

7) M. Chiba, S. Hisada, S. Nishibe och H. Thieme, Phytochemistry, 19, 335 (1980).

8) a) H. Hikino, Y. Hikino, Fortschritted. Chem. Org. Naturst., 28, 256 (1970); b) RW Miller, J. Clardy, J. Kozlowski, KL Mikolajczak, RD Plattner, RG Powell, CR Smith, D. Weisleder och Q.-T. Zheng, Planta Medica, 1985, 40.