Effekt av cistanches Herba vattenhaltigt extrakt på benförlust hos ovarieektomerad råtta

Kontakt: Audrey Huaudrey.hu@wecistanche.com

Haidong Liang 1,*, Fang Yu 2, Zhihong Tong 1 och Zaiguo Huang 3

1 Hands and feet microsurgery, Dalian Municipal Central Hospital, Dalian 116033, China; E-Mail: tongzhih37@sina.cn

2 School of Medicine, Dalian University, Dalian 116033, China; E-Mail: yufangk7@sina.cn

3 Orthopedics Department, Dalian Municipal Central Hospital, Dalian 116033, China; E-Mail: huangzg41@sina.com

Abstrakt:För att bedöma förmågan hos Cistanches Herba-extrakt (CHE) från traditionell kinesisk medicin att förhindra benförlust i den ovarieektomerade (OVX) råttan, administrerades Cistanches Herba-extrakt (CHE) intragastriskt till råttorna. Honråttor bedövades med pentobarbitalnatrium (40 mg kg-1, ip), och deras äggstockar avlägsnades bilateralt. Råttorna i den skenopererade gruppen bedövades, laparotomierades och suturerades utan att ta bort deras äggstockar. Efter 1 veckas återhämtning från operationen delades OVX-råttorna slumpmässigt in i tre grupper och behandlades oralt med H2O (OVX-grupp) eller CHE (100 eller 200 mg kg-1 dagligen) i 3 månader. Den skenopererade gruppen (n=8) behandlades oralt med H2O. Efter 3 månader undersöktes den totala kroppens benmineraldensitet (BMD), benmineralinnehåll (BMC), benbiomekaniska index, blodmineralnivåer och antioxidantenzymer i blodet hos skenopererade, ovarieektomerade och Cistanches Herba-extraktbehandlade råttor. Resultaten visade att Cistanches Herba-extraktbehandling signifikant dosberoende ökade benmineraldensitet (BMD), benmineralhalt (BMC), maximal belastning, förskjutning vid maximal belastning, stress vid maximal belastning, belastning vid autopaus, förskjutning vid autopaus , och stress vid autopaus, och aktivitet av antioxidantenzymer i blodet, minskade Ca-, Zn- och Cu-nivåerna i blodet jämfört med OVX-gruppen. Detta experiment visar att administrering av Cistanches Herba-extrakt till ovariektomierade råttor motverkar benförlust och förhindrar osteoporos.

Nyckelord:ovariektomi; råtta; ben; antioxidant; Cistanches Herba

Cistanches Herba

1. Introduktion

Osteoporos är en åldrandesjukdom associerad med benförlust som ofta inträffar utan symtom tills mikroarkitektonisk försämring blir så betydande att benfraktur alltid inträffar vid den punkt där en minskning av benmassan är under vad som krävs för benintegritet. Osteoporos är av stor betydelse inom vården. Även om benen minskat i massa är benen normala med avseende på mineralisering, men histologiskt sker en minskning av tjockleken på cortex och antalet och storleken av trabeculae i det grova spongiösa benet [1–3].

Många studier av denna sjukdom har genomförts de senaste åren. Ackumulerande data har indikerat att förlusten av östrogen vid klimakteriet är en stor bidragande orsak till sjukdomens patogenes eftersom detta hormon är en huvudsaklig negativ regulator av osteoklastaktivitet [4–6], och osteoklaster är de huvudsakliga cellerna som är ansvariga för benremodellering vid osteoporos [7].

Postmenopausal osteoporos är den vanligaste metaboliska bensjukdomen, den kännetecknas av en snabb förlust av mineraliserad benvävnad, störning av benets trabekulära arkitektur och förändringar i de kristallina egenskaperna hos mineralavlagringar, vilket resulterar i strukturfel (fraktur) av platser rika på spongiöst ben, såsom kotorna, höften och distala underarmen [8–11]. Östrogenbrist anses vara den viktigaste avgörande faktorn för benförlust hos postmenopausala kvinnor. Ovariektomerade råttor och hundar har använts i stor utsträckning i osteoporosmodeller. År 1996 rapporterades effekterna av ibandronat på ovariektomierade hundar [12].

Cistanches Herba (CH), holoparasitisk växt av Cistanche deserticola YC Ma, klassificeras som ett tonifierande medel i orientalisk traditionell medicin och används ofta för att behandla glömska, hörselnedsättning, infertilitet och kronisk förstoppning. CH har olika farmakologiska aktiviteter, inklusive antinociceptiva, antiinflammatoriska och immunförstärkande effekter [13,14]. En tidigare studie har rapporterat att Cistanches Herba kan styra benmesenkymala stamceller (BMSC) att differentiera till osteoblaster, vilket lovar en gynnsam utsikt för behandling av osteoporos och benfrakturupplösning [15]. Chen et al. [16] rapporterade att Cistanches Herba-polysackarider kan främja benmärgscellcykelövergången och återhämtningen av hematopoetisk funktion hos benmärgsdeprimerade anemiska möss, påskynda hematogenesen i rubrumstam och makronukleusstam.

I denna studie undersöktes benmineraldensitet (BMD), benmineralinnehåll (BMC), benbiomekaniskt index, blodmineralnivåer och antioxidantenzymer i blodet hos skenopererade, ovariektomerade och Cistanches Herba-behandlade råttor för att studera effekterna av behandling med Cistanches Herba-extrakt på benkvalitet.

Traditionell kinesisk medicin Cistanches Herba-extrakt (CHE)

2. Material och metoder

2.1. Beredning av Cistanches Herba vattenextrakt

Cistanches Herba samlades in från öknen i alxa-ligan i den autonoma regionen Nei Monggol (Inre Mongoliet) 2010.

Den torkade stjälken av Cistanches Herba extraherades med destillerat vatten vid 100 grader i 2 timmar. Lösningen centrifugerades vid 4000 r/min under 10 min. Återstoder avlägsnades genom filtrering och det kombinerade filtratet indunstades genom upphettning för att erhålla en önskad koncentration (2,1 g torrt växtekvivalentextrakt/ml). Utbytet av extraktion var 13,7 % (vikt/vikt). Det vattenhaltiga extraktet förvarades vid 2–8 grader.

2.2. Djur

Trettiotvå Wistar-honråttor på 3 månader gamla, som vägde mellan 240 och 270 g i början av experimentet, användes för studien. De hölls under standardlaboratorieförhållanden med 12 timmars ljus och mörk cykel, med fri tillgång till standard laboratorieråttfoder och kranvatten.

2.3. Djurförsök.

Honråttor bedövades med pentobarbitalnatrium (40 mg kg-1, ip), och deras äggstockar avlägsnades bilateralt. Råttorna i den skenopererade gruppen bedövades, laparotomierades och suturerades utan att ta bort deras äggstockar. Efter 1 veckas återhämtning från operationen delades OVX-råttorna slumpmässigt in i tre grupper (n=8 i varje grupp) och behandlades intragastriskt med H2O (OVX-grupp), Cistanches Herba-extrakt (CHE) (100 eller 200 mg kg) −1 dagligen) i 3 månader. Den skenopererade gruppen (n=8) behandlades oralt med H2O.

På den sista dagen av studien vägdes och avlivades djuren och blodprover samlades samtidigt. Lårbenen dissekerades och avlägsnades från mjuk vävnad för mätning av biomekanisk testning.

Alla experiment utfördes i enlighet med forskningsprotokoll som fastställts av djurvårdskommittén i Kina.

2.4. Bendensitometri

Femoral benmineralinnehåll (BMC) och benmineraldensitet (BMD) bestämdes med hjälp av en Hologic QDR{{0}}W DXA. Instrumentet var anpassat för ett ultrahögupplöst läge med radavstånd på 0.0254 cm, upplösning på 0,0127 cm och kollimator på 0,9 cm i diameter. Benen placerades i en petriskål. För att simulera mjukvävnadstäthet som omger benen hälldes kranvatten runt benen för att uppnå ett djup på 1 cm. Resultat ges för BMC och för det uppmätta området. BMD för detta område beräknas som BMC dividerat med area. Förutom resultat för det totala lårbenet analyserades den distala och mitten av lårbenet som subregioner [17].

2.5. Benbiomekanisk testning

Lårbensbenen hölls vid 4 grader tills brottstyrkan bestämdes med en 5-kN Flexure Fixture, konfigurerad för trepunktsböjningstest och fäst till en Instron Universal Testing Machine Model 4502 utrustad med en 10- kN lastcell (Instron, Canton, MA, USA), som tidigare beskrivits [18]. Tvärhuvudets hastighet var 50 mm/min och datasamplingshastigheten var 10 prover/s. Maximal belastning, belastning vid maximal belastning, belastning vid brott och belastning vid brott bestämdes i lårbenen med hjälp av Series IX, v 8.08.00 programvara (Instron).

2.6. Biokemisk analys

Ca-, Zn- och Cu-nivåer i blodet mättes med atomabsorptionsspektrofotometri.

Baserat på metoden enligt King och Armstrong [19] analyserades aktiviteten av alkaliskt fosfatas (ALP) med användning av dinatriumfenylfosfat som substrat. Den framkallade färgen avlästes vid 510 nm i en UV-vis spektrofotometer efter 10 min. Aktiviteter av ALP uttrycktes som IU/L.

Koncentrationen av malondialchehyche (MDA) i blodet bestämdes med användning av metoden som beskrivs av Jain et al. [20], baserat på TBA-reaktivitet. Kortfattat, 0,2 mL erytrocytpellets eller supernatant erhållen från vävnader, 0,8 mL fosfatbuffert (pH 7,4), 0.025 mL BHT och { {19}}.5 ml 30 procent TCA sattes till rören och blandades. Efter 2 timmars inkubation vid -20 grader centrifugerades blandningen (4000 x g) i 15 min. Efter detta togs 1 mL supernatant och sattes till varje rör, och sedan 0,075 mL 0,1 M EDTA och

0.25 ml 1 procent TBA tillsattes. Dessa rör med teflonfodrade skruvlock inkuberades vid 90 grader i ett vattenbad under 15 minuter och kyldes till rumstemperatur. Den optiska densiteten mättes till 532 för MDA-koncentration i blodet.

Aktiviteten av glutationperoxidas (GSH-Px) bestämdes enligt metoden av Lawrence och Burk [21]. Analysblandningen bestod av 2,0 mL 75 mM fosfatbuffert (pH 7.0), 50 μL 60 mM glutation, {{15} },1 mL 30 enheter/ml glutationreduktas, 0,1 mL 15 mM EDTA, 0,1 mL 3 mM NADPH och lämplig mängd vävnadssupernatant till en slutlig volym av 3,0 mL . Reaktionen startade genom tillsats av 0,1 ml 7,5 mM H2O2. Hastigheten för förändring av absorbans under omvandlingen av NADPH till NADP plus registrerades spektrofotometriskt vid 340 nm under 3 min. GSH-Px-aktivitet för vävnader uttrycktes som μmol NADPH oxiderad till NADP plus min-1 mg-1 protein.

Aktiviteten av superoxiddismutas (SOD) bestämdes i blodet enligt metoden enligt Sun et al. [22]. Principen för metoden är baserad på hämning av reduktion av nitroblått tetrazolium (NBT) genom att använda xantin-xantinoxidassystemet som superoxidgenerator. Aktiviteten utvärderades i supernatanterna av 10 000 g metanol/kloroform (5/3, v/v) extrakt av vävnadshomogenat (10 procent). En enhet SOD definierades som den enzymmängd som orsakade 50 procents hämning av NBT-reduktionshastigheten.

Katalasaktiviteten (CAT) mättes med användning av Abeis [23] metod. Serum sattes till en kyvett innehållande 2,89 ml av en 50 mmol/L fosfatbuffert (pH 7,0). Reaktionen initierades genom att tillsätta 0,1 mL nyberedd 30 mmol/L H2O2 för att få en slutlig volym på 3,0 mL vid 25 grader. Nedbrytningshastigheten för H2O2 mättes vid 240 nm under 5 minuter på en spektrofotometer. En enhet (U) CAT definierades som mängden enzym som krävs för att sönderdela 1 nmol H2O2 per min, vid 25 grader och pH 7,8.

2.7. Statistisk analys

De experimentella resultaten uttrycktes som medelvärde ± SD för åtta djur i varje grupp. De biokemiska parametrarna analyserades statistiskt med användning av en envägsanalys av varians ANOVA, följt av Dunnetts multipla jämförelsetest (DMCT). P-värde av<0.05 was="" considered="" statistically="">

3. Resultat

Två djur förföll under studiens gång. Följaktligen var siffrorna för grupperna vid studiens slut: 8 i skenkontrollen; 7 i OVX-gruppen; 7 i CHE-behandlingsgruppen (100 mg kg−1 dagligen), och 8 i CHE-behandlingsgruppen (200 mg kg−1 dagligen). Två dagar efter operationen var råttornas mat- och vattenintag något lägre än före operationen. Inget djur led av infektion och anabios. Inga kliniskt uppenbara biverkningar observerades hos råttor.

Före operationen fanns det ingen signifikant (p > {{0}}.01) skillnad i råttors kroppsvikt mellan grupperna. Kroppsvikten för OVX-gruppen var signifikant (p < 0.01)="" lägre="" än="" den="" för="" skengruppen="" (tabell="" 1).="" administrering="" av="" cistanches="" herba-extrakt="" i="" en="" dos="" av="" 100="" och="" 200="" mg/kg="" dagligen="" ökade="" signifikant="" (p="">< 0,05)="" råttors="" kroppsvikt="" i="" den="" che-behandlade="" gruppen="" (100="" och="" 200="" mg/kg="" dagligen).="" data="" erhållna="" från="" djur="" visade="" att="" det="" fanns="" statistiskt="" signifikanta="" skillnader="" mellan="" bmd="" och="" bmc="" för="" ovx-gruppen="" och="" för="" skenkontroll="" (p="">< 0,01).="" som="" förväntat="" ledde="" administrering="" av="" cistanches="" herba-extrakt="" i="" en="" dos="" på="" 200="" mg/kg="" till="" en="" signifikant="" ökning="" av="" bmd="" och="" bmc="" för="" den="" che-behandlade="" gruppen="" (p="">< 0,05;="" p=""><>

4. Diskussion

Osteoporos är en av de vanligaste sjukdomarna i samband med östrogenbrist och åldrande. Klimakteriet resulterar i förhöjd benomsättning, en obalans mellan benbildning och benresorption och nettobenförlust. Benförlust orsakad av östrogenbrist beror främst på en ökning av osteoklastisk benresorption hos både människor och försöksdjur [24].

Även om osteoporos drabbar både äldre män och kvinnor, har postmenopausala kvinnor varit det primära fokus för osteoporos [25,26]. En dramatisk brist på kvinnliga hormoner är den viktigaste faktorn för postmenopausala kvinnors osteoporos. OVX-råttmodellen används oftast i forskning om postmenopausal osteoporos [27,28], där ovariektomi resulterar i ett överskott av benresorption jämfört med benbildning initialt och orsakar benförlust. OVX-operation orsakar en betydande kroppsviktsökning som kan vara en vägledning för att utvärdera operationens framgång [29]. I slutet av denna studie var OVX-gruppens kroppsvikter markant reducerade jämfört med skengruppens och behandling med Cistanches Herba-extrakt förhindrade dessa minskningar helt. Vi antar att OVX orsakade allvarliga fysiologiska obehag som påverkade råttornas födointag. Därefter minskade OVX-gruppens kroppsvikt markant.

Benmineraldensitet har beskrivits som endast ett surrogatmått på benstyrka [30]; mikroarkitektoniska egenskaper är emellertid en nybildad markör för utvärdering av behandlingens verkliga inverkan på kvaliteten på trabekulärt ben. Även om låg benmassa är en viktig riskfaktor för fraktur [31], bidrar bevarandet av trabekulär benarkitektur avsevärt till benstyrkan och kan minska frakturrisken utöver BMD och BMC, vilket påvisats av ett antal studier som har rapporterat nära samband mellan mikrostrukturella egenskaper och benens biomekaniska styrka [32,33]. I detta arbete visade sig BMD och BMC vara signifikant olika mellan sken- och ovariektomigrupperna. Behandling med Cistanches Herba-extrakt förbättrade signifikant BMD och BMC hos OVX-råttor. Dessutom ökade administrering av Cistanches Herba-extrakt avsevärt dosberoende maximal belastning, förskjutning vid maximal belastning, stress vid maximal belastning, belastning vid automatisk avbrott, förskjutning vid automatisk avbrott och stress vid automatisk inkörning CHE-behandlade grupper jämfört med OVX-gruppen. Dessa resultat indikerade att lårbensben från råttor som matades med Cistanches Herba-extrakt hade högre belastning vid brott och därmed kunde vara mer motståndskraftiga mot stressfrakturer. Dessutom hade råttor i OVX-gruppen högre Ca-, Zn- och Cu-nivåer i blodet än de i skengruppen. Administrering av Cistanches Herba-extrakt hade minskade Ca-, Zn- och Cu-nivåer i blodet hos OVX-råttor.

Uppfattningen att oxidativ status är viktig vid osteoporos stämmer överens med det starka epidemiologiska sambandet mellan osteoporos och åderförkalkning, en sjukdom där oxidant stress spelar en stor roll. Dessutom har det nyligen observerats att det finns ett samband hos kvinnor mellan oxidant stress (mätt med en biomarkör för oxidativ stress, 8-iso-PGF2-) [34], antioxidantnivåer [35] och Bentäthet. Kliniska studier som har undersökt sambandet mellan kost- och/eller tillskott av askorbat och benmassa hos människor tyder också på ett samband med ökad benmassa [36].

Eftersom MDA har hög reaktivitet mot aminogrupper, hämmar det syntesen av nukleinsyror och proteiner och deaktiverar även enzymerna [37,38]. Således kan minskningen av femurantioxidantenzymer som observeras efter OVX bero på förhöjd lipidperoxidation. Antioxidantenzymer är involverade i försvarssystemet mot fria radikaler-medierade vävnader eller cellskador. De metaboliserar antingen fria radikaler eller reaktiva syremellanprodukter till icke-radikalprodukter. Dessa enzymer inkluderar en familj av glutationberoende enzymer [39]. I denna studie rapporterar vi en signifikant minskning av nivåerna av antioxidantenzymer, dvs. SOD, GSH-Px, CAT i blodet från ovarieektomerade råttor. Dessa fynd tyder på att brist på äggstockshormoner korrelerar med misslyckande med att bekämpa oxidativ stress. Administrering av Cistanches Herba-extrakt förbättrade signifikant dosberoende blod-SOD, GSH-Px och CAT-aktiviteter hos OVX-råttor. Dessa resultat verkar indikera en bättre skyddande effekt av Cistanches Herba-extrakt mot oxidativ stress inducerad under OVX.

Sammanfattningsvis är Cistanches Herba-extrakt effektivt för att förhindra benförlust orsakad av hormonbrist i äggstockarna, sett från lårbenets BMD, BMC-värden och blod Ca, Zn och Cu-nivåer. Eftersom osteoporos är förknippat med oxidativ stress, vittnar studier av detta slag om vikten av antioxidanters terapeutiska värden. Vi antar att Cistanches Herba-extrakt förbättrar benkvaliteten möjligen delvis genom att förbättra OVX-råttors antioxidantenzymaktiviteter och minska benmineralelementen.

Cistanches Herba-extrakt: förhindrar benförlust

Referenser

1. Canalis, E.; Giustina, A.; Bilezikian, JP Mekanismer för anabola terapier för osteoporos. N. Engl. J. Med. 2007, 357, 905–916.

2. Heaney, RP; Recker, RR; Saville, PD Menopausala förändringar i benombyggnad. J. Lab. Clin. Med. 1978, 92, 964–970.

3. McNamara, LM; Ederveen, AGH; Lyons, CG; Pris, C.; Schaffer, MB; Weinans, H.; Prendergast, PJ Styrka hos spongiös bentrabekulär vävnad från normala, ovariektomerade och läkemedelsbehandlade råttor under åldrandet. Bone 2006, 39, 392–400.

4. Compston, JE Hormonersättningsterapi. Clin. Reumatol. 1997, 11, 583–596.

5. Meiner, SE Ett växande landskap osteoporos: Behandlingsalternativ idag. Adv. Nurse Pract.1999, 7, 26–31.

6. Aubin, JE; Bonnelye, E. Osteoprotegerin och dess ligand: Ett nytt paradigm för reglering av osteoklastogenes och benresorption. Osteoporos. Int. 2000, 11, 905–913.

7. Roodman, GD Framsteg inom benbiologi: Osteoklasten. Endocr. Rev. 1996, 17, 308–332.

8. Kastanj, CH, III. Läkemedelsbehandling: Kalcitonin, bisfosfonater och anabola steroider. Inom osteoporos: Etiologi, diagnos och hantering; Riggs, BL, Melton, LJ, III, Eds.; Lippincott-Raven: Philadelphia, PA, USA, 1995.

9. Quan, Q.-M.; Wu, W.; Li, Y.-X.; Cai, Q.-R. Variation i icariin- och flavonoidinnehåll hos Barrenwort-arter. J. Med. Plants Res. 2010, 4, 1176–1181.

10. Du, XG; Pan, HZ; Zhang, CY; Zhang, HY; Liu, HM; Chen, ZY; Zeng, XY Zingiber officinale-extrakt modulerar g-strålningsinducerad immunsuppression hos möss. J. Med. Plants Res. 2010, 4, 1647–1655.

11. Paschalis, EP; Betts, F.; DiCarlo, E.; Mendelsohn, R.; Boskey, AL FTIR mikrospektroskopisk analys av humana höftbenskammen biopsier från det obehandlade osteoporotiska benet. Calcif. Tissue Int. 1997, 61, 487-492.

12. Motoie, H.; Kanoh, H.; Ogata, S.; Kawamuki, K.; Shikama, H.; Fujikura, T. Förebyggande av benförlust av bisfosfonat YM175 hos ovariektomierade hundar med kalciumrestriktion i kosten. Jpn. J. Pharmacol. 1996, 71, 239-246.

13. Lin, LW; Hsieh, MT; Tsai, FH; Wang, WH; Wu, CR Antinociceptiv och antiinflammatorisk aktivitet orsakad av Cistanche deserticola hos gnagare. J. Etnopharmacol. 2002, 83, 177–182.

14. Wu, XM; Gao, XM; Tsim, KW; Tu, PF En arabinogalaktan isolerad från stjälkarna av Cistanche deserticola inducerar spridningen av odlade lymfocyter. Int. J. Biol. Macromol. 2005, 37, 278–282.

15. Zeng, JC; Fläkt, YG; Liu, JR; Zeng YR; Yi, CZ; Liang Y. Experimentell studie av riktad differentiering av benmesenkymala stamceller (BMSC) till osteoblaster styrd av seruminnehållande cistanche deserticola. Zhongguo Gu Shang 2010, 23, 606–608.

16. Chen, Z.-W.; Zhu, B.-D.; Xu H.-Y. Experimentstudie av ökenlevande cistanche-polysackarider på reglerad hematogenes i benmärgsdeprimerade anemimöss. Haka. Båge. Tradit. Haka. Med. 2007, 25, 1473–1474.

17. Prakasam, G.; Ja, JK; Chen, M.-M.; Castro-Magana, M.; Liang, CT; Aloia, JF Effekter av tillväxthormon och testosteron på kortikal benbildning och bentäthet hos åldrade ovariektomiserade råttor. Bone 1999, 24, 491–497.

18. McClung, JP; Stahl, CH; Marchitelli, LJ; Morales-Martinez, N.; Makin, KM; Young, AJ; Scrimgeour, AG Effekter av dietfytas på kroppsviktsökning, kroppssammansättning och benbiomekanik hos växande råttor som matas med en diet med låg zinkhalt. J. Nutr. Biochem. 2006, 170, 190–196.

19. King, EJ; Armstrong, AR En bekväm metod för att bestämma serum- och gallfosfatasaktivitet. Burk. Med. Assoc. J. 1934, 31, 376–381.

20. Jain, SK; McVie, R.; Duett, J.; Herbst, JJ Erytrocytmembranlipidperoxidation och glykosylerat hemoglobin vid diabetes. Diabetes 1989, 38, 1539–1543.

21. Lawrence, RA; Burk, RF Glutationperoxidasaktivitet i selenbrist på råttlever. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1976, 71, 952–958.

22. Sun, Y.; Oberley, LW; Ying, L. En enkel metod för klinisk analys av superoxiddismutas. Clin. Chem. 1988, 34, 497–500.

23. Abei, H. Catalase in vitro. Metoder Enzymol. 1988, 10, 121-126.

24. Mozaffari, Z.; Azarnia, M.; Abdolhamid Angaji, S. Utvärdering av toxiska effekter av Trigonella foenum-graecum lövvattenextrakt på utvecklingen av lång benvävnad hos råttfostret. J. Med. Plants Res. 2010, 4, 1148–1155.

25. Buencamino, MCA; Sikon, AL; Jain, A.; Thacker, HL En observationsstudie om hur man följer behandlingsriktlinjerna för osteopeni. J. Women's Health 2009, 18, 873–881.

26. Schmitt, MN; Schmitt, J.; Dören, M. Den fysiska aktivitetens roll i förebyggandet av osteoporos hos postmenopausala kvinnor – en uppdatering. Maturitas 2009, 63, 34–38.

27. Lelovas, PP; Xanthos, TT; Thomas, SE; Texter, GP; Dontasi, IA Laboratorieråttan som en djurmodell för osteoporosforskning. Comp. Med. 2008, 58, 424–430.

28. Ncango, DM; Pohl, CH; van Wyk, PWJ; Kock, JLF Icke-steroida antiinflammatoriska läkemedel (NSAID) hämmar tillväxten av jästpatogener. Afr. J. Microbiol. Res. 2011, 5, 1123–1125.

29. Fazliana, M.; Nazaimoon, WMW; Gu, HF; Ostenson, CG Labisia pumila extrakt reglerar kroppsvikt och adipokiner hos ovarieektomerade råttor. Maturitas 2009, 62, 91–97.

30. Bourrin, S.; Ammann, P.; Bonjour, JP; Rizzoli, R. Återhämtning av proximal tibia-benmineraldensitet och styrka, men inte spongiös benarkitektur, efter långvarig bisfosfonat- eller selektiv östrogenreceptormodulatorterapi hos åldrade råttor. Bone 2002, 30, 195–200.

31. Borah, B.; Dufresne, TE; Chmielewski, PA; Gross, GJ; Prenger, MC; Phipps, RJ Risedronat bevarar den trabekulära arkitekturen och ökar benstyrkan i ryggkotan hos ovarieektomerade minigrisar mätt med tredimensionell mikrodatortomografi. J. Bengruvarbetare. Res. 2002, 17, 1139–1147.

32. Müller, R.; Hannan, M.; Smith, SY; Bauss, F. Intermittent ibandronate bevarar benkvalitet och benstyrka i ländryggen efter 16 månaders behandling hos den ovariektomierade cynomolgusapan. J. Bengruvarbetare. Res. 2004, 19, 1787–1796.

33. Lane, NE; Kumer, JL; Majumdar, S.; Khan, M.; Lotz, J.; Stevens, RE; Klein, R.; Phelps, KV Effekterna av syntetiska konjugerade östrogener, a (Cenestin) på trabekulär benstruktur och styrka i den ovariektomiserade råttmodellen. Osteoporos Int. 2002, 13, 816–823.

34. Basu, S.; Michaelsson, K.; Olofsson, H.; Johansson, S.; Melhus, H. Samband mellan oxidativ stress och bentäthet. Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001, 288, 275–279.

35. Maggio, D.; Barabani, M.; Pierandrei, M.; Cristina Polidori, M.; Catani, M.; Mecocci, P.; Senin, U.; Pacifici, R.; Cherubini, A. Markant minskning av plasmaantioxidanter hos äldre osteoporotiska kvinnor: Resultat av en tvärsnittsstudie. J. Clin. Endokrinol. Metab. 2003, 88, 1523–1527.

36. Morton, DJ; Barrett-Connor, EL; Schneider, DL C-vitamintillskott användning och bentäthet hos postmenopausala kvinnor. J. Bengruvarbetare. Res. 2001, 16, 135–140.

37. Bird, RP; Draper, HH Effekt av malonaldehyd och acetaldehyd på odlade däggdjursceller: Tillväxtmorfologi och syntes av makromolekyler. J. Environ. Hälsa 1980, 6, 811–823.

38. Abdelhalim, MAK Den potentiella inverkan av högt kolesterol diet-inducerad oxidativ stress på sammansättningen och egenskaperna hos röda blodkroppar hos kaniner. Afr. J. Microbiol. Res. 2010, 4, 836–843.

39. Chaudiere, J.; Ferrari-Illiou, R. Intracellulära antioxidanter från kemiska till biokemiska mekanismer. Food Chem. Toxicol. 1999, 37, 949-962.