Effekt av Runing II på tillväxten och metastaseringen av transplanterad tumör hos möss som bär bröstcancer och dess mekanism

Mål:

Att studera effekten av Runing II (ett kinesiskt örtpreparat för bröstcancer) på tillväxt och metastasering av transplanterade tumörer av bröstcancer MA-891-bärande TA2-möss och dess mekanism. Metoder: Modellen för bröstcancer MA-891 cellstam transplanterad tumör från TA2-möss med lungmetastas utvecklades för att observera effekten av Runing II på tillväxten och metastasen av den transplanterade tumören. Den immunhistokemiska metoden och bildanalys användes för att detektera nivåerna av vaskulär endoteltillväxtfaktor (VEGF), vaskulär endoteltillväxtfaktorreceptor (VEGFR), antal mikrokärl (MVC) och mikrokärlsarea (MVA).

Resultat: I Running II-gruppen var tumörviktsinhiberingshastigheten och lungmetastasinhiberingshastigheten 37,3 procent respektive 65,4 procent, tumörtillväxten och lungmetastaseringen var uppenbarligen hämmad; Och nivåerna av VEGF och VEGFR, MVC och MVA minskade signifikant jämfört med de i den tumörbärande kontrollgruppen (P<0.05). Conclusion: The Chinese herbal preparation Running II can inhibit the metastasis of tumors by inhibiting angiogenesis, and the mechanism is possibly related to the down-regulation of VEGF and VEGFR expression.

Dessutom, samtidigt med forskning, fann vi att echinacea i Cistanche har en antitumöreffekt. För applicering av echinakosid i antitumörläkemedel tillsätter föreliggande uppfinning först MTH1, oorganiskt pyrofosfatas och dGTP till reaktionslösningen (100mM pH8.0 Tris-ättiksyra, 40mM NaCl, 10mM magnesiumacetat, 0,005 procent Tween20 och 1 mMDTT) I metoden inkuberades enzymet och substratet vid rumstemperatur under 1 timme och sedan tillsattes 25 ul av den malakitgröna lösningen för att avsluta reaktionen. Absorbansen detekterades vid 630 nm med en BIO-RAD iMark-mikroplattläsare. Resultaten visade att echinakosid hade en signifikant hämmande effekt på enzymaktiviteten hos MTH1; För det andra detekterades effekten av echinakosid på tumörceller på cellnivå med MTT-analys, och resultaten visade att echinakosid signifikant kunde hämma tillväxten av SW480 koloncancerceller och U2OS humana osteosarkomceller, och föreliggande uppfinning hämmade tillväxten av echinakosid MTH1, ett specifikt enzym som upprätthåller överlevnaden i tumörceller, leder till inkorporering av oxiderade nukleotider i DNA, vilket orsakar dödliga DNA-dubbelsträngsbrott i cancerceller, vilket ger antitumöreffekter. Den nya medicinska applikationen kommer att lägga grunden för utvecklingen av nya antitumörläkemedel i framtiden.

Klicka cistanche effekter produkt

Nyckelord:

brösttumör; angiogenes; vaskulär endoteltillväxtfaktor (VEGF); Running II (ett kinesiskt örtpreparat för bröstcancer)

Bröstcancer är en elakartad tumör som allvarligt hotar kvinnors hälsa och sjukdomsincidensen rankas först bland kvinnliga maligna tumörer, med en tendens att öka år för år. Även om dess terapeutiska metoder har gjort vissa framsteg, har den långsiktiga överlevnaden för patienten med bröstcancer inte höjts på grund av den invasiva tillväxten och metastaseringen av tumörer. Angiogenes av tumörer är ett grundläggande villkor för tillväxt, invasion och metastasering av tumörer.

Därför är hämning av angiogenes av tumörer ett effektivt sätt att förhindra produktion och utveckling av tumörer och förlänga patientens liv.1 I den aktuella studien visar mekanismen för det kinesiska läkemedlet Running II med funktioner att komplettera qi och näring till yin, reglering av genomfartsled och befruktningskärl, upplösning av massa och avgiftning vid hämning av tumör och antimetastasering studerades från angiogenes och dess reglerande faktorer i den transplanterade tumören av bröstcancer MA-891 hos TA2-möss med lungmetastaser.

MATERIAL

Sextio SPF TA2-honmöss, som vägde (20±2) g, i åldern 6-8 veckor, köptes från Department of Laboratory Animals, Tianjin University of Medical Sciences. Bröstcancer-MA-891-cellstammen av musen levererades av Prof. Luo Liqin, Patologiska Laboratoriet, Institute of Tumor, Chinese Academy of Medical Sciences.

Runing II består av Sheng Huang Qi (Radix Astragali Mongolici), Shan Ci Gu (Pseudobulbus Cremastrae), Tai Zi Shen (Radix Pseudostellariae), Gou Qi Zi (Fructus Lycii), E Zhu (Rhizoma Curcumae Phaeocaulis), Yi Yi Ren ( Semen Coicis), Yin Yang Huo (Herba Epimedii), Dang Gui (Radix Angelicae Sinensis), etc., med dosförhållandet 1,67: 1,67: 1,33: 1,33: 1,33: 1,33: 1,33: 1, som bereddes ett avkok av Sektion för läkemedel, Longhua sjukhus, enligt en traditionell teknik, och hålls vid 4ć för användning; Cyklofosfamid (CTX, 200 mg/ampull, filialnummer: 981104) och tamoxifen (TAM) producerades av Shanghai Hualian Pharmaceutical Co. Ltd.; Normal koksaltlösning producerades av Shanghai Fumin Pharmaceutical Co.

Vaskulär endoteltillväxtfaktor (VEGF) polyklonal antikropp (arbetsspädningar 1:25–1:50), vaskulär endoteltillväxtfaktorreceptor (VEGFR, arbetsspädningar 1:30–1:50) och FVIIIAg polyklonal antikropp (arbetsspädning 1:50 ) köptes från Santa Cruz Biotechnology Inc; EnVision andra antikropp, kanin-anti-rått-VEGF-antikropp, get-anti-kanin FVIII Ag-antikropp och get-anti-kanin VEGFR-antikropp och EnVision Kit köptes från Dako Co., Danmark; 3,3- Diaminobenzidine (DAB) köptes från Shanghai Huamei Bioengineering Factory.

METODER

Utveckling av djurmodell

Djurmodellen utvecklades med slutsats till metoderna enligt Luo och Gao, et al.2,3. In vitro-odlade bröstcancer-MA-891-celler från musen i en logaritmisk överlevnadsfas selekterades och koncentrationen av celler reglerades till 1x107/ml. Under de aseptiska förhållandena inokulerades däggdjurscancercellerna i TA2-mössens subkutana del av höger axill (0,2 ml/mus, dvs 2X106 celler/mus).

Gruppering av djur och administreringsmetoder

Två dagar efter inokulering delades mössen slumpmässigt in i 4 grupper, 15 möss i varje grupp. 1) Tumörbärande kontrollgrupp: 0,4 ml normal koksaltlösning administrerades intragastriskt, en gång varje dag, fem gånger i veckan. 2) Körning II-grupp: Körning II späddes med normal koksaltlösning och 0,4 ml av denna utspädning motsvarande 48 g·kg{{10}}·d-1 som var beräknat enligt den bifogade tabellen "Omvandlingstabell mellan människors och djurs kroppsytor" i "Metodik för studier av farmakologi av kinesiska droger"4 gavs intragastriskt, en gång dagligen, fem gånger varje vecka. 3) CTX-kontrollgrupp: Om doseringen som användes av Jiang Bo, 5 späddes CTX med normal koksaltlösning, och 0,4 ml motsvarande 50 mg·kg-1·d-1 var ges intragastriskt, en gång varannan dag, tre gånger i veckan. 4) TAM-kontrollgrupp: TAM späddes med normal koksaltlösning och 0,4 ml motsvarande 2,7 mg·kg-1·d-1 administrerades intragastriskt, en gång dagligen, fem gånger varje vecka. Läkemedlen gavs under 3 veckor i alla fyra grupperna.

Provtagning

På den 22:a dagen efter administrering avlivades mössen genom dislokation av halskotorna och vägdes. Därefter togs och vägdes tumörmassan och lungan. Musens verkliga kroppsvikt=kroppsvikten – tumörvikten. Grå noder på lungytan, dvs metastasfokus, räknades med blotta ögat. Tumörmassan placerades i en 10-procentig neutral formaldehydlösning för fixering, följt av paraffininbäddning, ultratunn snittning, immunhistokemisk Envision tvåstegs töjning och bestämning av VEGF, VEGFR, antal mikrokärl (MVC) och mikrokärlsarea (MVA).

Tumörviktshämningshastigheten

Tumörhämningsfrekvensen=(medeltumörvikt för kontrollgruppen efter behandling – medeltumörvikt för läkemedelsgruppen efter behandling)/medeltumörvikt för kontrollgruppen efter behandling × 100 procent .

Hämningshastigheten för lungmetastasering

Hämningsfrekvensen för lungmetastasering=(genomsnittligt lungmetastasnodnummer för kontrollgruppen – genomsnittligt lungmetastasnodnummer för läkemedelsgruppen)/medelvärde för lungmetastasnodnummer för kontrollgruppen x 100 procent .

Immunhistokemisk Envision tvåstegsfärgning

Paraffinsnittet på 4 μm togs, följt av rutinmässig deparaffin med xylen, gradientdehydrering och tvättning med PBS, 5 min x 3 gånger; sektionen nedsänktes i 0.01 mol/L, pH 6,0 citratbuffert, placerades i en mikrovågsugn på 98ć i 10 minuter för antigen reparation och kyldes naturligt i rumstemperatur efter att ha tagits från mikrovågsugn; droppa den första antikroppen (ovannämnda antikropp respektive spädning av motsvarande antikropp), 37ć, 90 min, tvättning med PBS, 5 min x 3 gånger; droppande Envasion andra antikropp, vid rumstemperatur under 60 min, tvättning med PBS, 5 min x 3 gånger; droppa nyberedd DAB-färgframkallande lösning, kontrollera framkallande färg i 3–10 min under mikroskop, motfärgning i 45 s med campeachy, sköljning med kranvatten, torkning med blås, montering med neutralt gummi. Cellen med cytoplasman av brungula eller svartbruna granuler ansågs vara positiv. Den kända positiva delen av bröstcancer användes som en positiv kontroll, och den där PBS-buffert ersatte den första antikroppen användes som en negativ kontroll.

Bildanalys

ACE videokamera (upplösningseffekt 930 linjer) och LEICAQ500W bildanalysator och LEICA helautomatiska bildanalyssystem användes. Under ett mikroskop x 200 valdes 2 synfält i varje sektion slumpmässigt ut för bestämning av VEGF eller 3 synfält för bestämning av VEGFR och MVA, och procentandelen positiv area till hela synfältsarean beräknades i alla grupperna . För bestämning av MVC valdes 5 regioner med de rikaste blodkärlen i varje sektion under ett mikroskop x 100, och sedan under x 400 räknades mikrokärlen i varje synfält med 5 icke-överlappande regioner, och medelvärdet användes som en genomsnittlig mikrokärlräknare (MVC) för tumören.

Statistisk metod

Programvara SPSS8.0 användes och chi-kvadrattestet användes för jämförelsen mellan frekvenserna, och ett t-test eller envägs ANOVA användes för jämförelse av medelvärden.

RESULTAT

Tumörhämmande och antimetastaseffekter av Running II på den transplanterade tumören av bröstcancer MA-891-bärande TA2-möss med lungmetastaser

It was shown in Table 1 that the tumor weight inhibition rate was 37.3% in the Runing II group and 86.2% in the CTX control group, both tumor inhibition rates being >30 procent, med signifikant skillnad (båda P<0.05) as compared with both tumor-bearing control group and TAM control group, indicating that both Runing II and CTX have a certain tumor-inhibiting effect. And there was a significant difference (P<0.05) between the Runing II group and the CTX control group in the tumor inhibition rate, indicating that the tumor-inhibiting effect of Runing II was lower than that of CTX. The lung metastasis inhibition rate was 65.4% in the Runing II group and 43.9% in the CTX control group, with significant difference (both P<0.05) as compared with a tumor-bearing control group and TAM control group, indicating that both Runing II and CTX have a certain tumor metastasis-inhibiting action. And there was a significant difference between the Runing II group and the CTX control group (P<0.05) in the lung metastasis inhibition rate, suggesting that the anti-metastasis action of Runing II is superior to that of CTX.

Effekter av körning II på VEGF- och VEGFR-uttryck i den transplanterade tumören hos MA-891--bärande TA2-möss

Som visas i tabell 2 var uttrycken av VEGF och VEGFR i både Running II-gruppen och CTX-kontrollgruppen signifikant lägre än de i den tumörbärande kontrollgruppen (P<0.05), with a significant difference between the two. In the Running II group, the VEGF and VEGFR expressions were not significantly different from those in the CTX control group (P>0.05), var VEGF-uttrycket signifikant lägre än det i TAM-kontrollgruppen (P<0.05), and the VEGFR expression was similar to that in the TAM control group (P>0.05). In the CTX control group, the VEGF and VEGFR expression was lower than those in the TAM control group. In the TAM control group, the VEGF expressions were similar to that in the tumor-bearing control group (P>0.05), och VEGFR-uttrycket var lägre än det i den tumörbärande kontrollgruppen (P<0.05).

Effekt av körning II på MVA och MVC för den transplanterade tumören i MA-891-bärande TA2-möss

Som visas i tabell 3 var nivåerna av MVA och MVC i den transplanterade cancern i läkemedelsgrupperna signifikant lägre än de i den tumörbärande kontrollgruppen (P<0.05); in the Running II group, the levels of MVA and MVC were significantly higher than those in the CTX control group (P<0.05), the level of MVC was lower than that in the TAM control group (P<0.05), and the MVA level was similar to that in the TAM control group (P>0.05).

DISKUSSION

Traditionell kinesisk medicin hävdar att uppkomsten och utvecklingen av tumörer är resultatet av de omfattande effekterna av idiopatiska och empatiska faktorer men med stressen på de förstnämnda. I en tidigare klinisk studie ansåg professor Lu och Tang att brist på vital-qi i det inre och disharmoni av genomfartsled och befruktningskärl är de främsta orsakerna till tumöruppkomst, och inre invasion, förflyttning och spridning av cancerpatogener är de huvudsakliga tillstånden för tillväxt och metastasering av bröstcancer.6 Därför förespråkar de i behandlingen näring av vital qi och avlägsnande av massor. Running II är en kinesisk örtformel som sammanfattas genom många års klinisk praxis enligt behandlingsprincipen att först stärka kroppens motståndskraft och sedan eliminera patogena faktorer. I formeln är Sheng Huang Qi (Radix Astragali Mongolici), Tai Zi Shen ( Radix Pseudostellariae), Gou Qi Zi (Fructus Lycii), Yin Yang Huo (Herba Epimedii) suveräna ingredienser, med effekter av att komplettera qi och närande yin, som reglerar genomfarts- och befruktningskärl, som överensstämmer med vanliga egenskaper hos bröstcancer såsom både qi- och yin-brist och disharmoni i genomfartsled och befruktningskärl. Kliniskt uppnår denna formel den uppenbara effekten av att förlänga överlevnadstiden, öka livskvaliteten, stabilisera tumörfokus och förhindra metastasering av cancer.

Den aktuella studien etablerade modellen för bröstcancer MA-891 cellstam transplanterad tumör från TA2-möss med lungmetastaser och observerade effekten av Running II på solid tumörtillväxt och lungmetastas, och fann att det fanns signifikanta skillnader i tumören hämningshastighet och lungmetastasinhiberingshastigheten mellan Running II-gruppen och den tumörbärande gruppen, och mellan Running II-gruppen och CTX-kontrollgruppen, vilket visar att Running II har uppenbara funktioner för att hämma tumörtillväxt och antimetastasering. Dessutom har tamoxifen (TAM) inte den uppenbara funktionen att hämma tumörtillväxt och antimetastasering i modellmössen, vilket liknar resultatet att bröstcancer MA-891 är ER-cellstam och rapporten om direkt verkan av låg koncentration av TAM utomlands.7

Tumören är en typisk blodkärlsberoende sjukdom och dess tillväxt, infiltration och metastasering beror på angiogenes. Samtidigt tillhandahåller neovaskulariseringen återigen en metastaskanal för tumörceller, vilket skapar gynnsamma förhållanden för tillväxt, metastasering och diffusion av tumören. 8, 9 VEGF är en pro-angiogen faktor med den starkaste, unika och specifika verkan på vaskulära endotelceller, och många tumörceller kan utsöndra VEGF, vilket ökar vaskulär permeabilitet och som direkt verkar på vaskulära endotelceller genom bindning till VEGF-receptorn, stimulerar dess delning och proliferation, inducerar angiogenes av tumör och påverkar antalet mikrokärl, för att främja tillväxt och metastasering av tumör.10,11 De flesta tumörceller har högt VEGF-uttryck, medan det i de normala vävnaderna endast är ett litet antal organ som t.ex. njurarna, äggstockarna etc. har högre VEGF-uttryck. Därför anser vissa forskare att VEGF kan användas som markörer för tumörmetabolism och metastaser12 och mer idealisk måldel för att blockera neoangiogenes i tumörer,13 och störa vaskulära reglerande faktorer hos tumörer och dess verkande länk, reglera uttrycket av angiogenesfaktorer, och hämmande angiogenes kontrollerar möjligen tillväxt och metastasering av tumör.

Resultaten i den föreliggande studien indikerar att Runing II kan nedreglera uttryck av VEGF och VEGFR för att eventuellt blockera signalledning av VEGF-inducerad migration och proliferation av endotelceller, och ytterligare hämma angiogenes i tumörer, och därmed utöva antineoplastiska och antimetastaserande effekter .

Tidigare studier har visat att i tillväxtförloppet för maligna tumörer inducerade översnabb tillväxt av vävnaden oundvikligen allvarlig anoxi av lokal vävnad, och anoxi kunde stimulera syntesen av VEGF-mRNA och bromsa nedbrytningen av VEGF-mRNA för att inducera uppkomsten av en stort antal lokala nya kapillärkärl.14,15 Vid observation av immunhistokemiska positiva färgningsceller fann författarna uppenbart VEGF-uttryck i cytoplasman hos döende nekrotiska tumörceller, tvärtom mindre eller inget uttryck av VEGF i tumörceller med aktiv proliferation , vilket kan vara relaterat till en högre nivå av anoxiinducerande faktor i tumörceller, i enlighet med rapporten från Talks KL, et al.16 Running II innehåller Dang Gui (ᔧᔦ Radix Angelicae Sinensis), E Zhu (Rhizoma Curcumae Phaeocaulis), Sheng Yi Yi Ren (Semen Coicis), Shan Ci Gu (Pseudobulbus Cremastrae), etc., som fungerar aktiverar blodcirkulationen, löser slem och tar bort grumlig. De hämmar syntes och utsöndring av VEGF möjligen genom att förbättra den lokala mikrocirkulationen av tumören, öka syretillförseln till tumörcellerna, vilket hämmar tillväxten av tumören för att utföra antimetastaser.

REFERENSER

1.Folkman J. Angiogenes och bröstcancer. J Clin Oncol 1994; 12: 441-443.

2. Folkman J. Angiogenesforskning: från laboratorium till klinik. Forum (Genova) 1999; 9: 59-62.

3. Potgens AJ. Uttryck av vaskulär permeabilitetsfaktor påverkar tumörangiogenes i humana melanomlinjer xenotransplanterade till nakna möss. Am J Pathol 1995; 5: 775-782.

4. Sauter ER, Nesbit M, Watson JC, et al. Den vaskulära endotelial tillväxtfaktorn är en marknad för tumörinvasion och metastaser i skivepitelcancer i huvud och hals. Clin Cancer Res 1999; 5: 775-782.

5. Warren RS, Yuan H, Matli MR, et al. Reglering genom vaskulär endotelial tillväxtfaktor genom hypoxi. J Biol Chem 1996; 271: 2746-2753.

6. Levy AP, Levy NS, Goldberg MA. Post-transkriptionell reglering av vaskulär endotelial tillväxtfaktor genom hypoxi. J Biol Chem 1996; 271: 2746-2753.

7. Samtal KL, Turley H, Gatter KC, et al. Uttrycket och distributionen av de hypoxiinducerbara faktorerna HIF-1 alfa och HIF-2 alfa i normala mänskliga vävnader, cancerformer och tumörassocierade makrofager. Am J Pathol 2000; 157: 411-421.

For more information:1950477648nn@gmail.com