Effekt av tanshinone IIA på LPS-inducerad inflammatorisk respons i ett ROS-NLRP3 inflammasomberoende sätt i RAW264.7-celler

För mer information:emily.li@wecistanche.com

Höjdpunkter

Tan IIA kan hämma det inflammatoriska svaret och NLRP3-uttrycket stimulerat av LPS eller LPS + ATP. Acetylcystein (N-acetyl-l-cystein, NAC), en ROS-hämmare, kan hämma LPS + ATP-inducerad ökning av NLRP3-nivån. Mekanismen bakom effekterna av Tan IIA kan innebära reglering av ROS-NF-κB / P38-NLRP3-vägen. Denna studie karakteriserade vidare den molekylära mekanismen för Tan IIA och gav nya tankar till dess kliniska terapi.

Abstrakt

Nya bevis har visat att Tanshinone IIA (Tan IIA) förhindrar kardiomyocyter skada, hjärtfibroblaster och ateroskleros. Den molekylära mekanismen bakom effekterna av Tan lA är dock fortfarande oklar. Att undersöka rollen av Tan ll A i det inflammatoriska svaret på ett ROS-NLRP3-inflammatoriskt beroende sätt. RAW264.7-celler stimulerade med LPS rekryterades för att producera en cellmodell av inflammatoriskt svar. Våra resultat indikerade att produktionen av NO ökade signifikant efter att ha stimulerats av LPS. andTan IIA som behandlades signifikant minskade nivån av NO. mRNA-uttrycket av NLRP3. IL-1B och TNF-a hämmades signifikant av Tan LLA jämfört med LPS-behandlade celler. Proteinuttrycket av NLRP3. IKBa, pp65/p65 och pp38/p38 signerades effektivt minskat med Tan IIA, jämfört med LPS- eller LPS+ATP-stimulerade grupper. Under tiden. Tan IA hämmade signifikant nivån av ROS inducerad av LPS + ATP. Och NAC, en ROS-hämmare, kan också hämma proteinuttrycket av NLRP3. Baserat på dessa resultat kan det spekuleras i att mekanismen bakom effekten av Tan IIA kan innebära reglering av ROS-NF-kB / P38-NLRP3-vägen. Denna studie karakteriserade vidare den molekylära mekanismen för Tan IA och gav nya tankar till dess kliniska terapi.

Nyckelord: Tanshinone IIA,Inflammation, NLRP3 inflammatorisk, ROS

Fördelar med Cistanche-produkter

Bakgrund

Makrofager spelar en viktig roll för att hålla hjärthomeostas och orkestrera vävnadsreparation samt ombyggnad. Ihjärtamisslyckandepatienter, förhöjda proinflammatoriska cytokiner i serum antas vara prediktiva biomarkörer för försämrade kliniska resultat, ochinflammationkan bidra till utvecklingen av hjärtsvikt [1]. Fastäninflammationhar framstått som ett terapeutiskt mål för behandling av hjärt-kärlsjukdomar, det verkar dock som om bred immunsuppression misslyckades med att förbättra kliniska resultat antingen efter hjärtinfarkt (MI) eller vid hjärtsvikt [2,3].

Flera kliniska studier har visat att hämning av eninflammatoriskväg, såsominflammatoriskcytokin, IL-1β, kan effektivt minska återkommande kardiovaskulära händelser [4, 5]. Det kan spekuleras i att immunmoduleringen av inflammatoriskt svar har viktig diagnostisk och terapeutisk betydelse i processen med hjärt-kärlsjukdomar.

NLRP3-inflammasom är den mest omfattande studien av alla typer av inflammasomer. Det har dokumenterats att NLRP3-inflammasom spelar en avgörande roll i många sjukdomar, såsom multipel skleros (MS), Alzheimers sjukdom (AD), ateroskleros, fetma och typ 2-diabetes mellitus [6], och fler och fler bevis tyder på att NLRP3-inflammasom också är involverad i myokardiell ischemi / reperfusionsskada (MI / RI) [7,8]. Mekanismerna för NLRP3-aktivering kan innefatta generering av reaktiva syrearter (ROS), kaliumutflöde och frisättning av katepsiner i cytosolen efter lysosomal destabilisering. När celler stimulerades av patogener eller farosignaler aktiverades NLRP3 och rekryterades pro-caspase-1 genom adaptorproteinet ASC. NLRP3. ASC och pro-caspase-1 gjordeNLRP3 inflammatorisk komplex montering. Under verkan av NLRP3-inflammasomen aktiverades pro-caspase-1 för att vara caspase-1, vilket så småningom ledde till utsöndring av IL-1βoch IL-18 och orsakade en serie inflammatoriska reaktioner [9,10].

Tan IIA är en lipolöslig beståndsdel i Danshen (Sahia miltiorrhiza Bge), som har olika biologiska egenskaper och deltar i en serie biokemiska reaktioner. Tan IA haranti-inflammatorisk,antioxidantoch främjar angiogeneseffekten och har också i stor utsträckning effused för behandling av sjukdomen hjärt-cerebrovaskulärt system [1, 12]. Nya bevis har visat att Tan IIA förhindrar kardiomyocyter skada, hjärtfibroblaster, ateroskleros, ochneuroinflammation[13-16]. Den molekylära mekanismen som ligger till grund för effekterna av Tan IIA är dock fortfarande oklar.

Under ischemi / reperfusionsskada initierar monocyt / makrofag, neutrofiler och endotelcellerinflammatorisksvar, vilket inducerar frisättningen av en mängd olikainflammatoriskcytokiner, och resulterar i ökad vaskulär permeabilitet, vävnadsödem och skador. Makrofag är en viktig inflammatorisk regleringscelltyp bland allainflammatoriskcellarter och spelar en avgörande roll i processen med hjärtinfarkt [17]. Monocyt/makrofag som rekryteras till det skadade myokardiet kan ytterligare frigöra ROS, inflammatoriska mediatorer och proteaser som förvärrar hjärtskada [18].

Av den anledningen att makrofager spelar en viktig roll för att hålla hjärthomeostas och orkestrera vävnadsreparation, rekryterade vi RAW264.7-celler stimulerade med LPS för att producera en cellmodell av inflammatoriskt svar. Den föreliggande studien undersökte om Tan IIA har en effekt på LPS-stimulerade makrofager och mekanismerna bakom effekterna av Tan II.A på makrofag på ett ROS-NLRP3-inflammatoriskt beroende sätt.

Material och metoder

Cellodling och behandling

RAW264.7-cellen köptes från Cell Culture Center vid Chinese Academy of Medical Sciences (Peking, Kina). Cellerna odlades i DMEM-medium (hög glukos), tillsatte 10 % fetalt bovint serum (FBS), 100 U/ml penicillin och 100 ug/ml streptomycin. Cellerna odlades vid 37 °C i en helt fuktig atmosfär med 5 % CO2. För alla experiment behandlades celler vid 80-90% cellkonfluens. Cellerna behandlades med olika koncentrationer av Tan IIA (vid 10,1 och 0,1 uM) under olika tider, med eller utan 1 ug/ml LPS. Under tiden behandlades celler i kontrollgruppen med samma volym 0,1 % DMSO.

Mätning av NO-produktion

NO Assay Kit (Beyotime, Kina) användes för att mäta produktionen av NO enligt tillverkarens instruktioner. Kortfattat späddes standarderna med DMEM + 10% FBS och 50μL standard eller cellodling supernatant tillsattes till varje brunn på 96-brunnsplattan. Därefter pipetterades 50uL Griess Reagens I och II i varje brunn på plattan och den optiska densiteten (OD) detekterades av Varioskan LUX multimode mikroplattläsare vid 540 nm.

RNA-extraktion

RAW264.7-celler pläterades med en densitet av 1×106 celler/brunn med 10 % FBS DMEM i sexbrunnsplattor. 24 timmar senare avlägsnades mediet och tillsattes med serumfritt, antibiotikafritt DMEM-medium istället. RAW264,7-celler behandlades med DMSO (kontroll), LPS (1 ug/ml) och LPS+Tan IIA(10,1 och 0,1uM i 6 timmar. Därefter extraherades totalt RNA för att detektera mRNA-nivån av NLRP3, IL-1β och TNF-α. Totalt RNA extraherades genom användning av TRIzol-reagenset (Ambion). RNA mättes med koncentrationer Va en ultramikrofluorescensspektrofotometer (DeNovix). HiFiScript cDNA-syntessats (cwbiotech) användes för omvänd transkription enligt tillverkarens instruktioner. 1 ug RNA-prover transkriberades omvänd och reaktionsstegen var följande: 42 ° CC i 50 min, 85 ° CC i 5 minuter och hölls sedan vid 4 ° C.

RT-PCR

Ouantitativ PCR(OPCR)-analys utfördes med ett O-PCR-instrument (Lightcycler 96, Roche) med användning av UltraSYBR-blandning (cwbiotech). PCR-protokollet var 95 ° C i 10 minuter, följt av 40 cykler på 95 ° C för 10-talet, 56 för 30-talet och 72 för 32-talet. De primers som används för qRT-PCR visas enligt följande: GADPH-Forward: 5'-AACTTTGGCATTGTGGAAGG-3'; GADPH-Reverse:5'-ACACATTGGGGGTAGGAACA-3',NLRP3-Forward:5'-ATGCTGCTTCGACATCTCCT-3'NLRP3-Reverse:5'-AACCAATGCGAGATCCTGAC-3';IL-1β-Forward:5'-GCCCATCCTCTGTGACTCAT-3';IL-1β-Reverse:5'-AGGCCACAGGTATTTTGTCG-3':TNF-α-Forward:5'-GCAGATGGGCTGTACCTTATC-3'TNF-a-Reverse:5'-GCAGATGGGCTGTACCTTATC-3! Genuttrycksnivån beräknades med hjälp av 2-AACt-metoden.

Västra blotting

Western blotting genomfördes med följandeAntikroppar: anti-NLRP3-antikropp (CST), anti-pp38-antikropp (CST), anti-p38-antikropp (CST), anti-pp65-antikropp (CST), anti-GADPH-antikropp (proteinteknik), anti-β-tubulinantikropp (proteinteknik), anti-HMGB1-antikropp (proteinteknik), anti-p65-antikropp (proteinteknik), anti-IKB-α-antikropp (proteinteknik). Proteinfraktioner extraherades från lysaterna av odlade celler och ett Enhanced BCA Protein Assay Kit (Beyotime, Kina) användes för att mäta proteinkoncentrationerna. Proteiner denaturerades och löstes på SDS-PAGE och överfördes sedan till ett PVDF-membran. Efter blockering med QuickBlockTMBlocking Buffer (Beyotime, Kina) i 1 timme inkuberades PVDF-membranen sedan med primära antikroppar över natten vid 4 ° C ° C. Därefter tvättades membranen med Western Wash Buffer (Beyotime, Kina) tre gånger och inkuberades med HRP-konjugerade sekundära antikroppar i 1 timme vid rumstemperatur. En BeyoECL Plus (Beyotime, Kina) kit användes för att detektera proteinerna enligt tillverkarens instruktioner. En C-DiGit 3600 (Li-Cor, USA) användes för att avbilda och banden kvantiterades av Image J Software.

Mätning av ROS-ackumulering

En DCFH-DA-sond Reactive Oxygen Species Assay Kit (Beyotime, Kina) användes för att mäta intracellulära ROS-nivåer i RAW264.7-celler enligt tillverkarens instruktioner. I korthet späddes DCFH-DA med serumfritt DMEM-medium och den slutliga koncentrationen justerades till 10 μM/l. Efter inkubation med 10 μM DCFH-DA-färgämne i 30 min vid 37 °CC tvättades RAW264,7-celler tre gånger med serumfritt DMEM-medium för att avlägsna överskottet av DCFH-DA. För positiv kontroll tillsattes väl,lμL Rosup till cellerna. Fluorescensen kvantifierades med hjälp av ett inverterat mikroskop från Nikon IX73. Bilderna av celler mättes med hjälp av Image J Software.

Statistisk analys

Alla experiment upprepades minst tre gånger. SPSS-programvaran användes för alla analyser, och GraphPad Prism 5 utfördes för grafikritningen. Alla resultat gavs som medelvärde ± SD. Envägs ANOVA användes för att analysera data mellan grupper och parade jämförelser med hjälp av SNK-q-testet. Ett värde P< 0.05="" was="" considered="" statistically="" significant="" in="" all="">

Figur 1. Tan IIA hade en regulatorisk effekt på NO-produktion, NLRP3, IL-1β, TNF-α mRNA

uttryck

A. RAW264.7 Celler INGEN produktion av olika grupper. Cellerna förbehandlades med Tan IIA 10μM, 1μM och

0,1 μM i 30 min och stimuleras med LPS (1 μg/ml) i 24 timmar. * P< 0.05="" vs="" ctrl,="" #="" p="">< 0.05="" vs="" lps.="" b-d.="" tan="">

hade en reglerande effekt på mRNA-uttryck av TNF-α, NLRP3 och IL-1β. Cellerna förbehandlades med Tan IIA

Resultat

Effekten på RAW264.7-celler INGEN produktion av Tan IIA-behandling

NO, en andra budbärarmolekyl, utför olika funktioner i cellfysiologiska och patologiska processer. NO utsöndras av makrofager spelar en viktig roll i inflammatoriska, immuna och antivirala reaktioner [19, 20]. På grund av dessa kan NO användas för att uppskatta effekterna av LPS på immun- och inflammatoriska svar. Cellerna behandlades med olika koncentrationer av Tan IIA (vid 10, 1 och 0,1 μM) med eller utan 1 μg/ml LPS under 24 timmar, och cellerna i kontrollgruppen behandlades med en lika stor volym på 0,1 % DMSO. Som visas i figur 1A, jämfört med kontrollgruppen, i modellgruppen stimulerad med LPS i 24 timmar, ökade produktionen av NO markant (P<0.05); and="" various="" concentrations="" of="" taniia="" treatment="" (at="" 10,="" 1,="" and="" 0.1="" μm)="" significantly="" decreased="" the="" no="" production=""><0.05) of="" the="" cells="" stimulated="" with="">

Effekten på NLRP3, IL-1β och TNF-α mRNA-uttryck av Tan IIA-behandling

RAW264.7-celler stimulerade med LPS kan inducera aktiveringen av det inflammatoriska svaret, och det kan förbättras av Tan IIA, inklusive mRNA-uttrycket av NLRP3, IL-1β och TNF-α. Som visas i figur 1B-D, jämfört med kontrollgruppen, i modellgruppen stimulerad med LPS, ökade mRNA-uttrycket av NLRP3, IL-1β och TNF-α markant (P< 0.05);="" and="" various="" concentrations="" of="" tan="" iia="" treatment="" (at="" 10,="" 1,="" and="" 0.1="" μm)="" significantly="" decreased="" the="" mrna="" expression="" of="" nlrp3,="" il-1β="" and="" tnf-α="" (p="">< 0.05)="" in="" cells="" stimulated="" with="">

Effekten på NLRP3-proteinuttryck av Tan IIA-behandling

ATP, en andra signalmolekyl, är en aktivator som krävs för NLRP3-inflammatorisk aktivering. Så ATP användes för att inducera aktiveringen av NLRP3 [21, 22]. Våra resultat visade att LPS + ATP-inducerade aktiveringen av NLRP3-proteinuttryck och det kunde förbättras av Tan IIA. Som visas i figur 2, jämfört med kontrollgruppen, i modellgruppen inducerad av LPS + ATP, ökade proteinuttrycksnivån för NLRP3 markant (P< 0.05);="" and="" taniia="" treatment="" (at="" 10μm)="" significantly="" decreased="" the="" protein="" expression="" of="" nlrp3="" (p="">< 0.05)="" in="" cells="" stimulated="" with="">

LPS-inducerad aktivering av NF-κB- och p38-vägen kan hämmas av Tan IIA

Som visas i figur 2, jämfört med kontrollgruppen, ökade proteinuttrycket av IKBα, pp65/p65 markant i cellerna stimulerade med LPS eller LPS + ATP (P< 0.05);="" and="" tan="" iia="" treatment="" (at="" 10μm)="" significantly="" decreased="" the="" upregulation.="" the="" protein="" level="" of="" pp38/p38="" was="" upregulated="" in="" cells="" stimulated="" with="" lps+atp,="" and="" the="" upregulation="" was="" inhibited="" by="" tan="" iia="" (10μm)="" (figure="" 2).="" however,="" the="" protein="" level="" of="" pp38/p38="" did="" not="" change="" significantly="" in="" cells="" stimulated="" with="" lps.="" furthermore,="" the="" protein="" expression="" of="" hmgb1="" was="" also="" enhanced="" in="" cells="" induced="" with="" lps="" or="" lps+atp="" but="" showed="" no="" statistical="" difference.="" these="" results="" suggest="" that="" lps="" or="" lps+atp="" induced="" activation="" of="" nf-κb="" and="" p38="" pathway="" can="" be="" inhibited="" by="" tan="">

Tan IIA hade en regulatorisk effekt på ROS

För att bekräfta om Tan IIA kunde rensa intracellulär ROS utvärderades produktionen av intracellulär ROS genom fluorescensmikroskopi med hjälp av ett Reactive Oxygen Species Assay Kit. RAW264.7-cellerna exponerades för LPS i 6 timmar och 1 mM ATP tillsattes 30 minuter innan cellerna skördades. De ROS-positiva cellerna visualiserades som ljusgröna fläckar, och LPS + ATP-behandling ökade nivån av intracellulär ROS signifikant jämfört med den i kontrollgruppen (figur 3). Under tiden hämmade behandling med Tan IIA den LPS+ATP-inducerade ökningen av intracellulär ROS signifikant (figur 3). Dessa resultat föreslog att Tan IIA hade antioxidantkapacitet.

Figur 3. Tan IIA hade regulatorisk effekt på ROS-uttryck (skalstång 50μm)

Cellerna förbehandlades med Tan IIA 10μM i 30 min och stimulerades med LPS (1 μg/ml) i 5,5 h. ATP tillsattes 30 min innan cellerna skördades. A. Representativa fluorescensbilder av cellENS ROS-uttryck. B. Kvantitativa data om genomsnittet över tre separata experiment. * P< 0.05="" vs="" ctrl,="" #="" p="">< 0.05="" vs="">

Figur 4. NAC hade en reglerande effekt på proteinuttrycket av NLRP3.

Cellerna förbehandlades med Tan IIA 10μM i 30 min och stimulerades med LPS (1 μg/ml) /LPS (1 μg/ml) +NAC (1mM) i 5,5 h. ATP tillsattes 30 min innan cellerna skördades. A. Representativ västerländsk fläck av NLRP3. B. Kvantitativa data om genomsnittet över tre separata experiment. * P< 0.05="" vs="" ctrl,="" #="" p="">< 0.05="" vs="">

NAC hade en regulatorisk effekt på NLRP3

Acetylcystein (N-acetyl-l-cystein, NAC), en asätare av ROS, kan hämma proteinuttrycket av NLRP3. Som tidigare nämnts ökade proteinuttrycket av NLRP3 signifikant efter att ha stimulerats med LPS + ATP i 6 timmar, och behandling med Tan IIA hämmade den LPS + ATP-inducerade ökningen av NLRP3-proteinnivån. Vidare kan behandling med NAC också hämma LPS + ATP-inducerad ökning av NLRP3-proteinnivån signifikant (figur 4). Dessa resultat visade att den regulatoriska effekten av Tan IIA på NLRP3 kan bero på en ROS-NLRP3-väg.

Diskussion

Makrofager deltar i processen med det inflammatoriska svaret och spelar en avgörande roll i processen med hjärtinfarkt. Monocyt/makrofag som rekryteras till det skadade myokardiet kan ytterligare frigöra ROS, inflammatoriska mediatorer och proteas, vilket förvärrar hjärtskada [23]. RAW264.7-celler har betraktats som en dominerande experimentell makrofagmodell och spelar en viktig roll i forskningen om makrofagrelevanta inflammatoriska signalvägar [24]. Makrofager spelar en viktig roll för att hålla hjärthomeostas och orkestrera vävnadsreparation samt ombyggnad. LPS-stimulerade RAW264.7-celler har använts i stor utsträckning för att studera läkemedel som har antiinflammatoriska egenskaper och underliggande mekanismer [25,26].

NLRP3-inflammasomen är en viktig medlare av inflammatoriska svar, och det har ökat bevis för att NLRP3-inflammasom spelar en avgörande roll i hjärtsjukdomar. I humana artärkärl korrelerades NLRP3-högt uttryck med riskfaktorer för aterosklerotiska sjukdomar och svårighetsgraden av kranskärlssjukdom [27], och nivån av NLRP3-inflammasomrelaterade gener var associerad med aterosklerotisk plack [28]. Aktivering av NLRP3-inflammasomen har också associerats med negativ hjärtremodellering. NLRP3 aktiverades i kardiomyocyter i tvärgående aortaförträngning (TAC) inducerad möss negativ hjärtremodelleringsmodell, och aktiveringen av NLRP3-inflammasom medförde omvandlingen av pro-kaspas-1 till dess aktiva form [29]. MCC950.a NLRP3-inflammasomhämmare kan hämma aterosklerotisk effekt, förmodligen på ett sätt att hämma vidhäftningen av monocyter och minska ackumuleringen av intraplak makrofager [30].

Tan IIA är en stor monomer extraherad från Danshen, som har olika biologiska egenskaper. Tan II.A haranti-inflammatorisk,antioxidantoch främjar angiogeneseffekten och har använts i stor utsträckning för behandling av sjukdomar i det kardiovaskulära cerebrovaskulära systemet [11]. Nya bevis har visat att Tan A förhindrade kardiomyocyter skada, hjärtfibroblaster, ateroskleros, ochneuroinflammation[13-16]. Våra tidigare studier har visat att Tan IIA utövade en antiinflammatorisk effekt genom att hämma TLR4-MyD88-NF-KB-signalvägen och justera relaterat miRNA-uttryck i LPS-stimulerade RAW264.7-celler [31]. Dessutom kan Tan IIA främja makrofagpolarisering från en proinflammatorisk M1-fenotyp mot en antiinflammatorisk M2-fenotyp [32]. Den molekylära mekanismen bakom effekterna av Tan IIA var dock fortfarande oklar.

Våra resultat har visat att produktionen av NO markant ökade i RAW264.7-celler stimulerade med LPS, och Tan IIA-behandling (vid 10,1 och 0.1 uM) minskade signifikant NO-produktionen av cellerna. RAW264.7-celler stimulerade med LPS kan inducera aktiveringen av det inflammatoriska svaret, och det kan förbättras av Tan IIA, inklusive mRNA-uttrycket av NLRP3, IL-1β och TNF-α.ATP är en andra signalmolekyl av NLRP3-inflammasomaktivering. I studien användes ATP för att inducera aktiveringen av NLRP3. Resultaten visade att LPS + ATP-inducerade aktiveringen av NLRP3-proteinuttryck och det kunde förbättras av Tan IIA. I cellerna stimulerade med LPS eller LPS + ATP ökade proteinuttrycket av IKBa, pp65 / p65 markant; och Tan IA-behandling (vid 10μM) minskade signifikant uppregleringen. Proteinnivån av pp38/p38 uppreglerades i celler stimulerade med LPS+ATP, och uppregleringen hämmades av Tan IA(10uM). Vidare förbättrades proteinuttrycket av HMGB1 också i celler inducerade med LPS eller LPS + ATP men visade ingen statistisk skillnad. Dessa resultat föreslog att LPS eller LPS + ATP-inducerad aktivering av NF-kB och p38-vägen kunde hämmas av Tan IIA.

LPS+ATP-behandling ökade nivån av intracellulär ROS signifikant, och Tan IIA hämmade den LPS+ATP-inducerade ökningen av intracellulär ROS signifikant. Acetylcystein (N-acetyl-I-cystein, NAC) är en asätare av ROS. NAC kan hämma IPS + ATP-inducerad ökning av NLRP3-proteinnivån signifikant. Dessa resultat föreslog att Tan IIA hade antioxidantkapaciteten och att den reglerande effekten av Tan IIA på NLRP3 kan bero på en ROS-NLRP3-väg.

För att sammanfatta. Tan IIA kan hämma det inflammatoriska svaret och NLRP3-uttrycket stimulerat av LPS eller LPS + ATP, och NAC kan hämma LPS + ATP-inducerad ökning av NLRP3-nivån. Härmed kan det spekuleras i att mekanismen bakom effekterna av Tan IIA kan innebära reglering av ROS-NF-kB / P38-NLRP3-vägen. Denna studie karakteriserade vidare den molekylära mekanismen för Tan IA och gav nya tankar till dess kliniska terapi.

Referenser

1 M.DeBerge.SJ. Shah, L. Weilbacher, et al Makrofager vid hjärtsvikt med reducerad kontra bevarad ejektionsfraktion. Trender Mol. Med 2019, 25: 328-340.

2. GH. Gislason, S. Jacobsen, J.N. Rasmussen, et al Risk för dödsfall eller återinfarkt i samband med användning av selektiva cyklooxygenas-2-hämmare och icke-selektiva icke-steroida antiinflammatoriska läkemedel efter akut hjärtinfarkt. Upplaga 2006, 113: 2906-2913

3. D.M. McNamara, R. Holubkov, R.C.Starling, et al. Kontrollerad studie av intravenöst immunglobulin i nyligen debuterad dilaterad kardiomyopati. Upplaga 2001, 103:2254-2259.

4. P.M. Ridker, B.M.Everett, T.Thuren, et al. Antiinflammatorisk terapi med kanakinumab för aterosklerotisk sjukdom. N Engl J Med 2017,377:1119-1131. P.M.Ridker, J.G. MacFadyen, T. Thuren, et al.

5. Effekt av interleukin-1beta-hämning med kanakinumab på infallande lungcancer hos patienter med åderförkalkning: explorativa resultat från en randomiserad, dubbelblind, placebokontrollerad studie. Lancet 2017,390:1833-1842. H. Guo, J.B. Callaway, J.P. Ting.

6. verkningsmekanism, roll i sjukdom och terapi. Nat Med 2015,21:677-687.

7. L.Minutoli.D.Puzzolo、M.Rinaldi, et al. ROS-medierad NLRP3-inflammatorisk aktivering i hjärnan. hjärta. njure och testikel ischemi / reperfusionsskada. Oxid Med Cell Longley 2016.2016:2183026.

8. M.KawaguchiM.TakahashiTHata, et al. Inflammasomaktivering av hjärtfibroblaster är avgörande för myokardiell ischemi / reperfusionsskada. Upplaga 2011, 123:594-604. G. Trendelenburg. Molekylär reglering av cellens öde

9. vid cerebral ischemi: inflammasomens roll och anslutna vägar. J Cereb Blodflöde Metab 2014,34:1857-1867.

10.C. Jin, R.A.Flavell. Molekylär mekanism för NLRP3-inflammasomaktivering. J Clin Immunol 2010,30:628-631.

11.Y. Cai. W, Zhang, Z.Chen, et al. Nya insikter i de biologiska aktiviteterna och läkemedelsleveranssystemen hos tanshinoner. Int J Nanomedicin 2016,11:121-130.

12. M.Akaberi, M.Iranshahi, S. Mehri. Molekylära signalvägar bakom de biologiska effekterna av salviaarter diterpener inom neurofarmakologi och kardiologi. Phytother Res2016.30: 878-893.

13. D. Wang, Y.Liu, G.Zhong, et al. Kompatibilitet mellan tanshinon IIA och astragalosid IV vid dämpning av hypoxiinducerad kardiomyocyterskada. Ethnopharmacol 2017,204:67-76.

14. W. Chen, X.Li, S.Guo, et al. Tanshinone IIA harmoniserar överhörningen av autofagi och polarisering i makrofager via miR-375 / KLF4-vägen för att dämpa ateroskleros. Int Immunopharmacol 2019,70:486-497.

15. Y.T. Tsai, S.H.Loh, C.Y. Lee, et al. Tanshinone A hämmar hög glukosinducerad kollagensyntes via kärnfaktor erytroid 2-relaterad faktor 2 i hjärtfibroblaster. Cell Physiol Biochem 2018,51:2250 2261.

16.N. Huang, Y.Li, Y. Zhou, et al. Neuroprotektiv effekt av tanshinone IA-inkuberade mesenkymala celler stammar Abeta25-35-inducerad 5C På neuroinflammation. Behav Brain Res 2019,365:48-55.

17.T. Heidt. G Artigheter, P Dutta, et al. Differentiellt bidrag från monocyter till hjärtmakrofager i steady-state och efter hjärtinfarkt. Circ Res 2014,115:284-295.

18. S. Steffens, F. Montecucco, F. Mach. Det inflammatoriska svaret är ett mål för att minska myokardiell ischemi och reperfusionsskada. Tromb Haemost 2019,102:240-247.

19.J. MacMicking, O.W. Xie. C. Nathan Kväveoxid och makrofagfunktion Annu Rev Immunol 1997,15: 323-350.

20.S.H.HH. W, W.U. NO at Work.Cell 1994.78: 919-925.

21. L. Franchi, T. Eigenbrod, R. Munoz-Planllo, et al Inflammasomen: en kaspas-1-aktiveringsplattform som reglerar immunsvar och sjukdomspatogenes. Nat Immunol 2009,10:241-247.

22. X. Dong Z. Zheng, P. Lin, et al ACPAs främjar IL-1beta-produktion vid reumatoid artrit genom att aktivera NLRP3-inflammasomen. Cell Mol Immunol 2019.

23. PJ. Murray, T.A. Wynn. Skyddande och patogena funktioner hos makrofagundergrupper. Nat Rev Immunol 2011,11:723-737.

24. G Pascual, A.L. Fong, S.Ogawa, et al. En SUMOylation-beroende väg förmedlar transrepression av inflammatoriska responsgener av PPAR-gamma. Naturen 2005,437:759-763.

25.X. Zhang G.Wang, E.C.Gurley, et al. Flavonoid apigenin hämmar lipo polysackarid-inducerat inflammatoriskt svar genom flera mekanismer i makrofager. PLoS One 2014,9:e107072.

26. Z. Yuan, M.A. Syed, D.Panchal, et al. Curcuminmedierad epigenetisk modulering hämmar TREM-1-uttryck som svar på lipopolysackarid. Int J Biochem Cell Biol 2012,44:2032-2043.

27.F.Zheng.S, Xing. Zhong, et al NLRP3-inflammasomer visar högt uttryck i aortan hos patienter med ateroskleros. Hjärtlunga Circ 2013, 22:746-750.

28. G Paramel Varghese, L. Folkersen, R.J. Strawbridge, et al. NLRP3 inflammatoriskt uttryck och aktivering vid mänsklig ateroskleros. J Am Heart Assoc 2015,5.

29.T. Suetomi, A. Willeford, C.S.Brand, er al Inflammation och NLRP3-inflammatorisk aktivering initierad som svar på trycköverbelastning av Ca(2+)/calmodulinberoende proteinkinas II deltasignalering i kardiomyocyter är avgörande för negativ hjärtremodellering. Upplaga 2018, 138:2530-2544.

30. T. van der Heijden, E. Kritikou, W. Venema, et al. NLRP3 inflammasomhämning av MCC950 minskar aterosklerotisk lesionsutveckling i apolipoprotein E-bristfällig möss-kort rapport. Arterioskler tromb Vasc Biol 2017,37:1457-1461.

31. G Fläkt.X. Jiang. X. Wu, e1 al. Antiinflammatorisk aktivitet av tanshinone IIA i LPS-stimulerade RAW264.7 makrofager via miRNA och TLR4-NF-kappaB-vägen. Inflammation 2016,39: 375-384.

32. S. Gao, Y. Wang, D. Li, et al. Tanshinone IIA lindrar inflammatoriskt svar och styr makrofagpolarisering i lipopolysackaridstimulerade RAW264.7-celler. Inflammation 2019, 42: 264-275.