Effektiviteten av den kombinerade behandlingen av Laminaria Japonica och Cistanche Tubulosa-extrakt i hårväxt

Kyungha Shin1#, Tae-Su Kim2#, Jangbeen Kyung1, Dajeong Kim1, Dongsun Park1, Ehn-Kyoung Choi1, Sung-Pyo Lee2, Woong-Suk Yang2, Myung-Hwa Kang3, Yun-Bae Kim1*

1College of Veterinary Medicine, Chungbuk National University, Cheongju, Korea

2Misuba RTech Co., Ltd., Asan, Korea

3Institutionen för livsmedelsvetenskap och nutrition, Hoseo University, Asan, Korea

Eftersom håravfall i hårbotten på senare tid har ökat även hos unga människor, vilket allvarligt påverkar individers livskvalitet, har de hårväxtstimulerande effekterna av Laminaria japonica-extrakt (LJE) ochCistanche tubulosaextrakt (CTE) undersöktes. Efter att ha bekräftat den anagena fasen av folliklar under rakning, applicerades hanmöss C57BL/6 dermalt med 3 procent Minoxidil eller administrerades oralt med kombinationerna av LJE och CTE i 21 dagar. Minoxidil främjade håråterväxt och ökade aktiviteter -glutamyltranspeptidas (-GTP) och alkaliskt fosfatas (ALP). Dessutom uppreglerade Minoxidil nivåerna av epidermal tillväxtfaktor (EGF) och vaskulär endoteltillväxtfaktor (VEGF). Samtidig administrering av LJE och CTE vid 54 mg/kg LJE plus 162 mg/kg CTE utövade synergistiska främjande effekter på håråterväxten, jämförbar med 3 procent Minoxidil. LJE förbättrade företrädesvis ALP-aktivitet, medan CTE ökade både -GTP- och ALP-aktiviteter såväl som EGF- och VEGF-uttryck. In vivo luftpåsinflammationsmodell, karragenan-inducerad vaskulär utsöndring och ökade kväveoxid- och prostaglandin E2-koncentrationer i exsudaten undertrycktes synergistiskt genom samtidig administrering av LJE och CTE. Dessutom hämmades inflammatorisk cellinfiltration väsentligt av kombinationsbehandlingen. Resultaten tyder på att kombinationsbehandling med LJE och CTE i lämpliga doser och förhållanden förhindrar håravfall och förbättrar alopeci, vilket delvis kan förmedlas av deras antiinflammatoriska aktiviteter.

Nyckelord:Hårväxt, inflammation, Laminaria japonica,Cistanche tubulosa,kombinationsbehandling

För mer information vänligen kontakta:Joanna.jia@wecistanche.com

Cistanchedeserticola har många effekter, klicka här för att veta mer

På senare tid har håravfall i hårbotten ökat även hos unga människor, vilket allvarligt påverkar en individs livskvalitet. Även om skallighet inte är ett av hälsoproblemen, kan det orsaka djup psykologiskt obehaglig social stress. Därför är det av stort intresse att utveckla nya förebyggande och/eller terapeutiska material för håravfall och återväxt. Trots miljardmarknaden finns det några få för närvarande effektiva produkter tillgängliga [1]. Hårsäckarna ombildar sig själva under cykliska perioder av tillväxt (anagen), regression (katagen), vila (telogen) och avfall (exogen) [2]. Under catagen,

många follikulära celler genomgår programmerad celldöd (apoptos) [3], vilket minskar follikelstorleken när folliklarna kommer in i telogen. Aktivering av sällan cirkulerande epitelstamceller som är belägna i folliklarnas utbuktning gör follikelförnyelse i början av nästa anagena fas [4]. Stamcellsavkomma bildar en ny follikulär matris under tidig anagen, och hårstrået och inre rotskidan härrör från dessa relativt odifferentierade matrisceller [5]. Det är välkänt att storleken på hårsäcken och varaktigheten av den anagena fasen styr storleken (diametern) respektive längden på hårstrået. Denna cykliska tillväxt av hår regleras av olika tillväxtfaktorer.

Minoxidil, finasterid och propecia är kommersiellt tillgängliga för att bromsa håravfall och underlätta håråterväxt. Minoxidil som vasodilator utövade en bieffekt för att underlätta hårväxt [6] vilket kan bero på dess näringstillförsel och kaliumkanalöppnande aktiviteter [7,8]. Minoxidil är effektivt för androgen alopeci, bland andra behandlingar för skallighet, även om dess effektivitet försvinner inom månader efter avslutad behandling. Som jämförelse kan nämnas att finasterid och propecia, läkemedel mot benign prostatahyperplasi och prostatacancer, har registrerats i många länder för androgenetisk alopeci (manlig skallighet). Finasteride och propecia är syntetiska anti-androgener som hämmar typ II 5--reduktas, ett enzym som omvandlar testosteron till dihydrotestosteron (DHT) i papillcellerna längst ner i hårsäckarna [9]. Laminaria japonica, Undaria pinnatifida och Cladosiphon okamuranus, spridda i många länder, har använts som terapeutiska medel inom orientalisk medicin under en lång period. I tidigare studier hade fucoidan, ett sulfatpolysackaridkomplex, extraherats och identifierats från tången och bekräftats ha antioxidativa, anti-koagulerande, anticancer- och antiinflammatoriska aktiviteter [10,11]. Därefter har fördelaktiga effekter av fucoidan på inflammatoriska sjukdomar, ischemi, immundysfunktion och tumörer visats [12,13]. Å andra sidan,Cistanche tubulosa extrakt(CTE) har också använts i stor utsträckning för traditionell medicinering i Kina. CTE förbättrar blodflödet genom att sänka kolesterolnivåerna i blodet [14]. Nyligen rapporterades det att CTE minskade produktionen av tumör-nekrosfaktor- (TNF- ) och interleukin-4 (IL-4) som är viktiga faktorer för produktion av kväveoxid (NO) i den inflammatoriska vägen [15]. Vi visade också att fucoidan från Laminaria japonica-extrakt (LJE) och CTE synergistiskt dämpade inflammation in vitro och in vivo [16]. Noterbart har det visats att det fanns ett nära samband mellan hudinflammation (särskilt tårkörtel) med alopeci [17]. Således framträder antiinflammatoriska aspekter av alopecibehandling [18]. Baserat på förbättringsaktiviteterna för blodflöde och inflammation, undersöker vi den kombinerade effekten av LJE och CTE på hårväxt och underliggande mekanism(er), i jämförelse med 3 procent Minoxidil (Hyundai Pharmaceutical, Seoul, Korea), ett välkänt hårstrå. tillväxtförstärkare.

CistancheExtrakt mot håravfall

Material och Metoder

Material

LJE och CTE erhölls från Misuba RTech Co., Ltd. (Asan, Korea). Torkat pulver av Laminaria japonica extraherades i renat vatten vid 6 0oC i 24 timmar, filtrerades genom ett 0,45 µm membran, desinficerades och spraytorkades. Cistanche tubulosa extraherades i 80 procent etanol, desinficerades, koncentrerades och torkades. LJE och CTE hölls vid 4oC, blandades (1:3) och löstes i renat vatten före användning och administrerades oralt i en volym av 5 ml/kg.

Djur

C57BL/6-möss av hankön för studier av hårtillväxt och ICR-möss av hankön för inflammationsstudier köptes från Daehan Biolink (Eumseong, Korea) och hölls i ett rum med konstanta miljöförhållanden (23±2ºC; 45-65 procent relativ luftfuktighet ; 12-timme ljus-mörkercykel; 150-300 lux ljusstyrka). Pelletsfoder och renat vatten var tillgängliga ad libitum. Alla djurexperiment godkändes av Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) vid Chungbuk National University (CBNU), Korea, och utfördes enligt Standard Operation Procedures (SOP) från Laboratory Animal Research Center, CBNU.

Behandling för hårväxt

Efter att ha bekräftat den anagena fasen genom att observera homogent rosa hudfärg i ryggen på C57BL/6-möss (6 veckor gamla, n=8/grupp) efter klippning i telogenfasen, rakades håret [1 ,19,20]. Från nästa dag valdes möss utan synliga repor och behandlades oralt med LJE (18 eller 54 mg/kg), CTE (54 eller 162 mg/kg) eller deras blandning (18 plus 54 eller 54 plus 162 mg/kg) en gång om dagen i 21 dagar. Låga doser av LJE (18 mg/kg) och CTE (54 mg/kg) kom från uppskattade humandoser på 100 mg/kropp (70 kg) och 300 mg/kropp efter ytareatranslation av kroppsvikt (Km{{23} } för människa/Km=3 för mus). Höga doser av LJE och CTE sattes till 3 gånger, ensamma eller i kombination, för att bedöma maximala synergistiska effekter [16]. Minoxidil (3 procent, 0,2 ml) applicerades topiskt en gång om dagen på den rakade huden i samma schema med LJE/CTE-behandling.

Grov observation av hårväxt

Dagar med 3-dagars intervall efter rakning och under behandling bedövades mössen lätt med dietyleter och fotografier togs på deras baksidor. Förhållandet mellan håråterväxt (återväxt område/rakat område) på fotografierna analyserades med användning av ett datoriserat bildanalyssystem (Imageinside, Daejeon, Korea).

Mikroskopisk undersökning av hårsäckar

På dagarna 14 och 21 avlivades mössen genom djup bedövning med dietyleter och deras ryggskinn avlägsnades [1]. Rygghuden skars i två delar. Formalinfixerade, paraffininbäddade vävnadssektioner (5 µm i diameter) av en del färgades med hematoxylin-eosin för att undersöka antalet hårsäckar och de histologiska fynden. Den andra delen av vävnaden frystes i flytande kväve för enzymanalys och immunanalys.

Analys av enzymaktivitet

Hudvävnad homogeniserades i 4 volymer fosfatbuffert (pH 7,4). Homogenatet centrifugerades vid 3,000 rpm i 20 minuter, och supernatanten användes för analys av -glutamyltranspeptidas (-GTP) och alkaliskt fosfatas (ALP) aktiviteter med användning av p-nitrofenolfosfat (PNPP)-DEAV som substrat [1,21].

Kvantifiering av tillväxtfaktorer

Epidermal tillväxtfaktor (EGF) och vaskulär endotelial tillväxtfaktor (VEGF) kvantifierades med hjälp av enzymkopplade immunosorbentanalyssatser (ELISA) (R&D Systems, Minneapolis, USA) enligt tillverkarens instruktioner [1,22].

Behandling för inflammation

ICR-möss (7 veckor gamla, n=8/grupp) behandlades oralt med LJE (18 eller 54 mg/kg), CTE (54 eller 162 mg/kg) eller deras blandning (18 plus 54 eller 54 plus 162 mg/kg) en gång om dagen i 7 dagar [16]. På den första dagen av LJE- och CTE-behandling injicerades mössen subkutant med 10 ml steril luft på baksidan för att bilda en påse [16,23,24]. Efter 2 och 5 dagar återinjicerades påsen med 5 ml luft. En timme efter den sista LJE- och CTE-behandlingen injicerades 1 ml karragenan (1 procent i saltlösning; Sigma-Aldrich, St. Louis, USA) eller dess vehikel (saltlösning) i påsen.

Analys av exsudat

Luftpåsen tvättades med 1 ml kall koksaltlösning 6 timmar efter karragenaninjektion och nettovolymen

av sköljvätska registrerades [16]. Totalt antal inflammatoriska celler inklusive neutrofiler, monocyter och lymfocyter bestämdes med användning av en kolterräknare. Koncentrationerna av NO och prostaglandin E2 (PGE2) bestämdes med Griess-reagens (Sigma-Aldrich) och

enzymimmunoassay (EIA) med användning av ett Correlate-EIA-kit (Assay Designs, Ann Arbor, USA), respektive [16].

Cistancheextrahera anti-aging och mot håravfall

Statistisk analys

Data presenteras som medel±standardfel. Den statistiska signifikansen bestämdes genom envägsanalys av varians, följt av posthoc Tukeys multipeljämförelsetest. P-värden<0.05 were="" considered="" to="" be="" statistically="">

Resultat

Applicering av Minoxidil (3 procent), ett referensmaterial, underlättade markant hårväxten hos C57BL/6-möss, och uppvisade en nästan full täckning (92,4 procent) av det rakade området (figur 1, 2B) jämfört med 29,2 procent i normala tillväxt (figur 1, 2A) på dag 21. Även om den var mindre effektiv än applicering av Minoxidil, underlättade oral behandling av LJE också hårväxten, vilket ledde till 33,5 och 69,1 procent täckning vid 18 respektive 54 mg/kg (figur 1, 2C, 2D). CTE var också effektiv för att förbättra hårväxten och nådde 73,6 och 80,4 procent

täckning vid 54 respektive 162 mg/kg (figur 1, 2E, 2F). Kombinationsterapi med höga doser av LJE (54 mg/kg) och CTE (162 mg/kg) förbättrade hårtillväxten anmärkningsvärt från dag 12, jämförbart med effekten av Minoxidil (figur 1, 2H), även om låga doser av LJE (18 mg/kg) och CTE (54 mg/kg) utövar en synergistisk effekt endast i tidig fas (figur 1, 2G).

Jämfört med normala hårsäckar (Figur 3A) förbättrade Minoxidil-applikationen hårsäckarnas integritet och visade större folliklar och tjockare hårstrån (Figur 3B). Sådana effekter hittades också i huden på möss som behandlats med LJE och/eller CTE (figur 3C-3H). Speciellt var den hårsäcksstärkande effekten av kombinationsbehandling av LJE och CTE jämförbar med den för Minoxidil.

Applicering av minoxidil ökade aktiviteten av -GTP som inducerar hårsäckarna till anagen fas med 90-120 procent

dag 14 och 21, jämfört med nivån av normal hud (Figur 4). LJE (54 mg/kg) ökade också enzymaktiviteten, även om det fanns stora variationer. CTE utövade liknande effekter, vilket signifikant förstärkte - GTP-aktiviteten på dag 14. Intressant nog ökade kombinationsbehandling av LJE och CTE enzymaktiviteten ytterligare högre än när extrakten användes ensamma.

ALP-aktivitet, en markör för bentillväxt och angiogenes, ökade signifikant i huden dag 14 och 21 efter topisk applicering av Minoxidil (Figur 5). LJE och CTE ökade också ALP-aktiviteten efter oral administrering på ett dosberoende sätt. Speciellt förstärktes enzymaktiviteten synergistiskt genom kombinerad behandling med LJE och CTE.

I analysen av EGF, en välkänd hårväxtfaktor, ökade Minoxidil-applikationen nivån av EGF

3,5 gånger normal kontroll både dag 14 och 21 (Figur 6). LJE (18 mg/kg) ökade EGF endast dag 21, medan CTE (162 mg/kg) kraftigt uppreglerade sin produktion dag 14 och 21. Det är av intresse att notera att kombinationsbehandlingen av LJE och CTE även kl. låga doser uppvisade markanta synergistiska effekter.

Minoxidilbehandling ökade också nivån av VEGF med 50-80 procent över kontrollvärdet (Figur 7). Även om LJE var ineffektivt, utövade CTE anmärkningsvärda förbättrande effekter. Dessutom visade kombinationsterapi av LJE och CTE en synergistisk aktivitet i den tidiga fasen på dag 14.

Injektion av karragenan i ICR-musluftpåsen ökade exsudatvolymen i påsen 6 gånger kontrollnivån (tabell 1). Sådan ökad utsöndring försvagades signifikant genom behandling med LJE (18 och 54 mg/kg) eller CTE (54 och 162 mg/kg). Noterbart minskade den kombinerade behandlingen med LJE och CTE ytterligare

exsudatvolymen, jämfört med de individuella effekterna. Antalet inflammatoriska celler ökades drastiskt genom karragenaninjektion: 34,6-, 4,2- och 24,9-faldiga kontrollnivåer för neutrofiler, monocyter respektive lymfocyter (tabell 1). LJE och CTE reducerade emellertid signifikant de inflammatoriska cellerna på dosberoende sätt, där LJE var något överlägsen CTE. Förväntat uppnåddes synergistiska effekter i den inflammatoriska cellinfiltrationen genom samtidig administrering av LJE och CTE.

Parallellt med den inflammatoriska cellinfiltrationen i påsen ökade NO- och PGE2-innehållet i påsen också drastiskt efter karragenaninjektion (tabell 1). I jämförelse med den milda effekten av LJE,

CTE sänkte NO-koncentrationen markant. Kombinationsbehandling av LJE och CTE minskade NO-nivån ytterligare på ett dosberoende sätt. På liknande sätt var den ökade PGE2-nivån synergistisk

undertryckt av kombinationsterapi av LJE och CTE (tabell 1).

Cistancheextrakt förstärkerimmunitetoch förhindrar håravfall

Diskussion

Människohuvudet har i genomsnitt 100,000 hårsäckar.

Under en livstid växer och faller varje follikel cirka 20 gånger, vilket visar dagligt håravfall på 100 hårstrån [25]. Håravfall inklusive alopeci och håravfall är ett plågsamt tillstånd för män och kvinnor, särskilt i det moderna samhället. Därför är det av stor vikt att utveckla nya terapier som förhindrar håravfall och förbättrar hårbehandlingen; dvs vaskulär utsöndring och inflammatorisk cellinfiltration undertrycktes synergistiskt. I kvantitativ analys kontrollerades huvudsakliga inflammatoriska mediatorer NO och PGE2 väsentligen efter oral samtidig administrering av LJE och CTE. Intressant nog, eftersom LJE uppvisade antiinflammatorisk aktivitet högre än den för halvrenat fucoidan [16], antas det att det kan finnas ytterligare en eller flera aktiva ingredienser, förutom fucoidan, i LJE.

Sammantaget indikerar resultaten att kombinationsbehandling med LJE och CTE förbättrar håravfall genom att uppreglera tillväxtfaktorer och relaterade enzymaktiviteter och delvis via antiinflammatorisk potential. Därför föreslås det att en kombination som inkluderar LJE och CTE i lämpliga kliniska doser och förhållanden skulle kunna vara ett kandidatrecept för patienter med håravfall.

Erkännanden

Denna forskning fick ekonomiskt stöd av den ledande industriutvecklingen för ekonomisk region vid Chungcheongs ledande industrikontor, Korea Institute for Advancement of Technology (KIAT) och Ministry of Knowledge Economy (MKE), och delvis av High Value-added Food Technology Development Program , Ministeriet för jordbruk, livsmedel och landsbygdsfrågor (MAFRA; bidragsnummer 113034-3).

Intressekonflikt Författarna förklarar att det inte finns någon ekonomisk intressekonflikt för att publicera dessa resultat.

Referenser

1. Kim JS, Kang BS, Park HJ, Kim DY, Hwang SY, Nam SY, Yun YW, Lee BJ. Främjande effekt av örtextraktblandningar på håråterväxt hos C3H/HeJ-möss. J Biomed Res 2009; 10(3): 99-108.

2. Paus R, Cotsarelis G. Hårsäckarnas biologi. N Engl J Med 1999; 341(7); 491-497.

3. Cotsarelis G. Hårsäcken: dör efter uppmärksamhet. Am J Pathol 1997; 151(6): 1505-1509.

4. Cotsarelis G, Sun TT, Lavker RM. Etikettbevarande celler finns i utbuktningsområdet av pilosebaceous enhet: implikationer för follikulära stamceller, hårcykeln och hudkarcinogenes. Cell 1990; 61(7): 1329-1337.

5. Oshima H, Rochat A, Kedzia C, Kobayashi K, Barrandon Y. Morfogenes och förnyelse av hårsäckar från vuxna multipotenta stamceller. Cell 2001; 104(2): 233-245.

6. Burton JL, Marshall A. Hypertrichosis på grund av minoxidil. Br J Dermatol 1979; 101(5): 593-595.

7. Meisheri KD, Cipkus LA, Taylor CJ. Verkningsmekanism av minoxidilsulfat-inducerad vasodilatation: en roll för ökad K plus permeabilitet. J Pharmacol Exp Ther 1988; 245(3): 751-760.

8. Buhl AE, Waldon DJ, Baker CA, Johnson GA. Minoxidilsulfat är den aktiva metaboliten som stimulerar hårsäckarna. J Invest Dermatol 1990; 95(5): 553-557.

9. Kaufman KD, Dawber RP. Finasteride, en typ 2 5alfa-reduktashämmare, vid behandling av män med androgenetisk alopeci. Expert Opin Investig Drugs 1999; 8(4): 403-415.

10. Feldman SC, Reynaldi S, Stortz CA, Cerezo AS, Damont EB. Antivirala egenskaper hos fucoidanfraktioner från Leathesia difformis. Phytomedicine 1999; 6(5): 335-340.

11. Wang J, Zhang Q, Zhang Z, Song H, Li P. Potentiell antioxidant- och antikoagulantkapacitet hos fucoidanfraktioner med låg molekylvikt extraherade från Laminaria japonica. Int J Biol Macromol 2010; 46(1): 6-12.

12. Bojakowski K, Abramczyk P, Bojakowska M, Zwoliñska A, Przybylski J, Gaciong Z. Fucoidan förbättrar det renala blodflödet i det tidiga skedet av njurischemi/reperfusionsskada hos råtta. J Physiol Pharmacol 2001; 52(1): 137-143.

13. Li N, Zhang Q, Song J. Toxikologisk utvärdering av fucoidan extraherad från Laminaria japonica i Wistar-råttor. Food Chem Toxicol 2005; 43(3): 421-426.

14. Shimoda H, Tanaka J, Takahara Y, Takemoto K, Shan SJ, Su MH. De hypokolesterolemiska effekterna av Cistanche tubulosa-extrakt, en kinesisk traditionell råmedicin, hos möss. Am J Chin Med 2009; 37(6): 1125-1138.

15. Yamada P, Iijima R, Han J, Shigemori H, Yokota S, Isoda H. Hämmande effekt av akteosid isolerad från Cistanche tubulosa på kemisk mediatorfrisättning och inflammatorisk cytokinproduktion av RBL-2H3- och KU812-celler. Planta Med 2010; 76(14): 1512- 1518.

16. Kyung J, Kim D, Park D, Yang YH, Choi EK, Lee SP, Kim TS, Lee YB, Kim YB. Synergistiska antiinflammatoriska effekter av Laminaria japonica fucoidan och Cistanche tubulosa-extrakt. Lab Anima Res 2012; 28(2): 91-97.

17. Chee E, Fong KS, Al Jajeh I, Nassiri N, Rootman J. Föreningen av tårkörtelinflammation med alopecia areata. Orbit 2015; 34(1): 45-50.

18. Brzezinska-Wcislo L, Bergler-Czop B, Wcislo-Dziadecka D, Lis- Swiety A. Nya aspekter av behandlingen av alopecia areata. Postepy Dermatol Alergol 2014; 31(4): 262-265.

19. Hattori M, Ogawa H. Biokemisk analys av hårväxt utifrån aspekter av åldrande och enzymaktiviteter. J Dermatol 1983; 10(1): 45-54.

20. Lee SH, Lee HJ, Baek IJ, Yon JM, Nam SY, Lee BJ, Yun YW, Kim YB, Hwang SY, Hong JT. Effekt av DREAMMO® hårbottenlotion på hårväxtfrämjande i en alopecimodell av C57BL/6 möss. Lab Anima Res 2006; 22(1): 91-96.

21. Handjiski BK, Eichmüller S, Hofmann U, Czarnetzki BM, Paus

R. Alkaliskt fosfatasaktivitet och lokalisering under den murina hårcykeln. Br J Dermatol 1994; 131(3): 303-310.

22. Cross MJ, Dixelius J, Matsumoto T, Claesson-Welsh L. VEGF-receptorsignaltransduktion. Trends Biochem Sci 2003; 28(9): 488-494.

23. Shin S, Jeon JH, Park D, Jang JY, Joo SS, Hwang BY, Choe SY, Kim YB. Antiinflammatoriska effekter av ett etanolextrakt av Angelica gigas i en Carrageenan-luftpåseinflammationsmodell. Exp Anim 2009; 58(4): 431-436.

24. Kim D, Park D, Kyung J, Yang YH, Choi EK, Lee YB, Kim HK, Hwang BY, Kim YB. Antiinflammatoriska effekter av Houttuynia cordata superkritiskt extrakt i carrageenan-luftpåseinflammationsmodell. Lab Anima Res 2012; 28(2): 137-140.

25. Rebora A. Patogenes av androgenetisk alopeci. J Am Acad Dermatol 2004; 50(5): 777-779.

26. Shirai A, Ikeda J, Kawashima S, Tamaoki T, Kamiya T. KF19418, en ny förening för att främja hårväxt in vitro och in vivo-musmodeller. J Dermatol Sci 2001; 25(3): 213-218.

27. Kawabe TT, Kubicek MF, Johnson GA, Buhl AE. Användning av gamma-glutamyltranspeptidasaktivitet som en markör för hårcykel och anageninduktion i hårsäckar från mus. J Invest Dermatol 1994; 103(1): 122-126.

28. Hamada K, Suzuki K. Utvärdering av biokemiska index som en hårcykelmarkör i C3H-möss. Exp Anim 1996; 45(3): 251-256.

29. Park SJ, Lee KW, Lim DS, Lee S. Den sulfaterade polysackariden fucoidan stimulerar osteogen differentiering av mänskliga fetthärledda stamceller. Stamceller Dev 2012; 21(12): 2204-2211.

30. Danilenko DM, Ring BD, Pierce GF. Tillväxtfaktorer och cytokiner i hårsäcksutveckling och cykling: färska insikter från djurmodeller och potentialerna för klinisk terapi. Mol Med Today 1996; 2(11): 460-467.

31. Ozeki M, Tabata Y. In vivo främjade tillväxten av möss hårsäckar genom kontrollerad frisättning av tillväxtfaktorer. Biomaterials 2003; 24(13): 2387-2394.

32. Fujie T, Katoh S, Oura H, Urano Y, Arase S. Den kemotaktiska effekten av en dermal papillcell-härledd faktor på yttre rotslidsceller. J Dermatol Sci 2001; 25(3): 206-212.

33. Stenn KS, Paus R. Kontroller av hårsäckscykling. Physiol Rev 2001; 81(1): 449-494.

34. Chapman RE, Hardy MH Effekter av intradermalt injicerade och topiskt applicerade musepidermal tillväxtfaktor på ulltillväxt, hud och ullfolliklar hos merinofår. Aust J Biol Sci 1988; 41(2): 261-268.

35. Dvorak HF, Brown LF, Detmar M, Dvorak AM. Vaskulär permeabilitetsfaktor/vaskulär endoteltillväxtfaktor, mikrovaskulär hyperpermeabilitet och angiogenes. Am J Pathol 1995; 146(5):

1029-1039.

36. Ellis RA, Moretti G. Vaskulära mönster associerade med categen hårsäckar i den mänskliga hårbotten. Ann NY Acad Sci 1959; 83: 448- 457.

37. Stenn KS, Fernandez LA, Tirrell SJ. De angiogena egenskaperna hos råttvibrissa-hårsäcken är associerade med löken. J Invest Dermatol 1988; 90(3): 409-411.

38. Yano K, Brown LF, Detmar M. Kontroll av hårväxt och follikelstorlek genom VEGF-medierad angiogenes. J Clin Invest 2001; 107(4): 409-417.

39. Lachgar S, Charveron M, Ceruti I. Distribution av VEGF-mRNA-indiferent hårsäcksstadier genom fluorescens in situ-hybridisering kombinerat med konfokal lasermikroskopi. I: Hair Research for the Next Millennium (Van Neste DJJ, red), Elsevier, Amsterdam, 1996; sid 407-412.

40. Freyschmidt-Paul P, Sundberg JP, Happle R, McElwee KJ, Metz S, Boggess D, Hoffmann R. Framgångsrik behandling av alopecia areata-liknande håravfall med kontaktsensibilisatorn squaric acid dibutylester (SADBE) i C3H/HeJ möss. J Invest Dermatol 1999; 113(1): 61-68.