Effekter av polygona-polysackaros på ferroptos hos råttor med diabetesnefropati

Nyckelord:Diabetisk nefropati;polygona-polysackaros; ferroptos; transferrin; FTH1; GPX4

 

Diabetisk nefropati(DN) är en allvarlig mikrovaskulär komplikation avdiabetes mellitus[1] DN är ett seriöstmikrovaskulär komplikation av diabetesmellitus [1], uppträder vanligtvis som mikroalbuminuri i de tidiga stadierna, följt av progressiv utveckling av Det tidiga stadiet uppträder vanligtvis med mikroalbuminuri, följt av progressiv utveckling av massiv proteinuri, progressiv minskning av glomerulär filtrationshastighet och progressiv ökning av blodkreatinin [2] ]. progressiv ökning av kreatinin[2]. Om den lämnas obehandlad kan sjukdomen leda till kronisk sjukdom. Om den lämnas obehandlad kan den leda till kronisk progressiv njurskada och slutligen sjukdom i slutstadiet. Om det lämnas obehandlat kan det leda till kronisk progressiv njurskada och så småningom njursvikt i slutstadiet[3]. Järndöd Järndöd är en järnberoende ansamling av omättade fettsyror järndöd är en järnberoende ansamling av omättade fettsyror fosfolipidoxidation som leder till celldöd, huvudsakligen manifesterad av Den huvudsakliga manifestationen av järndöd är ansamling av järnberoende intracellulära lipidperoxider[4] . [4] . Studier Det har visat sig att skada på tubulära njurepitelceller är nära förknippad med järndöd[5]. Wang et al.

Wang et al[6] fann att uttryck av glutationperoxidas 4 (GPX4) i njurtubulärt interstitiellt uttryck (GPX4) är nära relaterat till svårighetsgraden och progressionen av DN-sjukdom. GPX4, som ett viktigt mål för att utlösa järndödsprogram, är en sensor för oxidativ stress och celldödssignalering, och minskat GPX4-uttryck leder till en signifikant ökning av levande GPX4-uttrycksminskningar, vilket resulterar i en signifikant ökning av levande syre i kroppen[ 7] . . Därför kan hämning av renal tubulär epitelcellsdöd genom reglering av järndöd Därför kan hämning av renal tubulär epitelcellsdöd genom reglering av järndöd för att lindra DN-njurskada vara en effektiv strategi för att behandla DN. Därför kan hämning av renal tubulär epitelcellsdöd genom reglering av järndöd kan vara en effektiv strategi för DN-behandling.
DepolysackaridavC. flavusär den vanligaste och viktigaste farmakologiska Den är en av de mest förekommande och viktigaste farmakologiska komponenterna i C. flavus. Den experimentella studien fann att det spelar en viktig roll för att förbättra njurfunktionen hos DN och lindra det inflammatoriska svaret. Li et al[8]. Li et al[9]. fann att Li et al[9] fann att ingreppet av C. flavus polysackarid signifikant förbättrade glukoslipidmetabolismstörningar och insulintolerans hos diabetiska möss. Li et al. En annan studie fann att glukos-, 24-timmarsglukos- och insulintoleransen hos möss med diabetisk nefropati förbättrades avsevärt efter ingreppet av gul extraktpolysackarid. En annan studie fann att blodsocker, 24-h urinmikroalbumin, blodkreatinin (SCr) och blodkarbamidkväve (BUN) i modellmöss för diabetisk nefropati förbättrades avsevärt efter ingreppet av Fructus flavus polysackarid. och nivåerna av ureakväve i blodet (BUN) reducerades signifikant i en modell för diabetisk nefropati[10]. Behandlingen av DN med polysackarid från Flos Chrysanthemi Den specifika mekanismen för dess verkan är dock inte klar. I denna studie användes därför en diet med hög fetthalt kombinerad med streptozotocin (STZ) injektion för att etablera en DN-råttmodell.
Därför, i denna studie, etablerade vi en DN-råttmodell med diet med hög fetthalt kombinerad med streptozotocin (STZ) injektion, och observerade effekten av C. flavus polysackarid på järndöd hos råttor. Därför genomfördes den föreliggande studien för att observera effekten av C. flavus-polysackarid på järndöd hos råttor som utfodrats med fettrik kost kombinerad med streptozotocin (STZ)-injektion, och för att klargöra verkningsmekanismen för C. flavus-polysackarid på DN.

Material och metoder
1.1 Djur
Femtio friska SD-råttor av hankön med en kroppsmassa på (200±20) g hölls vid Institute of Radiology, Chinese Academy of Medical Sciences, Peking, Kina, under en 12-h ljus-mörker cykel vid en temperatur på (25±2) grader och relativ fuktighet på (50±15) procent och matas ad libitum. Diet med hög sockerhalt och hög fetthalt (10 procent ister, 20 procent sackaros, 2,5 procent kolesterol, 67,5 procent konventionellt foder), (4,8 procent fett, 20 procent protein och 59,4 procent totalt socker), Beijing Huafukang Biotechnology Co. Detta experiment godkändes av Cangzhou Hospital of Integrative Medicine (CZX2022-KY-023).

1.2 Läkemedel och beredning
PolysackaridavFlos Astragalus(renhet 70 procent, satsnummer S27804), bereddes Shanghai Yuanye Biotechnology Co. Ltd. Ltd. med saltlösning i en koncentration av 200 respektive 800 mg/ml. 800 mg/ml lösning. Irbesartan-tabletter (parti 8A411), Sanofi (Hangzhou) Pharmaceutical Co. (Hangzhou) Pharmaceutical Co., Ltd. bereddes i saltlösning med 30 mg/ml. lösning.

 

1.3 Huvudreagenser och instrument
Urinprotein (batchnummer C035-2-1), SCr (batchnummer C011-2-1), BUN (batchnummer C013-2-1) BUN (batchnummer C013-2-1), malondialdehyd ( MDA, batchnummer C003-1- 2), glutation (GSH, parti C006-2-1), totalt järnjoninnehåll (batchnummer A039-2-1), Nanjing Jiancheng Biological Engineering Research Institute of Biological Engineering , Nanjing, Kina; Transferrin (batchnummer ab278498), ferritin Transferrin (parti ab278498), ferritin tung kedja (FTH1, parti ab75973), GPX4 (parti ab252833) och -ferritin (parti ab252833). ab252833), -aktin (parti ab179467), Abcam, Storbritannien. iMark680 multifunktionell enzymmarkör, Bio-Rad, USA. Fresco17 centrifug, Thermo, USA; 5810 bänkfryst centrifug, Eppndorf, Tyskland; ABI Prism® 7500 fluorescenskvantifiering Applied Biosystems, USA; DYCZ-24DN vertikal elektroforestank, Beijing Liuyi Instrument Factory, Peking, Kina; SH-523 chemiluminescence imaging Ltd, Hangzhou Shenhua Technology Co.

 

1.4 Modellering, gruppering och läkemedelsadministration
Efter 1 veckas adaptiv utfodring valdes 10 råttor slumpmässigt ut som normala. De återstående 40 råttorna hänvisades till litteraturmetoden [11] för att fastställa DN-råttmodellen. Råttorna matades med kost med hög socker och hög fetthalt i 7 veckor och fastade sedan i 12 timmar utan vatten. Råttorna matades med hög socker och hög fetthalt i 7 veckor, sedan fastade de med mat och vatten i 12 timmar. STZ injicerades intraperitonealt med 30 mg/kg. Efter 72 timmar samlades blod från svansvenen för att detektera slumpmässigt blodsocker, och ett blodsocker på större än eller lika med 16,7 mmol/L ansågs vara framgångsrik modellering av diabetes. Råttorna matades med kost med högt socker och hög fetthalt i 1 vecka, och 24-h urin samlades upp från den metaboliska buren.

 

 

1.5.5 Western blot-analys
Samla njurvävnad, tillsätt 150 μL RIPA-lysbuffert, homogenisera Proteinsupernatanten behölls efter centrifugering. Den totala proteinkoncentrationen bestämdes med användning av BCA-proteinanalyskitet. Den totala proteinkoncentrationen bestämdes genom att använda BCA-proteinanalyskit och proteinkoncentrationen homogeniserades. Lika mängder protein 20 ug, 8 procent -12 procent SDS-PAGE användes för proteinseparation och proteinet överfördes. Membranen stängdes med 5 procent skummjölkspulver vid rumstemperatur under 2 timmar. Primär anti-råttaantikropp Transferrin (1:2 000), FTH1 (1:3 000) och GPX4 (1:3 000) tillsattes. 3,000), GPX4 (1:3,000), -aktin (utspädd 1:5,000), och inkuberades över natten vid 4 grader . Inkubera över natten vid 4 grader. Membranet tvättades, sekundär antikropp (1:9 000) tillsattes och inkuberades i 2 timmar vid rumstemperatur. Membranen tvättades med TBST, utvecklades genom ECL-kemiluminescens och detekterades med användning av
Bild J-mjukvara användes för att analysera gråskalevärdena för banden.

 

1.6 Statistiska metoder
SPSS Statistics25.0 statistisk programvara användes för analys. Experiment Resultaten uttrycktes som xˉ±s, och alla data testades för normalitet och chi-kvadrat. Alla data testades för normalitet och chi-kvadrat, och t-test användes om de var uppfyllda och icke-parametriska tester användes om de inte var uppfyllda. P<0.05 indicates that the difference is statistically significant.

 

2 resultat
2.1 Effekter av Flavopiridium-polysackarid på kroppsmassa och fasteblodsocker hos modellråttor Jämfört med normalgruppen minskade kroppsmassan hos råttor i modellgruppen signifikant (P<0.01) and FBG was significantly increased (P<0.01); compared with the model group, the body mass of rats in the positive drug group was significantly increased (P<0.05), and the differences in FBG of rats in each group were not statistically significant (P>0.05). Se tabell 2.

2.2 Effekter av Flavopiridium-polysackarid på njurfunktionsindex hos modellråttor
Jämfört med den normala gruppen var SCr, BUN-nivån och 24 timmars urinproteininnehåll hos råttor i modellgruppen signifikant högre (P<0.01); compared with the model group, the Cr, BUN level and 24 h urine protein content of rats in the positive drug group and the high dose group of Flavopiridium polysaccharide were significantly lower (P<0.05, P<0.01). See Table 3.

2.3 Effekter av gul extraktpolysackarid på den histopatologiska morfologin hos njurarna hos modellråttor
Glomerulus och tubulär struktur hos normala gruppråttor visade inte några abnormiteter, och tylakoidmembranet och tylakoidstroman prolifererades inte och det fanns ingen inflammatorisk cellinfiltration, etc.; modellen Hos modellråttorna observerades fokal tubulär degeneration och atrofi, och det glomerulära basalmembranet var något. Råttorna i modellgruppen visade fokal tubulär degeneration och atrofi, något förtjockat glomerulärt basalmembran, tylakoidhyperplasi och fettdegeneration av glomeruli och tubuli. Råttorna i varje läkemedelsadministreringsgrupp visade minskade lesioner, och förbättringen var mer uppenbar i den positiva läkemedelsgruppen och den höga dosen av Flavopiridium-polysackarid. Förbättringen var mer uppenbar i den positiva läkemedelsgruppen och den höga dosen av Flavopiridium polysackarid. Se figur 1.