Glycosider of Cistanche förbättrar inlärning och minne i råttmodellen för vaskulär demens

för mer information:ali.ma@wecistanche.com

J. CHEN1,2, S.-N. ZHOU1, Y.-M. ZHANG2, Y.-L. FENG2, S. WANG2

1 Institutionen för neurologi, Qilu sjukhus vid Shandong University, Jinan, Kina. & Brain Science Research Institute, Shandong University, Shandong, PR Kina

2Nurologiska institutionen, Folksjukhuset i den autonoma regionen Inre Mongoliet, PR Kina

Jin Chen och Yan-Mei Zhang bidrog lika mycket till denna studie

Abstrakt.– MÅL:Glykosider av cistanche(GC) extraheras från Xin JiangCistanche, som används ofta som en kinesisk ört. Denna studie syftar till att utvärdera effekterna av GC på vaskulär demens (VD).

MATERIAL OCH METODER: VD-modellen etablerades genom ligaturen av den bilaterala gemensamma halspulsådern hos vuxna Wistar-råttor, som fick daglig ip-administrering av saltlösning, GC (10 mg/kg kroppsvikt/d, ip) eller oxiracetam (450 mg/kg kroppsvikt/d, ip) i 14 dagar. Morris Water Maze-test värderade råttornas kognitiva prestanda. Hippocampus dissekerades och utsattes för proteomik och immunhistokemisk analys. RESULTAT: GC-gruppen visade signifikant lägre flyktlatens än VD-gruppen fyra och fem dagar efter operationen. De visade ingen signifikant skillnad jämfört med den skenopererade gruppen och oxiracetamkontrollgruppen. I hippocampus visade de 21 proteinfläckarna i GC-gruppen olika uttrycksnivåer jämfört med VD-gruppen. Detta inkluderade de fyra proteinerna som visade en signifikant skillnad: tre uppreglerade proteiner tioredoxinliknande protein 1, dubbelspecificitet mitogenaktiverat proteinkinaskinas 1 och dihydropyridinasrelaterat protein 2 (CRMP-2) och en nedreglerat proteinglutationsyntetas. Immunhistokemianalys visade att P-tau-proteinnivån var signifikant högre i VD-modellgruppen än i den skenopererade gruppen (p < 0,05).="" efter="" gc-behandling="" visade="" p-tau-proteinnivån="" i="" vd-modellråttor="" en="" signifikant="" minskning="" jämfört="" med="" vd-gruppen="" som="" behandlades="" med="" saltlösning="" (p="">< 0,05).="" slutsatser:="" gc="" spelar="" en="" avgörande="" roll="" för="" att="" skydda="" hippocampus-neuronerna="" i="" vd="" genom="" att="" minska="" p-tau-fosforyleringen="" och="" öka="" crmp-2-uttrycksnivån.="" farmekologisk="" manipulation="" av="" gc="" erbjuder="" en="" ny="" möjlighet="" för="">

Nyckelord:

Vaskulär demens, Glycosider of cistanche, Proteomics, P-tau, Dihydropyrimidinas-relaterat protein 2.

Klicka på Cistanche och cistanche deserticola ma för att förbättra minnet

Introduktion

Vaskulär demens (VD) är den näst ledande senila demenssjukdomen och orsakas huvudsakligen av ischemisk cerebrovaskulär sjukdom. VD leder till heterogen kognitiv funktionsnedsättning, och nya effektiva terapeutiska läkemedel som behandlar eller förhindrar progression av VD behövs1. Det finns dock fortfarande ingen effektiv kinesisk ört för att förbättra kognitiv försämring inducerad av cerebral ischemi.

Glykosider av cistanche (GC) har använts i stor utsträckning som en ört med neuroprotektiva effekter. Herba Cistanches Extract förbättrarinlärning och minneav möss genom att främja neuronal celldifferentiering, neurittillväxt och synapsbildning2. Glykosider av cistanche kan förhindra apoptos i cerebellära granulneuroner och utöva en anti-apoptoseffekt genom att hämma aktiveringen av kaspas-3 och kaspas-83. Echinakosid, en viktig aktiv komponent i Herba Cistanches, är tillräcklig för att skydda neuronala celler från rotenonskada genom att aktivera Trk-signalering4. Mekanismerna genom vilka GC förbättrar kognitiv funktionsnedsättning vid VD är fortfarande i stort sett okända.

Tau-protein är ett neuronalt mikrotubuli-associerat protein som stabiliserar neuronala mikrotubuli. Fosforylering av tau-protein (P-tau) påverkar dess förmåga att interagera med mikrotubuli och påverkar synaptisk transmission. Ansamlingen av neurofibrillära trassel (NFT) består av P-tau-protein och är en av de viktigaste egenskaperna hos Alzheimers sjukdom (AD)5. Det är välkänt att VD och AD är de två vanligaste demenssjukdomarna. De delar en gemensam korrelation med vaskulära riskfaktorer, såsom högt blodtryck, diabetes mellitus och hyperkolesterolemi. Därför kan P-tau också vara inblandad i VD.

Vi utvärderade effekterna av GC påinlärningsminnesfunktioni en råttmodell av VD och utförde proteomik och immunhistokemisk analys på hippocampus hos VD-råttor för att ge insikt i de neuroprotektiva effekterna av GC. Våra resultat visade att GCförbättrad inlärning och minnei VD-råttor, och ändrade nivåerna av proteiner såsom P-tau i VD-råttor.

Material och metoder

Djur

Sex månader gamla Wistar-hanråttor (vikt 230- 270 g) tillhandahölls av försöksdjurscentret i Hubeiprovinsen, Kina. Alla försöksdjursförsök utfördes i enlighet med djurvårdsriktlinjerna och lokala etiska föreskrifter på Wuhan No. 1 Hospital, Kina. Det etiska godkännandenumret är 00014834. Djuren hölls separat i grupper om 4 per bur vid 25 grader med en 12-timmes ljus/12-timmes mörk cykel och fri tillgång till mat och vatten. Djur (n=45) tilldelades slumpmässigt till fyra grupper: modellgrupp (n=12), skenopererad grupp (n=11), GC-behandlad grupp (n{{14} }), och oxiracetambehandlad kontrollgrupp (n=10).

Bilateral Ligering av halspulsådern (2-VO)

Under djup anestesi med 10 procent kloralhydrat (Tianjin Damao Chemical Reagent Factory reagens, Tianjin, Kina) (350 mg/kg kroppsvikt,

ip), bilaterala gemensamma halsartärer (CCA) separerades försiktigt från de omgivande vävnaderna och ligerades sedan tätt med suturen. Huden rekonstruerades därefter och råttor hölls därefter vid rumstemperatur och återvände till hemburen tills återupplivning. Sham-opererade kontrollråttor utsattes för samma kirurgiska procedur utan CCA-ligering. VD-råttor behandlades med GC (10 mg/kg kroppsvikt/d, ip) eller oxiracetam (450 mg/kg kroppsvikt/d, ip) omedelbart efter operationen under 14 på varandra följande dagar. Modellgruppen injicerades med samma volym normal saltlösning.

Morris vattenlabyrinttest

MWM-testet utfördes enligt en tidigare beskriven metod7. Testområdet bestod av en cirkulär pool fylld med vatten (25 ± 1 grad), som gjordes ogenomskinlig med mjölk så att råttorna inte kunde se undervattensplattformen 1 cm under vattenytan. Poolen delades upp i fyra kvadranter (märkta zoner I, II, III och IV) och en plattform var nedsänkt i zon II. Visuella signaler placerades på väggen i testrummet. Djuren placerades i vattnet vid en av de fyra startkvadrantpunkterna, som varierades slumpmässigt under försöken. Råttorna fick 2 min att hitta plattformen och sitta på den i 15 s. Råttor som inte lyckades hitta platsen inom en given tid leddes försiktigt till plattformen och fick stanna på den i 15 sekunder. Ett automatiskt spårningssystem användes för att registrera simbanan, latens, simdistans och tid i varje zon. Alla råttor avlivades två veckor efter MWM-testet för den efterföljande analysen.

Proteinextraktion

Under djup anestesi med 10 procent kloralhydrat halshuggades alla råttor som utsattes för MWM-testet. Hippocampus vävnader skördades snabbt på is och frystes sedan omedelbart i flytande kväve. Alla vävnader homogeniserades under flytande kväve med användning av en mortel och mortelstöt och uppsamlades i lysbuffert (7 M urea, 2 M tiourea, 2 procent CHAPS, 20 mM Tris). Olösliga partiklar avlägsnades genom centrifugering vid 12, 000 rpm under 20 minuter vid 4 grader. Kontaminerade nukleinsyror i proverna bröts av intermittent ljudoscillation under 5 min. Supernatanterna uppsamlades efter centrifugering vid samma betingelser som beskrivits ovan. Proteinkoncentrationen i supernatanterna mättes med Bradford-analys och supernatanterna lagrades vid 80 grader.

Tvådimensionell gelelektrofores

Proteinalikvoterna (120 µg) justerades med en rehydreringsbuffert (7 M urea, 2 M tiourea, 4 procent CHAPS, 1 procent vikt/volym DTT, 0,5 procent IPG-buffert och ett spår av bromfenolblått) i en volym av 35 0 µL. Isoelektrisk fokusering (IEF) utfördes i IPG-remsor (pH 4-7, storlek 22 cm) vid 300 V i 12 minuter, 700 V i 18 minuter, 1500 V i 1,5 timmar, 9900 V för 3 timmar, 9990 V i 6,5 timmar och sedan 600 V i 20 timmar på ett Ettan IPGphor II-system (GE ETTAN IPGPHOR3). Efter IEF-programmet ekvilibrerades remsorna i en IPG-ekvilibreringsbuffert I (6 M urea, 2 procent SDS, 30 procent glycerol, 0,375 M Tris, pH 8,8, 20 mg/ml DTT och ett spår av bromfenolblått) och alkylerades sedan (25 mg/ml jodacetamid istället för DTT i en ekvilibreringsbuffert) under 15 min. 2-DE utfördes på 12,5 procent SDS polyakrylamidgeler (24 cm×19,5 cm×1,0 mm) med 0,5 procent agarosförseglingslim, med användning av Ettan DALT Six elektroforessystem (GE ETTAN DALTsix, PA, USA). Elektrofores utfördes vid 2 W under 45 minuter, följt av separation vid 17 W under fyra timmar tills bromfenolblått nästan nådde botten av gelerna. Proteinfläckarna visualiserades via silverfärgning (Tianjin Damao Chemical Reagent Factory) i analytiska geler. 2-DE-bricka bildad i tre exemplar och från tre oberoende proteinextraktioner för varje grupp.

Preparativ gelelektrofores

Proteinprover (600 µg) från fyra grupper av råttor utsattes för 2-DE enligt metoden som beskrivs ovan. Proteinfläckarna visualiserades via Coomassie briljant blå färgning (Tianjin Damao Chemical Reagent Factory) i preparativa geler.

Bildinsamling och analys

Gelbilderna togs på ett {{0}}DE-bildskanningssystem (UMAX Powerlook1100, VT, USA) och analyserades med programvaran Image Master 2D Platinum 5.0 (GE, PA, USA). Proteinfläckarna upptäcktes automatiskt och redigerades sedan manuellt för att ta bort streck, fläckar och artefakter.

Matrix-assisterad laserdesorption jonisering-time-of-flight masspektrometri (MALDI-TOF-MS)

För fingeravtryck av peptidmassa och efterföljande analys skars geler och Coomassie-färgade fläckar avfärgades och tvättades med 100 mM ammoniumbikarbonat och acetonitril, reducerades med DTT vid 60 grader i 40 minuter och alkylerades sedan med IAA i 30 min i mörker. Gelén inkluderades i 50 µL 12 ng/µl modifierad trypsinlösning i 50 mM ammoniumbikarbonat (pH 8,6) vid 37 grader över natten. Peptider extraherades från gelpluggen med 1 procent myrsyra/2 procent acetonitril och koncentrerades med C-18 Zip-Tips. Digestioner observerades (fyra replikat) på ett MALDI-mål med användning av a-cyano 4-hydroxikanelsyra (2 mg/ml i 50 procent acetonitril, 0,1 procent TFA innehållande tio mM ammoniumfosfat) som en matris. Spectra förvärvades på en 4700 MALDI TOF/TOF masspektrometer (Applied Biosystems, NY, USA) och analyserades med GPS Explorer TM (Applied Biosystems) programvara.

Immunhistokemi

Koronala hippocampussektioner fixerades i 4 procent paraformaldehyd innan de bäddades in i paraffin och skars sedan i 4- µm tjocka sektioner. Avslutade koronala hippocampussektioner bearbetades för att släcka endogen peroxidasaktivitet med användning av 3 procent H2O2 i fosfatbuffrad saltlösning. Ospecifika immunreaktioner blockerades vid rumstemperatur under 15 minuter. Sektioner inkuberades sedan med P-tau-antikropp och sekundär antikropp vid rumstemperatur under 3 0 min och visualiserades efter 3,3'-diaminobensidintetrahydroklorid-reaktion (Dako, Tokyo, Japan). Bilderna togs med hjälp av ett ljusmikroskop (Olympus, Tokyo, Japan) och bearbetades med Photoshop-programvara (version 7.0, Adobe, San Jose, CA, USA).

Statistisk analys

Kvantitativa data uttrycktes som medelvärden ± SD. Tvåvägsvariansanalys (ANOVA) utfördes med SPSS 10.0 analysmjukvara (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). p < 0,05="" ansågs="">

Resultat

GC främjar inlärning och minne hos VD-råttor

För att utvärdera effekterna av GC på den kognitiva funktionen hos VD-råttmodellen utförde vi MWM-testet. I MWM-testet visade GC-gruppen signifikant lägre flyktlatens än VD-gruppen vid 4 och 5 dagar efter operationen men visade ingen signifikant skillnad jämfört med den skenopererade gruppen och oxiracetamkontrollgruppen (tabell I). Dessa data tyder på att GC främjar inlärning och minne hos VD-råttor. GC ändrar proteomiska profiler för Hippocampus hos VD-råttor.

Genom proteomisk analys av råtthippocampus fann vi att 21 proteinfläckar i GC-gruppen visade olika uttrycksnivåer jämfört med VD-gruppen. Bland dem visade fyra proteiner en signifikant skillnad i hippocampus hos GC-råttorna (tabell II): inklusive tre uppreglerade proteiner tioredoxinliknande protein 1 (TXNL 1), mitogenaktiverat proteinkinaskinas 1 med dubbel specificitet (MAPKK 1) och dihydropyrimidinas-relaterat protein 2 (DPYSL2); och ett nedreglerat proteinglutationsyntetas (GCL). De typiska tvådimensionella gelelektroforesprofilerna (2-DE) för DPYSL2 visades i figur 1.

GC modulerar P-tau-nivån i Hippocampus hos VD-råttor

Genom immunhistokemi-analys fann vi att P-tau-proteinnivån var signifikant högre i VD-modellgruppen än i den skenopererade gruppen (p < 0.05).="" efter="" gc-behandlingen="" visade="" p-tau-proteinnivån="" i="" vd-modellråttor="" en="" signifikant="" minskning="" jämfört="" med="" vd-gruppen="" behandlad="" med="" saltlösning="" (p="">< 0,05)="" men="" visade="" ingen="" signifikant="" skillnad="" jämfört="" med="" oxiracetamkontrollgruppen="" (figur="">

Diskussion

VD beror på försämring av minne och kognitiv funktion främst orsakad av cerebrovaskulära sjukdomar8,9,10,11. Tvåkärlsocklusionsmodellen (2VO) är enkel och stabil och erkänd som standardmodellen för cerebral ischemi. I denna studie använde vi 2VO-modellen för att etablera VD-djurmodellen. Genom MWM-test fann vi att VD-gruppen visade minskad kognitiv förmåga jämfört med den skenopererade gruppen, vilket bekräftar att vi etablerade VD-modellen framgångsrikt. Baserat på denna modell fann vi att GC-behandling förbättrade den rumsliga kognitiva förmågan hos VD-råttorna i liknande utsträckning med oxiracetam, en positiv kontroll. Dessa data indikerar att GC kan främja rumslig inlärning och minnesförsämring vid VD.

För att undersöka mekanismen genom vilken GC utövar neuroprotektiva effekter på VD, använde vi ett proteomiskt tillvägagångssätt för att screena differentiellt uttryckta proteiner i hippocampus hos VD-råttor. Vi fann att flera proteiner relaterade till energimetabolism, proteinveckning, signalväg och cytoskelett visade olika uttryck i hippocampus hos VD-råttorna som behandlades med GC jämfört med de som behandlades med saltlösning som kontroll.

Ett av de differentiellt uttryckta proteinerna är DPYSL2, även känt som kollapsinresponsmediatorprotein-2 (CRMP-2), som är anrikat i den distala delen av växande axoner i primära hippocampala neuroner och är avgörande för axondifferentiering och neuronal utväxt12,13. Dessutom främjar CRMP-2 mikrotubulusmontering och medierar Ras-signalering för att förbättra bildningen av flera axoner och neuronal polaritet14,15. I denna studie ökades proteinuttrycksnivån för CRMP-2 med 2,28 gånger i GC-gruppen jämfört med VD-gruppen, vilket tyder på en viktig roll för CRMP-2 i potentiella reparationsmekanismer för bildande av neurala nätverk och underhåll av neuronal polaritet i VD.

Dessutom fann vi i den aktuella studien högre P-tau i VD-modellgruppen, men lägre P-tau-uttryck efter GC-behandling. Tau-protein spelar en nyckelroll i morfogenesen av neuroner. I vissa patologiska situationer kan P-tau-protein generera avvikande aggregat som är toxiska för neuroner genom att påverka mitokondriell funktion15. Tidigare studier tyder på att GC kan förbättra mitokondriell energimetabolism med antioxidationsfunktion16,17,18. Intressant nog har CRMP-2-fosforylering också karakteriserats som en beståndsdel av neurofibrillära trassel i AD.

Slutsatser

CRMP2 fosforyleras vanligtvis av cyklinberoende proteinkinas-5 (Cdk5) och glykogensyntaskinas-3 (GSK3) i hjärnan hos AD-patienter, samma kinaser som fosforylerar tau-protein för att generera NFTs19,20. Ytterligare studier behövs för att undersöka om GC reglerar P-tau och CRMP2 uttrycksnivåer i VD genom att reglera Cdk5 och GSK3 aktivitet21,22,23. Sammanfattningsvis tyder våra data på att GC spelar en avgörande roll för att skydda hippocampus neuroner av VD, genom att minska P-tau-fosforylering och öka CRMP-2-expressionsnivån. Farmakologisk manipulation av GC erbjuder en ny möjlighet för utveckling av terapi mot VD.

Erkännanden

Denna studie stöddes av Special Foundation for Taishan Scholars och National Natural Science Fund (30960520).

Intressekonflikt

Författarna förklarar att det inte finns några intressekonflikter.

Referenser

1)GORELICK PB, PANTONI L. Framsteg i vaskulär kognitiv funktionsnedsättning. Stroke 2013; 44: 307-308.

2)CHOI JG, MOON M, JEONG HU, KIM MC, KIM SY, OH MS. Cistanches Herba förbättrar inlärning och minne genom att inducera nervtillväxtfaktorer. Behav Brain Res 2011; 216: 652-658.

3)TIAN XF, PU XP. Fenyletanoidglykosider från Cistanches salsa hämmar apoptos inducerad av 1- metyl-4-fenylpyridiniumjon i neuroner. J Ethnopharmacol 2005; 97: 59-63.

4)ZHU M, LU C, LI W. Övergående exponering för echinakosid är tillräcklig för att aktivera Trk-signalering och skydda neuronala celler från rotenon. J Neurochem 2013; 124: 571-580.

5) MEDINA M, AVILA J. Nya perspektiv på rollen av tau i Alzheimers sjukdom. Implikationer för terapi. Biochem Pharmacol 2014; 88: 540-547.

6)NING M, ZHANG Z, CHEN Z, ZHAO T, ZHANG D, ZHOU D, LI W, LIU Y, YANG Y, LI S, HE L. Genetiska bevis för att vaskulär demens är relaterad till Alzheimers sjukdom: genetisk association be- mellan tau polymorfism och vaskulär demens i den kinesiska befolkningen. Age Aging 2011; 40: 125-128.

7) CAIN DP, BOON F. Detaljerad beteendeanalys avslöjar både uppgiftsstrategier och rumsliga minnesförsämringar hos råttor som fått bilateral stroke i cerebral artär. Brain Res 2003; 972: 64-74.

8)ZHONG G, WANG Y, ZHANG Y, GUO JJ, ZHAO Y. Rökning är associerad med en ökad risk för demens: en metaanalys av prospektiva kohortstudier med undersökning av potentiella effektmodifierare. PLoS One 2015; 10: e0118333.

9)NETO E, ALLEN EA, AURLIEN H, NORDBY H, EICHELE T. EEG-spektrala egenskaper skiljer mellan Alzheimers och vaskulär demens. Front Neurol 2015; 6:25.

10)CALABRÒ RS, DE LUCA R, LEO A, BALLETTA T, MARRA A, BRAMANTI P. Lokomat-utbildning i vaskulär demens: motorisk förbättring och mer! Aging Clin Exp Res 2015 12 mars.

11)UTKAN T, YAZIR Y, KARSON A, BAYRAMGÜRLER D. Etanercept förbättrar kognitiva prestanda och ökar eNOS- och BDNF-uttryck under experimentell vaskulär demens vid streptozotocin-inducerad diabetes. Curr Neurovasc Res 2015 11 mars.

12)ZHOU LS, ZHAO GL, LIU Q, JIANG SC, WANG Y, ZHANG DM. Tysta kollapsinsvarsmediatorprotein-2 omprogrammerar makrofagfenotyp och förbättrar infarktläkning i experimentell hjärtinfarktmodell. J Inflamm (Lond) 2015; 12:11.

13) WILSON SM, KI YEON S, YANG XF, PARK KD, KHANNA R. Differentiell reglering av kollapsinresponsmediatorprotein 2 (CRMP2) fosforylering av GSK3ß och CDK5 efter traumatisk hjärnskada. Front Cell Neurosci 2014; 8:135.

14)LIM NK, HUNG LW, PANG TY, MCLEAN CA, LIDDELL JR, HILTON JB, LI QX, WHITE AR, HANNAN AJ, CROUCH PJ. Lokaliserade förändringar av glykogensyntaskinas-3 och kollapsinsvarsmediatorprotein-2 i hjärnan som drabbats av Huntingtons sjukdom. Hum Mol Genet 2014; 23: 4051-4063.

15)BRUSTOVETSKY T, PELLMAN JJ, YANG XF, KHANNA R, BRUSTOVETSKY N. Collapsin respons mediator protein 2 (CRMP2) interagerar med N-metyl-D-aspartat (NMDA) receptor och Na plus /Ca2 plus bytare och reglerar deras funktionell aktivitet. J Biol Chem 2014; 289: 7470-7482.

16)DONG B, YUAN X, ZHAO Q, FENG Q, LIU B, GUO Y, ZHAO B. Ultraljudsassisterad vattenhaltig tvåfasextraktion av fenyletanoidglykosider från Cistanche deserticola YC Ma stammar. J Sep Sci 2015 Jan 21. [Epub före tryck].

17)HU GS, JIA JM, KIM DH. Effekter av att mata tyrosin och fenylalanin på ackumuleringen av fenyletanoidglykosider till Cistanche deserticola cellsuspensionskultur. Chin J Nat Med 2014; 12: 367-372.

18)DONG S, GAO R, YANG Y, GUO M, NI J, ZHAO L. Samtidig bestämning av fenyletanoidglykosider och aglykoner genom kapillärzonelektrofores med löpande buffertmodifierare. Anal Biochem 2014; 449: 158-163.

19)XIONG WT, GU L, WANG C, SUN HX, LIU X. Antihyperglykemiska och hypolipidemiska effekter av Cistanche tubulosa i typ 2 diabetiska db/db möss. J Ethnopharmacol 2013; 150: 935-945.

20)LIU B, OUYANG J, YUAN X, WANG L, ZHAO B. Adsorptionsegenskaper och preparativ separation av fenyletanoidglykosider från Cistanche deserticola genom användning av makroporösa hartser. J Chro- motor B Analyt Technol Biomed Life Sci 2013; 937: 84-90.

21)CALDERÓN-RIVERA A, SANDOVAL A, GONZÁLEZ-RAMÍREZ R, GONZÁLEZ-BILLAULT C, FELIX R. Reglering av neuronala cav3.1-kanaler genom cyklinberoende kinas 5 (cdk5). PLoS One 2015; 10: e0119134.

22)CASTRO-ALVAREZ JF, URIBE-ARIAS A, CARDONA-GÓMEZ GP. Cyclin-beroende kinas 5-målinriktning förhindrar b-amyloid-aggregation som involverar glykogensyntaskinas 3b och fosfataser. J Neurosci Res 2015 24 feb. [Epub före tryckning].

23) ROUGET R, SHARMA G, LEBLANC AC. Cyklinberoende Kinas 5-fosforylering av familjära prionproteinmutanter förvärrar omvandlingen till amyloidstruktur. J Biol Chem 2015; 290: 5759- 5771.