Abstrakt

Bakgrund:Det finns en brist på avbildnings- och bildbehandlingstekniker för exakt urskiljning och kvantifiering av den dermala extracellulära matrisen (ECM), främst kollagen. Denna studie syftade till att utveckla och demonstrera en holistisk avbildnings- och bildbehandlingsmetod för att visualisera och kvantifiera kollagenombyggnad i makro-, mikro- och nanoskala med hjälp av histokemisk avbildning, Reflectance Confocal Microscopy (RCM) och Atomic Force Microscopy (AFM) , respektive.

Glykosid av cistanche kan också öka aktiviteten av SOD i hjärt- och levervävnader och avsevärt minska innehållet av lipofuscin och MDA i varje vävnad, effektivt rensa upp olika reaktiva syreradikaler (OH-, H₂O₂, etc.) och skydda mot DNA-skador orsakade av OH-radikaler. Cistanche-fenyletanoidglykosider har en stark rensande förmåga av fria radikaler, en högre reducerande förmåga än vitamin C, förbättrar aktiviteten av SOD i spermiesuspension, minskar innehållet av MDA och har en viss skyddande effekt på spermiemembranets funktion. Cistanche-polysackarider kan öka aktiviteten av SOD och GSH-Px i erytrocyter och lungvävnader hos experimentellt åldrande möss orsakade av D-galaktos, samt minska innehållet av MDA och kollagen i lungor och plasma, och öka innehållet av elastin, har en god renande effekt på DPPH, förlänger hypoxitiden hos åldrande möss, förbättrar aktiviteten av SOD i serum och fördröjer den fysiologiska degenerationen av lungor hos experimentellt åldrande möss. Med cellulär morfologisk degeneration har experiment visat att Cistanche har den goda antioxidantförmågan och har potential att vara ett läkemedel för att förebygga och behandla åldrande hudsjukdomar. Samtidigt har echinacoside i Cistanche en betydande förmåga att avlägsna DPPH-fria radikaler och har förmågan att avlägsna reaktiva syrearter och förhindra friradikal-inducerad kollagennedbrytning, och har även en god reparationseffekt på anjonskada av tymin-fria radikaler.

Klicka på Hur man använder Antioxidant Cistanche

【För mer information:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Material och metoder:För proof-of-concept testades en kommersiell anti-aging-produkt som är känd för att inducera nysyntes och omorganisation av kollagen ex vivo på humana hudbiopsier från två åldrade kvinnor.

Resultat:I förhållande till obehandlad hud var kollagenfibrer (RCM) och fibriller (AFM) längre och anpassade efter behandlingen. Innehållet av kollagen och elastin (histokemisk avbildning och ELISA) förbättrades statistiskt efter behandling.

Slutsats:Baserat på våra fynd kan vi dra slutsatsen: (1) AFM, RCM och histokemisk avbildning kan exakt skilja kollagen från andra ECM-komponenter i huden och (2) bildbehandlingsmetoderna kan möjliggöra kvantifiering och därmed fånga små förbättringar i kollagenombyggnad efter behandling (kommersiell kosmetisk produkt med kollagenorganiseringsteknologi som proof-of-concept). Den rapporterade holistiska avbildningsmetoden har direkta kliniska konsekvenser för forskare och hudläkare att fatta snabba, realtids- och korrekta beslut inom hudforskning och diagnostik.

NYCKELORD

anti-aging, atomkraftsmikroskopi, kollagenomorganisation, dermal remodellering, extracellulär matris, reflektanskonfokalmikroskopi (Vivascope)

1. INTRODUKTION

Kontrollerad ombyggnad av den dermala extracellulära matrisen (ECM) är avgörande för normal utveckling och homeostas av huden och andra organ. ECM-ombyggnad är kännetecknet inom patofysiologin för hudens åldrande1, sårläkning och vissa dödliga sjukdomar inklusive men inte begränsat till cancer och fibros.2 Det finns många estetiska och medicinska alternativ för att behandla dessa hudåkommor, men det är knappt med avbildningsmetoder för realtidsvisualisering av ECM-remodellering, främst kollagen som är den mest förekommande strukturella komponenten i den dermala ECM. Även om de är under utveckling, är några av de nya icke-invasiva kliniska avbildningsteknikerna i realtid för att visualisera kollagen och dess organisation Multi-Photon Microscopy with Second Harmonic Generation (MPM-SHG),3 Reflectance Confocal Microscopy (RCM),4 Optical Coherence Tomography (OCT),5,6 Lindfield Confocal Optical Coherence Tomography (LC-OCT) baserad på kombinationen av modaliteter av RCM och OCT,7 magnetisk resonanstomografi (MRI),8 och ultraljudstomografi.9 Av dessa är RCM, MPM och LC-OCT är CE-certifierade hudavbildningsinstrument. Men bland dem alla är RCM-tekniken (Vivascope® 1500 och 3000 från Lucid, Inc. USA) den enda FDA-godkända diagnostiska tekniken för klinisk dermatologi (510(k)# K080788), som också täcks av de flesta försäkringar i USA för att diagnostisera hudskador.10 Det är ett icke-invasivt och kostnadseffektivt alternativ till klassiska biopsi- och histopatologiska tekniker för att diagnostisera och övervaka hudcancer och deras behandling.10 Bland prekliniska avbildningsmetoder för att visualisera kollagenorganisation, atomkraftsmikroskopi ( AFM),11 elektronmikroskopi,11,12 histokemisk avbildning med fluorescensmikroskopi,13 polariserad ljusmikroskopi,14 konfokal laserskanningsmikroskopi (CLSM),15,16 multimodal konfokal reflektans- och fluorescensmikroskopi,17 och röntgenspridning18 är välkänd.

En av de stora förbehållen som begränsar användningen av ovannämnda kliniska avbildningstekniker är att det kräver en tråkig manuell bedömning eftersom ämnesexpertis och erfarenhet av att noggrant analysera svartvita bilder av hudstrukturer är en förutsättning.19,20 Därför görs fler ansträngningar. krävs inom bildbehandlingsområdet för att utveckla och validera algoritmer och programvara för att automatisera analys,5 producera lätttolkade digitalt färgade bilder,16,17 och extrahera kvantitativ information för att övervaka sjukdomsprogression och terapi, inklusive kollagenorganisation i samband med vår forskning.3,6,12–14 Det kommer att göra det möjligt för icke-dermatologer och hudläkare att fatta beslut snabbare och med mer självförtroende eftersom besluten kommer att tas från en större urvalsstorlek av de randomiserade bilderna. Vissa grundläggande studier har gjorts för att visa användningen av RCM och MPM för att förstå åldersrelaterade hudförändringar (inklusive kollagenorganisation) hos unga kontra gamla eller fotoåldrade försökspersoner.21,22 Det finns dock en begränsad ansträngning för att utöka kraften av dessa avbildningstekniker för att fånga förbättringar i behandlingen, vilket kräver sofistikerad bildbehandling för att få kvantitativ information.3,13,16

Denna studie syftade till att utveckla och demonstrera en holistisk avbildnings- och bildbehandlingsmetod för att visualisera och kvantifiera förbättringar av dermal remodellering (främst kollagen). Som proof-of-concept användes en kliniskt beprövad kommersiell anti-aging kosmetisk produkt med kollagenorganiseringsteknologi för att bedöma möjligheten att använda bildbehandling för att kvantifiera mindre förändringar i kollagen före och efter behandling.

2. MATERIAL OCH METODER

2.1 Hudbiopsier och deras behandling

Hudbiopsier som användes i denna forskning var det överblivna materialet från bukplastik som erhölls från två donatorer efter deras samtycke (samtycke behålls av klinikerna). Donator #1 (62 år) och donator #2 (52 år) var båda kvinnor och Fitzpatrick hudtyp II. Biopsier upprätthölls under standardodlingsbetingelser och behandlades dagligen med testprodukt eller kontroll (obehandlad eller placebo) under 6 dagar och skördades på dag 7 för avbildning och ELISA. Biopsier från donator #1 användes för ELISA, RCM och AFM, medan biopsier från donator #2 användes för histokemisk avbildning.

2,2 RCM- och AFM-avbildning

Hudbiopsierna från donator #1 skördades på dag 7 och avbildades direkt utan någon sektionering och färgning. AFM (Bruker, Multimode 8 AFM) och RCM (Vivascope® 1500) användes för att erhålla högupplösta nano- och mikroskaliga bilder av kollagen i hud behandlad med testprodukten och obehandlad som kontroll. För alla experiment var AFM utrustad med en liten cantilever (PPP-FMR- 20, nanosensorer): fjäderkonstant, k=0.5–9.5 N/m, resonansfrekvens, f {{13} }–115 kHz i luft och drevs i uttagsläge vid rumstemperatur. Hudproverna monterades i sidled på en magnetisk skiva (1 mm × 1 mm) och placerades på scenen. AFM-bilderna förvärvades genom en sido-/sidovy av hudbiopsierna för att undvika sektionering. För RCM-avbildning förvärvades sju slumpmässiga bilder från behandlade och obehandlade biopsier från toppen (Stratum corneum-sidan) och botten (dermissidan) för att få högkvalitativa bilder av kollagen. RCM-bilder bearbetades och analyserades med ConfoScan® för kollagentextur för att rapportera det genomsnittliga fragmenteringsindexet. Fragmenteringsindexet definieras av objektytan dividerat med antalet objekt som erhållits efter bearbetning av de råa bilderna för kollagenstruktur. Figur S1 visar bildbehandling med ConfoScan® för att erhålla kvantitativa värden på kollagenfragmenteringsindex (CFI).

2.3 Histokemisk avbildning

För att testa effekten av anti-aging-produkten på behandling av fotoåldrad hud (återvinning av fotoskadat kollagen och elastin), exponerades biopsierna från donator nr 2 för en simulerad dos av UV (6 J/cm2 med 96 procent UVA) ). Proverna och förhållandena som testades i experimenten var: (A) negativ kontroll (obehandlad, ingen UV och ingen testprodukt), (B) positiv kontroll (hud exponerad för UV, men ingen testprodukt) och (C) behandlad ( hud exponerad för UV, följt av daglig behandling med testprodukt). Hudbiopsier skördades på dag 7, sektionerades, färgades för kollagen (Picosirius-färgning) och elastin (immunfärgning) och avbildades. Bilderna bearbetades och analyserades med en proprietär bildanalysalgoritm för att få kvantitativ information om innehållet av kollagen och elastin i papillärdermis. I korthet inkluderar den analytiska processen för att erhålla kvantitativ information om kollagen- och elastininnehåll konvertering av RGB-bilder till LAB-färgrymd, filtrering av bakgrunden för att erhålla tydliga bilder av kollagen och elastin och sedan normalisering av kollagen- och elastininnehållet i papillärdermis till samma område eller flera pixlar. Det fanns sex biopsier eller hudprover för varje tillstånd och två sektioner eller bilder från varje prov, vilket resulterade i N=12 bilder och datapunkter för statistisk testning. Figur S2 visar schemat för bildbehandlingsmetoden för att erhålla kvantitativa värden på kollageninnehållet.

2,4 ELISA

Efter vävnadsskörd på dag 7 användes en stans med 4 mm diameter för att erhålla mindre biopsier och två biopsier valdes med ~25 mg/biopsi. De stansade biopsierna (50 mg totalvikt) blandades i en lysbuffert innehållande 0,1 procent Triton och proteashämmarcocktail, följt av homogenisering av vävnaden med användning av en automatiserad dubbelbearbetningshomogenisator med mekaniska och ultraljudsfunktioner för att fullständigt lysera vävnad. Den lyserade vävnaden centrifugerades, supernatanten samlades upp, delades upp i två delar och förvarades vid -80◦C tills den användes. Förutom normalisering avseende vikt (50 mg) normaliserades proverna även till den totala proteinhalten i supernatanten. Supernatanten analyserades för Pro-Collagen 1, Elastin, Alpha-Smooth Muscle Actin (A-SMA), Tenascin-X och Hyaluronsyra med användning av kommersiella ELISA-kit. Statistiken utfördes på N=6 datapunkter (3 biopsier × 2 alikvoter).

3. RESULTAT

Histokemisk avbildning (Figur 1) gav makroskopisk information om fördelningen och kvantiteten av kollagen och elastin. En tydlig minskning av den röda färgen på kollagen- och elastinfiberknippen observerades efter behandling av hudbiopsierna med UV.

Tabell 1 visar de kvantitativa värdena för kollagen- och elastininnehåll i tre behandlingstillstånd. Dessa värden gjorde det möjligt för oss att mäta förbättringar i kollagen- och elastininnehåll och göra statistiska jämförelser. Minskningen av innehållet av kollagen (−23 procent jämfört med obehandlat) och elastin (-30 procent mot obehandlat) efter UV-exponering var signifikant (Figur 2). Efter behandling med testprodukten i 6 dagar kunde de UV-exponerade hudbiopsierna återvinna kollagen (plus 18 procent mot UV-behandlat) och elastin (plus 46 procent mot UV-behandlat). Även om kollagenets organisation inte är tydlig i histokemiska bilder (eftersom kollagenet är mest rikligt och tätt packat i huden), observeras karakteristisk vinkelrät inriktning av elastinfibrer som löper mot epidermis i naturlig (Figur 1A) och UV-skadad hud efter behandling med testprodukt (Figur 1C).

ELISA (Figur 3) jämför nivåerna av biomarkörer som uttrycks av hudbiopsier som behandlats med testprodukten eller placebo (som saknar en cocktail av aktiva ingredienser som är kända för dermal remodeling). Jämfört med placebo var det en 2–3-faldig ökning av nivåerna av elastin och kollagen, särskilt typ 1 pro-kollagen (testprodukt kontra placebo). Även om det inte var signifikant, observerades också en märkbar ökning (P < 0.1) i hyaluronsyra och tenascin-X.

RCM kunde framgångsrikt avslöja organisationen av kollagenfibrer (bunt av kollagenfibriller) i huden (Figur 4). Tack vare dess konfokala och kvartsvågsplatta optiska egenskaper kunde tekniken framgångsrikt skilja kollagen (starkt endogent kontrastmedel med dubbelbrytning) från andra matriser utan att sektionera och färga huden. Det korta fragmenterade kollagenet och dess hopkrupen arrangemang (karakteristiskt för skadat och dåligt organiserat kollagen i åldrad/fotoåldrad hud) observeras i obehandlad hudbiopsi. Efter behandling med testprodukten i 6 dagar ser arrangemanget av kollagenfibrer i denna 62-åriga kvinnliga hudbiopsi (donator #1) relativt mer organiserad ut än obehandlade kollagenfibrer med längder på mer än 100 µm löpande parallella med varandra. Även om kontrasten är dålig kan vi observera formen och storleken på fibroblasterna (markerade med pilar i figur 4), stora och spridda fibroblaster med regelbundna former i den behandlade huden kontra obehandlad hud. Ljusa runda celler i figur 4C är av särskilt intresse. De kan vara mastceller eller inflammatoriska celler. Det är inte klart om dessa inflammatoriska celler är representativa för normala hudtillstånd eller om de uttrycktes som svar på en betydande kraft som applicerades på laserhuvudet för att försöka uppnå bättre kontakt mellan laserhuvudet och huden för högkvalitativa bilder av kollagenet fibrer.

Tabell 2 visar det genomsnittliga fragmenteringsindexet bestämt genom ConfoScan®-analys av sju slumpmässiga bilder av behandlad kontra obehandlad hud. Kollagen betyder fragmenteringsindex för den behandlade kontra obehandlade gruppen var 0.032 respektive 0,064. En minskning av fragmenteringsindexet indikerar förbättring av kollagenorganisationen.

För att ta en djupare titt på kollagenarrangemanget förvärvades AFM-bilder för att visualisera kollagenarrangemanget i nanoskala (Figur 5). Vi kan se individuella kollagenfibriller (den bunt för att bilda en kollagenfiber) av nanometer tjocklek. Vidare kan vi också se det karakteristiska tvärbandsmönstret för kollagenfibriller (D ~ 68 nm), vilket är i linje med litteraturen11 och validerar att AFM kunde skilja kollagen från andra ECM-fibrer. I samförstånd med RCM observerades också en relativt parallell organisation av kollagenfibriller under AFM för behandlad kontra obehandlad hud.

4. DISKUSSION

I den här forskningen undersökte vi potentialen med att använda tre avbildningstekniker för att visualisera förändringar i kollagen i humana hudbiopsier som behandlats med en kommersiell anti-aging produkt som innehåller några benchmark syntetiska peptider kända för att inducera kollagen ombyggnad. De histokemiska avbildnings- och RCM-avbildningsteknikerna kombinerades med bildbehandling för att erhålla semikvantitativ information om kollageninnehåll och fragmentering som ett index för att uppnå förbättring av kollagen efter behandling med anti-aging-produkten.

Intressant nog visade vår studie en mycket stark korrelation mellan histokemisk avbildning och ELISA för att rapportera en signifikant ökning av kollagen- och elastinnivåerna efter behandling med testprodukten. Typ 1 pro-kollagen är markören för nyligen syntetiserat kollagen, och dess överuttryck av fibroblaster som svar på Matrixyl® (Sederma/Croda) är en välkarakteriserad mekanism för anti-aging-effekten.23,24 Det var också en signifikant ökning i uttrycket av A-SMA, en markör unik för myofibroblaster, som är speciellt differentierade fibroblastceller. Rollen av A-SMA i fibroblastmedierad ECM-kontraktion och ombyggnad är välkänd,25 och en direkt korrelation mellan A-SMA-uttryck och fibroblastkontraktionsaktivitet rapporteras.26 En ökning av hyaluronsyra, även om den inte är signifikant, kan primärt vara tillskrivas närvaron av hyaluronsyra som en fuktgivande ingrediens i anti-aging-produkten. TNSX är ett nytt ECM-protein som är lokaliserat mellan eller vid ytan av kollagenfibriller i huddermis27 och TNSX rapporteras inducera dosberoende kollagenfibrillogenes,28,29 även om det finns kontroverser om TNSX binder specifikt till pro-kollagentyp 1 eller andra kollagen- och ECM-biomolekyler också.28,29 En dosberoende ökning av TNSX som svar på SKINectura™ (Lucas Meyer Cosmetics), en aktiv ingrediens i anti-aging-testprodukten, rapporteras (Internationell patentansökan# PCT /IB2017/056370). Därför kan det antas att Matrixyl® (Sederma/Croda) och SKINectura™ (Lucas Meyer Cosmetics) i testprodukten samverkar för att underlätta syntesen och anpassningen av nysyntetiserat kollagen, prokollagen typ 1. En signifikant minskning av kollagen och elastin efter UV-behandling (fotoskadad hudmodell), följt av deras reparation efter behandling med en anti-aging-produkt (jämnar tillbaka till naturlig hud som inte exponeras för UV) indikerar förmågan hos den histokemiska avbildningen (polariserad mikroskopi) och bildbehandlingstekniken att mäta små förändringar i innehållet i ECM-komponenter (figur 1 och 2). Flitiga ansträngningar gjordes för att försöka avbilda kollagen- och elastinorganisation (efter immunfluorescensmärkning) med det nyinköpta Thunder Leica-fluorescenssystemet. Upplösningen var dock inte tillräckligt hög och därför kunde inget tillförlitligt fastställas om organisationen. Den fluorescensbaserade CLSM-avbildningen erbjuder högre upplösning än konventionell bredfältsfluorescensavbildning för att möjliggöra tydlig visualisering av kollagen- och elastinorganisationen. Konventionell bredfältsfluorescensavbildning begränsas av dominansen av sekundär fluorescens och tjockleken på proverna, vilket inte är ett problem för CLSM.

Vi kunde visualisera kollagenorganisation med RCM (Figur 4). RCM är ett bättre val än CLSM eftersom (1) RCM inte använder någon märkning eller färgning (till skillnad från fluorescens-CLSM som kräver immunfluorescensmärkning) vilket tar bort alla chanser till osäkerhet eller icke-specificitet på grund av märkningar, och (2) RCM är en allmänt använde klinisk dermal avbildningsteknik för kollagen. En förbättring av strukturen hos kollagenfibrer, långa och tunna fibrer efter behandling med en anti-aging produkt (mot täta och korta fragmenterade kollagenfibrer i obehandlad hud) indikerar dess verkningssätt på strukturell nivå. RCM-upplösningen var tillräckligt hög för att till och med fånga fibroblastceller, hudens kollagensyntesfabrik. Kollagenfibrerna lindade runt fibroblasterna kan vara de nyligen syntetiserade kollagenfibrerna eftersom de är tunnare i diameter än omgivande kollagenfibrer och deras buntar (Figur 4). Baserat på ConfoScan®-analys av randomiserade RCM-bilder kan vi dra slutsatsen att obehandlad hud har ett mycket högre index av fragmenterat kollagen jämfört med den behandlade huden. Även om vi i RCM-bilder kan se den parallella inriktningen av kollagenfibrer efter behandling med testprodukten, kan det inte dras slutsatsen om inte isotropi/anisotropi-förhållandet beräknas, vilket var utanför ramen för denna forskning. Den ultrahöga AFM-upplösningen på nanoskalanivå avslöjar dock bevis på kollagenanpassning på enstaka fibrillernivå. Baserat på den positiva korrelationen mellan RCM- och AFM-bilder på den parallella inriktningen av kollagenfibrer (obehandlade vs. behandlade), finns det en stor möjlighet att antiaging-produkten har den påstådda kollagenomorganiseringsegenskapen. För framtida forskning bör studien utföras för att övervaka samma punkt (kollagenfibrer) över tid (longitudinell studie) före och efter behandling med testprodukten för att undersöka om det är anpassningen av befintligt kollagen eller de nysyntetiserade kollagenfibrerna som är mer anpassade. En sådan longitudinell studie kommer dock att kräva integrering av RCM- och AFM-instrument till levande vävnadsavbildningskapacitet och time-lapse-avbildning för att fånga förändringar i realtid i kollagenombyggnad.

5. SLUTSATSER

Baserat på våra forskningsresultat från denna proof-of-concept-studie kan vi dra slutsatsen att AFM, RCM och histokemiska avbildningstekniker är kapabla att övervaka förändringar i kollagenorganisationen på nano-, mikro- respektive makroskala. AFM- och RCM-bilder visar tecken på kollagenjustering i nano- och mikroskala efter behandling med testprodukten. Analysen av randomiserade RCM och histokemiska bilder med användning av proprietära bildbehandlingsmetoder indikerar vidare att huden efter behandling med testprodukten har lägre kollagenfragmentering och högre kollagenförtätning jämfört med obehandlad. Även om en del ansträngningar har lagts ned på att utveckla och validera bildbehandlingsalgoritmer3,5,6,12–14,16,17 krävs mer forskning i denna riktning för att uppnå datadrivna prekliniska och kliniska forsknings- och diagnostiska beslut. Vårt holistiska tillvägagångssätt att tillämpa högupplösta och högt innehållsmässiga avbildningstekniker i kombination med kraftfulla och robusta bildbehandlingsalgoritmer och mjukvara är ett steg i denna riktning.

Även om omfattningen av denna forskning var begränsad till att undersöka kollagenorganisationen som svar på en anti-aging testprodukt på ex vivo human hudbiopsi, har dessa bildbehandlingstekniker implikationer för övervakning och kvantifiering av ECM-ombyggnad, vilket är kännetecknet för normal utveckling, sårläkning, samt en nyckelmarkör i patofysiologin för livshotande tillstånd som fibros och cancer som uppstår vid okontrollerad ECM-ombyggnad.2

INTRESSEKONFLIKT

Författarna förklarar att ingen intressekonflikt skulle kunna uppfattas som att det påverkar opartiskheten i den rapporterade forskningen.

REFERENSER

1. Shin JW, Kwon SH, Choi JY, Na JI, Choi HR, Park KC. Molekylära mekanismer för dermalt åldrande och antiaging-metoder. Int J Mol Sci. 2019;20(9):2126.

2. Cox TR, Erler JT. Ombyggnad och homeostas av den extracellulära matrisen: Implikationer för fibrotiska sjukdomar och cancer. Dis Model Mech. 2011;4(2):165–78

3. Pittet JC, Freis O, Vazquez-Duchene MD, Perie G, Pauly G. Utvärdering av elastin/kollageninnehåll i mänsklig dermis in vivo genom multifoton tomografi-variation med djup och korrelation med åldrande. Kosmetika. 2014;1(3):211–21

4. Longo C, Casari A, Beretti F, Cesinaro AM, Pellacani G. Hudens åldrande: Mikroskopisk bedömning av epidermala och dermala förändringar med hjälp av konfokalmikroskopi. J Am Acad Dermatol. 2013;68(3):e73–82.

5. Yamazaki K, Li E, Miyazawa A, Kobayashi M. Djuplöst undersökning av flera optiska egenskaper och rynkmorfologi i ögonhörnområden med multi-kontrast Jones matrix optisk koherens tomografi. Skin Res Technol. 2020;27(3):435–443.

6. Yow AP, Cheng J, Li A, Srivastava R, Liu J, Wong DWK, et al. Automatiserat in vivo 3D high-definition optisk koherens tomografi hudsystem. Annual Int Conf IEEE Eng Med Biol Soc. 2016;2016:3895–8

7. Ruini C, Schuh S, Sattler E, Welzel J. Linjefältskonfokal optisk koherenstomografi-praktiska tillämpningar inom dermatologi och jämförelse med etablerade avbildningsmetoder. Skin Res Technol. 2021;27:340–52.

8. Tal S, Maresky HS, Bryan T, Ziv E, Klein D, Persitz A, et al. MRI för att upptäcka kosmetiska injicerbara fyllmedel för ansiktet. Head Face Med. 2016;12(1):27.

9. Mandava A, Ravuri PR, Konathan R. Högupplöst ultraljudsavbildning av hudskador. Indian J Radiol Imaging. 2013;23(3):269–7.

10. Edwards SJ, Mavranesouli I, Osei-Assibey G, Marceniuk G, Wakefield V, Karner C. Vivascope 1500 och 3000 system som upptäcker och övervakar hudskador: En systematisk översyn och ekonomisk utvärdering. Health Technol Assess. 2016;20(58):1–260.

11. Ushiki T. Kollagenfibrer, retikulära fibrer, elastiska fibrer. En övergripande förståelse ur en morfologisk synvinkel. Arch Histol Cytol. 2002;65(2):109–26

12. Starborg T, Kalson NS., Lu Y, Mironov A, Cootes T, Holmes D, et al. Använda transmissionselektronmikroskopi och 3view(R) för att bestämma kollagenfibrillers storlek och tredimensionell organisation. Nat Protoc. 2013;8(7):1433–48.

13. Wegner KA, Keikhosravi A, Eliceiri AW, Vezina CM. Fluorescens av röd picosirius multiplexerad med immunhistokemi för kvantitativ bedömning av kollagen i vävnadssnitt. J Histochem Cytochem. 2017;65(8):479–90.

14. Changoor A, Tran-Khanh N, Methot S, Garon M, Hurtig MB, Shive MS, et al. En metod för polariserad ljusmikroskopi för korrekt och tillförlitlig gradering av kollagenorganisation vid broskreparation. Artros Cartil. 2011;19(1):126–35.

15. Bernstein EF, Chen YQ, Kopp JB, Fisher L, Brown DB, Hahn PJ, et al. Långvarig solexponering förändrar kollagenet i papillärdermis. Jämförelse av solskyddad och fotoåldrad hud genom nordlig analys, immunhistokemisk färgning och konfokal laserskanningsmikroskopi. J Am Acad Dermatol. 1996;34(2 pt 1):209–18.

16. Schuurmann M, Stecher MM, Paasch U, Simon JC, Grunewald S. Utvärdering av digital färgning för ex-vivo konfokal laserskanningsmikroskopi. JEADV. 2020;34(7):1496–9.

17. Gareau DS. Genomförbarhet av digitalt färgade multimodala konfokala mosaiker för att simulera histopatologi. J Biomed Opt. 2009;14(3):034050.

18. Zhang Y, Ingham B, Cheong S, Ariotti N, Tilley RD, Naffa R, et al. Realtid Synchrotron små vinkel röntgenspridningsstudier av kollagenstruktur under läderbearbetning. Ind Eng Chem Res. 2018;57(1):63–9.

19. Från bild till information: Bildbehandling inom dermatologi och kutanbiologi. I: Hamblin, M., Avci, P., Gupta, G., redaktörer. Imaging in dermatology, 1st ed.Academic Press: Amsterdam, Nederländerna; 2016. sid. 519–35.

20. Schneider SL, Kohli I, Hamzavi IH, Council ML, Rossi AM, Ozog DM. Framväxande bildtekniker inom dermatologi, del II: Tillämpningar och begränsningar. J Am Acad Dermatol. 2019;80(4):1121–31.

21. Guida S, Pellacani G, Ciardo S, Longo C. Reflekterande mikroskopi avbildning av åldrande hud och hudcancer. Dermatol Prac koncept. 2021;11(3):2021068.

22. Wang H, Shyr T, Fevola MJ, Cula GO, Stamatas GN. Åldersrelaterade morfologiska förändringar av den dermala matrisen i mänsklig hud dokumenterades in vivo med multifotonmikroskopi. J Biomed Opt. 2018;23(3):1–4.

23. Jones RR, Castelletto V, Connon CJ, Hamley IW. Kollagenstimulerande effekt av peptidamfifil C16-KTTKS på humana fibroblaster. Mol Pharm. 2013;10(3):1063–9.

24. Gorouhi F, Maibach HI. Aktuella peptiders roll för att förebygga eller behandla åldrad hud. Int J Cosmet Sci. 2009;31(5):327–45.

25. Shinde AV, Humeres C, Frangogiannis NG. Rollen av a-slät muskelaktin i fibroblastmedierad matriskontraktion och ombyggnad. Biochim Biophys Acta. 2017;1863(1):298–309.

26. Hinz B, Coletta G, Tomasek JJ, Gabbiani G, Chaponnier C. Alfa glattmuskelaktinuttryck uppreglerar fibroblastkontraktila aktivitet. Mol Biol Cell. 2001;12(9):2730–41.

27. Valcourt U, Alcaraz LB, Exposito JY, Lethias C, Bartholin L. Tenascin-X: Bortom den arkitektoniska funktionen. Cell Adh Migr. 2015;9(1–2):154–65.

28. Egging D, van den Berkmortel F, Taylor G, Bristow G, Schalkwijk J. Interaktioner mellan humana tenascin-X-domäner med dermala extracellulära matrismolekyler. Arch Dermatol Res. 2007;298(8):389–96.

29. Minamitani T, Ikuta T, Saito Y, Takebe G, Sato M, Sawa H, et al. Modulering av kollagenfibrillogenes av tenascin-X och typ VI kollagen. Exp Cell Res. 2004;298(1):305–15

STÖDJANDE INFORMATION

Ytterligare stödinformation kan hittas i onlineversionen av artikeln på förlagets webbplats.

【För mer information:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】