HPLC-bestämning av echinakosid i vattenextrakt av Cistanche Herba

Abstrakt: Syfte: En HPLC-metod etablerades för bestämning av Echinacoside i vattenextraktet från Cistanche deserticola. Metoder: Echinakosid bestämdes med HPLC. Separationen utfördes på en Inertsil ODSSP C18-kolonn med en mobil fas bestående av acetonitril (A) och 0,4 % fosforsyralösning (B), genom gradienteluering. Detektionsvåglängden sattes till 333 nm, och kolonntemperaturen var 30 grader. Flödeshastigheten var 1,0 mL·min-1, och injektionsvolymen var 10 μL. Resultat: Den linjära relationen mellan echinakosid inom koncentrationsintervallet 44,93977-539,2764 ug ·m var bra(r=0.9998). Återvinningarna var 94,59 %-105,31 % (RSD= 2.93%,n=9). Innehållet av echinakosid i vattenextrakt av Cistanche herba var 15.527, 7.347, 12.267 mg·g-1

Slutsats: Den etablerade HPLC-metoden med god repeterbarhet är korrekt, enkel och genomförbar. Den är lämplig för bestämning av echinakosid i vattenextraktet från Cistanche deserticola.

Nyckelord: HPLC; vattenextrakt av Cistanche deserticola; Echinakosid; fastställande av innehåll

Cistanche deserticola är en allmänt använd tonic i traditionell kinesisk medicin i klinisk praxis och har ryktet om "ökenginseng". Cistanche deserticola som ingår i 2015 års upplaga av den kinesiska farmakopén är den torkade, fjällande, köttiga stammen från Orobaceae-växten Cistanche deserticola YC Ma eller Cistanche tubulosa (Schenk) Wright. Den har en varm natur, en söt och salt smak och tillhör njurens och tjocktarmens meridianer. Det har effekterna att tonifiera njurens yang, gynna essens och blod, fukta tarmarna och lindra förstoppning [2].

Desert ginseng

"Shennong Materia Medica Classic" säger att den kan "nära mitten, ge näring till de fem inre organen och stärka yin och ge näring till essensen." Cistanche deserticola innehåller huvudsakligen fenyletanoidglykosider, iridoider och glykosider, lignaner och glykosider, polysackarider, estrar och alkaloider [3]. Fenyletanolglykosider är de huvudsakliga aktiva komponenterna i Cistanche deserticola, bland vilka echinacea och poolside är indikatorkomponenterna för identifiering och innehållsbestämning av Cistanche deserticola i den kinesiska farmakopén.

Fenyletanolglykosid är den huvudsakliga aktiva komponenten i Cistanche deserticola

Farmakologiska studier [4] indikerar att Cistanche deserticola har olika farmakologiska effekter, såsom att fukta tarmarna och lindra förstoppning, skydda levern, motstå osteoporos, antioxidation, anti-aging och anti-trötthet. Det vattenhaltiga extraktet av Cistanche deserticola kan främja benmorfogenetiska protein 2-gener från osteoblaster hos råttor, såväl som tartratresistent surt fosfatas och osteokalcin i serum från ovarieektomiserade möss, såväl som Smad1- och Smad5-gener och transformerande tillväxtfaktorer för{8} bone tillväxtfaktorer, etc.} anti-osteoporos effekt [5-6]. Echinosid kan främja proliferationen av osteoblaster och främja differentieringen av benmärgsmesenkymala stamceller till osteoblaster in vitro [7-9].

Echinoside, den viktigaste kemiska komponenten i Cistanche deserticola

Klicka här för att se Natural Cistanche Echinacoside-produkter

【Be om mer】 E-post: xue122522@foxmail.com /WhatsAppp: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

Under senare år har det kommit många rapporter om bestämning av halten av echinakosid och polysid i alkoholextraktet av Cistanche deserticola och dess sammansatta preparat [10-12], men det finns få rapporter om bestämning av innehållet av indikatorkomponenter i vattenextraktet av Cistanche deserticola. I denna studie användes högpresterande vätskekromatografi (HPLC) för att bestämma innehållet av echinakosid i vattenextraktet av Cistanche deserticola.

1. Material

1.1 Apparatur

LC-20AT högpresterande vätskekromatografi, SPD-20A detektor, SIL-20A automatisk provtagare, CTO-10ASvp kolonntemperaturlåda, LCsolution vätskekromatografi arbetsstation, Shimadzu Corporation i Japan; MES125P-OCE-DU elektronisk analytisk balans, Sartorius, Tyskland; SHZ-D (III) multifunktionsvakuumpump för cirkulerande vatten, Henan Yuhua Instrument Co., Ltd.

1.2RC2BSO25 roterande förångare kylcirkulationssystem, RV10DS96 roterande förångare, IKA, Tyskland; DK-S26 Electric Thermostatic Water Bath, Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., Ltd; UPR-serien ultrarent vattenmaskin, Sichuan Youpu Ultra Pure Technology Co., Ltd.

1.2 Medicinska material och reagenser

Medicinskt material för kött Rong, köpt från Guangzhou Lingnan Traditional Chinese Medicine Slices Co., Ltd., batchnummer: 18010011806001, 181001. De torkade, fjällande, köttiga stjälkarna från Leobaceae-växten Cistanche deserticola, identifierade av Thi Chief Chinese Herbsthospital i Guangzhou University Traditionell kinesisk medicin förvaras i Drug Inspection Room på det tredje anslutna sjukhuset vid Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine; Echinosid-referensämne, innehåll 89,7 %, China Institute for the Control of Food and Drug Control, batchnummer: 111670-201706; Acetonitril är kromatografiskt ren (Merck, Tyskland); Metanol och fosforsyra är analytiskt rena (Tianjin Fuyu Fine Chemical Co., Ltd.); Vatten är ultrarent vatten.

2. Metoder och resultat

2.1 Beredning av vattenextrakt från Cistanche deserticola

Ta cistanchepulvret, tillsätt 10 gånger mängden destillerat vatten, värm upp och återloppskoka för att extrahera två gånger, varje gång i 1 timme. Filtrera, kombinera filtratet och använd en rotationsindunstare för att koncentrera filtratet till ett råläkemedelsinnehåll av 0,100 g · ml-1. Förvara vid 4 grader för standby. 2.2 Kromatografiska förhållanden och systemlämplighet Kromatografikolonn: InertsilODS SPC18 kolumn (150 mm × 4,6 mm, 5 μm); Mobil fas: acetonitril (A) - 0.4% fosforsyralösning (B), gradienteluering: 0~5 min, 17% A; 5~25 min, 20%A; 25~30 min, 17%A; Detektionsvåglängd: 333nm; Kolumntemperatur: 30 grader ; Flödeshastighet: 1,0 ml · min-1; Injektionsvolym: 10 μ L. Under detta kromatografiska tillstånd är upplösningen mellan topparna av echinacea och intilliggande komponenter större än 1,5, och det teoretiska antalet kolumner bör inte vara mindre än 4000 för echinaceatoppar. Kromatogrammet visas i figur 1.

Figur 1 HPLC-kromatogram av echinakosid(A) och vattenextrakt av Cistanche herba(B)

2.3 Beredning av lösning

2.3.1 Referenslösning

Väg en lämplig mängd Echinacetin-referensämne, väg den noggrant, placera den i en 10 ml mätkolv, tillsätt metanol för att lösas upp och låt den innehålla 898.794 Echinacetin per milliliter μG av referenslösningen, lagrad vid 4 grader för standby.

Echinoside av Cistanche deserticola

2.3.2 Testlösning

Mät noggrant upp 2,0 mL vattenhaltigt Cistanche deserticola-extrakt, indunsta i ett vattenbad, lös upp i metanol, bringa till en konstant volym i en 10 mL mätkolv och skaka väl . 0.22 μm mikroporös membranfiltrering, nämligen.

2.4 Undersökning av ett linjärt samband

Mät noggrant upp 0,25, 0,50, 1,00, 2,00, 2,50 och 3,00 ml av referenslösningen under 2.3.1 och placera dem i en 5 ml mätkolv, tillsätt metanol till konstant volym och skaka väl för att erhålla gradientkoncentrationer på 44,9397,87,4,89,57,8,44,89397,8. 359,5176, 449,3970 och 539,2764 μG · ml-1 av referenslösningen, 0,22 μM mikroporös membranfiltrering. Utför bestämningen enligt de kromatografiska förhållandena i 2.2 och registrera topparean. Med användning av masskoncentrationen av referensämnet som abskissan (X, μ G · mL-1), är topparean ordinatan (Y), och den linjära regressionsekvationen erhålls: Y=13185.0X-32273.0, r=0.9998. Resultaten visade att echinacea varierade från 44.439 72.599 till 7.539. Det linjära sambandet inom koncentrationsområdet g · mL-1 är bra.

2.5 Precisionstest

Ta 539,2764 μG · ml-1 referenslösning, injicera provet kontinuerligt 6 gånger enligt de kromatografiska förhållandena i 2.2 och registrera topparean. Resultat: RSD för topparean av echinacea var 1,81 %, vilket tyder på god precision hos instrumentet.

2.6 Stabilitetstest

Mät noggrant upp 2,0 mL vattenhaltigt Cistanche deserticola-extrakt, indunsta till torrhet i ett vattenbad, lös upp i metanol, bringa till en konstant volym i en 10 mL mätkolv, skaka väl, 0,22 μ Filtrera med ett mikroporöst membran, injicera prover för bestämning, 2 timmar, 42, 42, 8 timmar, och membran. till de kromatografiska förhållandena i 2.2 och registrera topparean. Resultat: RSD för topparean av echinacea var 1,16 %, vilket tyder på att testlösningen hade god stabilitet inom 24 timmar.

2.7 Repeterbarhetstest

Mät noggrant upp 6 portioner av 2,0 ml vattenhaltigt extrakt av Cistanche deserticola, förbered 6 portioner av testlösningen parallellt enligt metoden som beskrivs i 2.3.2, injicera prover för bestämning enligt de kromatografiska förhållanden som beskrivs i 2.2, och registrera topparean. Resultat: RSD för masskoncentrationen av echinacea var 1,28 %, vilket tyder på att metoden hade god repeterbarhet.

Cistanche deserticola experiment

2.8 Provadditionsåterställningstest

Mät noggrant upp 9 portioner av 1,0 mL Cistanche deserticola vattenhaltigt extrakt, tillsätt 0,8, 1,0 och 1,2 mL referenslösning (101,552 mg · mL - 1), indunsta i ett vattenbad, lös upp i metanol och ställ till volymen i en ml volym etanol; Skaka väl, 0,22 μ Filtrera med m mikroporöst filtermembran för att förbereda testlösning med hög, medium och låg koncentration. Bered 3 delar av varje koncentration parallellt, mät enligt de kromatografiska förhållandena i 2.2, registrera topparean och beräkna återvinningen av provtillsatsen. Resultaten visas i tabell 1.

2.9 Bestämning av provinnehåll

Mät noggrant upp 3 portioner av 2,0 mL vattenextrakt från Cistanche deserticola, indunsta till torrhet i ett vattenbad, lös upp i metanol, bringa till en konstant volym i en 10 mL mätkolv, skaka väl, 0,22 μ Filtrera med ett mikroporöst membran, mät enligt kromatografiska förhållanden i 22, mät enligt kromatografiska förhållanden, beräkna den kromatografiska ytan. av echinacea. Resultaten visas i tabell 2.

Tabell 1: Resultat av återvinningstester av echinakosid

Tabell 2 Resultat av innehållsbestämning av echinakosid i vattenextrakt av Cistanche herba

3. Diskussion

3.1 Förberedelsemetod för testartikeln

Det vattenhaltiga extraktet av Cistanche deserticola innehåller olika kemiska komponenter såsom fenyletanolglykosider och polysackarider, som orsakar viss interferens med komponenterna som ska testas. Denna studie undersökte två olika koncentrationer av lösningsmedel, 50 % metanol och metanol. Resultaten visade att separationseffekten av topparna i kromatogrammet av testprodukten med användning av 50 % metanol som lösningsmedel var dålig mellan echinacea och intilliggande komponenter. Genom att använda metanol som lösningsmedel är upplösningen av echinacea-glykosidtoppen god, och det finns ingen störning från andra orenhetstoppar. Därför valdes metanol som lösningsmedel för testlösningen. Med användning av metanol som lösningsmedel indunstades vattenextraktet av Cistanche deserticola till torrhet i ett vattenbad. Två behandlingsmetoder användes: metanolupplösning, konstant volymskakning och metanolultraljudsupplösning (10 min). Resultaten visade att det inte fanns någon signifikant skillnad mellan de två metoderna. Denna metod valdes för att framställa testlösningen på grund av den enkla operationen med metanolupplösning och konstant volymskakning.

Kinesisk ört cistanche

3.2 Val av mobil fas

I denna studie hänvisades till den mobila fasen (metanol-0,1 % myrsyra) som används för innehållsbestämning av Cistanche deserticola i den kinesiska farmakopén (volym I) (2015). Resultaten visade att toppen av echinacea-glykosid vidgades och det fanns ett framkantsfenomen, som kan vara relaterat till den mobila fasens svaga elueringsförmåga; Med hänvisning till relevant litteratur [12-13] användes acetonitril-0,5 % ättiksyra som den mobila fasen, men toppformen för echinacea var dålig och det fanns ett svansfenomen. Med tanke på pH-värdet för den mobila fasen användes slutligen acetonitril-0,4 % fosforsyra som den mobila fasen. Som ett resultat var det teoretiska plattantalet av echinaceatoppar större än 4000, och upplösningen mellan echinacea och angränsande komponenttoppar var större än 1,5. Toppformen var symmetrisk, utan störningar från föroreningstoppar, och baslinjen var stabil. I denna studie användes därför acetonitril-0,4 % - 0.4 % fosforsyra som den kromatografiska mobila fasen för bestämning av echinacea-innehåll. I denna studie användes HPLC-metoden för att bestämma Echinacea i Cistanche deserticola vattenhaltigt extrakt.

Cistanche-extraktpulver

Metoden är enkel, exakt och reproducerbar. Den är lämplig för bestämning av echinacea i cistanche deserticola vattenhaltigt extrakt och kan användas som en kvalitetskontrollmetod för cistanche deserticola vattenhaltigt extrakt. Denna studie bestämde endast innehållet av echinacea i vattenextraktet av Cistanche deserticola. I framtiden är det planerat att bestämma innehållet av echinacea i det sammansatta avkoket av Cistanche deserticola för att undersöka effekterna av olika faktorer på innehållet av echinacea, vilket ger en referens för kvalitetskontrollen av avkoket som innehåller Cistanche deserticola.