Induktion av slemhinneimmunitet genom lungadministrering av en cellinriktad nanopartikel

ABSTRAKT

Vi fann tidigare att en nanopartikel konstruerad med ett antigen, bensalkoniumklorid (BK) och c-polyglutaminsyra (c-PGA) visade hög immuninduktion av Th1- och Th2-typ efter subkutan administrering. För profylax av luftvägsinfektioner bör emellertid slemhinneimmunitet induceras. I denna studie undersökte vi effekten av lungadministrering av en nanopartikel innefattande ovalbumin (OVA) som modellantigen, BK och c-PGA på induktionen av mukosal immunitet i lungorna och serum.

Komplexet togs upp kraftigt av RAW264.7- och DC2.4-celler. Efter lungadministrering var lungretentionen längre för OVA/BK/c-PGA-komplexet än för enbart OVA. OVA-specifikt serumimmunoglobulin (Ig)G inducerades i hög grad av komplexet. Höga IgG- och IgA-nivåer inducerades också i den bronkoalveolära sköljvätskan, och in vivo observerades inga toxiciteter. Sammanfattningsvis inducerade vi effektivt och säkert mukosal immunitet genom pulmonell administrering av ett OVA/BK/c-PGA-komplex.

På senare år har fler och fler studier visat att slemhinneimmunitet spelar en viktig roll i kroppens immunförsvar. Slemhinneimmunitet avser det slemhinnebaserade immunsystemet i människokroppen, och dess försvarsförmåga är främst inriktad på invasionen av patogener i mänskliga slemhinnor såsom luftvägarna, matsmältningsorganen och fortplantningsorganen.

Slemhinneimmunitet i sig gör inte kroppen mer immun, men den kan hjälpa vår kropp att hantera invasionen av främmande patogener mer effektivt. Genom att kontinuerligt stimulera slemhinneimmuniteten producerar vår kropp fler antikroppar, vilket stärker vår immunitet.

Så, hur kan mukosal immunitet stimuleras? Här är några förslag:

1. Få i dig tillräckligt med C-vitamin. C-vitamin är en naturlig antioxidant som stärker immuncellernas funktion, vilket hjälper till att bekämpa infektioner. Frukt och gröna bladgrönsaker som citroner, apelsiner och jordgubbar är rika på C-vitamin.

2. Öka intaget av mjölksyrabakterier. Mjölksyrabakterier kan främja balansen i tarmfloran och hämma tillväxten av skadliga bakterier. Vanliga mjölksyrabakterier inkluderar yoghurt, surkål, kimchi, etc.

3. Öva andningen Djupa andetag. Djup andning ökar syretillförseln och ventilationen till lungorna, vilket kan hjälpa till att avlägsna ackumulerade patogener från lungorna.

Kort sagt, stimulering av slemhinneimmunitet är ett viktigt medel för att förbättra immuniteten. Vi bör göra vårt bästa för att förbättra vår slemhinneimmunitet genom kost och levnadsvanor, för att skydda vår hälsa. Ur denna synvinkel måste vi förbättra immuniteten. Cistanche kan förbättra immuniteten avsevärt eftersom köttaska innehåller en mängd olika biologiskt aktiva komponenter, såsom polysackarider, två svampar och Huang Li, som kan stimulera immunförsvaret. Olika typer av celler ökar deras immunförsvar.

Klicka cistanche deserticola tillägg

1. Introduktion

Akuta luftvägsinfektioner är nästan säkert den vanligaste dödsorsaken bland barn < 5 år gamla i utvecklingsländer (Williams et al., 2002). Flera vacciner, såsom de mot influensa, pertussis och pneumokocker, har utvecklats för luftvägsinfektioner (White, 1988; Pittman, 1991; Chen et al., 2020). De flesta av dessa vacciner administreras intramuskulärt och subkutant, vilket effektivt skulle kunna inducera serumimmunoglobulin (Ig)G. Andra vägar är emellertid mer användbara för att stimulera slemhinneimmunitet för att förhindra akuta luftvägsinfektioner. Slemhinneadministrationer, såsom intranasal och pulmonell, har rapporterats effektivt inducera mukosal IgA och förhindra luftvägsinfektioner (Giri et al., 2005; Ainai et al., 2017).

Å andra sidan bör vacciner för intranasal och pulmonell administrering inte innehålla adjuvans som har rapporterats orsaka inflammatoriska reaktioner och sårbildning på administreringsstället (Tamura et al., 1988; McKee et al., 2007). Ett annat tillvägagångssätt för att förbättra effektiviteten av vacciner utan adjuvans är att utveckla ett system som effektivt kan leverera vacciner till mukosala antigenpresenterande celler (APC).

I en tidigare studie utvecklade vi en ny vaccintillförselvektor konstruerad med ett antigen, bensalkoniumklorid (BK) och c-polyglutaminsyra (c-PGA). Ett komplex innefattande ovalbumin (OVA) som modellantigen, BK och c-PGA (OVA/BK/c-PGA-komplex) levererade effektivt OVA till dendritiska celler och förbättrade OVA-specifik serum-IgG-induktion efter subkutan administrering till möss (Kurosaki et al. ., 2012). Föreliggande studie syftade till att undersöka effekten av pulmonell administrering av ett OVA/BK/c-PGA-komplex på induktionen av mukosal immunitet i lungorna och serum.

2. Material och metoder

2.1. Kemikalier

OVA köptes från Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, USA). BK erhölls från Nacalai Tesque, Inc. (Kyoto, Japan). c-PGA tillhandahölls av Yakult Pharmaceutical Industry Co., Ltd. (Tokyo, Japan). Fluoresceinisotiocyanatmärkt OVA (FITC-OVA) och Alexa Fluor 647-märkt OVA (Alexa647- OVA) erhölls från Invitrogen (Carls, CA, USA). Fetalt bovint serum (FBS) köptes från Biological Industries Ltd. (Kibbutz Beit Haemek, Israel). OPTI-MEM I erhölls från GIBCO BRL (Grand Island, NY, USA), och en förblandning av antibiotikalösning innehållande penicillin, streptomycin och L-glutamin erhölls från Wako Pure Chemical Industries, Ltd. (Osaka, Japan). Dulbeccos modifierade örnmedium (DMEM) och RPMI1640-medium erhölls från Nissui Pharmaceutical Co., Ltd. (Tokyo, Japan).

2.2. Komplex beredning

Tidigare konstruerade vi ett OVA/BK/c-PGA-komplex i ett viktförhållande på 1:0.2:0.2 (Kurosaki et al., 2012). För att framställa OVA/BK-komplexet blandades en lämplig mängd BK-lösning (pH 5.0) löst i 5 procent glukos med OVA-lösning (pH 7.0) löst i 5 procent glukos och lämnas i 15 minuter vid 4 C. För att belägga OVA/BK-komplexet med c-PGA sattes en c-PGA-lösning (pH 7,0) löst i 5 procent glukos till OVA/BK-komplexet och lämnades i ytterligare 15 minuter vid 4 C. Partikelstorleken och f-potentialen för varje komplex mättes med användning av en Zetasiser Nano ZS (Malvern Instruments, Ltd., Malvern, Storbritannien).

2.3. Celler

Musmakrofagcellinje RAW264.7 och dendritisk cellinje DC2.4 användes. RAW264.7-celler odlades i DMEM kompletterat med 10 procent FBS och antibiotika. DC2.4-celler odlades i RPMI1640-medium kompletterat med 10 procent FBS, antibiotika, 1 mM icke-essentiella aminosyror och 1 nM 2-merkaptoetanol. Dessa celler bedömdes under en fuktad atmosfär av 5 procent CO2 i luft vid 37C.

2.4. In vitro cellulärt upptagsexperiment

RAW264.7-celler och DC2.4-celler ströks ut på 24-brunnsplattor (Corning, NY, USA) med en densitet av 2.0 104 celler/brunn och odlades i 50{ {21}} mL odlingsmedium. Efter 24-h förinkubation ersattes mediet med OPTI-MEM I-medium och cellerna inkuberades med 5 mg FITC-OVA och komplexet innehållande 5 mg FITC-OVA under 2 timmar. Efter inkubation tvättades dessa celler med PBS och observerades under ett fluorescerande mikroskop (BIOREVO BZ-9000; Keyence Co., Osaka, Japan). Efter observation lyserades dessa celler i 300 1L lyseringsbuffert (pH 7,8 och 0,1 M Tris/HCl-buffert innehållande 0,05 procent Triton X-100 och 2 mM EDTA). Lysaten placerades i 96-brunnsplattor och fluorescensen av FITC-OVA mättes vid en emissionsvåglängd på 530 nm med en excitationsvåglängd på 480 nm, med användning av en fluorometrisk mikroplattläsare (Infinite-200Pro M-Plex, Tecan Japan Co., Ltd., Kanagawa, Japan). Proteininnehållet i lysatet bestämdes genom en Bradford-analys med BSA som standard. Absorbansen mättes med användning av mikroplattläsaren vid 570 nm. Upptag av FITC-OVA indikerades som mg per mg protein.

2.5. Djur

Djurvård och experimentella procedurer utfördes av riktlinjerna för djurförsök vid Nagasaki University med godkännande från den institutionella kommittén för djurvård och användning. C57BL/6N-möss av hankön (5 veckor gamla) köptes från Japan SLC (Shizuoka, Japan). Efter att ha transporterats fick mössen acklimatisera sig till sin nya miljö under 1 dag innan experimenten. Lungadministrering (40 mL) utfördes genom att använda en tungdepressor med ljus genom spontan andning hos möss som bedövats genom inandning av isofluran (Horiguchi et al., 2015).

2.6. Lungackumulering av komplex

För att undersöka ackumuleringen av OVA administrerades 40 mg Alexa647-OVA och komplexet innehållande 40 mg Alexa647- OVA i en volym av 40 ml per mus till möss via lungväg. Sex dagar efter administreringen avlivades mössen och lungorna dissekerades. Den fluorescerande intensiteten hos Alexa647-OVA i muslungan observerades med ett Xenogen IVIS Lumina System kopplat med programvaran Living Image för datainsamling (Xenogen, Co, Almeda, CA, USA). Efter observationen homogeniserades dessa lungor med lyseringsbuffert och homogenaten centrifugerades vid 15,000 rpm (Kubota-3500, Kubota Corporation, Tokyo, Japan) under 5 minuter och fluorescensen av Alexa647 i dessa supernatanter bestämdes med mikroplattledare vid en excitation och en emissionsvåglängd på 640 respektive 670 nm.

2.7. Immunisering

Möss immuniserades med en 5-procentig glukoslösning, 40 mg OVA, ett tomt komplex av 8 mg BK och 8 mg c-PGA (vehikel) och OVA/BK/c-PGA-komplex innehållande 40 mg OVA genom pulmonell administrering, 4 gånger varje vecka. Två veckor efter den sista immuniseringen erhölls bronkoalveolär sköljvätska (BALF) och serum. BALF och serum användes för enzymkopplade immunosorbentanalyser (ELISA).

2.8. Bestämning av OVA-specifik antikroppsinduktion

För OVA-beläggning sattes 100 ml OVA-lösning (10 mg/ml, i 1 M natriumvätekarbonat) till varje brunn på ELISA-plattorna (Thermo Fisher Scientific Inc., Waltham, MA, USA) och inkuberades över natten vid 4 C. Plattorna tvättades tre gånger med fosfatbuffrad saltlösning innehållande 0,05 procent Tween-20 (PBST), 200 ml blockerande reagens N 102 (Nichiyu, Co., Ltd., Tokyo, Japan 10 (MgS04) tillsattes för att blockera ospecifik bindning och inkuberades sedan under 6 timmar vid 4 C. Plattorna tvättades två gånger med PBST. Sedan sattes 100 ml alikvoter av 1000-faldigt utspätt serum och outspädda BALF-prover till varje brunn och inkuberades över natten vid 4 C. Efter fem gånger tvättning med PBST, 100 ml vardera pepparrotsperoxidas (HRP) – konjugerad get-anti -mus IgG, IgA, IgM, IgE, IgG1, IgG2a, IgG2b och IgG3 (1:10,000) (Abcam, Cambridge, Storbritannien) – sattes till varje brunn och inkuberades vid rumstemperatur i 1 timme och tvättas sedan fem gånger med PBST. TMB One-lösning (Promega, WI, USA) användes och bereddes enligt tillverkarens instruktioner. Reaktionen stoppades sedan vid 15 minuter genom tillsats av 1 N saltsyra. Absorbansen avlästes vid 450 nm med användning av en mikroplattläsare.

2.9. In vivo toxicitet av OVA/BK/c-PGA-komplex

OVA och OVA/BK/c-PGA-komplex administrerades till möss via lungvägen. BALF erhölls 3 och 24 timmar efter administrering från möss. Tjugofyra timmar efter administrering dissekerades även lungan. Laktatdehydrogenas (LDH) aktivitet i BALF mättes med QuantiChromTM Lactate Dehydrogenase Kit (BioAssay Systems, CA, USA) enligt fabrikens instruktioner. Lungproverna fixerades i en 4-procentig paraformaldehydfosfatbuffertlösning. Sektioneringen och hematoxylin-eosin (HE)-färgningen anförtroddes till GenoStaff (Tokyo, Japan). HE-färgade sektioner av lungan observerades genom mikroskopi vid 20 förstoring.

2.10. Statistisk analys

Den statistiska signifikansen av skillnader mellan de två grupperna bedömdes genom att utföra Students t-test. Flera jämförelser mellan grupperna utfördes genom att utföra Tukeys test. p-värden < 0,05 ansågs vara indikativa för statistisk signifikans.

3. Resultat

3.1. Komplexets fysikalisk-kemiska egenskaper

Vi konstruerade ett anjoniskt OVA/BK/c-PGA-komplex i ett viktförhållande på 1:0.2:0.2. Det c-PGA-belagda komplexet hade en partikelstorlek på ungefär 105,4 nm och en f-potential på ungefär 35,5 mV.

3.2. Cellulärt upptag av komplexet

RAW264.7-celler och DC2.4-celler behandlades med FITC-OVA och FITC-OVA/BK/c-PGA-komplex, och det cellulära upptaget av FITC-OVA visualiserades, som visas i figur 1. FITC-OVA/BK/ c-PGA-komplexet togs i hög grad av RAW264.7-cellerna och DC2.4-cellerna, och stark grön fluorescens av FITC-OVA observerades (Figur 1 (A, B), respektive). Samtidigt observerades små mängder FITC-OVA i båda cellerna behandlade med FITC-OVA.

Cellulärt upptag av FITC-OVA kvantifierades i RAW264.7-cellerna och DC2.4-cellerna (Figur 1(C)). FITC-OVA/BK/c-PGA-komplex visade signifikant högre upptag än FITC-OVA i båda cellerna (p < 0,01).

3.3. Lungackumulering av Alexa647-OVA efter pulmonell administrering

Alexa647-OVA och Alexa647-OVA/BK/c-PGA-komplex administrerades till möss via lungvägen för att fastställa lungansamlingen av Alexa647-OVA som antigen. 6 dagar efter administrering dissekerades lungorna och deras fluorescensintensitet visualiserades med användning av ett Xenogen IVIS Lumina System. En ex-vivo fluorescerande bild visas i figur 2(A). Hög fluorescensintensitet observerades i hela lungan 6 dagar efter pulmonell administrering, även om det inte fanns någon fluorescensintensitet i mjälten, hjärtat, njurarna och levern (data visas inte). Lungackumuleringen var högre för Alexa647-OVA/BK/c-PGA-komplexet än för Alexa647-OVA på dag 6. Som visas i figur 2(B) var lungackumuleringen signifikant högre för Alexa 647-OVA/BK/c-PGA-komplex än för Alexa647- OVA (p < .05).

3.4. OVA-specifik antikropp i serum efter pulmonell administrering av komplexet

En 5-procentig glukoslösning, BK/c-PGA-komplex (vehikel), OVA och OVA/BK/c-PGA-komplex administrerades via lungvägen till möss fyra gånger, och sedan serum OVA-specifikt IgG, IgA, IgM, och IgE bestämdes med ELISA såsom visas i figur 3. Lungadministrering av OVA och OVA/BK/c-PGA-komplexet ökade IgG-nivåerna i möss, även om OVA-specifikt IgG inte detekterades i möss som administrerades 5 procent glukos och vehikel. Dessutom var IgG- och IgA-produktionen signifikant högre efter administrering av OVA/BK/c-PGA-komplexet än efter administrering av OVA (p < 0,05 eller 0,01). Å andra sidan inducerades inte OVA-specifikt IgM och IgE av OVA eller OVA/BK/c-PGA-komplexet.

3.5. OVA-specifik antikropp i BALF efter pulmonell administrering av komplexet

OVA-specifikt IgG, IgA, IgM och IgE i BALF bestämdes också, som visas i figur 4. Nivån av IgG ökade signifikant av OVA i förhållande till nivåerna efter administrering av kontrollen och vehikeln (p < 0,05 eller .01). Icke desto mindre ökade OVA/BK/c-PGA-komplexet signifikant inte bara IgG utan även IgA i BALF (p < 0,01). OVA-specifikt IgM och IgE inducerades emellertid inte av OVA eller OVA/BK/c-PGA-komplexet.

3.6. IgG-subtyper i serum efter pulmonell administrering av komplexet

Induktionseffekter av OVA-specifika IgG-subtyper, såsom IgG1, IgG2a, IgG2b och IgG3 i serumet bestämdes som visas i figur 5. Jämfört med kontrollen och vehikeln ökade OVA signifikant endast IgG1 (p < 0,01). Antikroppsnivåerna för alla subtyper inducerade av OVA/BK/c-PGA-komplexet var signifikant högre än nivåerna inducerade av kontrollen och vehikeln (p < 0,05 eller 0,01).

3.7. IgG-subtyper i BALF efter pulmonell administrering av komplexet

OVA-specifika IgG-subtyper, såsom IgG1, IgG2a, IgG2b och IgG3 i BALF bestämdes också, som visas i figur 6. OVA ökade signifikant endast IgG1-nivåer i förhållande till de som inducerades av kontrollen och vehikeln (p < 0,01) . Jämfört med kontrollen, vehikeln och OVA inducerade OVA/BK/c-PGA-komplexet signifikant högre antikroppsnivåer av alla subtyper (p < 0,05 eller 0,01).

3.8. In vivo toxicitet av OVA/BK/c-PGA-komplex

Möss administrerades 5 procent glukoslösning, OVA och OVA/BK/c-PGA-komplexet. LDH-aktivitet i BALF bestämdes 3 eller 24 timmar efter administrering (Figur 7). Administrering av OVA och OVA/BK/c-PGA-komplex hade liten effekt på LDH-nivåerna i BALF.

Tjugofyra timmar efter administrering dissekerades lungorna från dessa möss för histologisk analys. HE-färgade lungsektioner visas i figur 8. Inga histologiska abnormiteter observerades hos mössen som behandlats med OVA och OVA/BK/c-PGA-komplexet.

4. Diskussion

Lungan styr andningen och utsätts för många patogener, såsom virus och bakterier som orsakar luftvägsinfektioner. Dessa patogener infekterar genom lungslemhinnan, så mukosal immunitet måste induceras för att skydda mot luftvägsinfektioner. Förhindra luftvägsinfektioner, slemhinneimmunitet har en viktig roll; intradermal och intramuskulär administrering av vaccinet kan dock inte starkt stimulera mukosal immunitet (Ito et al., 2003; Amorij et al., 2007). Det mukosala immunsystemet som inducerar sekretoriskt IgA utvecklas på slemhinneytan. Flera APC, såsom dendritiska celler och makrofager, har rapporterats vara lokaliserade i slemhinneytan (Kopf et al., 2015). Vidare finns bronkassocierad lymfoid vävnad (BALT) i bronkiolarslemhinnan och är en lymfoid follikel som har en central roll i slemhinneimmuniteten i luftvägarna (Bienenstock, 1980). Lungadministrering av vaccinet förväntas stimulera det mukosala immunsystemet effektivt. Därför konstruerade vi OVA/BK/c-PGA-komplexet för att bedöma dess användbarhet som ett vaccin administrerat via lungvägen.

Figur 4 visar BALF-koncentrationen av OVA-specifika antikroppar efter pulmonell administrering av OVA och OVA/BK/c-PGA-komplexet. Pulmonell administrering av OVA ökade IgG men hade liten effekt på IgA i BALF. Å andra sidan inducerade OVA/BK/c-PGA-komplexet signifikant IgA-utsöndring i BALF. Dessutom var serum-IgG-induktion signifikant högre efter administrering av OVA/BK/c-PGA-komplexet än efter administrering av OVA (Figur 3). Serum IgG är viktigt för att förhindra förvärring av eventuella infektioner som uppstår (Huber et al., 2006; Schroeder & Cavacini, 2010). Resultaten indikerar att OVA/BK/c-PGA-komplexet kan förhindra luftvägsinfektioner genom hög mukosal IgA-induktion och förvärring av luftvägsinfektion genom hög serum-IgG-induktion. Dessutom observerades inte IgE-induktion av OVA/BK/c-PGA-komplexet, och detta resultat indikerade liten risk för allergisk reaktion av OVA/BK/c-PGA-komplexet.

OVA/BK/c-PGA-komplexet kunde också inducera inte bara IgG1 och IgG2b utan även IgG2a och IgG3 (Figur 5). IgG1 och IgG2b är kända som immunglobuliner av Th2-typ som medierar det humorala immunsvaret, och IgG2a och IgG3 är kända som immunglobuliner av Th1-typ som medierar det cellulära immunsvaret (Firacative et al., 2018) . Därför kan OVA/BK/c-PGA-komplexet inducera både humorala och cellulära immunsvar. Dessa resultat tyder på att detta system kan vara användbart för vacciner mot infektioner såväl som cancer. Den förebyggande effekten, antigeninducerade cytokinsvar av Th1- och Th2-typ i inducerbar BALT, Treg-population och IL-10-induktion bör utvärderas med riktiga antigener från infektioner eller cancer i framtiden studier.

Den starka induktionen av OVA/BK/c-PGA-komplexet av immunsvaret måste bero på den höga retentionen av komplexet i lungan och den effektiva leveransen av OVA till APC:erna i lungslemhinnan. Våra resultat bekräftade detta genom att visa att 6 dagar efter administrering fanns Alexa647-OVA/BK/c-PGA-komplexet kvar i lungan och visade signifikant högre fluorescens än Alexa647- OVA (Figur 2). Komplexbildningen kan förhindra diffusion av OVA och skydda OVA från nedbrytning av proteaser i lungslemhinnan. Dessutom kunde OVA/BK/c-PGA-komplexet effektivt leverera OVA till RAW264.7 makrofagceller och DC2.4 dendritiska celler (Figur 1). Dessa resultat indikerade att OVA/BK/c-PGA-komplexet skulle tas upp av alveolära APC och inducera ett högt immunsvar efter pulmonell administrering. Det har rapporterats att c-PGA-belagda nanopartiklar togs upp av den gamma-glutamyl transpeptidas-medierade endocytotiska vägen (Du et al., 2015). Vi bekräftade också att de c-PGA-belagda nanopartiklarna togs upp av den c-PGA-specifika endocytotiska vägen (Kurosaki et al., 2009). OVA/BK/c-PGA-komplexet kan tas upp av APC:er i lungan genom samma mekanismer. Det är dock fortfarande inte klart vilka celler som är ansvariga för OVA-upptag och efterföljande antigenpresentation vid induktion av specifik immunitet. Ytterligare studier om detaljerade immuninduktionsmekanismer bör utföras i framtiden.

Många adjuvanser har utvecklats för att förbättra effektiviteten av vacciner; dock har adjuvanser rapporterats orsaka inflammatoriska reaktioner på injektionsstället (Tamura et al., 1988; McKee et al., 2007). Därför kan administrering av adjuvans till lungan orsaka allvarliga biverkningar, såsom lunginflammation. Efter pulmonell administrering av OVA/BK/c-PGA-komplexet ökade inte LDH-nivåerna i BALF (Figur 7) och histologiska abnormiteter observerades inte i det HE-färgade avsnittet (Figur 8). Enligt uppgift är c-PGA en biokompatibel och biologiskt nedbrytbar polymer som inte uppvisar immunoinflammatoriska reaktioner (Prodhomme et al., 2003; Ye et al., 2006). BK är en säker kvartär ammoniumförening som har använts i stor utsträckning kliniskt som en antimikrobiell tillsats (Marple et al., 2004). Dessa rapporter stöder också säkerheten för OVA/BK/c-PGA-komplexet. Å andra sidan observerades högre LDH-nivåer 3 timmar efter lungadministreringen än vid 24 timmar, även i kontrollgruppen. Dessa resultat indikerar att en lätt irritation orsakades av pulmonell administrering. Ytterligare säkerhetsstudier behövs innan den kliniska tillämpningen av OVA/BK/c-PGA-komplexet.

I den föreliggande studien visade vi hög slemhinneinduktion av immunsystemet genom en ny vaccintillförselvektor konstruerad med ett antigenprotein, BK och c-PGA efter pulmonell administrering. Systemet kan användas för vacciner mot olika luftvägsinfektioner.

Avslöjande uttalande

Ingen potentiell intressekonflikt rapporterades av författaren/författarna.

Finansiering

Detta arbete stöddes av Japan Society for the Promotion of Science (JSPS) KAKENHI under anslag [JP20K12649 och JP20K07156].

Referenser

1.Ainai A, Suzuki T, Tamura SI, et al. (2017). Intranasal administrering av helt inaktiverat influensavirusvaccin som en lovande influensavaccinkandidat. Viral Immunol 30:451-62.

2. Amorij JP, Saluja V, Petersen AH, et al. (2007). Pulmonell leverans av ett inulinstabiliserat influensasubenhetsvaccin framställt genom sprayfrystorkning inducerar systemiska, mukosala humorala såväl som cellmedierade immunsvar i BALB/c-möss. Vaccin 25:8707–17.

3. Bienenstock J. (1980). Bronk-associerad lymfoid vävnad och källan till immunglobulininnehållande celler i slemhinnan. Environ Health Perspect 35:39–42.

4. Chen JR, Liu YM, Tseng YC, et al. (2020). Bättre influensavaccin: ett industriperspektiv. J Biomed Sci 27:11.

5. Du X, Xiong L, Dai S, et al. (2015). c-PGA-belagda mesoporösa kiseldioxidnanopartiklar med kovalent fästa prodrugs för förbättrat cellulärt upptag och intracellulär GSH-responsiv frisättning. Adv Healthc Mater 4: 771–81.

6. Firacative C, Gressler AE, Schubert K, et al. (2018). Identifiering av T-hjälpare (Th)1- och Th2-associerade antigener från cryptococcus neoformans i en murin modell av lunginfektion. Sci Rep 8:14.

7. Giri PK, Sable SB, Verma I, et al. (2005). Jämförande utvärdering av intranasal och subkutan immuniseringsväg för utveckling av ett mukosalt vaccin mot experimentell tuberkulos. FEMS Immunol Med Microbiol 45:87–93.

8. Horiguchi M, Oiso Y, Sakai H, et al. (2015). Lungadministrering av fosfoinositid 3-kinashämmare är en botande behandling för kronisk obstruktiv lungsjukdom genom alveolär regenerering. J Control Release 213:112–9.

9. Huber VC, McKeon RM, Brackin MN, et al. (2006). Distinkta bidrag från vaccininducerade immunglobulin G1 (IgG1) och IgG2a antikroppar till skyddande immunitet mot influensa. Clin Vaccine Immunol 13: 981–90.

10. Ito R, Ozaki YA, Yoshikawa T, et al. (2003). Roller av anti-hemagglutinin IgA och IgG antikroppar på olika platser i luftvägarna hos vaccinerade möss för att förhindra dödlig influensapneumoni. Vaccin 21:2362–71.

11.Kopf M, Schneider C, Nobs SP. (2015). Utvecklingen och funktionen av lungboende makrofager och dendritiska celler. Nat Immunol 16: 36–44.

12. Kurosaki T, Kitahara T, Fumoto S, et al. (2009). Ternära komplex av pDNA, polyetylenimin och gamma-polyglutaminsyra för gentillförselsystem. Biomaterials 30:2846–53.

13. Kurosaki T, Kitahara T, Nakamura T, et al. (2012). Utveckling av effektivt cancervaccin med användning av inriktningssystem av antigenprotein till APC. Pharm Res 29:483–9.

14. Marple B, Roland P, Benninger M. (2004). Säkerhetsgranskning av bensalkoniumklorid som används som konserveringsmedel i intranasala lösningar: en översikt över motstridiga data och åsikter. Otolaryngol Head Neck Surg 130: 131–41.

15.McKee AS, Munks MW, Marrack P. (2007). Hur fungerar adjuvans? Viktiga överväganden för ny generation adjuvanser. Immunity 27: 687–90.

For more information:1950477648nn@gmail.com