Intratumor barndomsvaccinspecifik CD4+ T-cell Recall Coordinates Antitumor CD8+ T-celler och eosinofiler
Oct 17, 2023
ABSTRAKT
Bakgrund
Antitumörmekanismer för CD4+ T-celler förblir grovt definierade, och det saknas medel för att effektivt utnyttja CD4+ T-cellshjälp för cancerimmunterapi. Redan existerande minnes-CD4+ T-celler har potential att utnyttjas för detta ändamål. Rollen av redan existerande immunitet i viroterapi, i synnerhet rekombinant poliovirusimmunterapi där barndomspoliovaccinspecifik immunitet är allestädes närvarande, förblir oklar. Här testade vi hypotesen att barndomsvaccinspecifika minnes-T-celler förmedlar antitumörimmunterapi och bidrar till antitumöreffekten av polioviroterapi.
Fördelarna med cistanche tubulosa-Antitumor
Metoder
Effekten av polioimmunisering på polioviroterapi och antitumöreffekterna av polio- och stelkrampsåterkallelse testades i syngena murina melanom- och bröstcancermodeller. CD8+ T-cell och B-cell knockout, CD4+ T-cell utarmning, CD4+ T-cell adoptiv överföring, CD40L blockad, bedömningar av antitumör T-cell immunitet och eosinofil utarmning definierade antitumörmekanismer för återkallande antigener. Pan-cancer-transkriptomdatauppsättningar och korrelat från kliniska prövningar av polioviroterapi användes för att bedöma relevansen av dessa fynd hos människor.
Resultat
Tidigare vaccination mot poliovirus stärkte avsevärt antitumöreffekten av polioviroterapi hos möss, och intratumoråterkallelse av poliovirus eller stelkrampsimmunitet fördröjde tumörtillväxt. Intratumor återkallande antigener förstärkte antitumör T-cells funktion, orsakade markant tumörinfiltration av typ 2 medfödda lymfoida celler och eosinofiler, och minskade proportioner av regulatoriska T-celler (Tregs). Antitumöreffekter av återkallande antigener medierades av CD4+ T-celler, begränsade av B-celler, oberoende av CD40L, och beroende av eosinofiler och CD8+ T-celler. Ett omvänt förhållande mellan eosinofil- och Treg-signaturer observerades över cancertyperna Cancer Genome Atlas (TCGA), och eosinofilutarmning förhindrade Treg-reduktioner efter polioåterkallelse. Polioneutraliserande antikroppstitrar förbehandling var högre hos patienter som levde längre, och eosinofilnivåerna ökade hos majoriteten av patienterna efter polioviroterapi
Slutsats
Redan existerande anti-polio-immunitet bidrar till antitumöreffekten av polioviroterapi. Detta arbete definierar potentialen för cancerimmunterapi hos barnvacciner, avslöjar deras användbarhet för att engagera CD4+ T-cellshjälp för antitumör CD8+ T-celler och implicerar eosinofiler som antitumöreffektorer av CD4+ T-celler.
INTRODUKTION
Även om CD4+ T-celler är viktiga förmedlare av adaptiv immunfunktion och minne, saknas 1–3 vägar för att utnyttja deras potential för cancerimmunterapi. Adaptivt immunminne möjliggör robusta immunsvar mot tidigare påträffade patogener. Följaktligen, återkalla svar, det vill säga aktivering av adaptiva minnesceller av besläktat antigen, orkestrera lokaliserad medfödd och adaptiv inflammation.4 5 Baserat på nyligen genomfört arbete som visar cancerimmunterapi användbarhet av intratumorala antivirala CD8+ T-cellssvar , 6 7 antog vi att tumörlokaliserad, barnvaccin-associerad CD4+ T-cellsåterkallelse kan påverka antitumörfunktioner hos CD{10}} T-celler. PVSRIPO (nu känt som 'Lerapolturev'), det levande försvagade poliovirus typ 1 (Sabin)-vaccinet modifierat med det inre ribosomala inträdesstället för humant rhinovirus typ 2,8 har visat tidiga bevis på effekt vid återkommande glioblastom (rGBM)9 och återkommande , icke-resekterbart melanom10 11 efter intratumör (it) administrering. Poliovirus (polio)vaccination är en del av det vanliga pediatriska immuniseringsschemat över hela världen, antingen med levande försvagade (Sabin) eller inaktiverade (IPOL) vacciner. Den kodande sekvensen för PVSRIPO är identisk med typ 1 Sabin-vaccinet. Redan existerande anti-PVSRIPO/polio-antikroppsreaktivitet i serum bekräftades hos alla patienter som fick PVSRIPO-behandling.9 10 12 Dessutom innebär klinisk användning av PVSRIPO tidigare boost med trivalent IPOL minst 1 vecka innan dess administrering, vilket orsakade serum-PVSRIPO-neutraliserande antikroppsökningar hos alla patienter.9 10 Antitumöreffekterna av polioviroterapi omfattar neoplastisk cellskada och subletal virusinfektion av myeloidceller som driver på ihållande typ I-interferon (IFN)-signalering.12–15 Anti-polio-immunminne hindrar sannolikt PVSRIPO-replikation inuti tumören men kan ge en alternativ antitumörverkningsmekanism genom att den återkallar poliovaccinspecifika T-celler. Med hjälp av mustumörmodeller av melanom och bröstcancer visar vi att redan existerande immunitet mot polio potentierar antitumöreffekten av polioviroterapi genom att engagera antitumörfunktioner hos CD4+ T-celler. Det återkallade polio eller stelkramp utlöste markerad CD4+ T-cell, typ 2 medfödd lymfoidcell (ILC2) och eosinofilinflöde; förmedlar antitumöreffektivitet genom CD8+ T-celler och eosinofiler på ett CD40L-oberoende sätt. I kohorter av patienter med rGBM som behandlats med Lerapolturev (PVSRIPO) var högre nivåer av polioneutraliserande antikroppar förbehandling associerade med längre överlevnad, och perifer induktion av eosinofiler observerades hos patienter med melanom efter behandling med Lerapolturev. Således samordnar polioviroterapi och barnvaccinassocierade antigener antitumör typ I- och II-immunitet via CD4+ T-cellsåterkallelse.
cistanche tillägg fördelar-öka immunitet
MATERIAL OCH METODER
Utökade material och metoder presenteras i tilläggsinformation online.
Möss, cellinjer, virus, poly(I:C) och antikroppar av in vivo kvalitet
(Tokyo, Japan). Vildtyp (wt) (#000664), CD8 knockout (k/o) (#002665), B-cell k/o (#002288), OT-I (#003831) och CD45.1 C57BL/6 möss (# 002014) var från The Jackson Laboratory. OT-I och CD45.1 C57BL/6 möss korsades för att generera CD45.1+OT-I möss. B16.F10 (American Type Culture Collection), E0771 (G. Palmer, Duke University, USA), E0771hCD155, B16.F10hCD155 och B16. F10.9hCD155-OVA-celler odlades i Dulbeccos modifierade örnmedium med hög glukoshalt (DMEM, Gibco) innehållande 10 % fetalt bovint serum (FBS) (Sigma-Aldrich). B16. F10.9hCD155-OVA-, B16-F10hCD155- och E0771hCD155-celler härleddes tidigare.12 13 Alla cellinjer bekräftades vara mykoplasma-negativa. PVSRIPO av laboratoriekvalitet, musanpassad PVSRIPO (mRIPO) och UV-inaktiverad PVSRIPO (UVP) genererades i HeLa-celler följt av storleksuteslutningsrening av den resulterande supernatanten som tidigare beskrivits.12 13 PVSRIPO användes för vaccination; UVP användes för att isolera effekter av poliokapsid (som innehåller poliovaccinspecifika epitoper); mRIPO är en musanpassad version av PVSRIPO som användes för att testa den fulla effekten av polioviroterapi på möss. VacciGrade högmolekylär poly(I:C) (InvivoGen) rekonstituerades enligt tillverkarens instruktioner. In vivo-antikroppar mot interleukin (IL)-5 (TRFK5) eller kontroll (HRPN), CD4 (GK1.5) eller kontroll (LTF-2), CD40L (MR-1) eller kontroll (#BP0091), och CD40 (FGK4.5) eller kontroll (2A3) var från Bio X Cell.
Vacciner, immuniseringar och virustitrar
Om inget annat anges, vacciner som använder PVSRIPO (1×107 plackbildande enheter (pfu)/mus), stelkrampstoxoid (Tet) (MilliporeSigma; 0,5 µg/mus), eller hemocyanin-nyckelhåls-limpet (KLH, Sigma) -Aldrich; 100 µg/mus) späddes i fosfatbuffrad saltlösning (PBS) med Alhydrogel (1:1; InvivoGen); 50 µL vaccin administrerades bilateralt i quadricepsmusklerna. Kombinerade immuniseringar av IPOL och Tenivac (Sanofi Pasteur) administrerades ensidigt för varje vaccin. Vaccinförstärkningar inträffade 14 dagar senare. För virustitrar skördades tumörer, vägdes och homogeniserades mekaniskt i 1 ml PBS. Homogenat testades genom plackanalys.16
Murina tumörmodellexperiment
Fördelarna med cistanche tubulosa-Antitumor
För B16-implantationer implanterades 2×105 celler subkutant i flanken av han- och honmöss; för E0771-implantationer implanterades 5×105-celler i den fjärde bröstfettkudden av honmöss. hCD155-tg C57BL/6-möss användes med mRIPO för att rekapitulera polioviroterapi (aktiv viral replikation ± redan existerande immunitet); medan wt C57BL/6-möss, som inte är tillåtande för polio, användes med UVP för att isolera effekterna av polioåterkallelse. Tumörer behandlades med antingen DMEM eller PBS (vehikel), mRIPO (1 × 107 pfu), UVP (1 × 108 förinaktiverad pfu), Tet (0,5 µg) och/eller poly(I: C) (30 µg) enligt anvisningarna i figurlegender. Behandlingsgrupper randomiserades efter tumörvolym (tjockleksmätningar, med användning av ekvationen L × W × W/2) på den första behandlingsdagen. Möss avlivades när tumörvolymen översteg 1000 mm3 såvida de inte föregicks av sårbildning (vilket var sällsynt och inte associerat med någon speciell behandling), i vilket fall möss uteslöts från studien. Gruppstorlekar baserades på effektbedömningar från pilotexperiment eller tidigare erfarenhet.12 Tumörmätningar utfördes blinda för it-behandlingsgruppen med början efter den sista dosen av it-terapi/antigen. Möss med avvikande starttumörvolym vid tidpunkten för randomisering (1 SD från medelvärdet) exkluderades.
Flödescytometrianalys av tumörer
Tumörer skördades vid tidpunkter som anges i figurförklaringar och dissocierades i RPMI-1640-media (Thermo Fisher) innehållande 100 µg/mL Liberase-TM (Sigma-Aldrich) och 10 µg/ml DNAse I (Roche) under 30 minuter vid 37 grader följt av passage genom en 70 µM (Olympus Plastics) cellsil, centrifugering och tvättning i PBS. För experiment med Zombie Aqua (BioLegend) färgades cellerna med Zombie Aqua i PBS (1:500) enligt tillverkarens instruktioner. Cellsuspensioner inkuberades sedan med 1:50 mus TruStain FcX (BioLegend) följt av panelspecifik färgning i PBS innehållande 2% FBS. Färgning av intracellulära transkriptionsfaktorer, cytokiner och granzym B åstadkoms med användning av Foxp3/Transcription Factor Staining Buffer Set (Thermo Fisher) enligt tillverkarens instruktioner. Se kompletterande information online för information om paneler och antikroppar som används. Data samlades in på en Fortessa X20 vid Duke Cancer Institute Flow Cytometry Core Facility; FCS-filer analyserades med FlowJo V.10 (BD Biosciences). Gatingstrategier presenteras i kompletterande information online; isotypkontroller, fluorescens minus en kontroller och jämförelse med etablerade negativa cellpopulationer användes för att definiera positivitet.
Kliniska prövningsrelaterade analyser
PVSRIPO neutralisationstiteranalyser utfördes enligt protokollet för kliniska prövningar9, och värden för båda rGBM kliniska prövningarna användes från inskrivningsanalyser för kliniska prövningar. Fas I rGBM (NCT01491893) poliotitrar rapporterades tidigare och överlevnaden uppdaterades den 29 april 2020; fas II (NCT02986178) överlevnad uppdaterades från och med den 27 april 2021. Melanom (NCT03712358)10 11 andelen vita blodkroppar som deltog i kliniska prövningar erhölls från kliniska tester för fullständigt blodvärde (CBC).
Statistisk analys och kliniska prövningskohorter
Analysspecifika statistiska tester anges i motsvarande figurförklaringar. GraphPad Prism V.8 användes för att utföra statistiska analyser. Tvåvägsvariansanalys (ANOVA) användes för att bedöma skillnaden i tumörtillväxt över tid mellan grupper, och ANOVA post hoc-testning användes för att ta hänsyn till flera jämförelser om inte annat anges i figuren och/eller figurförklaringen. En statistisk sannolikhet för (s<0.05) was used unless otherwise noted; all p values are two-tailed. All data points reflect individual mice or patients.
RESULTAT
Polioimmunisering potentierar polioviroterapi
Vi testade först produktion av anti-polioantikroppar (dvs. serokonversion) hos möss som var transgena för den humana poliovirusreceptorn CD155 (hCD155-tg) vid immunisering med IPOL eller PVSRIPO (för att efterlikna typ 1 Sabin) med och utan alunadjuvans ( Alhydrogel; ALH), en del av licensierade vaccinformuleringar (t.ex. Pentacel, Pediarix, Kinrix).17 45 dagar mellan initial immunisering och tumörimplantation möjliggjorde etablering av immunologiskt minne.18 IPOL uppnådde begränsad serokonversion och PVSRIPO-immunisering framkallade en starkare antikroppssvar; ALH stärkte antikroppssvaren mot båda (online kompletterande figur S1A, B). För att rekapitulera höga nivåer av anti-polio-antikroppar hos patienter med cancer9 valde vi PVSRIPO+ALH-vaccination (hädanefter "polio") för att bestämma rollen av redan existerande polioimmunitet i PVSRIPO-immunterapi. Murina tumörmodeller och möss som uttrycker hCD155 har tidigare utvecklats för att tillåta inträde och replikering av PVSRIPO, och PVSRIPO anpassades till murina celler för att rekapitulera viral replikation i murina cancerceller (mRIPO).13 19 I tidigare studier i poliovaccinnaiva, syngena mustumörmodeller, en enda it-injektion av mRIPO krävde programmerat celldödsprotein-1 (PD1)/programmerad dödligand-1 blockad eller tumöruttryck av det immunogena ovalbumin (OVA)-proteinet för att mediera varaktiga antitumöreffekter .12 13 Det mRIPO-medierade dock hållbar antitumöreffekt i polioimmuniserade möss i melanom (B16) och bröstcancermodeller (E0771), i förhållande till kontroll (KLH) immuniserade motsvarigheter (figur 1A, B, kompletterande onlinefigur S1C) . Sålunda stärker tidigare polioimmunisering antitumöreffektiviteten av polioviroterapi. Polioviroterapi är associerad med T-cellsinflammation i tumören.12 13 mRIPO-replikation i tumörer reducerades avsevärt hos polioimmuniserade möss 2 dagar och 5 dagar efter behandling (figur 1C, D), i överensstämmelse med hög neutraliserande antikropp titrar (online tilläggsfigur S1B). Ändå observerade vi ökad total immuncellstäthet (CD45.2+) i polioimmuniserade möss efter mRIPO-terapi, vilket till stor del förklaras av ett inflöde av konventionella CD4+ T-celler och myeloidceller (CD11b+, Ly6GNeg, F4/80+) (figur 1E, tilläggsfigurer online S2A, S3). Efterföljande analys visade att de ökade CD11b+-myeloidcellerna i polioimmuniserade möss behandlade med mRIPO var eosinofiler (figur 1F); nivåer av dendritiska celler (DC) förändrades inte signifikant. Förhöjd tumörnekrosfaktor (TNF), granulocyt-makrofagkolonistimulerande faktor (GM-CSF), IL-1 och IL-17A-nivåer i tumörhomogenat och högre IL-4 och IL{ {51}} i explanterade tumördränerande lymfkörtelkulturer (TDLN) från polioimmuniserade möss som behandlats med mRIPO indikerade distinkta inflammatoriska svar efter mRIPO-terapi (online tilläggsbild S2B). GM-CSF och IL-5 är kända inducerare av eosinofilproduktion och rekrytering,20 vilket möjligen förklarar eosinofilinflöde i tumörer (figur 1F). Konventionella CD4+ T-celler och eosinofilinfiltration som svar på mRIPO-behandling av polioimmuniserade möss observerades också i en separat modell, E0771 (online tilläggsfigur S2C, D). Således accentuerar redan existerande immunitet mot polio inflammatoriska svar på mRIPO som är associerade med förbättrad antitumöreffektivitet.
Figure 1 Polio immunization potentiates antitumor and inflammatory efficacy of polio virotherapy. (A) Polio or KLH-immunized hCD155-tg mice bearing hCD155-tg B16 or E0771 tumors were treated with DMEM (control) or mRIPO. (B) Survival cut-off was tumor volume >1000 mm3; se online tilläggsbild S1C; representant från två experiment. (C) Schema för experiment i D–H. (D) Tumörhomogeniserade virala titrar efter mRIPO; ND, inte upptäckt. (E) Flödescytometrianalyser av tumörer på dag 7 (n=13/grupp-mock; n=14/grupp mRIPO). (F) Flödescytometrianalyser för myeloidceller och dendritiska celler (DCs: Ly6CNeg, F480Neg, CD11c+, IA/IE+) på dag 11. (G) Aktiveringsmarkörer i TILs på dag 7 och 12; slogs samman från två experiment; gånger genomsnittliga KLH-DMEM-värden visas. (H) TIL-transkriptionsfaktoruttryck på dag 12; samma prover som dag 12 av (A); representativa data för tre upprepningar visas. Se kompletterande figurer online S1–S4 för utökade data. (E–H) Tukeys post hoc-test sid< 0.05 versus mock controls (*) or all other groups (#). Data bars and brackets indicate mean+SEM. mRIPO, mouse adapted PVSRIPO; DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; IFN, interferon; i.t., intratumor; KLH, hemocyanin keyhole limpet; OVA, ovalbumin; TIL, tumor-infiltrating lymphocyte; TNF, tumor necrosis factor.
Förstärkta T-cells funktionella fenotyper i polioimmuniserade möss behandlade med mRIPO
CD8+ och CD4+ tumörinfiltrerande lymfocyter (TIL) i poliovaccinerade möss uttryckte högre nivåer av intracellulär IFN-, TNF och granzym B efter mRIPO-behandling, vilket antyder förbättrad funktionsstatus (figur 1G , online tilläggsfigur S4). TILs från polioimmuniserade möss behandlade med mRIPO uppvisade också ökat uttryck av transkriptionsfaktorerna T-bet, GATA3 och ROR t; såväl som induktion av IRF4, en promotor för T-cellsaktivering och funktion (figur 1H).21 Uttryck av T-cellsutmattningsmarkörerna PD1 och T-cells immunoglobulin och mucindomäninnehållande protein 3 (TIM3) på CD{{20 }} T-celler i tumören och TDLN från poliovaccinerade möss som behandlats med mRIPO reducerades (online kompletterande figur S2E). Förändringar i T-cellsaktiverings-/differentieringsmarkörer var konsekventa i E0771-ortotopisk bröstcancermodell (online tilläggssiffror S2F, G). Således, minns svar på polio ökar funktionella fenotyper i TILs efter intratumoral polioviroterapi.
Polio och stelkramp återkallar antigener medierar antitumöreffektivitet
Reovirusspecifik minnes-CD8+ T-celler dödar direkt reovirusinfekterade cancerceller under onkolytisk reovirusterapi,22 och stelkrampsspecifik minnes-CD4+ T-celler dödar cancerceller infekterade med Listeria som uttrycker Tet.23 Alternativt, inflammatoriska svar orsakade av minnes-T-cellsåterkallelse i tumörmikromiljön (TME) kan också stärka immunövervakningen.6 7 Vi antog att återkallelseinducerad inflammation förklarade accentuerad antitumöreffektivitet av polioviroterapi i poliovaccinerade möss sedan virusreplikation— som krävs för produktion av viralt antigen i tumörceller, onkolys och antiviral inflammation12 - reducerades kraftigt i polioimmuniserade möss (figur 1D). För att undersöka antitumöreffekterna av polioåterkallelse i TME använde vi en modell som saknar hCD155 (möss och tumörer; wt C57BL/6 möss) och behandlade tumörer med UV-inaktiverad PVSRIPO (UVP) för att förhindra virusinfektion/replikation. Vi inkluderade jämförelser med ett annat vaccinassocierat återkallningsantigen, Tet, som har visat sig mediera antitumöreffekter i andra studier.23 24 Behandling med UVP utövade antitumöreffekt uteslutande hos polioimmuniserade möss; Tet-behandling medierade övergående antitumöreffekter i Tet-immuniserade möss (figur 2A–C, kompletterande onlinefil 1). Naturliga återkallelsesvar förekommer i närvaro av ett lokaliserat medfödd immunsvar mot patogenreplikation. För att efterlikna detta behandlades Tet eller polioimmuniserade möss med poly(I:C) enbart eller i kombination med UVP eller Tet. Både UVP och Tet medierade uttalade antitumöreffekter i detta sammanhang (figur 2D). Dessa data avslöjar att det återkallar minnes-T-celler i TME - oberoende av uttrycket/major histocompatibility complex (MHC) presentationen av deras besläktade antigen av maligna celler - förmedlar antitumöreffektivitet.
CD4+ T-celler medierar antitumöreffektiviteten hos återkallande antigener
För att bestämma vilken eller vilka adaptiva avdelningar som förklarar antitumöreffektiviteten av polioåterkallelsesvar (oberoende av viral replikation), jämförde vi behandling med UVP i CD8+ T-cell och B-cell k/o-möss i förhållande till vikt möss (figur 3A). CD4 k/o-möss testades inte på grund av CD4+ T-cellers roll för att möjliggöra både CD8+ T-cells- och B-cellssvar på vaccination. Som väntat ledde polioimmunisering i WT och CD8 k/o möss, men inte B-cell k/o möss, till anti-PVSRIPO antikroppsproduktion (figur 3B). B16-tumörtillväxt var liknande i varje genetiskt sammanhang efter skenbehandling. I förhållande till wt-möss var antitumöreffektiviteten av UVP i polioimmuniserade möss begränsad i CD8 k/o-möss vid senare tidpunkter men förbättrades i B-cell k/o-möss (figur 3C; p=0.007wt vs B-cell k/o UVP-behandlade kurvor, tvåvägs ANOVA). Dessutom förhindrade B-cells k/o inte inflödet av eosinofiler eller CD4+ TILs (online tilläggsfigur S6A) associerat med polioåterkallelse (figur 1). Således är antitumöreffektiviteten av polioåterkallelse delvis beroende av CD8+ T-celler och begränsas av B-celler. Dessa observationer, tillsammans med ökade CD4+ TILs efter mRIPO-terapi i polioimmuniserade möss (figur 1E), antyder att CD4+ T-celler dikterar antitumöreffektiviteten av polioåterkallelsesvar. Därför testade vi nästa antitumöreffekten av polioåterkallelse med och utan transient CD4+ T-cellsutarmning (figur 3D, med början av 1-dagens förbehandling). Trots kraftig utarmning av CD4+ T-celler i TDLN, var utarmning av CD4+ T-cell i tumören ofullständig och reducerade preferentiellt regulatoriska T-cellspopulationer (Treg), vilket möjligen förklarar blygsamma antitumöreffekter och ökad CD 8+ T-celldensiteter efter CD4+ T-cellsutarmning (figur 3D, kompletterande onlinefigur S6B). Icke desto mindre avlägsnade CD4+ T-cellsutarmning nästan antitumöreffekten av UVP i polioimmuniserade möss och förhindrade rekryteringen av eosinofiler som svar på UVP (figur 3D); CD4+ T-cellsutarmning förhindrade också induktionen av granzym B i CD8+ T-celler efter UVP-behandling (online tilläggsbild S6B). Sammantaget indikerar dessa fynd att de antitumör- och inflammatoriska effekterna av återkallande av polio är CD4+ T-cellsberoende. Bekräftelse av att poliospecifika CD4+ T-celler är tillräckliga för att potentiera antitumöreffekten av polioviroterapi (med aktiv viral replikation), adoptiv överföring av CD4+ T-celler från mjältar från polioimmuniserade möss, men inte den för Tet, stärkte antitumöreffekten av mRIPO (figur 3E, online-tilläggsbild S6C).
Det påminner om antigenterapi potentierar antitumör CD8+ T-cellsfunktion
Tumörspecifika CD4+ T-celler visades direkt döda tumörceller,25–27 engagerar cytotoxiska medfödda immunceller,28 29 och ge hjälp till effektor CD8+ T-celler.1–{ {7}} I enlighet med det senare observerades antitumöreffekter av recall-antigener efter leverans till TME (figur 2 och 3), var delvis beroende av CD8+ T-celler (figur 3C) och CD{{12 }} TILs hade förbättrade polyfunktionella fenotyper efter mRIPO-terapi i poliovaccinerade möss (figur 1G).
Figur 2 Antigener för återkallande av polio och stelkramp förmedlar antitumöreffektivitet. B16 (A) eller E0771 (B) tumörbärande möss immuniserade med polio eller Tet behandlades intratumör med Tet eller UV-inaktiverad PVSRIPO (UVP). (C) Åldersmatchade naiva eller Tenivac och IPOL-immuniserade möss behandlades med PBS, Tet eller UVP. (D) Möss immuniserade som i (A, B) behandlades intratumör med sken, poly(I:C) (30 µg), poly(I:C) + Tet eller poly(I:C) + UVP som visas. (A–D) Medel+SEM från ett representativt experiment med minst två upprepningar visas; asterisker indikerar Dunnetts test sid< 0.05 versus all other groups; online supplemental figure S5 presents extended data. IPOL, inactivated polio vaccine; i.t., intratumor; PBS, phosphate buffered saline; UVP, UV-inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid.
Därför försökte vi härnäst avgöra om polio (UVP) och Tet-återkallelse förbättrar funktionen hos antitumör CD8+ T-celler. För detta ändamål överförde vi adoptivt CD45.1+OT-I CD8+ T-celler (OVA-specifika) till polio- eller Tet-vaccinerade möss och bestämde effekten av UVP och Tet-inducerad återkallelse på B{ {7}}OVA OT-I TIL-fenotyper (figur 4A). Induktion av återkallelsesvar i tumören efter UVP eller Tet associerades med försenad tumörtillväxt och ökad tumörinfiltration av endogen CD45.2+-celler, eosinofiler och konventionella CD4+-T-celler; i synnerhet ökade nivåerna av antitumör OT-I T-celler icke signifikant (figur 4B). Analys av tumörinfiltrerande OT-I CD8+ T-celler avslöjade emellertid förstärkt granzym B, TNF och IFN-; och minskat uttryck av den terminala utmattningsmarkören TIM3 efter polio eller Tet-återkallelse (figur 4C). Varierad Th-associerad transkriptionsfaktoruttryck i både OT-I och endogena T-celler observerades, inklusive det för GATA3, ROR t och BCL6 (figur 4C). Transkriptomisk analys av OT-I TILs efter polioåterkallelse visade ökat uttryck av granzymer; gener kopplade till T-cellsaktivering, funktion eller homeostas (Taok3, CD86, CCR5, Egr2, Adgre1, Vdr, IRF4 och BCL6); gener associerade med Th1-immunitet (Ptger4, Fgl2); såväl som gener associerade med Th2-immunitet (Alox15, Ccl8 och GATA3) (figur 4D, kompletterande online-figur 8C). Vi bekräftade dessa observationer genom att testa effekten av återkallande av polio på endogen TRP2-specifik (en endogen B16-antigen) CD8+ TIL i B16-tumörer utan OVA-uttryck. TRP2-specifika CD8+ TILs uppvisade ökat granzym B och minskat TIM3-uttryck efter polioåterkallelse på ett CD4+ T-cellsberoende sätt (online tilläggsfigur S9). Tillsammans indikerar dessa data förbättrade cytolytiska och funktionella fenotyper av antitumör-T-celler efter polioåterkallelse. Funktionellt demonstrerande förbättrad antitumör T-cellsimmunitet efter det att den återkallats, T-celler isolerade från mjältar från möss behandlade med det återkallar antigen (UVP vid poliovaccinerad eller Tet i Tenivac vaccinerad) fördröjde tumörtillväxt efter överföring till naiva mottagare (figur 4E). CD4+ T-celler hjälper till att främja antitumör CD8+ T-cellsfunktion delvis genom CD40L-signalering till CD40 på antigenpresenterande celler,1 men kan också hjälpa antitumör CD8+ T-celler oberoende av CD40L.31 CD40L blockad förhindrade inte UVP-inducerad eosinofil, konventionell CD4+ T-cell eller antitumör OT-I T-inflöde; det motverkade inte heller antitumöreffekter (tilläggsfigur S10 online). Dessutom rekapitulerade inte CD40-ligering det eosinofila inflödet som observerades efter återkallande antigenterapi (online tilläggsfigur S10). Således potentierar det CD4+ T-cellsåterkallelse antitumörfunktionen hos antitumör CD8+ T-celler på ett CD40L-oberoende sätt.
Figur 3 CD4+ T-celler förmedlar antitumöreffekten av återkallande av polio. (A) Design för experiment i (B, C). (B) ELISA för anti-polioantikroppar i varje genetisk bakgrund vid dag 0 (n=4/grupp). (C) Genomsnittlig tumörvolym + SEM efter skenbehandling (vänster) eller sken-mot UVP-behandling (höger paneler) för varje genotypkontext; p-värden är från tvåvägsvariansanalys (ANOVA) jämförelse av UVP med kontrollgruppen. (D) Möss immuniserade med polio behandlades med mock eller UVP som i (A), med intraperitoneala (ip) injektioner av IgG (kontroll) eller CD4+ T-cellsutarmande antikropp (250 µg levererad var tredje dag med början på dagen −1); medeltumörvolym + SEM och flödescytometrianalys av tumörinfiltrerande CD4 T-celler och eosinofiler visas; n=9 per grupp; p-värdet är från en tvåvägs ANOVA som jämför UVP IgG mot UVP CD4; (*) anger Tukeys post hoc sid<0.05. (E) CD4+ T cells from spleens of mice immunized with Tet (control) or polio were adoptively transferred to naïve B16 tumor-bearing recipients 1day-prior to intratumor treatment with DMEM or mRIPO. Mean tumor volume+SEM for mock or mRIPO treated mice for each CD4+ T-cell transfer condition; p values are from two-way ANOVA comparison of the two curves shown in each panel. See online supplemental figure S6 for extended data. DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; i.t., intratumor; UVP, UVinactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; mRIPO, mouse adapted PVSRIPO; Tconv, conventional CD4+ T cells.
Figur 4 Intratumor recall antigenterapi potentierar antitumör CD8+ T-cellsfunktion. (A) Polio eller Tet (Tenivac) immuniserade möss implanterades med B16-OVA-tumörer, följt av adoptiv överföring av aktiverade OT-I (CD45.1+)-celler och behandling med antingen Tet eller UVP . (B) Tumörvolym- och flödescytometrianalyser av immunceller (B) och TIL-undergrupper (C); online kompletterande figur S7 presenterar gating av OT-I TILs. (D) Transkriptom av OT-I TILs isolerade från polioimmuniserade möss 12 dagar efter behandling (DMEM eller UVP) analyserades. Center och skalade medelnormaliserade räkningar visas för transkript som skilde sig signifikant efter justering av p-värde för falsk upptäckt i två separata experiment (översta panelen, n=4/grupp respektive n=3/grupp ) eller för funktioner som är relevanta för (C) som närmade sig betydelse i båda datamängderna, inklusive granzymer, IRF4, BCL6 och GATA3 (nedre panelen); n=4 replikat/grupp visas i en värmekarta. Online kompletterande figur S8B och C presenterar normaliserade räkningar för enskilda prover och utökade data. (E) Tumörprogression hos naiva möss adoptivt överförda med T-celler från mjälten hos möss i AC. Medeltumörvolym+SEM visas; p-värdet kommer från en tvåvägs variansanalys. Alla datastaplar representerar medelvärde+SEM; värmekartor i (C) normaliserades med ett dubbelt medelvärde av den felaktiga antigenkontrollen; Tukeys post hoc-test sid<0.05 relative to all other groups (#) or respective DMEM control (*). (A–C) pooled results from two experiments; data in (E) were repeated twice. DMEM, Dulbecco's Modified Eagle Medium; TIM3, T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3; IFN, interferon; i.t., intratumor; OVA, ovalbumin; PD1, programmed cell death protein-1; UVP, UV inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; TIL, tumor-infiltrating lymphocytes; TNF, tumor necrosis factor.
Tumörinfiltrerande eosinofiler associerar omvänt med Tregs i mänskliga tumörer
Engagemang av andra antitumörimmuneffektorer via cytokinutsöndring är en nyckel-CD40L-oberoende mekanism för CD4+ T-celler.31 32 Den poliokapsid (UVP) och viroterapi (mRIPO) orsakade konsekvent robust infiltration av eosinofiler ( figurerna 1, 3 och 4), på ett CD4+ T-cellsberoende sätt (figur 3D). Tumöreosinofilinflöde associerar med immunterapisvar,33–35 och nyare arbeten visade att CD4+ T-celler ger antitumörfunktioner hos eosinofiler efter PD1-blockad via IL-5.36 Först frågade vi om eosinofildensitet korrelerar med den för CD4+ T-celler eller andra funktioner i TME för mänskliga tumörer genom att fråga en pan-cancerdatauppsättning från The Cancer Genome Atlas (TCGA).37 Med CIBERSORT38 förutsägelse av cellinfiltrat, 37 prover från varje cancertyp stratifierades genom närvaro eller frånvaro av detekterade eosinofila genuttryckssignaturer (figur 5A, kompletterande onlinefigur S11,12); Testikulära könscellstumörer (TGCT) och Uveal Melanom (UVM) exkluderades på grund av begränsade fall med eosinofil anrikning (n<3). While limited association of eosinophil presence was observed with CD8+ or CD4+ T-cell enrichment, eosinophil presence was associated with significantly lower Treg signatures across all cancer types (figure 5A, online supplemental figure S11B, C). Eosinophil presence was associated with longer survival in Low-Grade Glioma (LGG), where eosinophil density was also the highest (online supplemental figure S11A), but not in other tumor types (figure 5B, online supplemental figure S11D). Importantly, significant differences in Treg density on stratification by eosinophil enrichment were observed within several cancer types, with heterogenous relationships between CD4+ and CD8+ T-cell density (online supplemental figure S12). Notably, eosinophil influx was associated with reduced Treg proportions after polio recall in our studies (figures 1E and 4B, online supplemental figure S2). Together, these data may reflect a role for eosinophils in countering tumor-infiltrating Tregs.
cistanche tubulosa-förbättra immunförsvaret
Klicka här för att se produkter från Cistanche Enhance Immunity
【Be om mer】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
Antitumör typ II-immunitet efter mRIPO-behandling av polioimmuniserade möss
Vi försökte sedan bestämma betydelsen av eosinofilinfiltration efter polioåterkallelse hos möss. Eosinofiler är mediatorer av typ II-immunsvar, som spelar roller i anti-helmintimmunitet och allergisk inflammation.39 Rekrytering av eosinofiler kan förmedlas av andra typ II-immunförmedlare, inklusive ILC2, som koordinerar Th2-svar genom direkta interaktioner med CD{{4} } T-celler,40 uttrycker transkriptionsfaktorn GATA3 och eosinofilbefrämjande cytokin IL-5, men saknar T-cellsreceptoruttryck. GATA3+ CD3Neg-celler ökade faktiskt i tumörer hos möss efter att de återkallats (figur 5C), vilket möjligen återspeglar ILC2-inflöde. Vi testade sedan hur eosinofiler påverkar polioviroterapi (mRIPO) i polioimmuniserade möss och mätte ILC2s direkt. Eosinofilutarmning (via IL-5-neutralisering41) mildrade antitumöreffekterna av mRIPO i B16-OVAHCD155-bärande, polioimmuniserade möss (figur 5D, E); minskade inte CD4+ T-cellinflöde; men blockerade minskningar i Treg-andel (figur 5F). Dessutom ledde polioviroterapi (mRIPO) till ILC2-inflöde (figur 5F) och förändrade ILC2-fenotyper i polioimmuniserade möss, med reducerad IL-5 och inducerad PD1- och granzym B-uttryck (figur 5G). Förutom dess roll i att kontrollera eosinofilnivåerna är IL-5 också avgörande för B-cellsdifferentiering.42 Men eftersom antitumöreffekterna av polioåterkallelse är oberoende av – och möjligen motverkas av – B-celler (figur 3C), och på grund av den konsekvent robusta eosinofilinfiltrationen vid polioåterkallelse, drar vi slutsatsen att IL-5-neutralisering minskar antitumöreffekterna av polioåterkallelse via eosinofilutarmning. Sammantaget visar dessa data antitumörroller för eosinofiler och rekrytering av ILC2s med förändrade fenotyper efter polioåterkallelse och antyder att eosinofiler reglerar den Treg-densiteter.
Redan existerande anti-polioantikroppar är förknippade med längre överlevnad efter Lerapolturev (PVSRIPO) terapi; perifera eosinofiler ökar efter Lerapolturev
In trials of Lerapolturev in rGBM9 and melanoma,10 all patients were confirmed seropositive for anti-PVSRIPO neutralizing antibodies (from polio vaccine crossreacting antibodies) at the time of enrollment, a feature anticipated to correlate with pre-existing PVSRIPO specific CD4+ T-cell immunity. We queried both phase I (n=61)9 and II (n=72 at the time of data cut-off) clinical rGBM cohorts for the relationship between pretreatment Lerapolturev neutralizing antibodies and survival. In both cohorts, patients living >18 månader efter Lerapolturev (typisk medianöverlevnad i rGBM är ~9 månader) 9 43 hade signifikant högre neutraliserande antikroppstitrar för behandling (figur 6A, B). För att ta itu med huruvida immunsvar av typ II kan vara engagerad hos patienter som behandlats med polioviroterapi, analyserade vi longitudinella CBCs tillgängliga från en liten dosökningsstudie av Lerapolturev vid återkommande, icke-opererbart melanom (fas I, n=12) .10 11 Dessa data avslöjade ökade eosinofilnivåer i blodet efter Lerapolturev hos 8/12 patienter (figur 6C), vilket sammanföll med en minskning av neutrofiler (10/12 patienter). Dessa fynd kan tyda på att redan existerande immunitet bidrar till antitumöreffekten av polioviroterapi och att polioviroterapi inducerar immunsvar av typ II hos patienter med cancer.
Figur 5 Eosinofiler associerar omvänt med Tregs i humana tumörer; mRIPO inducerar antitumör typ II-immunitet hos polioimmuniserade möss. (A) CIBERSORT dekonvoluterade T-cellsundergrupper i cancertyperna The Cancer Genome Atlas (n=29) stratifierade efter eosinofilstatus, p-värden från parat t-test. (B) HRs (överlevnad) ± 95% CI för eosinofil status efter cancertyp; cancertyper med mindre än 20 dödsfall exkluderades; p-värden är från Mantel-Cox log-rank test. (C) Procentandel av GATA3+ CD3Neg-celler från data i figur 4C, p-värden är från oparade t-test. (D) Design för (E–H): polioimmuniserade, B16-OVAHCD155-tumörbärande hCD155-transgena möss behandlades med skenbart eller PVSRIPO ± eosinofil utarmning (anti-IL-5 eller kontroll IgG, 1 mg varje vecka). Genomsnittlig tumörvolym+SEM (E), eosinofil- och ILC2-densitet i tumörer (F) och fenotyp av tumörinfiltrerande ILC2 (lineageNegCD90+ CD127+ CD25+) kontra härstamningsnegativ CD 90+ celler för jämförelse visas (G). (E) (*) Tvåvägsvariansanalys sid<0.05; (F–G) (*)Tukey's post hoc test p< 0.05 versus mock+IgG control. Online supplemental figure S11–S13 presents extended data. IL, interleukin; ILC2, type 2 innate lymphoid cell; i.p., intraperitoneal; i.t., intratumor; OVA, ovalbumin; PD1, programmed cell death protein-1; UVP, UV-inactivated PVSRIPO; Tet, tetanus toxoid; Tregs, regulatory T cells; mRIPO, mouse-adapted PVSRIPO.
Kinesisk ört cistanche växt-Antitumor
DISKUSSION
Det här arbetet avslöjar potentialen för cancerimmunterapi hos tumörlokaliserad CD4+ T-cellsåterkallelse. CD4+ T-cellshjälp är nyckeln för att generera fullt fungerande antitumör-CD8+ T-cellsimmunitet1 44 och långtidsminne.2 45 Antitumör-CD8+ T-celler uppvisade större polyfunktionella fenotyper efter återkallande, adoptiv T-cellsöverföring från återkallande antigenbehandlade möss fördröjde tumörtillväxt hos naiva mottagare, och UVP-antitumöreffekter trubbades i polioimmuniserade möss som saknade CD8+ T-celler. Detta indikerar att tillhandahållande av CD4+ T-celler hjälper till att antitumör CD8+ T-celler. Faktum är att CD4+ T-cellshjälp är kopplad till nedreglering av utmattningsmarkör, förhöjt uttryck av TNF/IFN-/granzym B och Tbet/IRF4-induktion i "hjälpt" effektor-T-celler,3 som alla inträffade med polio viroterapi hos immuniserade möss. Sådan T-cellshjälp är sannolikt mångfacetterad, inklusive "licensiering" av DC; CD4+ T-cellsutsöndring av cytokiner (t.ex. IL-21, IFN-); TME-omprogrammering; eller genom positiva effekter av rekryterade eosinofiler på CD8+ T-cells immunövervakning.36 46 Möjligen på grund av aktiviteten hos polioneutraliserande antikroppar som begränsar CD4+ T-cellsaktivering genom att minska tillgängligheten av recall-antigen eller persistens, B-celler var kontraproduktiva för antitumöreffekter av polioåterkallelse. Polio minns konsekvent medierade starkare antitumör- och inflammatoriska svar än Tets i våra studier. En möjlighet är att detta beror på skillnader i intensitet och/eller kvalitet hos redan existerande immunitet inducerad efter polio kontra Tet-vaccination i våra modellsystem. Till stöd för denna möjlighet var antitumöreffekterna av Tet och UVP liknande när möss immuniserades med IPOL-vaccin av klinisk kvalitet (figur 2C), vilket inducerade svagare anti-polioimmunitet än polioimmuniseringsstrategin (PVSRIPO+ALH) som användes för andra experiment i vår studie (online kompletterande figur S1B). Det är emellertid också väl etablerat att antigenets natur (t.ex. epitopdensitet, som sannolikt är högre i poliokapsiden) kan påverka adaptiva immunsvar. 47 48 Antitumöreffekten av polioåterkallelse berodde endast delvis på CD8+ T-celler. Recall antigenterapi orsakade eosinofil- och ILC2-inflöde, och eosinofilutarmning minskade antitumöreffekter hos polioimmuniserade möss som behandlats med mRIPO. För att betona vikten av sammanhang, visades både eosinofiler och ILC2s också mediera protumorigena effekter.49 50 Vid astma rekryterar CD4+ T-celler eosinofiler51 via ILC2s.52 ILC2s uttrycker MHC klass II och sprider Th2-svar i helmintinfektioner.40 I cancer är tumöreosinofilinfiltration kopplad till immunterapisvar, 33 34 eosinofiler visades stödja CD8+ T-cells immunövervakning,46 och ILC2s bidrar till anti-PD1 antitumöreffektivitet. 35 53 Vårt arbete indikerar att antitumörfunktioner hos eosinofiler, och möjligen hos ILC2, kan påverkas av CD4+ T-celler. Hur CD4+ T-cellsåterkallelse rekryterar eosinofiler till tumören återstår att fastställa fullt ut, men nyare arbete ger en potentiell förklaring genom att visa att under PD1-blockaden IL-5-utsöndring av CD4+ T-celler inducerar expansion av eosinofiler och rekrytering av detta.36 Dessutom avslöjade cytokinanalys av tumörhomogenat och TDLN-explantat efter polioviroterapi också ökad eosinofilbefrämjande GM-CSF och IL-5 i polioimmuniserade möss (online tilläggsfigur S2B ).
Figur 6 Redan existerande anti-polioantikroppar är associerade med längre överlevnad efter Lerapolturev (PVSRIPO)-terapi; perifera eosinofiler ökar efter Lerapolturev. (A, B) Förbehandling Lerapolturev serumneutraliseringstitrar mättes i återkommande glioblastom (rGBM) fas I (A, Ph1, NCT01491893) och fas II (B, Ph2, NCT02986178) försök. Överlevnad efter separation med medianneutralisationstiter (1:2000), tillsammans med medel+SEM-titer för patienter som överlever
Vi upptäckte också ett omvänt samband mellan tumöreosinofilinflöde och Treg-densitet i mänskliga tumörer, och återkallande antigenterapi ledde till minskade andelar Tregs som samvarierade med eosinofilinflöde, vilket antyder en ömsesidig roll för eosinofiler i att kontrollera CD4+ T-cell biologi. Att bestämma exakt hur eosinofiler medierar antitumöreffekter efter CD4+ T-cellsåterkallelse och om ILC2 bidrar till denna process kräver ytterligare studier. Enbart skillnader i eosinofildensitet verkar inte vara prognostiska i de flesta cancertyper, med det potentiella undantaget för LGG, där eosinofilnivåerna också var de högsta bland alla andra tumörtyper. Intressant nog har en negativ korrelation mellan perifera eosinofiler och gliomgrad rapporterats54; och luftvägsallergier och atopi är associerade med lägre gliomincidens.55 Vi använde Th2-polariserande vaccinationsstrategier, i överensstämmelse med den kliniska användningen av polio- och stelkrampsvacciner, för att dechiffrera antitumörpotentialen hos CD4+ T-cellsåterkallelse. Medan – kanoniskt – Th1/Tc1-, Th2/Tc2- och Th17/Tc17-polarisationer är ömsesidigt uteslutande, minns antigenterapi i detta sammanhang producerad Th1 (CD8+ T-cellsengagemang, Tbet/IFN-uttryck i CD{{ 20}} T-celler); Th2 (eosinofil/ILC2-rekrytering, GATA3-uttryck i CD4+ T-celler); och i mindre utsträckning Th17 (ROR t uttryck i CD4+ /CD8+ T-celler) polariserande egenskaper. Dessa data bidrar till allt fler bevis för att olika CD4+ T-cellpolarisationer, utöver Th1, kan generera kompatibla och produktiva antitumörimmunsvar.56–58 Vårt arbete visar att även om redan existerande immunitet begränsar viral replikation inom tumören ökar den antitumöreffekten av polioviroterapi. En begränsning av detta arbete är att det utfördes i murina system som inte fångar heterogeniteten hos vare sig polio/Tet-minnes CD4+ T-cellsvar eller TME hos människor. Dessutom, på grund av den snabba tillväxten av använda tumörmodeller, var tumörer relativt små vid tidpunkten för behandlingsstart. Icke desto mindre, vilket tyder på tillämpbarheten av våra observationer på människor, var förbehandling polioneutraliserande antikroppstitrar högre hos patienter med rGBM som levde längre efter polioviroterapi, och blodets eosinofilnivåer ökade hos majoriteten av patienterna med melanom (8/12) efter behandling med polioviroterapi (Lerapolturev). Som en varning kan högre neutraliserande polioantikroppstitrar återspegla överlägsen immunfunktionsstatus. Även om vi inte kan utesluta denna möjlighet, visar dessa data åtminstone att redan existerande immunitet inte utesluter framgångsrik polioviroterapi hos patienter. Våra observationer antyder också att flera doser av Lerapolturev kan vara motiverade för att accentuera antitumöreffekterna av polioåterkallelse. Faktum är att svar hos patienter med melanom som behandlats med Lerapolturev samlades i kohorten med det högsta antalet it-behandlingar.10 Med tanke på CD4+ T-cellers framstående betydelse i cancerimmunterapi,1 32 syftar växande ansträngningar till att dra nytta av CD4+ T-cellshjälp i tumörer, till exempel med CD40-agonistiska antikroppar,59 eller med peptidvacciner inklusive MHC klass II-epitoper44 som primerar neoantigenspecifik CD4+ och CD8+ T celler.60 Vårt arbete avslöjar potentialen i att utnyttja barnvaccinspecifika minnes-CD4+ T-celler för att engagera mångfacetterade antitumörmekanismer hos CD4+ T-celler.
REFERENSER
1 Borst J, Ahrends T, Bąbała N, et al. Cd4+ T-celler hjälper till med cancerimmunologi och immunterapi. Nat Rev Immunol 2018;18:635–47.
2 Ahrends T, Busselaar J, Severson TM, et al. Cd4+ T-celler hjälper till att skapa minnes-CD8+ T-celler med medfödd och hjälpoberoende återkallningskapacitet. Nat Commun 2019;10:5531.
3 Ahrends T, Spanjaard A, Pilzecker B, et al. CD4+ t-celler hjälper till att ge ett cytotoxiskt t-cellseffektorprogram inklusive samhiberande receptornedreglering och ökad vävnadsinvasivitet. Immunitet 2017;47:848–61.
4 Schenkel JM, Fraser KA, Beura LK, et al. T-cells minne. resident memory CD8 T-celler utlöser skyddande medfödda och adaptiva immunsvar. Science 2014;346:98–101.
5 Ariotti S, Hogenbirk MA, Dijkgraaf FE, et al. T-cells minne. hudresident memory cd8+t-celler utlöser ett tillstånd av vävnadsomfattande patogenvarning. Science 2014;346:101–5.
6 Rosato PC, Wijeyesinghe S, Stolley JM, et al. Virusspecifika minnes-t-celler befolkar tumörer och kan återanvändas för tumörimmunterapi. Nat Commun 2019;10:567.
7 Çuburu N, Bialkowski L, Pontejo SM, et al. Utnyttja anti cytomegalovirus immunitet för lokal immunterapi mot solida tumörer. Proc Natl Acad Sci USA 2022;119:e2116738119.
8 Gromeier M, Lachmann S, Rosenfeld MR, et al. Intergeneriska poliovirusrekombinanter för behandling av malignt gliom. Proc Natl Acad Sci USA 2000;97:6803–8.
9 Desjardins A, Gromeier M, Herndon JE 2nd, et al. Återkommande glioblastom behandlat med rekombinant poliovirus. N Engl J Med 2018;379:150–61.
10 Beasley GM, Nair SK, Farrow NE, et al. Fas I-studie av intratumoral PVSRIPO hos patienter med inoperabelt, behandlingsrefraktärt melanom. J Immunother Cancer 2021;9:e002203.
11 Beasley GM, Brown MC, Farrow NE, et al. Multimodalitetsanalys ger en prognostisk fördel med en T-cellsinfiltrerad tumörmikromiljö och perifert immunstatus hos patienter med melanom. J Immunother Cancer 2022;10:e005052.
12 Brown MC, Mosaheb MM, Mohme M, et al. Viral infektion av celler i tumörmikromiljön förmedlar antitumörimmunterapi via selektiv tbk1-irf3-signalering. Nat Commun 2021;12:1858.
13 Brown MC, Holl EK, Boczkowski D, et al. Cancerimmunterapi med rekombinant poliovirus inducerar IFN-dominant aktivering av dendritiska celler och tumörantigenspecifika CTL. Sci Transl Med 2017;9:eaan4220.
14 Holl EK, Brown MC, Boczkowski D, et al. Rekombinant onkolytiskt poliovirus, PVSRIPO, har potenta cytotoxiska och medfödda inflammatoriska effekter, förmedlar terapi i humana bröst- och prostatacancerxenograftmodeller. Oncotarget 2016;7:79828–41.
15 Yang Y, Brown MC, Zhang G, et al. Polioviroterapi riktar sig mot det maligna myeloida gliominfiltratet med diffus mikrogliaaktivering som uppslukar CNS. Neuro Oncol 2023:noad052.
16 Brown MC, Bryant JD, Dobrikova EY, et al. Induktion av viral, 7-metyl-guanosin cap-oberoende translation och onkolys genom mitogenaktiverade proteinkinas-interagerande kinas-medierade effekter på det serin/argininrika proteinkinaset. J Virol 2014;88:13135–48.
17 Hawken J, Troy SB. Adjuvans och inaktiverat poliovaccin: en systematisk översikt. Vaccin 2012;30:6971–9.
18 Swain SL. Generering och in vivo persistens av polariserade th1 och th2 minnesceller. Immunity 1994;1:543–52.
19 Mosaheb MMet al. Genetiskt stabila poliovirusvektorer aktiverar dendritiska celler och initierar antitumör CD8 T-cellsimmunitet. Nat Commun 2020;11:524.
20 Blanchard C, Rothenberg ME. Eosinofilens biologi. Adv Immunol 2009;101:81–121.
21 Mittrücker HW, Matsuyama T, Grossman A, et al. Krav på transkriptionsfaktorn lsirf/irf4 för mogen b- och t-lymfocytfunktion. Science 1997;275:540–3.
22 Groeneveldt C, Kinderman P, van Stigt Thans JJC, et al. Förinducerad reovirusspecifik t-cellsimmunitet förbättrar anticancereffektiviteten av reovirusterapi. J Immunother Cancer 2022;10:e004464.
23 Selvanesan BC et al. Listeria levererar stelkrampstoxoidprotein till bukspottkörteltumörer och inducerar cancercellsdöd hos möss. Sci Transl Med 2022;14:eabc1600.
24 Tähtinen S, Feola S, Capasso C, et al. Utnyttja redan existerande immunitet för att förbättra immunterapi mot onkolytisk cancer. Cancer Res 2020;80:2575–85.
25 Cachot A, Bilous M, Liu YC, et al. Tumörspecifika cytolytiska cd4 t-celler förmedlar immunitet mot human cancer. Sci Adv 2021;7:eabe3348.
26 Oh DY, Kwek SS, Raju SS, et al. Intratumorala cd4+ t-celler medierar antitumörcytotoxicitet vid blåscancer hos människa. Cell 2020;181:1612–25. 27 Quezada SA, Simpson TR, Peggs KS, et al. Tumörreaktiva CD4 (+) T-celler utvecklar cytotoxisk aktivitet och utrotar stora etablerade melanom efter överföring till lymfopeniska värdar. J Exp Med 2010;207:637–50.
28 Perez-Diez A, Joncker NT, Choi K, et al. Cd4-celler kan vara mer effektiva vid tumöravstötning än CD8-celler. Blood 2007;109:5346–54.
29 Corthay A, Skovseth DK, Lundin KU, et al. Primärt antitumörimmunsvar medierat av CD4+ T-celler. Immunitet 2005;22:371–83.
30 Church SE, Jensen SM, Antony PA, et al. Tumörspecifika CD4+ T-celler upprätthåller effektor- och minnetumörspecifika CD8+ T-celler. Eur J Immunol 2014;44:69–79.
31 Lu Z, Yuan L, Zhou X, et al. Cd40-Oberoende vägar för T-celler hjälper till att primera CD8 (+) cytotoxiska T-lymfocyter. J Exp Med 2000;191:541–50.
32 Hung K, Hayashi R, Lafond-Walker A, et al. CD4 (+) T-cellers centrala roll i antitumörimmunsvaret. J Exp Med 1998;188:2357–68.
33 Simon SCS, Hu X, Panten J, et al. Eosinofilackumulering förutsäger svar på melanombehandling med immunkontrollpunktshämmare. Oncoimmunology 2020;9:1727116.
34 Mackensen A, Meidenbauer N, Vogl S, et al. Phase I study of adoptive T-cell therapy using antigen-specific CD8+ T cells for the treatment of patients with metastatic melanoma. J Clin Oncol 2006;24:5060–9.
35 Jacquelot N, Seillet C, Wang M, et al. Blockad av den ko-inhiberande molekylen PD-1 släpper lös ILC2-beroende antitumörimmunitet vid melanom. Nat Immunol 2021;22:851–64.
36 Blomberg OS, Spagnuolo L, Garner H, et al. IL-5-producerande cd4+ t-celler och eosinofiler samarbetar för att förbättra svaret på immunkontrollpunktsblockad vid bröstcancer. Cancercell 2023;41:106–23.
37 Thorsson V, Gibbs DL, Brown SD, et al. Cancerns immunlandskap. Immunitet 2018;48:812–30.
38 Newman AM, Steen CB, Liu CL, et al. Bestämning av celltypsöverflöd och uttryck från bulkvävnader med digital cytometri. Nat Biotechnol 2019;37:773–82.
39 Lloyd CM, Snelgrove RJ. Typ 2-immunitet: utökar vår syn. Sci Immunol 2018;3:eaat1604.
40 Oliphant CJ, Hwang YY, Walker JA, et al. MHCII-medierad dialog mellan grupp 2 medfödda lymfoida celler och cd4(+) t-celler potentierar typ 2-immunitet och främjar utdrivning av parasitisk helmint. Immunitet 2014;41:283–95.
41 Moynihan KD, Opel CF, Szeto GL, et al. Utrotning av stora etablerade tumörer hos möss genom kombinationsimmunterapi som engagerar medfödda och adaptiva immunsvar. Nat Med 2016;22:1402–10.
42 Kouro T, Takatsu K. IL-5- och eosinofilmedierad inflammation: från upptäckt till terapi. Int Immunol 2009;21:1303–9.
43 Barthel FP, Johnson KC, Varn FS, et al. Longitudinella molekylära banor av diffust gliom hos vuxna. Naturen 2019;576:112–20.
44 Alspach E, Lussier DM, Miceli AP, et al. MHC-II neoantigener formar tumörimmunitet och svar på immunterapi. Naturen 2019;574:696–701.
45 Laidlaw BJ, Craft JE, Kaech SM. Den mångfacetterade rollen för CD4 (+) T-celler i CD8 (+) T-cellsminne. Nat Rev Immunol 2016;16:102–11.
46 Arnold IC, Artola-Boran M, Gurtner A, et al. GM-CSF-IRF5-signalaxeln i eosinofiler främjar antitumörimmunitet genom aktivering av typ 1 T-cellsvar. J Exp Med 2020;217:e20190706.
47 Bachmann MF, Rohrer UH, Kündig TM, et al. Inverkan av antigenorganisation på B-cells känslighet. Science 1993;262:1448–51.
48 Link A, Zabel F, Schnetzler Y, et al. Medfödd immunitet förmedlar follikulär transport av partikelformiga men inte lösliga proteinantigener. J Immunol 2012;188:3724–33.
49 Trabanelli S, Chevalier MF, Derré L, et al. ilc2s pro- och antitumörroll. Semin Immunol 2019;41:101276.
50 Simon SCS, Utikal J, Umansky V. Motsatta roller av eosinofiler i cancer. Cancer Immunol Immunother 2019;68:823–33.
51 Lloyd CM, Hessel EM. Funktioner hos T-celler vid astma: mer än bara T (H) 2-celler. Nat Rev Immunol 2010;10:838–48.
52 Smith SG, Chen R, Kjarsgaard M, et al. Ökat antal aktiverade grupp 2 medfödda lymfoida celler i luftvägarna hos patienter med svår astma och ihållande eosinofili i luftvägarna. J Allergy Clin Immunol 2016;137:75–86.
53 Moral JA, Leung J, Rojas LA, et al. Ilc2S förstärker PD-1-blockad genom att aktivera vävnadsspecifik cancerimmunitet. Naturen 2020;579:130–5.
54 Huang Z, Wu L, Hou Z, et al. Eosinofiler och andra biomarkörer för perifert blod i gliomgradering: en preliminär studie. BMC Neurol 2019;19:313.
55 Ostrom QT, Lu D, Lu R, et al. Prevalens av autoimmunitet och atopi hos amerikanska vuxna med glioblastom och meningiom. Neuro Oncol 2022;24:1807–9.
56 Tuzlak S, Dejean AS, Iannacone M, et al. Ompositionering av cellpolarisationen från enstaka cytokiner till komplex hjälper. Nat Immunol 2021;22:1210–7.
57 Nishimura T, Iwakabe K, Sekimoto M, et al. Distinkt roll för antigenspecifika T-hjälpare typ 1 (Th1) och Th2-celler i tumörutrotning in vivo. J Exp Med 1999;190:617–27.
58 Lorvik KB, Hammarström C, Fauskanger M, et al. Adoptiv överföring av tumörspecifika Th2-celler utrotar tumörer genom att utlösa ett in situ inflammatoriskt immunsvar. Cancer Res 2016;76:6864–76.
59 Vonderheide RH. Cd40-agonistantikroppar i cancerimmunterapi. Annu Rev Med 2020;71:47–58. 60 Ott PA, Hu Z, Keskin DB, et al. Ett immunogent personligt neoantigenvaccin för patienter med melanom. Naturen 2017;547:217–21.
