Iridoida och acykliska monoterpenglykosider, kankanosider L, M, N, O och P från Cistanche Tubulosa

Cistanche tubulosa(SCHRENK) R. WJÄTTE(Orobanchaceae) är en flerårig parasitisk växt som växer på rötter avSalvadoraellerCalotropisarter, spridda i Nordafrika, Arabien och asiatiska länder.1) Stammar av denna växt (Kanka-nikujuyou på japanska) har traditionellt använts förbehandling av impotens, sterilitet, ländrygg och kroppssvaghetsamt ett främjande medel för blodcirkulationen.1,2) Under våra studier på bioaktiva beståndsdelar från stammar avC. tubulosa, 3-6) vi har tidigare rapporterat tjugofyra fenyletanoida aminoglykosider inklusive kankanosider H1, H2, I, J1, J2, K1, och K2och två acylerade oligosocker från färska stjälkar avC. tubulosa. 5,6) Vidare rektorfenyletanoidglykosider, echinakosid, acteosid och isoacteosid, visade sig hämma ökningen av serumaspartataminotransferas (AST) och alaninaminotransferas (salt) nivåer i mössens skadade lever inducerad avD-galaktosamin (D-GalN)/lipopolysackarid i doser på 25-100 mg/kgper os(p.o.). Strukturella krav för fenyletanoidglykosiderna för den hepatoskyddande aktiviteten klargjordes också.5) I denna fortsatta studie om beståndsdelar i färska stjälkar avC. tubulosa, isolerade vi ytterligare elva iridoidglykosider inklusive kankanosider L (1), M (2), och N (3), sju acykliska monoterpenglykosider inklusive kankanosider O (4) och P (5), tre fenylpropanoider och fyra lignaner. Denna artikel behandlar isolering och strukturbelysning av fem nya föreningar (1-5).

NATURLIG CISTANCHE TUBULOSA FÖR LÄMPNING AV SEXUELL DYSFUNKTION PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Färska stjälkar av C. tubulosa (odlade i Urumqi, Xinjiang-provinsen, Kina) extraherades med metanol under återflöde för att ge ett metanoliskt extrakt (8,36 % från de färska stjälkarna). Från metanolextraktet erhölls H2O- och MeOH-eluerade fraktioner (5,63% respektive 2,73%) genom Diaion HP-20 kolonnkromatografi (H2O→MeOH) som beskrivits tidigare.5) Den MeOH-eluerade fraktionen var utsätts för SiO2- och ODS-kolonnkromatografi och slutligen HPLC för att ge kankanosider L (1, 0.0026%), M (2, 0.{{27 }}001%), N (3, 0.00{{60}}7%), O (4, 0.0{{90}}2{{105}}%) och P (5, 0 .0002%), 6-deoxycatalpol3,7) (6, 0.197%), bartsioside3,7) (7, { {147}}.0583%), glurosid3,7) (8, 0.0443%), kankanoisid A3) (9, 22,3 mg, 0,0010%), mussaenosidinsyra3,7) ( 10, 0,0056%), 8- epilogansyra3,8) (11, 0,0023%), 8-epideoxilogansyra3,7) (12, 0,0004%), geniposidinsyra3,7) (13, 0,0040% ), kankanosid E3) (14, 0,0026%), (2E,6Z)-8-bD-glukopyranosyloxi-2,6-dimetyl-2,6-oktadiensyra3 ,9) (15, 31,0 mg, 0,0014%), (2E,6E)-3,7-dimetyl-8-hydroxioktadien-1-yl-ObD-glukopyranosid10) (16, 0,0082%), 8-hydroxigeraniol 8-O-bD-glukopyranosid11) (17, 0,0044%), betulalbusid A12) (18, 0,0004%), coniferin13) (19, 0,0002%), (spruta i 20, 0,0015%), sinapicaldehyd 4-ObD-glukopyranosid14) (21, 0,0001%), ( )-pinoresinol ObD-glukopyranosid4,8,15) (22, 0,0010%), eucommin A120.020.020.020. %), isoeukommin A17) (24, 0,0010%) och ( )-syringaresinol ObD-glukopyranosid4,8,18) (25, 0,0044%).

Strukturer för kankanosider L (1), M (2) och N (3)

Kankanosid L (1) erhölls som ett vitt pulver med negativ optisk rotation ([a]D 26 - 45.7 i MeOH). Dess IR-spektrum visade ett starkt absorptionsband vid 3433 och 1{{20}}80 cm- 1 vilket tyder på en glykosiddel. Det snabba atombombardementet (FAB)-MS av 1 körning i positiva och negativa jonlägen visade kvasimomolekylära jontoppar vid m/z 371 [M Na] respektive 347 [M-H]-, och molekylformeln var bestäms som C15H24O9 genom högupplöst FABMS-mätning. Syrahydrolys av 1 med 1,0 M saltsyra (HCl) frigjorde D-glukos, som identifierades genom HPLC-analys med användning av en optisk rotationsdetektor.3-6) 1H- och 13C-NMR-spektra av 1 (CD3OD, tabeller). 1, 2), som tilldelades genom olika NMR-experiment,19) visade signaler som kan tilldelas fyra metylener [d 1,43 (1H, br dd, J= ca. 5, 13 Hz, 4a-H), 1,73 ( 1H, br dd, J= ca 12, 14 Hz, 6a-H), 1,85 (1H, m, 4b-H), 1,93 (1H, br dd, J= ca. 8 , 14 Hz, 6b-H), 3,50 (IH, ddd, J= 2,4, 12,5, 13,0 Hz, 3a-H), 3,83 (IH, br dd, J=

ca. 5, 13 Hz, 3b-H), 3,78, 4,12 (1H vardera, båda d, J= 13,1 Hz, 10-H2)], två metiner [d 2,15 (1H, dd, J=7.2, 8,9 Hz, 9-H) och 2,23 (1H, m, 5-H)], och en acetalgrupp [d 4,81 (1H, d, J{{28) }},9 Hz, 1-H)] tillsammans med en b-glukopyranosyldel [d 4,70 (d, J= 7,9 Hz, 1 -H)]. Som visas i Fig. 1 indikerade 1 H–1 H korrelationsspektroskopi (1 H–1 H COSY) experiment på 1 närvaron av delstrukturer skrivna i fetstil. I experimentet med heteronukleär multipelbindningskorrelation (HMBC) på 1 observerades långdistanskorrelationer mellan följande protoner och kol (1-H och 3-C, 8-C; {{ 49}}H och 1-H och 8-C, 9-H och {{56} }}H2 och 7-C, 8-C; 1 -H och 1-C) som visas i fig. 1. Därefter karakteriserades den relativa stereostrukturen av 1 av faskänslighet nukleär Overhauser-förstärkningsspektroskopi (faskänslig NOESY) experiment, som visade NOE-korrelationer mellan följande protonpar (1-H och 3aH; 3a-H och 4a-H; 3b-H och 4b-H; 4b-H; 4b-H och 5-H, 9- H och 6b-H, 9-H 6a-H och 7- och 10-H2), som visas i fig. 1. 1H- och 13C-NMR-spektra av 1 var överlagrade på de för den huvudsakliga iridoidbeståndsdelen 6-deoxikatalpol (6), med undantag för signalerna pga. till den mättade d-laktoldelen. Slutligen gav hydrering av 6 1, så stereostrukturen för kankanosid L klargjordes till 3,4- dihydro-6-deoxikatalpol (1).

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA FÖR LITTNING PÅ E-POST UPPHOVSSTÖDELSE PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Kankanosid M (2) erhölls som ett vitt pulver med negativ optisk rotation ([a]D 26 - 18.7 i MeOH). IR-spektrumet för 2 visade absorptionsband vid 3433, 1736, 1655 och 1076 cm- 1 som kan tillskrivas hydroxyl-, d-lakton-, olefin- och etergrupper. Positivt-jon-FAB-MS-spektrumet av 2 visade en kvasimomolekylär jontopp vid m/z 353 [M Na] och molekylformeln bestämdes som C15H22O8 genom högupplöst positiv-jon FAB-MS-mätning. Syrahydrolys av 2 med 1,0 M HCl frisatt D-glukos. 1H- och 13CNMR-spektra för 2 (CD3OD, Tabell 1, 2) visade signaler som kan tilldelas fyra metylener [d 1,66, 2,11 (1H vardera, båda m, 4-H2), 2,15, 2,75 (1H vardera, båda m, 6-H2), 4,29 (1H, ddd, J= 2,8, 8,4, 14,3 Hz, 3b-H), 4,32, 4,51 (1H vardera, båda d, J{{61 }},1 Hz, 10-H2), 4,35 (1H, ddd, J= 3.1, 6,7, 14,3 Hz, 3a-H)], två metiner [d 2,97 (1H, m, 5-H), 3,82 (1H, br s, 9-H)], en olefin [d 5,94 (1H, m, 7-H)] och en mättad laktongrupp (d C 174,9) tillsammans med en bD-glukopyranosyldel [d 4,32 (IH, d, J= 7.9 Hz, 1 -H)]. Som visas i Fig. 1 indikerade 1 H–1 H COSY-experimentet på 2 närvaron av delstrukturer skrivna i fetstil och i HMBC-experimentet observerades långdistanskorrelationer mellan följande proton- och kolpar ({{ 103}}H och 1-H och 9-H och 1-C, {{110 }}H2 och 7-C, 8-C, 9-C 1 -H och 10-C). Den relativa stereostrukturen för 2 karakteriserades av ett faskänsligt NOESY-experiment, som visade NOE-korrelationer mellan följande protonpar (3a-H och 4a-H; 3b-H och 4b-H; 4b-H och 5- H; 5-H och 6b-H, 9-H) som visas i fig. 1. Sålunda klargjordes stereostrukturen för 2 som visas.

Kankanosid N (3) isolerades som ett vitt pulver med negativ optisk rotation ([a]D 25 - 24.6 i MeOH). I positiv-jon FAB-MS av 3 observerades en kvasimomolekylär jontopp vid m/z 371 [M Na]. Molekylformeln C16H28O8 bestämdes genom högupplöst FAB-MS-mätning. Syrahydrolys av 3 med 1.0 M HCl frisatt D-glukos. 1H- och 13C-NMR-data (CD3OD, tabell 1, 2) visade signaler som kan tilldelas en metyl [d 1.07 (3H, d, J= 7.2 Hz, {{ 28}}H3)], fyra metylener {d 1,37, 1,87 (1H vardera, båda m, 7-H2), 1,65, 1,81 (1H vardera, båda m, 6-H2), [3,65 ( 1H, dd, J= 9,1, 9,8 Hz), 3,90 (1H, dd, J= 5,9, 9,8 Hz), 11-H2] och [3,70 (1H, dd, J= 3,3, 12,0 Hz), 3,88 (1H, m), 3-H2]}, fyra metiner [d 1,69 (1H, m, 4-H), 1,75 (1H, m, 9-H), 2,06 (1H, m, 8-H), 2,16 (1H, m, 5-H)], och en hemiacetalgrupp [d 4,67 ( 1H, d, J= 7,4 Hz, 1-H)] tillsammans med en bD-glukopyranosyldel [d 4,26 (1H, d, J= 7.9 Hz, {{101 }}H)]. Den iridoida strukturen av 3 klargjordes av 1 H–1 H COSY- och HMBC-experiment och den relativa stereostrukturen karakteriserades av ett faskänsligt NOESY-experiment som visas i Fig. 1. Följaktligen klargjordes sterostrukturen av 3 som visas.

NATURAL CISTANCHE TUBULOSA FÖR LÖSNING AV SEXUELLA PROBLEM PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Strukturer av kankanosider O (4) och P (5)

Kankanosider O (4) och P (5), C16H26O8, erhölls också som vita pulver med negativa optiska rotationer (4: [a]D 23 - 26.1; 5: [a]D 21 - 32. 7 båda i MeOH). IR-spektra för 4 och 5 visade absorptionsband vid 3433, 1696, 1647 och 1076 cm- 1 för 4, och 3434, 1701, 1647 och 1{ {95}}76 cm- 1 för 5, hänförligt till glykosid-, karboxyl- och olefinfunktioner. Deras UV-spektra visade ett gemensamt absorptionsmaximum vid 217 nm, vilket indikerar närvaron av en a,b-omättad karboxylsyradel i dem båda. Syrahydrolys av 4 och 5 frigjorde D-glukos, medan 4 och 5 genom den enzymatiska hydrolysen med glukosidas gav (2E,6E)-8-hydroxi-2,6-dimetyl{{37} },6-oktadiensyra20) (4a) och (2E,6E)-8-hydroxi-3,7-dimetyl-2,{{ 47}}oktadiensyra21) (5a). 1H- och 13C-NMR-data för 4 (CD3OD, tabellerna 2, 3) visade signaler som kan hänföras till två metyler [d 1,71 (3H, br s, 10-H3), 1,81 (3H, d, J{{ 66}},0 Hz, 9-H3)], tre metylener {d 2,19 (2H, br t, J= ca. 7 Hz, 5-H2), 2,36 (2H, m, 4-H2), [4,24 (1H, dd, J= 7.6, 12.0 Hz), 4.33 (1H, dd, J= 6.2, 12.0 Hz), { {96}}H2]} och två trisubstituerade olefiner [d 5,41 (1H, ddd, J= 1.2, 6,2, 7,6 Hz, 7- H), 6,75 (1H, tq, J{ {111}}.2, 1,0 Hz, 3-H)] tillsammans med en b-Dglucopyranosyldel [d 4,34 (d, J= 7,8 Hz, 1 -H)]. Genom att jämföra kolsignaler i 13C-NMR-spektrumet på 4

med de för 4a observerades en glykosyleringsförskjutning vid 8--positionen (d C4: 65,5; 4a: 59,4). Positionen för glukosidbindningen bekräftades också av HMBC-experiment som visas i Fig. 2. Följaktligen klargjordes stereostrukturen av 4 till att vara (2E,6E)-8-bD-glukopyranosyloxi-2,{{ 16}}dimetyl-2,6-oktadiensyra. Å andra sidan indikerade 1H- och 13C-NMR-data för 5 (CD3OD, tabell 2, 3) närvaron av en (2E,6E)-8-hydroxi{{30}} ,7-dimetyl-2,6-oktadiensyradel [d 1,70 (3H, br s, 10-H3), 2,14 (3H, br s, 9- H3), 2,24 (2H, m, 4-H2), 2,27 (2H, m, 5-H2), 4,05, 4,20 (IH vardera, båda br d, J= ca. 12 Hz, 8-H2), 5,47 (1H, tq, J= 7.1, 0,9 Hz, 6-H), 5,67 (1H, br s, 1-H )] tillsammans med en bD-glukopyranosyldel [d 4,23 (d, J= 7,7 Hz, 1 -H)]. Kopplingen av bD-glukopyranosyldelen i 5 klargjordes baserat på HMBC-experiment som visas i fig. 2. Dessutom observerades en typisk glykosyleringsförskjutning för signalerna vid 8-position (d C 5: 75,6; 5a: 68,8). baserat på ovan nämnda bevis, fastställdes stereostrukturen för 5 vara (2E,6E)-8-bD-glukopyranosyloxi-3,7-dimetyl-2,{{103 }}oktadiensyra.

Effekter av beståndsdelarna på tumörnekrosfaktor-a (TNF-a)-inducerad cytotoxicitet i L929-celler

TNF-a är känt för att förmedla en mängd olika organskador genom dess induktion av cellulär apoptos. När det gäller levern har de biologiska effekterna av TNF-a varit inblandade i leverskada inducerad av hepatiska toxiner, ischemi/reperfusion, viral hepatit och alkohol.22-24) Därför anses TNF-a vara ett viktigt mål för att upptäcka antiinflammatoriska och hepatoskyddande medel. Baserat på det ovan nämnda konceptet undersökte vi skyddande beståndsdelar från naturligt förekommande produkter på TNF-a-inducerad celldöd i L929-celler, en TNF-a-känslig cellinje.25) Tidigare har vi rapporterat

att flera beståndsdelar från Piper chaba, 26-29) Boesenbergia rotunda, 30,31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33-35) och Sapindus rarak, 36-38) visade sig ha hämmande effekter av TNF-a-inducerad cytotoxicitet i L929-celler. Eftersom fenyletanoidbeståndsdelarna i C. tubulosa (t.exechinakosid, akteosid och isoakteosid5) även hämmade denna cytotoxicitet, vi undersökte ytterligare iridoid-, fenylpropanoid- och lignanbeståndsdelar som visas i tabell 4. Som ett resultat kankanosid A (9, hämning: 16,3± 2,0% vid 1) 00 mM), mussaenosidinsyra (10, 44,7± 8,7%), 8-epigaminsyra (11, 10,7± 0,4%), 8-hydroxigeraniol 8-ObD- glukopyranosid (17, 21,3± 2,4 %) och ( )-pinoresinol ObD-glukopyranosid (22, 22,3 ± 1,6 %), visade sig uppvisa signifikant aktivitet. Även om deras aktiviteter var svagare än de för echinakosid (IC50= 31,1 mM), akteosid (17,8 mM) och isoaceteosid (22,7 mM), de huvudsakliga fenyletanoidbeståndsdelarna.5)

NATURLIG CISTANCHE TUBULOSA FÖR ATT FÖRBÄTTRA SEXUELL FUNKTION PHGS75% ECH 30% ACT 12%