Naringin och hesperidin motverkar diklofenak-inducerad levertoxicitet hos Wistar-hanråttor via deras antioxidanter, antiinflammatoriska och antiapoptotiska aktiviteter. Del 1
Mar 24, 2022
Vänligen kontaktaoscar.xiao@wecistanche.comför mer information
1. Introduktion
Icke-steroida antiinflammatoriska läkemedel (NSAID) har olika biverkningar [1]. Diklofenak, som ett av denna kategori av läkemedel, är ett derivat av fenylättiksyra som länge har använts som ett smärtstillande och ett antiinflammatoriskt läkemedel för att behandla vissa tillstånd [2]. I sin verkningsmekanism hämmar diklofenak cyklooxygenas-(COX- )2 enzymer med större styrka än vad de verkar på COX-1 [3]. Även om diklofenak har potenta terapeutiska effekter, är dess ihållande användning förknippad med allvarliga dosberoende biverkningar [3]. En ökning ioxidativstress och undertryckande av antioxidantförsvarssystem rapporterades av olika publikationer som var inblandade i induktionen av toxicitet och biverkningar av läkemedlet [4,5]. Användning av antioxidanter som citrusflavonoider i kombination med diklofenak kan motverka den diklofenak-inducerade oxidativa stressen och kan därigenom förhindra läkemedelsbiverkningar och toxicitet.
Naringin som är ansvarigt för den sura smaken och den bittra smaken av frukterna av citrusarter har bredspektrum farmakologiska och terapeutiska egenskaper som lipidsänkande, anti-inflammatorisk, fria radikaler-rensande, antioxidativ, antihyperlipidemisk,
antiapoptotiska och antiaterogena egenskaper [6,7. Hesperidin är en annan flavonoid isolerad från citrusarter som hade flera biologiska egenskaper, särskilt antioxidant och antiinflammatorisk [8]. Det har rapporterats att hesperidin förbättrade den cytokrom-inducerade levervävnadsskadan som observerats avhistopatologiskaundersökning [9]. Det avslöjades också att hesperidin var effektivt för att undertryckainflammationoch allergiska symtom och vid behandling av allergisk rinit[10]. Därför genomfördes denna studie för att bedöma de möjliga förebyggande effekterna av naringin och hesperidin på diklofenak-inducerad levertoxicitet och för att utforska rollerna för modulering av inflammation, oxidativ stress och apoptos i den förebyggande verkan.
2. Material och metoder
2.1. Kemikalier och kit. Diklofenaknatrium erhölls från El-Nasr Pharmaceutical Chemical Company, Egypten.
Naringin och hesperidin producerades av Sigma-Aldrich Company (St. Louis, MO, USA). Alla andra använda kemikalier är av analytisk kvalitet och erhölls från lokala kemikalieföretag. Alanintransaminas(ALT)- och aspartattransaminas(AST)-kit erhölls från Spinreact, Ctra Sta Coloma, 7,17176 St., Esteve de Bas, Girona, Spanien. Laktatdehydrogenas (LDH) och y-glutamyltransferas (GGT) erhölls från Spectrum, Egyptian Company for Biotechnology, Obour City Industrial Area, Kairo, Egypten. Alkaliskt fosfatas (ALP) kit erhölls från Biodiagnostic, 29 Tahrir St., Dokki, Giza, Egypten. Albumin- och bilirubinsatser erhölls från Diamond, 24 El Mon-matzah St., Heliopolis, Kairo, Egypten.
Cistanche kan förbättra immuniteten
2.2. Försöksdjur. Vuxna hanråttor av Wistar-stam som vägde 100-130g (9-1l veckor) användes som försöksdjur i detta arbete.
De erhölls från Animal House of Ophthalmology Research Institute, Giza, Egypten. Djuren hölls i välluftade burar vid 12 timmar dagligen med ljus-mörker cykler och temperatur mellan 20 och 25 grader. Råttor kompletterades dagligen med en vanlig pelleterad diet och vatten ad libitum. Djuren hölls under två veckor under observation innan experimentet startade för anpassning och för att utesluta eventuell interkurrent infektion. Alla djurmetoder är i enlighet med riktlinjerna och instruktionerna från Försöksdjurens etiska kommitté vid Naturvetenskapliga fakulteten för vård och användning av djuren, Beni Suef University, Egypten. Det etiska godkännandenumret är BSU/FS/2015/15. Alla ansträngningar gjordes för att minska djurens lidande och nöd.
2.3.Djurgruppering. Trettio Wistar-hanråttor användes i detta experiment och fördelades i fem grupper (Figur 1).
Råttorna i grupp 1 (normal) fick den ekvivalenta volymen saltlösning (vehikeln i vilken diklofenak löstes) genom intraperitoneal injektion och fick även motsvarande volym på 1 procentkarboximetylcellulosa (CMC; vehikeln i vilken naringin och hesperidin löstes) genom oral sondmatning dagligen i 4 veckor. Grupp 2 (diklofenak-injicerad grupp) injicerades med diklofenak (upplöst i koksaltlösning) genom intraperitoneal administrering i en dos av 3 mg/kilogram kroppsvikt (kgb. vikt)/dag [11] och gavs också motsvarande volym på 1 procent CMCby oral sondmatning dagligen i 4 veckor. Grupp 3 (diklofenakinjicerad grupp behandlad med naringin) fick diklofenak som i grupp 2 och behandlades oralt med naringin (upplöst i 1 procent CMC) vid en dosnivå av 20 mg/kgb. vikt/dag genom oral sondmatning[12] i 4 veckor. Grupp 4 (diklofenak-injicerad grupp behandlad med hesperidin) fick diklofenak som i grupp 2 och behandlades oralt med hesperidin (upplöst i 1 procent CMC) i en dos av 20 mg/kg kroppsvikt/dag [13] i 4 Veckor. Grupp 5 (diklofenak-injicerad grupp behandlad med naringin och hesperidin) kompletterades med diklofenak som i grupp 2 och behandlades oralt med naringin ochhesperidin(upplöst i 1 procent CMC) vid en dos av 20 mg/kg b. vikt/dag i 4 veckor.
2.4. Blod- och leverprovtagning.
I slutet av experimentet berövades råttor maten och blodprover togs från halsvenerna. Blodproverna lämnades att koagulera vid rumstemperatur och centrifugerades sedan vid 3000 rpm under 15 minuter. Serumet från varje blodprov fraktionerades i tre flaskor som hölls i -30 grad tills de användes för biokemisk analys.
Efter att ha tagit blodprov från halsvenen avlivades råttorna och dissekerades. Levern från varje råtta skars snabbt ut och tvättades i steril koksaltlösning ({{0}},9 procent NaCl. Delar av levern fixerades i 10 procent neutralt buffrat formalin för histologisk undersökning. Andra delar förvarades i en djupfrys vid -30 grad i väntan på homogenisering i steril isoton saltlösning (0,9 procent NaCl) för bestämning av oxidativ stress och antioxidantförsvarsmarkörer. Den tredje delen av levern hölls vid -30 grad i sterila Eppendorf-rör för analys av omvänd transkriptas-polymeraskedjereaktion (RT-PCR).
2.5. Detektering av leverfunktionsparametrar i serum.
ALT- och AST-aktiviteter uppskattades med användning av nikotinamid-adenindinukleotidväte (NADH)-oxidationsmetoden enligt metoderna enligt Murray [14] respektive Murray [15], med användning av reagenssatser köpta från Spinreact, Spanien. Kort sagt, ALT katalyserar omvandlingen av alanin till Pyruvat, som reduceras till laktat av LDH, och NADH oxideras till nikotinamidadenindinukleotid (NAD). Hastigheten för minskning av koncentrationen av NADH, mätt fotometriskt vid 340 nm, är proportionell mot den katalytiska koncentrationen av ALT som finns i serumprovet. Å andra sidan katalyserar AST omvandlingen av aspartat till oxaloacetat, som reduceras till malat av malatdehydrogenas (MDH), och NADH oxideras till NAD. Hastigheten för minskning av koncentrationen av NADH, mätt fotometriskt vid 340 nm, är proportionell mot den katalytiska koncentrationen av AST som finns i serumprovet. Serum-LDH-aktivitet detekterades enligt metoden enligt Van der Heiden et al. [16]. I denna metod katalyserar LDH reaktionen mellan pyruvat och NADH för att producera NAD* och L-laktat. Hastigheten för minskning av koncentrationen av NADH, mätt fotometriskt vid 340 nm, är proportionell mot den katalytiska koncentrationen av LDH som finns i provet. Serum-ALP-aktivitet bestämdes enligt metoden enligt Belfield och Goldberg [17] med användning av kit erhållna från Biodiagnostic, Egypten. Genom att tillsätta serumprov till fenylfosfat (5 mmol/L) vid pH 10,
ALP leder till bildandet av fenol och fosfat. Den frigjorda fenolen mäts kolorimetriskt vid 510nm i närvaro av 4-aminofenazon och kaliumferricyanid. GGT-aktiviteten bestämdes enligt metoden av Szasz och Persijn [18] med användning av kit erhållna från Spectrum Diagnostic, Egyptian Company for Biotechnology, Egypten. GGT överför they-glutamylgruppen från substratet L- -glutamyl-p-nitroanilid, vilket frigör kromogenen p-nitroanilid (PNA) som mäts vid 418nm och dess bildning är proportionell mot GGT-aktiviteten. Serumalbuminnivån bestämdes enligt metoden enligt Doumas et al. [19] med hjälp av reagenssatser köpta från Diamond, Egypten. Metoden, i korthet, utfördes genom att tillsätta 10μL serum till 2mL bro-more sol green (0,12 mmol/L) i citratbuffert pH 3,8. Albuminet/bromokresolgrönt komplex, bildat av reaktionen, mättes vid 630 nm. Serumbilirubinnivån analyserades enligt metoderna av Malloy och Evelyn [20] med användning av reagenssatser köpta från Diamond, Egypten. Denna metod för bilirubinuppskattning är baserad på van den Bergh-reaktionen. I denna reaktion reagerar bilirubin med diazotiserad sulfanilsyra för att producera azobilirubin som är lila till färgen och mättes fotometriskt vid 578 nm. Färgens intensitet är direkt proportionell mot mängden bilirubin i serumet.
2.6. Utvärdering av leveroxidativ stress och parametrar för antioxidantförsvarssystem.
Leverlipidperoxidation (LPO) bestämdes enligt metoden enligt Preuss et al. [21]. I korthet fälldes proteinet ut genom att tillsätta 0.15 ml 76 procent triklorättiksyra (TCA) till 1 ml leverhomogenat. Sedan sattes 0.35 ml tiobarbitursyra (TBA) som ett färgframkallande medel till den separerade supernatanten. Den utvecklade svagt rosa färgen mättes vid 532 nm efter inkubation i ett vattenbad vid 8 0 grader i 30 minuter. MDA (malondialdehyd eller 1,1,3,3-tetrametoxipropan) användes som standard. Minskad glutation(GSH)halt i levern bestämdes genom tillsats av 0,5 ml 5,5'-ditiobis(2-kväve-zoesyra), Ellmans reagens (som ett färgframkallande medel) och fosfatbuffertlösning (pH 7) för att homogenisera supernatant efter proteinutfällning baserat på förfarandet enligt Beutler et al. [22]. De utvecklade gula färgerna i prover och GSH-standarder mättes vid 412 nm mot blank. Lever GPx-aktivitet mättes enligt proceduren av Matkovics et al.[23] med vissa modifieringar. Denna metod är baserad på detektion av GSH som omvandlas till oxiderat glutation (GSSG) av enzymet genom att detektera kvarvarande GSH och subtrahera det från totalen. Kortfattat sattes 50 μL homogenat supernatant till ett Wasserman-rör innehållande 350 μL Tris-buffert (pH 7,6), 50 μL GSH-lösning (2 mM) och 50 μL H, O, (3,38 mM). Sedan, efter 10 minuters inkubation, mättes det kvarvarande GSH-innehållet med den tidigare beskrivna metoden för GSH-bestämning vid 430 nm. Standardtestet bereddes genom att tillsätta 50 μL destillerat vatten istället för 50 μL prov och blanktestet bereddes genom att tillsätta 100 μL destillerat vatten istället för 50 μL prov och 50 μL GSH-lösning. Efter detektion av kvarvarande GSH-innehåll i provet omvandlas GSH till oxiderad form (GSSG) och enzymaktiviteten kan beräknas. Leversuperoxiddismutas(SOD)aktivitet detekterades enligt metoden av Marklund och Marklund [24]. Reaktionen är baserad på inhibering av autooxidation av pyrogallol genom SOD. Processen är beroende av närvaron av superoxidjoner. Mängden av enzymet som orsakar en 50-procentig hämning av extinktionen förändras på 1 minut jämfört med kontrollen betraktas som en enhet av enzymet.
2.7.Bestämning av TNF-, IL-17- och IL-4-nivåer i serum.
Serumhalterna av TNF-, I-17 och I-4 uppskattades enligt specifika enzymkopplade immunosorbentanalyssatser (ELISA) enligt tillverkarens instruktioner. Rått-TNF-alfa-ELISA-kit (katalognummer: MBS355371), IL-17 ELISA-kit (katalognummer.MBS5203506) och IL-4 ELISA-kit (katalognummer: MBS494192) erhölls från MyBioSource, Inc. , San Diego, CA, USA. Dessa ELISA-kit använder sandwich-ELISA. I korthet, mikro-ELISA-plattorna som tillhandahålls i dessa kit har förbelagts med en antikropp specifik för det berörda cytokinet. Standarder eller prover läggs till lämpliga mikro-ELISA-brunnar och kombineras med de specifika antikropparna. Sedan tillsätts en biotinylerad detektionsantikropp som är specifik för det berörda cytokinet och avidin-pepparrotsperoxidas (HRP)-konjugat till varje mikroplatta i tur och ordning och inkuberas. Fria komponenter tvättas bort. Substratlösningen tillsätts till varje brunn. Endast de brunnar som innehåller cytokin, biotinylerade detektionsantikroppar och avidin-HRP-konjugat kommer att se blått ut. Enzym-substratreaktionen avslutas genom tillsats av en svavelsyralösning och färgen blir gul. Den optiska densiteten (OD) mäts spektrofotometriskt vid en våglängd av 450 nm. OD-värdet är proportionellt mot koncentrationen av det testade cytokinet och dess koncentration i proverna kan bestämmas genom att jämföra provernas OD med standardkurvan.
2.8. Detektion av mRNA-uttryck av p53
2.8.1.RNA-isolering.
Totalt RNA isolerades från levervävnaden enligt metoden av Chomzynski och Sacchi [25] och Boom et al. [26] med användning av ett Thermo Scientific GeneJET RNA-reningskit erhållet från Thermo Fisher Scientific Inc., Rochester, New York, USA. Kortfattat lyseras och homogeniseras leverprover i lysbuffert, som innehåller guanidintiocyanat som ett kaotropiskt salt och -merkaptoetanol som kan skydda RNA från endogena RNaser. Lysatet blandas sedan med etanol och laddas på en reningskolonn. Det kaotropa saltet och etanolen gör att RNA binder till kiselmembranet medan lysatet snurras genom kolonnen. Därefter avlägsnas föroreningar effektivt från membranet genom att tvätta kolonnen med tvättbuffertar. Rent RNA elueras sedan under låg jonstyrka med nukleasfritt vatten. Nivåerna av isolerat RNA bestämdes och kvantifierades med användning av en ultraviolett (UV)spektrofotometer och tog absorbansen vid optiska densiteter (OD) vid 260nm och 280 nm. RNA kvantifierades och kvalificerades baserat på Sambrook och Russells [27] formel （RNA（ug/μL）=ODat 260nm×spädning×40ug/mL/1000）. För varje extraherat RNA-prov säkerställer förhållandet mellan OD vid 260 nm och OD vid 280 nm och förhållandet mellan 1,7 och 2,0 hög renhet av extraherat RNA.
2.8.2. RT-PCR Assay.RT-PCR-analys användes med hjälp av Thermo Scientific Verso 1-Steg RT-PCR Reddy Mix Kit (Thermo Fisher Scientific Inc.,
Rochester, New York, USA) för detektering av mRNA-uttrycket av lever p53. Kort sagt, i en enstegsreaktion, omvänt transkriberades RNA till cDNA och det producerade cDNA:t amplifierades av Techne 32 Ther-mocycler. Reaktionsblandningen består av Veso Enzyme Mix（1μL）, 2X One-Step PCR ReadyMix（25μL）, RT-förstärkare （25μL）, forward primer （10μM; 1μL), omvänd primer（10μM;1μ）, mall-RNA（1 ng;1,5μL） och vattennukleasfritt för att fullborda total volym till 50μL. Det termiska cykelprogrammet inkluderar cDNA-syntes (temp.50 grader, 15 minuter, 1 cykel), Verso-inaktivering (temp. 95 grader, 2 minuter, 1 cykel), denaturering (temp. 95 grader, 20 sekunder), glödgning (temp. 55 grader C, 30 sekunder), förlängning (temp.72 grader, 1 minut), och slutlig förlängning (temp. 72 grader, 5 minuter, 1 cykel). Antalet denatureringscykler följt av hybridisering och förlängning är 35 cykler. Efter omvänd transkription och amplifiering analyserades 10 μL PCR-produkter på en 1,5 procent agarosgel färgad med etidiumbromid i 1×Tris Borate EDTA-buffert(TBE)pH 8.3-8.5. Den elektroforetiska bilden visualiserades och analyserades med geldokumentationssystem (GelDocu Advanced), och värdena normaliserades till mängden -aktin. Primerparsekvenserna p53 var 5'd CAGCGTGATGATGGTAAGGA 3'(framåt) och 5'd GCGTTGCTCTGATGGTGA 3'(omvänd) enligt Asiri [28].
2.9. Histopatologiska undersökningar. Efter avlivning och dissektion skars levern från varje råtta snabbt ut och perfunderades sedan i saltlösning.
Bitar från levern på varje råtta (3 mm²) togs och fixerades i 10 procent neutralt buffrat formalin under tjugofyra timmar. De fixerade levrarna skickades till patologiska avdelningen, fakulteten för veterinärmedicin, Beni Suef University, för vidare bearbetning, blockering i vax, snittning och färgning med hematoxylin och eosin (H&E)[29]. De färgade leversektionerna undersöktes för detektion av de histopatologiska poängen. I tre slumpmässigt utvalda fält av varje avsnitt (×100) graderades lesioner eller skador som frånvarande (0), milda (I), måttliga () och svåra (II) för förändringar, 0 procent , mindre än 30 procent , 30-50 procent , respektive mer än 50 procent [30]. De graderade lesionerna inkluderade hydropisk och vakuolär degeneration, inflammatorisk cellinfiltration, nekros, apoptos, Kupffer-cellproliferation, fettförändringar och steatos, överbelastade blodkärl och sinusoider och hyperplasi av epitelslemhinnan i gallgången.
2.10. Immunhistokemisk detektion av kaspas-3.
De paraffininbäddade leverproverna överfördes till Institutionen för patologi, National Cancer Institute, för sektionering i 5um tjocka sektioner som monterades på positivt laddade objektglas (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA). Kaspas-3-reaktivitet bearbetades enligt metoderna enligt Galaly et al.[31] och Ahmed och Ahmed [32]. Kort sagt, efter antigenåtervinning, inkuberades en utspädd primär antikropp för kaspas-3(Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) med leversektioner i 1 timme. Utspädd biotinylerad sekundär antikropp (DakoCytomation Kit) tillsattes och inkubation utfördes i 15 minuter vid 37 grader. Därefter applicerades pepparrotsperoxidas-konjugerad med streptavidin (DakoCytomation Kit) under ytterligare 15 minuters inkubation. Bundet antikroppskomplex visualiserades genom reaktion av 3,3'-diaminobensidin(DAB)-substrat och motfärgning med hematoxylin. Alla leversektioner inkuberades under samma förhållanden med samma utspädningar av antikroppar och vid samma period, så immunfärgningen var jämförbar mellan de olika studiegrupperna. För varje beredning utfördes en negativ kontroll (ett objektglas utan en primär antikropp). Sektionerna visualiserades under ett ljusmikroskop och graden av cellimmunopositivitet bedömdes. Bilder av delar av levern togs med en digitalkamera (Leica, DM2500M Leica, Wetzlar, Tyskland). Undersökning och analys av märkning utfördes med hjälp av gratis mjukvaruversion ImageJ(1.51d)[33]. ImageJ-mjukvaran användes för att mäta de integrerade intensiteterna (i pixlar) för den positiva reaktionen av kaspas-3.
2.11. Statistisk analys.
Results were represented in tables and graphs as the mean±standarderror(SE). The data were analyzed by LSD analysis to discern the main effects and to compare various groups with each other using PC-STAT, University of Georgia(USA)[34]. Values of p>0.05 ansågs statistiskt icke-signifikant olika, medan värden på p<0.05 were="" significantly="" and="" highly="" significantly="">
3. Resultat
3.1. Effekt på serumparametrar relaterade till leverfunktion.
Den dagliga intraperitoneala injektionen av diklofenak under 4 veckor inducerade en signifikant höjning (p<0.05)in serum="" alt,="" ast,="" ldh,="" alp,="" and="" ggt="" activities="" as="" well="" as="" serum="" total="" bilirubin="" level.="" the="" cotreatment="" of="" diclofenac-injected="" ani-mals="" with="" naringin="" and/or="" hesperidin="" induced="" a="" decrease="" in="" these="" elevated="" levels.="" while="" the="" cotreatment="" of="" diclofenac-injected="" rats="" with="" naringin="" induced="" a="" significant="" decrease=""><0.05)in the="" elevated="" serum="" ast,="" ldh,="" alp,="" ggt,="" and="" total="" bilirubin="" levels,="" it="" produced="" a="" nonsignificant="" effect="" (p="">0.05) på ALT-aktiviteten. Samtidig behandling av diklofenak-injicerade djur med hesperidin inducerade en signifikant effekt (p<0.05)on the="" elevated="" alt,="" ast,="" ldh,="" ggt,="" and="" total="" bilirubin="" levels="" while="" it="" failed="" to="" produce="" a="" significant="" effect="" in="" serum="" alp=""><0.05). the="" cotreatment="" with="" naringin="" and="" hesperidin="" in="" combination="" successfully="" caused="" a="" significant="" decrease=""><0.05)in all="" elevated="" parameters="" related="" to="" liver="" function="" including="" alt,="" ast,="" ldh,="" alp,="" ggt,="" and="" total="" bilirubin="" levels.="" moreover,="" the="" treatment="" with="" the="" combination="" of="" naringin="" and="" hesperidin="" appeared="" to="" be="" the="" most="" effective="" in="" improving="" the="" elevated="" ast,="" alp,="" and="" ggt="" activities(table="" 1).="" serum="" albumin="" level,="" on="" the="" other="" hand,="" exhibited="" a="" nonsignificant="" change="" (p="">0.05) i alla grupper.
3.2.Effekt på leveroxidativ stress och antioxidantförsvarssystem.
Den dagliga intraperitoneala injektionen av diklofenak under 4 veckor inducerade en signifikant höjning (p<0.05)in liver="" lpo="" and="" a="" significant=""><0.05) in="" liver="" gsh="" con-tent="" and="" gpx="" and="" sod="" activities.="" the="" treatment="" of="" diclofenac-injected="" animals="" with="" naringin="" and/or="" hesperidin="" induced="" a="" significant=""><0.05)in liver="" lpo.="" narin-gin="" and="" its="" combination="" with="" hesperidin="" were="" more="" potent="" than="" hesperidin="" alone="" in="" decreasing="" the="" elevated="" liver="" lpo="" product.="" while="" the="" treatment="" with="" naringin="" and/or="" hesperidin="" produced="" a="" significant="" increase=""><0.05) in="" liver="" gpx="" and="" sod="" activities,="" only="" naringin,="" and="" hesperidin="" in="" combination="" induced="" a="" significant="" increase=""><0.05) in="" liver="" gsh="" content="" (table="">
3.3. Effekt på lever p53 mRNA uttryck.
Som indikeras i figur 2 ökade det proapoptotiska proteinet p53 mRNA-uttryck signifikant (s<0.05)in the="" liver="" of="" diclofenac-injected="" rats.="" on="" the="" other="" hand,="" the="" treatment="" with="" naringin,="" hesperidin,="" and="" their="" combination="" produced="" a="" significant=""><0.05)decrease in="" p53="" mrna="" expression="" in="" comparison="" with="" diclofenac-injected="" control.="" there="" is="" no="" significant="" difference="" between="" the="" three="" treatments="" when="" compared="" with="" each="">
3.4. Effekt på serum-TNF-, IL--17- och -4-nivåer. I tabell 3 inducerade den dagliga intraperitoneala injektionen av diklofenak under 4 veckor en signifikant ökning (p<0.05)in serum="" tnf-αand="" il-17="" levels="" and="" a="" significant="" decrease="" in="" serum="" il-4="">
Samtidig behandling av diklofenak-injicerade råttor med naringin och/eller hesperidin inducerade en signifikant förbättring (s.<0.05)of altered="" serum="" tnf-a,="" il-17,="" and="" i-4="" levels.="" the="" treatment="" with="" the="" combination="" of="" both="" flavonoids="" was="" the="" most="" potent="" in="" increasing="" the="" lowered="" il-4level;="" the="" effect="" of="" the="" combination="" was="" more="" significantly="" potent=""><0.05)as compared="" with="" the="" effect="" of="" either="" naringin="" or="">
3.5. Leverhistopatologiska fynd.
Figur 3 visar effekten av naringin och/eller hesperidin på leverhistologiska förändringar hos diklofenak-injicerade råttor. Figur 3(a) visar levern med den normala histologiska strukturen av leverlobuli. Å andra sidan uppvisade levern hos diklofenak-injicerade råttor markanta skadliga histologiska förändringar som hydropisk degenerering av hepatocyter, apoptotiska celler och portalinfiltration med mononukleära celler (Figur 3(b)) förutom cytoplasmatisk vakuolisering av hepatocyter och fokal leverfunktion. associerad med fokal inflammatorisk cellinfiltration (Figur 3(c)). Dessa förändringar ändrades i viss utsträckning i de diklofenak-injicerade råttorna behandlade med naringin och visade den enda fettförändringen av sporadiska hepatocyter (Figur 3(d)). Behandlingen av diklofenak-injicerade råttor med hesperidin gav en förbättring av leverns histologiska förändringar jämfört med den diklofenak-injicerade kontrollen men uppvisade fortfarande fettförändring av sporadiska hepatocyter, lätt aktivering av Kupffer-celler och närvaro av få apoptotiska celler (Figur 3(e)). På liknande sätt förbättrade behandlingen av diklofenak-injicerade råttor med en kombination av naringin och hesperidin de histologiska förändringarna i levern jämfört med diklofenak-injicerad kontroll. Levern hos diklofenak-injicerade råttor med en kombination av båda flavonoiderna uppvisade emellertid lätt Kupffer-cellproliferation och lätt cytoplasmatisk vakuolisering (Figur 3(f)). Det verkade som om den kombinerade effekten av naringin och hesperidin var den mest potenta för att förbättra leverns histologiska arkitektur.
Histopatologiska förändringspoäng för alla grupper registreras i tabell 4. Leversektionen av normal kontroll visade noll poäng för alla histologiska lesioner. De leverdiklofenakinjicerade råttorna uppvisade olika grader av histologiska lesionspoäng från grad III till grad 0. Administrering av hesperidin och naringin till diklofenak-injicerade råttor resulterade i anmärkningsvärda förbättringar av histologiska lesioner inklusive hydropisk och vakuolär degeneration, inflammatorisk cellinfiltration, nekros, apoptos, Kupffer-cellproliferation, fettförändringar, steatos, överbelastning.
FCURE 2: Effekt av naringin, hesperidin och deras kombination på p53-mRNA-uttryck i levern hos diklofenak-administrerade råttor. Medel, som delar olika symboler, är signifikant olika på sid<0.05. blood="" vessels="" and="" sinusoids,="" and="" hyperplasia="" of="" the="" epithelial="" lining="" of="" the="" bile="" duct;="" thereby,="" the="" liver="" exhibited="" lower="" grades="" of="" histopathological="" change="" scores="" in="" the="" diclofenac-injected="" groups="" treated="" with="" naringin="" and/or="" hesperidin="" in="" comparison="" with="" diclofenac-injected="" control="" rats.="" the="" combinatory="" effect="" of="" naringin="" and="" hesperidin="" was="" the="" most="" potent="" in="" decreasing="" the="" histopathological="" lesion="">
3.6. Immunhistokemisk analys.
De immunhistokemiskt färgade leversektionerna avbildas i figur 4 och resultaten av bildanalys visas i figur 5.
Mikrofotografierna i figur 4 och data i figur 5 avslöjade att kaspas-3-uttryck ökade signifikant i diklofenak-injicerade råttor. Behandlingen av diklofenak-injicerade råttor med naringin, hesperidin och deras kombination resulterade i en signifikant minskning av det förhöjda kaspas-3-uttrycket i levern. Kombinationseffekten av naringin och hesperidin var den mest potenta för att minska det förhöjda innehållet av kaspas-3. Behandlingen med kombinationen normaliserade uttrycket av leverkaspas-3.
Denna artikel är extraherad från Oxidative Medicine and Cellular Longevity Volume 2021, artikel-ID 9990091, 14 sidor https://doi.org/10.1155/2021/9990091
