Del Ⅱ: Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosiders inducerar apoptos av hepatocellulära karcinomceller genom mitokondrierberoende och MAPK-vägar och förbättrar antitumöreffekten genom kombination med cisplatin

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Vi utvärderade vidare den immunstimulerande effekten av CTPG (Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosiders) på möss. Efter ip-injektion, sc-injektion och ig-administrering av CTPG (200 och 400 mg/kg), fanns det ingen signifikant förändring i tillståndet hos möss jämfört med den obehandlade gruppen. Kroppsvikten hos möss hade heller ingen signifikant skillnad mellan CTPG-behandlade grupper och obehandlade grupper (Figur 7A). Hjärt-, lever-, mjälte-, lung-, njur- och tymusindex för möss var likartade bland alla grupper utom mjältindex för möss i 400 mg/kg CTPG ip-injektionsgruppen (tabell 1). Resultaten antydde att de utvalda doserna av CTPG inte hade några biverkningar hos möss. Mjälten är ett viktigt immunförsvarsorgan hos däggdjur och dess utveckling påverkar direkt individens immunfunktion och förmåga att stå emot sjukdomar. Immunorganindexet återspeglar utvecklingen och immunfunktionen hos immunorganen. Mjälten innehåller en mängd olika immunceller, inklusive T-celler, B-celler, naturliga mördarceller (NK-celler), makrofager, dendritiska celler (DC) och andra, som spelar en viktig roll i immunsystemet.30 Det hade rapporterats att polysackarider kan öka antalet immunceller för att förstärka kroppensimmunitet.31 Eftersom ip-injektion av CTPG signifikant ökade mjältindexet (ökade 0.55 gånger), analyserade vi ytterligare antalet olika immunceller i mjälten. Resultaten visade att ip-injektion av CTPG signifikant ökade antalet T-celler (CD3 plus CD19−celler) (ökade 0.49 gånger), B-celler (CD3−CD19 plus celler) (ökade 0 0,49 gånger), och NK-celler (CD3-CD19-CD49b plus celler) (ökade 1,63 gånger) jämfört med den obehandlade gruppen. CD4 plus och CD8 plus T-celler, som huvudsubtyper av T-celler, spelar en viktig roll i det antigenspecifika cellulära immunsvaret.32 Därför analyserade vi ytterligare antalet och aktiveringsstatusen för CD4 plus och CD8 plus T-celler i mjälte. Resultaten indikerade att ip-injektion av CTPG inte bara signifikant ökade antalet CD4 plus och CD8 plus T-celler (ökade 0.55 respektive 0.34 gånger) utan också ökade aktiveringstillståndet för CD4 plus T-celler (CD4 plus CD44 plus celler) (ökade 0,84 gånger) (Figur 7B), dessa resultat tyder på att CTPG hade immunförstärkningsfunktion.

Kombinationen av CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosiders) och Cisplatin uppvisade potent antitumöreffekt på H22-tumörmusmodell

Det är allmänt accepterat att kemoterapi eller strålbehandling kan leda till dålig prognos och inducera många biverkningar, som kan bero på undertryckande av immunsystemet och skador på normala vävnader och organ. Polysackarider från TCM har immunförstärkande effekter och lindrar skador på immunorgan och immunceller orsakade av kemoterapi, till exempel kitosan33 och Lycium barbarum polysaccharides.34 Resultatet ovan visade att CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosiders) kan lindra biverkningarna av cisplatin på immunsystemet. Därför utvärderades antitumöreffekten av CTPG i kombination med cisplatin i H22-tumörmusmodellen. Som visas i figur 8A undertryckte CTPG enbart, enbart cisplatin och kombinationen av CTPG och cisplatin (CTPG plus cisplatin) signifikant H22-tumörtillväxt jämfört med kontrollgruppen. CTPG plus cisplatin visade en starkare hämmande effekt än CTPG och enbart cisplatin. På den 20:e dagen var tumörvolymerna i kontrollgruppen, enbart cisplatin, enbart CTPG och CTPG plus cis-platingrupperna cirka 1707,8, 722,5, 1033,8 respektive 367,5 mm3. Samma dag samlades tumörerna för visuell observation (Figur 8B) och viktjämförelse (Figur 8C). CTPG plus cisplatin visade bättre terapeutiska effekter på H22-tumörmusmodellen än CTPG eller enbart cisplatin. Tumörvikten i CTPG plus cisplatingruppen var lägre än i andra grupper. Dessa resultat tyder på att antitumöraktiviteten hos CTPG och cisplatin resulterar i synergistiska effekter.

Kroppsvikten hos möss mättes för att återspegla mössens hälsostatus. Kroppsvikten minskade anmärkningsvärt efter cisplatinbehandling, vilket tyder på cisplatininducerad allvarlig systemisk toxicitet.35 I jämförelse förbättrade CTPG i kombination med cisplatin avsevärt kroppsviktsminskningen inducerad av cisplatin, medan CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosiders) enbart hade ingen signifikant effekt på möss kroppsvikt (Figur 8D). Organen inklusive mjälte, hjärta, lever, lunga, njure och tymus isolerades också för att beräkna organindex. Jämfört med den obehandlade gruppen minskade mjältindex signifikant och ökade med cisplatin respektive CTPG. CTPG plus cisplatin återhämtade mjältindex jämfört med enbart cisplatin. Andra organindex visade ingen signifikant skillnad mellan alla grupper (tabell 2).CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosiders) Kombinerat med Cisplatin Enhanced theImmunitetav tumörmöss.

Ovanstående resultat visade att CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosiders) förstärkt immunitetenav möss och hämmade apoptos av splenocyter inducerad av cisplatin. Vi undersökte vidare om antitumöreffekten av CTPG plus cisplatin var korrelerad med förbättrad immunitet. I processen för uppkomst och utveckling av tumörer spelar kroppens immunsystem en viktig immunövervakningsfunktion, och T-cellsmedierad cellulär immunitet spelar en nyckelroll. CD4 plus T-celler har funktionen att assistera cellulär immunitet och humoralt immunsvar, och CD8 plus T-celler är de huvudsakliga effektorcellerna för ett immunsvar, som specifikt kan döda målceller och spela en viktig roll i tumörimmunitet och antiviral immunitet.32 Mjältarna från tumörbärande möss samlades in för att detektera antalet T-celler och B-celler genom flödescytometri. Frekvensen och antalet T-celler inklusive CD4 plus och CD8 plus T-celler i CTPG plus cisplatingruppen var signifikant högre än de i kontrollen (ökade 0,55 respektive 0,7 gånger) och cisplatingrupper (ökade 0,92 respektive 1,16 gånger) (Figur 9A och B). Jämfört med kontrollgruppen ökade CTPG enbart också delvis antalet CD4 plus och CD8 plus T-celler även om det inte fanns någon signifikant skillnad. Frekvenserna och antalet B-celler hade ingen signifikant skillnad mellan alla grupper.

Myeloid-härledda suppressorceller (MDSC) och regulatoriska T-celler (Tregs) expanderar i tumörer och hämmar antitumörimmunsvar; de undertrycker aktiveringen och expansionen av CD4 plus T-celler, funktionen hos effektor-T-celler, aktiveringen och/eller proliferationen och cytokinbildningen av CD4 plus och CD8 plus T-celler, B-cellsproliferationen och immunglobulinproduktionen och klassväxling, de cytotoxiska funktionerna hos NK och naturliga mördar-T-celler (NKT), och funktionen och mognad av DC:er.36-38 Frekvenserna och antalet MDSC:er (CD11b plus Gr-1 plus ), makrofager (CD11b plus Gr) -1-), och Tregs (naturliga Tregs: CD4 plus CD25 plus Foxp3 plus; inducerade Tregs: CD4 plus CD25-Foxp3 plus ) i mjälten hos tumörmöss analyserades med flödescytometri. Jämfört med kontrollgruppen minskade frekvenserna och antalet MDSCs signifikant efter injektion med enbart cisplatin (minskade 1,56 gånger) eller i kombination med CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosiders) (minskade 0.62 gånger). Antalet CD11b plus Gr-1-makrofager minskade också signifikant även om det inte fanns någon signifikant förändring i deras frekvenser (Figur 9C). Dessutom CTPG(Cistanche Tubulosa Phenylethanoid Glycosiders) enbart och CTPG plus cisplatinbehandling minskade signifikant frekvensen av inducerade Tregs (minskade {{0}}.33 respektive 0.37 gånger) (Figur 9D). Dessa resultat antydde att antitumöreffekten av CTPG plus cisplatin kan vara korrelerad med den förstärkta immuniteten som kännetecknas av det ökade antalet T-celler och det minskade antalet MDSCs och Tregs.