Preliminär undersökning av den främjande effekten och mekanismen hos polysackarider från Cistanche Deserticola på lymfocytproliferation

Metoder

MTT-analys användes för att detektera proliferationen av mjältlymfocyter hos möss. Cyklofosfamid (Cy) användes för att replikera djurmodeller av immunförsvagade djur, och mjält- och brässindex för normala och immunförsvagade djur mättes. Aktiviteten av interleukin-2 (IL-2) mättes med tymocytproliferationsanalysen. Resultat: Cistanche deserticola polysackarid främjade signifikant proliferationen av mitogen (ConA och LPS) aktiverade lymfocyter och icke-aktiverade normala celler, och främjade utsöndringen av IL-2 i lymfocyter. Intraperitoneal administrering visade att Cistanche deserticola polysackarid signifikant ökade mjältindexet hos normala och immunförsvagade möss, och hade också en signifikant antagonistisk effekt på minskningen av tymusindex orsakad av Cy. Slutsats: Cistanche deserticola polysackarid kan avsevärt främja proliferationen av mjältlymfocyter hos möss, vilket kan vara relaterat till dess främjande av IL-2-utsöndring.

Öken levande cistanche

[Nyckelord]Cistanche deserticola polysackarid; Mjältindex; Thymus index; Lymfocytproliferation; Interleukin-2

Växtpolysackarider har väckt stor uppmärksamhet på grund av deras utbredda immunmodulerande effekter och relativt låga toxicitet [1]. Cistanche deserticola ma, känd som "Desert Ginseng", är den fjällande, torra, köttiga stammen av Cistanche deserticola, en växt av Orobaceae, som har omfattande farmakologiska effekter. Dess vattenavkok kan avsevärt öka den fagocytiska procenten och det fagocytiska indexet för makrofager. Ytterligare studier har visat att dess materiella grund är den totala polysackariden av Cistanche deserticola [3]. Zeng Qunli et al. [4] har funnit att en enda komponent av Cistanche deserticola polysackarid har en betydande proliferativ effekt på mus tymiska lymfocyter in vitro. Effekten av Cistanche deserticola polysackarid på lymfocytproliferation observerades in vivo och in vitro.

Molekylformel för Cistanche deserticola

1 Material och metoder

1.1 Läkemedel och reagens

Polysackariden från Cistanche deserticola tillhandahålls av Plant and Chemical Department vid Institute of Medicine and Planting, Medical College. Det extraheras från Cistanche-extraktpulvret och polysackaridhalten är 87%.

Cistanche-extraktpulver

Innan du använder in vivo-experiment, lös upp och späd med fysiologisk koksaltlösning till önskad koncentration och koka för sterilisering. Före användningen av in vitro-experiment löstes RPMI-1640-odlingsmediet och späddes ut och högtryckssterilisering utfördes. Lipopolysackarid (LPS), concanavalin (ConA), dexametason (DEX) och MTT är alla produkter från Sigma Corporation. Cyclophosphamide, ett kinesisk-amerikanskt joint venture av Shanxi Taisheng Pharmaceutical Co., Ltd., fetalt bovint serum, RPMI1640 odlingsmedium och trypsin är alla Gibco-produkter. Andra reagens är inhemska analytiska reagenser.

1.2 Djur

BALB c unga möss (SPF-nivå) tillhandahålls av Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [SCXK (Beijing) 2002-2003]. SPF-klassade djur föds upp i ett rum och matas och dricks fritt.

1.3 Apparatur

Multikan Ascent enzymmarkör, en produkt från Thermo Electron Company, USA. Leici PHS-3B Precision pH Meter, Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd., NAPCOo 5410 koldioxidinkubator, NAPCO, USA. BCN-1360 Ultra Clean Workbench, Beijing Donglianhar Instrument Manufacturing Co., Ltd. XDS-1B Inverted Microscope, Chongqing Optoelectronic Instrument Co., Ltd.

1.4 Metod

1.4.1 Effekt på lymfocytproliferation [5]:

Rutinmässig beredning av mjältlymfocyter från BALB/c-möss, med hjälp av RPMI-1640 för att justera cellkoncentrationen till 1 × 107 mL, inokulerade på en odlingsplatta med 96 brunnar, med 100 cellsuspensioner tillsatta till varje brunn μL-50. Den samodlades med olika koncentrationer av Cistanche deserticola polysackarid (den slutliga koncentrationen av Cistanche deserticola polysackarid för proliferation av oaktiverade lymfocyter var 6,25, 12,5, 25, 50 och 100 mg/L i ordning; slutkoncentrationen av Cistanche deserticola polysackarid för proliferation av icke-aktiverade lymfocyter var 6,25, 12,5, 25, 50 och 100 mg/L i ordning; lymfocyter var 3,9, 7,8, 15,6, 31,2 och 62,5 mg/L i ordning och den slutliga koncentrationen av Cistanche deserticola polysackarid för proliferationen av LPS-aktiverade B-lymfocyter var 1,56, 3,13, 6,25, 125, eller LPS i ordningen; RPMI-1640 medium användes som kontroll. Den totala volymen för varje hål är 200 μL. När man lägger till mitogen ConA och LPS (kontrollen är RPMI-1640 som innehåller motsvarande koncentrationer av ConA eller LPS), är slutkoncentrationerna av båda 2,5 mg/L respektive 10 mg/L. Tre parallella hål gjordes för olika behandlingar. Placera odlingsplattan i en 37 graders, 5% CO2 mättad fuktighetsinkubator i 68 timmar, tillsätt MTT och fortsätt att odla i 4 timmar. Mät A540 nm-värdet med en enzymmarkör med MTT-metoden för att detektera proliferation. När du jämför varje grupp, omvandla A540nm-värdet till lymfocytproliferationshastighet enligt följande formel:lymfocytproliferationshastighet=AA-prov A-kontroll × 100 %.

Effekter av Cistanche - Förbättra immuniteten

1.4.2 Effekt på vikten av immunorgan hos normala möss [6,7]:

Unga BALB c-möss (hanar, 4 veckor gamla, med en kroppsvikt på 10-15 g) delades slumpmässigt upp i en blank kontrollgrupp (saltlösning) och olika doseringsgrupper (125 mg (kg · kroppsvikt) och 250 mg (kg · kroppsvikt)), med 11 råttor i varje grupp. Läkemedlet administrerades intraperitonealt en gång om dagen under 7 dagar i följd. Mössen dödades efter cervikal dislokation. Mjälten och tymus togs, fett och fasciavävnad avlägsnades och ytvätskan torkades med filterpapper. Efter vägning, mjältindex=100 × mjältvikt (mg) Kroppsvikt (mg); Hthymusindex=100 × Thymus Vikt (mg) Kroppsvikt (mg). Beräkna mjältindex och tymusindex för varje 100 mg kroppsvikt, respektive.

1.4.3 Effekt på immunorganvikt hos immunförsvagade möss [7,8]:

Unga BALB c-råttor (hanar, 6 veckor gamla, kroppsvikt 15-20 g) delades slumpmässigt in i 12 grupper efter kroppsvikt. Förutom den normala kontrollgruppen (intraperitoneal injektion av en ekvivalent volym fysiologisk koksaltlösning), injicerades de andra grupperna med Cy 50 mg (kg · bw) dagligen intraperitonealt, och testläkemedelslösningen administrerades intraperitonealt [125 och 250 mg (kg · bw)], den normala kontrollgruppen och modellgruppen gavs en gång en fysiologisk kroppsvolym under 13 dagar en gång en fysiologisk kroppsvolym dag. Förändringarna i djurvikt observerades under experimentet. 24 timmar efter den senaste administreringen, mjält- och tymusindexen mättes och beräknades med samma metod som i 1.4.2.

1.4.4 Inverkan på IL-2 aktivitet:

① Induktion av IL-2 [9]: Tillsätt 50 till varje brunn i en 96-brunnars cellplatta μ L Olika koncentrationer av Cistanche deserticola polysackarid (slutkoncentrationer i ordning: 3,91, 7,82, 15,63, 31,25, 65,5 mg/L, 1, 2, 65,5 mg/L, 1,25, 62,5 mg/L, 1,25 mg/l, μL kontrollen L odlingsmedium) och 50 μL ConA (slutkoncentration 5 mg/L), tillsätt 1 till per brunn × 106 mjältceller. Inkubera i en 37 graders, 5 % CO2 mättad fuktighetsinkubator i 24 timmar, centrifugera i 20 minuter vid 2500 r min och ta cellsupernatanten och förvara den vid - 20 grader för standby. ② IL-2 aktivitetsdetektering [9,10]: Den grundläggande metoden är baserad på litteratur [9], och lämpliga justeringar görs enligt litteraturen [10]. Konventionell beredning av BALB c mus-tymocytsuspension, 96-brunnars cellodlingsplatta, 1 inokulering per brunn × 106 tymocyter, samtidigt som man tillsätter 50 celler per brunn μL ConA (slutkoncentration 2,5 mg/L), och tillsätt sedan den beredda IL-2-supernatanten 50 μL till den blanka odlingslösningen 50, tillsätts tillsammans med L-odlingslösningen 50), 54 timmar, tillsätt MTT, fortsätt inkubera i 4 timmar, centrifugera i 10 till 15 minuter vid 1000 r min, kassera supernatanten och tillsätt DMSO 100 per brunn μL, skaka med en mikrooscillator i 8 minuter och mät A540 nm-värdet med en enzymmarkör.

1.5 Statistisk analys

Data uttrycktes som medelvärde och standardavvikelse (x ± s). Microsoft Excel-programvara användes för att sammanställa data och ett t-test genomfördes. P<0.05 and P<0.01 were significant differences, both of which were statistically significant.

2. Resultat

2.1 Effekt på lymfocytproliferation

Som framgår av tabell 1 kan tillsats av Cistanche deserticola polysackarid till odlingsmediet av musmjältlymfocyter odlade in vitro vid en koncentration över 25 mg/L avsevärt stimulera lymfocytproliferation, vilket indikerar att Cistanche deserticola polysackarid i sig har en mitotisk effekt. Samtidigt,det kan ses från tabell 2 och tabell 3 att CDPS har en signifikant främjande effekt på proliferationen av ConA-inducerade T-lymfocyter eller LPS-inducerade B-lymfocyter.

Tab.1 Inverkan av Cistanche deserticola polysackarid på proliferationen av oaktiverade lymfocyter (x ±s, n =3)

Inte: jämfört med kontrollgruppen, ＊P<0.05.

Tab.2 Inverkan av Cistanche deserticola polysackarid på proliferationen av T-lymfocyter inducerad av ConA (x ±s, n =3)

 

Obs: jämfört med ConA-gruppen, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.

Tab.3 Inverkan av Cistanche deserticola polysackarid på proliferationen av B-lymfocyter inducerad av LPS (x ±s, n =3)

Obs: jämfört med LPS-gruppen, ＊P<0.05, ＊＊P <0.01.

2.2 Effekt på vikten av immunorgan hos normala möss

Som framgår av tabell 4,Cistanche deserticola polysackarid kan signifikant öka mjältindexet hos normala BALB/cc unga råttor men påverkar inte tymuskörteln.

2.3 Effekt på immunförsvarets vikt hos immunförsvagade möss

Från tabell 5,det kan ses att mjälten och brässorganindexen hos möss i den Cy-immunsuppressiva gruppen är lägre än de i kontrollgruppen, och Cistanche deserticola-polysackarid (125, 250 mg/kg) kan signifikant förbättra mjält- och brässindex.

2.4 Effekt på IL-2 aktivitet

Som framgår av tabell 6,när dosen av Cistanche deserticola polysackarid når 7,82 mg/L kan det avsevärt öka frisättningen av IL-2 från musmjältceller.

Tab.4 Effekten av Cistanche deserticola-polysackarid på vikten av immunorgan hos normala möss (x ±s, n =11)

Obs: jämfört med kontrollgruppen, ＊＊P<0.01.

Tab.5 Effekten av Cistanche deserticola-polysackarid på vikten av immunorgan hos immundeprimerade möss (x ±s, n =12)

Notera: jämfört med kontrollgruppen, ## P < 0,01; jämfört med modellgruppen, ＊＊P<0.01.

Tab.6 Inverkan av Cistanche deserticola-polysackarid på IL-2-produktionen av mjältlymfocyter hos möss( x ±s, n =3)

Obs: jämfört med kontrollgruppen, ＊＊P<0.01.

3. Diskussion

ConA- och LPS-inducerad mjältlymfocytproliferation hos möss är ett in vitro-experiment för att detektera funktionen hos T- och B-lymfocyter och är en viktig indikator på specifik immunförmåga. Studier har visat att när den slutliga koncentrationen av Cistanche deserticola polysackarid är över 25 mg/L, kan det avsevärt främja lymfocytproliferation, vilket indikerar att det har en viss mitotisk effekt. I närvaro av mitogen (ConA eller LPS) kan en mindre dos av Cistanche deserticola polysackarid förbättras om kroppen uppvisar betydande proliferativ aktivitet. Vi vet att ConA och LPS huvudsakligen inducerar proliferationen av T-lymfocyter respektive B-lymfocyter. Studier har visatcistanche pulver hälsofördelar: Cistanche deserticola polysackarid kan främja både T-lymfocytproliferation och B-lymfocytproliferation, men dess proliferativa effekt på B-lymfocyter är betydligt starkare än på T-lymfocyter.

Cistanche pulver hälsofördelar-Improve immunitet

Klicka här för att se produkter från Cistanche Improve Immunity

【Be om mer】 E-post: xue122522@foxmail.com / WhatsApp 0086 18599088692 / WeWeChat18599088692

Tymus och mjälte är de viktigaste immunorganen hos djur. Immuncellerna i mjälten är huvudsakligen mogna B-lymfocyter, medan tymus huvudsakligen är omogna T-lymfocyter. Tymus- och mjältindex kan återspegla utvecklingen av immunorgan och immuncellers funktionella status. Intraperitoneal injektion av Cistanche deserticola polysackarid kan signifikant öka mjältindexet hos normala och immunsupprimerade möss och har en signifikant antagonistisk effekt på tymusatrofi inducerad av Cy hos möss.

Cistanche deserticola-polysackarid har ingen signifikant effekt på tymiskt index hos normala djur, vilket överensstämmer med resultaten av in vitro-experiment där Cistanche deserticola-polysackarid främjar proliferationen av B-lymfocyter snarare än T-lymfocyter.

Cistanche tillägg nära mig-Förbättraimmunitet

IL-2 är ett cytokin som produceras av T-lymfocyter från G1-fasen i cellcykeln till S-fasen. Det är en viktig T-cellstillväxtfaktor som fungerar som en autokrin tillväxtfaktor. Dessutom kan IL-2 främja B-cellsproliferation och antikroppssyntes [11,12]. Cistanche deserticola polysackarid främjar frisättningen av IL-2 från lymfocyter, vilket uppenbarligen är relaterat till Cistanche deserticola polysackarid som främjar spridningen av mjältlymfocyter.

Medicinsk forskning visar att Cistanche innehåller polysackarider, Echinacosider och Acteoside, som kan aktivera lymfocyter och förbättra kroppen; de funktionella komponenterna i cistanche Phenylethanoid Glycosides har en betydande effekt på cellåterhämtning efter 60 Co gammastrålningsskada, och kan också förbättra immunfunktionen mot strålningsskador. Att ta tillskott av Cistanche deserticola dagligen kan uppnå effekten av att förbättra immuniteten.