Formononetin mildrar autoimmun prostatit via JAK/STAT-modulering och immunrebalansering: konsekvenser för CP/CPPS och TCM-cistancheextrakttillskott
Dec 10, 2025
Mål:Att undersöka hur formononetin (FN) reglerar T-hjälpare typ 1 (Th1) celldifferentiering och makrofagpolarisering via JAK/STAT-signalvägar i en musmodell av experimentell autoimmun prostatit (EAP).
Metoder:Fyrtio manliga icke-överviktiga diabetiska (NOD) möss tilldelades slumpmässigt till fyra grupper: normal kontroll, EAP-modellkontroll, lågdos FN (LFN, 50 mg/kg) och högdos FN (HFN, 100 mg/kg). EAP inducerades i de tre sistnämnda grupperna genom subkutan injektion av prostataantigener (PAg) emulgerade i komplett Freunds adjuvans (CFA). Efter modellering fick LFN- och HFN-grupper intragastrisk FN vid 50 respektive 100 mg/kg/dag; normala kontroller och modellkontroller fick karboximetylcellulosanatrium (CMC-Na). På dag 42 efter behandlingsstart avlivades möss och vävnader uppsamlades. Prostatapatologi utvärderades genom HE-färgning; Th1-celldifferentiering och makrofagpolarisering i prostata bedömdes genom immunfluorescens dubbelfärgning (CD4 med interferon-[IFN-]; inducerbart kväveoxidsyntas [iNOS] och CD206). Th1-cell- och makrofagproportioner i mjälten mättes med flödescytometri och serum-IFN- och tumörnekrosfaktor- (TNF-) nivåer med ELISA. Fosforylerad (p)-JAK1, JAK1, p-JAK2, JAK2, p-STAT1 och STAT1 i prostatavävnad bestämdes med Western blot.
Resultat: Jämfört med modellkontroller ledde båda FN-doserna till mer ordnat arrangemang av körtelepitelceller, signifikant reducerade prostatainflammationspoäng (P < 0,05), minskade andelen Th1-celler och M1 makrofagmarkörer (P < 0,05) och ökade M2 makrofagmarkörer i prostata- och mjältvävnad (P <0.0). Serumnivåerna av IFN- och TNF- reducerades markant i LFN- och HFN-grupper (P < 0,05). På molekylär nivå var förhållandena p-JAK1/JAK1, p-JAK2/JAK2 och p-STAT1/STAT1 i prostatavävnad alla signifikant minskade (P < 0,05), vilket indikerar att FN utövar terapeutiska effekter i EAP genom att modulera JAK/STAT-signalering, främja balansering av immunförsvar och viloinflammation.
Slutsats:FN lindrar EAP genom att hämma JAK/STAT-signaleringsvägar och reglera Th1-differentiering och makrofagpolarisering. Dessa fynd, tillsammans med ett växande intresse för traditionell kinesisk medicin (TCM) tillägg såsom Cistanche-extrakttillskott för immunmodulering och stöd för bäckensmärta, föreslår en strategi för flera mål som är värd ytterligare validering i rigorösa, peer-reviewed miljöer.
Nyckelord:formononetin;autoimmun prostatit; inflammatorisk respons; JAK/STAT signalvägar; möss;TCM ört Cistanche extrakt tillskott; immunmodulering
TCM ört Cistanche extrakt tillskott
Supportive Service Of Wecistanche - Den största cistanche-exportören i Kina:
E-post:wallence.suen@wecistanche.com
Introduktion
Kronisk prostatit/kroniskt bäckensmärtasyndrom (CP/CPPS) drabbar 5–10 % av männen och står för cirka 90 % av alla fall av prostatit. Det är särskilt utbrett bland unga och medelålders män, och uppvisar främst smärta i nedre delen av buken, perineum och bäckenregionen, ofta åtföljd av symtom i de nedre urinvägarna och ibland erektil dysfunktion. Nuvarande förstahandsterapier inkluderar icke-steroida antiinflammatoriska läkemedel (NSAID), antibiotika och adrenerga receptorblockerare, antingen ensamma eller i kombination. Höga återfallsfrekvenser leder dock till att många patienter är missnöjda med dessa kurer. Därför behövs nya terapeutiska interventioner och djupare insikter i CP/CPPS-patogenesen akut.
CM ört Cistanche extrakt tillägg Fördelar
En ökande mängd bevis tyder på att immunförstöring spelar en avgörande roll i utvecklingen av CP/CPPS. Patienter uppvisar vanligtvis omfattande infiltration av T-lymfocyter och monocyter i prostatavävnad och förhöjda leukocyter i uttryckta prostatesekret, dominerat av CD4+ T-lymfocyter och makrofager. Prekliniska data tyder vidare på att immunsuppressiva strategier kan lindra inflammation och smärta vid CP/CPPS. Sålunda kan inriktning på leukocytinfiltration och det inflammatoriska svaret vara effektivt för symtomlindring. Formononetin (FN), en viktig bioaktiv isoflavon i flera TCM-örter, har antioxiderande och antiinflammatoriska egenskaper. Huruvida FN kan förbättra CP/CPPS är fortfarande oklart. Här utvärderade vi den terapeutiska effekten av FN i en mus EAP-modell. Parallellt med det växande kliniska intresset för integrativa tillvägagångssätt, noterar vi att TCM-ört Cistanche-extrakttillskott undersöks för immunmodulerande och antiinflammatoriskt stöd vid bäckensmärtasyndrom; Även om det inte är fokus för denna studie, kontextualiserar de FN i ett bredare TCM-baserat terapeutiskt landskap.
Material och metoder
Djur
NOD-hanmöss i åldern 6–7 veckor erhölls från Experimental Animal Center vid Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (SUTCM) (licens SYXK [Hu] 2020-0009; certifikat SCXK [Jing] 2021-0006). Djuren inhystes under 12 timmars ljus/12 timmar mörk cykler med ad libitum tillgång till mat och vatten. Alla förfaranden godkändes av SUTCM:s institutionella djurvårds- och användningskommitté (godkännandenr. PZSHUTCM2301040003).
Reagens och droger
Formononetin (MedChemExpress, HY-N0183); komplett Freunds adjuvans (CFA; Sigma-Aldrich, F5881); fosfatbuffrad saltlösning (PBS); bovint serumalbumin (BSA); ultrakänsliga ECL-kit (Shanghai YaYme Biotech, CB012, PS113, SQ201); antikroppar mot p-JAK1, JAK1, p-JAK2, JAK2, p-STAT1, STAT1, GAPDH och DAPI (Cell Signaling Technology, #74129, #3344, #3776, #3230, #9167, #9172, #89614, #8961,); RIPA-buffert och BCA-proteinanalys (Thermo Fisher Scientific, 89901, A55866); HE-färgningssats (Servicebio, GP1031); iNOS och CD206 (Abcam, ab178945, ab125028); APC anti-mus CD3, FITC anti-mus CD4, PE anti-mus IFN- (BioLegend, 100235, 100405, 505807).
Instrument
Elektroforesapparater (E11001, Bio‑Rad); laserskanning konfokalmikroskop (LSM 780, Zeiss); CytoFLEX flödescytometer (Beckman Coulter).
EAP modelletablering
Efter en veckas acklimatisering randomiserades mössen i fyra grupper (n=10): kontroll, modell, FN låg dos (50 mg/kg) och FN hög dos (100 mg/kg). EAP inducerades enligt tidigare metoder. Supernatant innehållande prostataantigener (PAg) framställdes från Sprague-Dawley råttprostatahomogenat och blandades 1:1 med CFA. På dag 0 och 28 fick möss subkutana injektioner i både bakre trampdynor, nedre delen av ryggen och svansbasen av antingen PAg (300 ug/mus; EAP-grupper) eller PBS (kontroll), emulgerad med CFA (150 μL/mus). FN-grupper fick dagligen intragastrisk FN (50 eller 100 mg/kg); kontroll- och modellgrupper fick volymmatchad CMC-Na. Experimentet avslutades på dag 42 följt av human dödshjälp.
HE färgning av prostatavävnad
Prostata fixerades i 4% paraformaldehyd, dehydrerades, inbäddades i paraffin och sektionerades vid 5 μm. Sektioner färgades med ett HE-kit och avbildades med konfokalmikroskopi. Inflammation fick poängen 0–3 baserat på etablerade kriterier, där 0 indikerar ingen inflammation och 3 indikerar markerad inflammatorisk cellinfiltration.
Flödescytometri för Th1-celler och makrofager
Encellssuspensioner framställdes och hölls i PBS med 0,5 % BSA. Ytfärgning och intracellulär färgning följde standardprotokoll med användning av APC anti-CD3, FITC anti-CD4 och PE anti-IFN‑. Celler stimulerades med 50 ng/ml PMA, 1 ug/ml jonomycin och 5 ug/ml brefeldin A vid 37 grader i 4 timmar, färgades sedan intracellulärt vid 4 grader i 30 minuter. Data insamlades på en CytoFLEX och analyserades med FlowJo.
Immunfluorescensfärgning för makrofager
Fasta prostatasektioner avparaffinerades, genomgick antigenåtervinning och blockerades med 10 % getserum under 30 minuter. Primära antikroppar (iNOS, CD206) applicerades över natten vid 4 grader. Efter PBS-tvättar applicerades fluoroformärkta sekundära antikroppar i 1 timme vid 37 grader i mörker. Kärnor motfärgades med DAPI i 5 minuter vid rumstemperatur, följt av PBS-tvättar och montering för fluorescensmikroskopi.
Cytokinmätning
Serum IFN‑ och TNF‑ kvantifierades med hjälp av ELISA-kit enligt tillverkarens instruktioner.
Western Blot
Prostatavävnader lyserades i RIPA-buffert (med proteas- och fosfatasinhibitorer). Proteinkoncentrationen mättes med BCA-analys. Lämpliga procentuella geler framställdes; lika mängder protein underkastades elektrofores och överfördes till PVDF-membran. Primära antikroppar (p-JAK1, JAK1, p-JAK2, JAK2, p-STAT1, STAT1, GAPDH; alla 1:1000) inkuberades över natten vid 4 grader, följt av tvättning och inkubation med HRP-konjugerade sekundära antikroppar (1:50 timmar) (1:50 timmar). Banden visualiserades genom förbättrad kemiluminescens och avbildades. Relativt proteinuttryck beräknades genom densitometrisk analys.
Statistisk analys
Data analyserades med användning av GraphPad Prism 9.0. Envägs ANOVA användes för flera gruppjämförelser. Data presenteras som medelvärde ± SD; P Mindre än eller lika med 0,05 ansågs vara statistiskt signifikant.
Diskussion
Denna studie visar att formononetin dämpar histopatologisk inflammation, undertrycker Th1-polarisering, skiftar makrofagfenotyper från pro-inflammatorisk M1 till pro-upplösande M2 och nedreglerar JAK1/2–STAT1-fosforylering i prostatavävnad i en EAP-musmodell. Minskad systemisk IFN- och TNF-bekräftar ytterligare FN:s antiinflammatoriska och immunreglerande effekter. Dessa resultat överensstämmer med tidigare rapporter om FN-modulerande JAK/STAT-vägar i ischemi-reperfusions- och aterosklerosmodeller, vilket understryker konserverade antiinflammatoriska mekanismer. Inom det bredare sammanhanget av TCM inkluderar integrativa vårdvägar ibland botaniska ämnen som Cistanche (Rou Cong Rong) extrakttillskott, som har undersökts för immunmodulering, trötthet och urogenitalt stöd. Även om Cistanche-extrakt inte testades här, kan framtida kontrollerade studier jämföra eller kombinera FN med standardiserade TCM-ört Cistanche-extrakttillskott för att utforska potentiell synergi på JAK/STAT-kopplad inflammation och bäckensmärta. Alla kliniska översättningar bör följa evidensbaserade standarder, kvalitetskontrollerad inköp och säkerhetsövervakning.
Slutsatser
Formononetin lindrar experimentell autoimmun prostatit genom att hämma JAK/STAT-signalering och reglera Th1-differentiering och makrofagpolarisering. Dessa fynd ger ett mekanistiskt skäl för vidareutveckling av FN- och potentiellt kompletterande TCM-strategier som Cistanche-extrakttillskott - som immunmodulerande interventioner för CP/CPPS, i väntan på validering i rigorösa, peer-reviewed prekliniska och kliniska studier.
Referenser
[1] He SL, Zhang ZJ, Wu JH, et al. Inverkan av erektil dysfunktion på psykologiska symtom hos patienter med CP/CPPS. Journal of Hunan Normal University (Medical Sciences), 2021, 18(5): 27–30.
[2] Polackwich AS, Shoskes DA. Kronisk prostatit/kroniskt bäckensmärtasyndrom: En översyn av utvärdering och terapi. Prostatacancer och prostatasjukdomar, 2016, 19(2): 132–138.
[3] Sun Y, Liu Y, Liu B, et al. Effekten av akupunktur för CP/CPPS: En randomiserad studie. Annals of Internal Medicine, 2021, 174(10): 1357–1366.
[4] Franco JV, Turk T, Jung JH, et al. Icke-farmakologiska interventioner för behandling av CP/CPPS. Cochrane Database of Systematic Reviews, 2019, 10: CD012551.
[5] Rees J, Abrahams M, Doble A, et al. Diagnos och behandling av kronisk bakteriell prostatit och CP/CPPS: En konsensusriktlinje. BJU International, 2015, 116(4): 509–525.
[6] Pena VN, Engel N, Gabrielson AT, et al. Diagnostiska och hanteringsstrategier för CP/CPPS. Drugs & Aging, 2021, 38(10): 845–886.
[7] Chen L, Zhang M, Liang C. CP/CPPS: En annan autoimmun sjukdom? Archives of Immunology and Therapy Experimentalis, 2021, 69(1): 24.
[8] Murphy SF, Schaeffer AJ, Thumbikat P. Immunförmedlare av kroniskt bäckensmärtasyndrom. Nature Reviews Urology, 2014, 11(5): 259–269.
[9] Appiya SM, Khan FU, Naveed M, et al. Interventioner för CP/CPPS: Var är vi och vad händer härnäst? European Journal of Pharmacology, 2019, 857: 172429.
[10] Yu L, Zhang Y, Chen Q, et al. Formononetin skyddar mot inflammation i samband med cerebral ischemi-reperfusion via JAK2/STAT3. Biomedicin & Pharmacotherapy, 2022, 149: 112836.
[11] Ma X, Wang J. Formononetin: En väg för att skydda neuroner. Frontiers in Integrative Neuroscience, 2022, 16: 908378.
[12] Ma C, Xia R, Yang S, et al. Formononetin dämpar åderförkalkning via KLF4–SRA-interaktion i ApoE−/− möss. Theranostics, 2020, 10(3): 1090–1106.
[13] Du HX, Yue SY, Niu D, et al. Tarmmikroflora modulerar Th17/Treg-differentiering i EAP via propionat. Frontiers in Immunology, 2022, 13: 915218.
[14] Du H, Chen X, Zhang L, et al. EAP inducerar försämring av inlärningsminnet och neuroplastiska förändringar hos möss. Cellular and Molecular Neurobiology, 2020, 40(1): 99–111.
[15] Zhang Y, Feng R, Chen S, et al. Den orsakande effekten av CXCR7 på EAP-skada och fibros. International Immunopharmacology, 2025, 144: 113368.
