Kvalitetsmarkörer av Cistanches Herba Baserat på Antioxidant Spectrum-Effect Relation Ⅱ

3. Resultat

3.1 Upprättande av fingeravtryckskarta

Bered 10 satser av testlösningar enligt metoden under 2.1, använd de kromatografiska förhållandena under 2.2 för detektion, erhåll fingeravtrycken från varje sats av prover (Figur 1) och välj topp nr 11 (C11) som referenstopp för fingeravtryck. Importera vätskefasdata.AIA-fil med fingeravtrycket från testprodukten Cistanche deserticola till programvaran "Traditional Chinese Medicine Chromatographic Fingerprint Similarity Evaluation System" (2012 års version). Sjutton vanliga kromatografiska toppar kalibrerades i det vanliga läget, och jämfört med det blandade referensstandardspektrumet (Figur 2) identifierades totalt 10 vanliga toppar.

3.2 Forskning om antioxidanteffekten av Cistanche deserticola

3.2.1 Effekt av Cistanche deserticola på livsdugligheten hos HEK 293-celler.

Jämfört med celler i den normala gruppen producerade Cistanche deserticola inte cytotoxicitet vid en masskoncentration av 50~100 ug·mL-1, och cellöverlevnaden var högre än 90%. När koncentrationen av Cistanche deserticola ökade, minskade cellviabiliteten. Därför valdes Cistanche deserticola med en masskoncentration av 100 µg·mL-1 för efterföljande administrering.

3.2.2 Effekt av Cistanche deserticola på ROS inducerad av H2O2 i HEK 293-celler

ROS IC50 för Cistanche deserticola vid olika koncentrationer beräknades med hjälp av programvaran GraphPad Prism 8. Resultaten visas i figur 3 och tabell 2.

För mer kunskap om cistanche, låt oss ta en titt på hur man särskiljer cistanche-kvalitet. Cistanchekvalitet beror på innehållet av de aktiva ingredienserna Echinacoside och Acteosid, det högre innehållet betyder starkare funktion, idag tar vi 30% Echinacoside och 12% Acteoside Cistanche Supplements som exempel för att ge oss en förklaring, kallar vi generellt cistanche i denna artikel.

HUR LÅNGE TAR DET FÖR CISTANCHE ATT ARBETA?

3.2.3 Effekt av Cistanche deserticola på H2O2-inducerad SOD av HEK 293-celler

Som visas i figur 4, jämfört med den normala gruppen, reducerades SOD-aktiviteten i cellerna i modellgruppen signifikant och SOD-aktiviteten hos administreringsgruppen Cistanche deserticola ökade i varierande grad (P<0.001), indicating that Cistanche deserticola can increase the intracellular SOD enzyme activity.

3.2.4 Effekt av Cistanche deserticola på H2O2-inducerad CAT i HEK 293-celler

Som visas i figur 5 kan H2O2 orsaka en signifikant minskning av intracellulär CAT-enzymaktivitet (P<0.001), with the activity only reaching 30% of the normal group, indicating that H2O2 has seriously damaged the antioxidant system of cells. After Cistanche deserticola administration, intracellular CAT enzyme activity decreased significantly (P<0.001). The enzyme activity was significantly increased (P<0.001).

3.3 Cistanche deserticola Q-markör screening baserad på spektral effektivitet korrelationsanalys

3.3.1 PCA använder egenvärdet > 1 och den kumulativa variansbidragsgraden > 85 % som standard för att extrahera fyra huvudkomponenter. Scree-diagrammet (Figur 6) för de tre första huvudkomponenterna har en brantare kurva, vilket innebär att dess bidragsgrad är högre. stor. Den kumulativa variansavgiften för de fyra huvudkomponenterna är 87,640 %, vilket indikerar att dessa fyra huvudkomponenter kan representera 87,640 % av informationen för de ursprungliga variablerna. De initiala egenvärdena och variansbidragshastigheterna visas i tabell 3. Den roterade komponentmatrisen erhålls med Kaisers normaliseringsmetod för maximal varians, se tabell 4. Enligt belastningsvärdet för varje kromatografisk topp på de fyra huvudkomponenterna återspeglas informationen av varje huvudkomponenten kan extraheras. Det vill säga, ju större belastningsvärdet är, desto större påverkan har den kromatografiska toppen på huvudkomponenten. I huvudkomponent 1 har topparna 1 till 3, 5, 7, 11 och 13 till 15 de största absoluta belastningarna; i huvudkomponent 2 har topparna 6 och 16 de största absoluta belastningarna; topp 17 förklarar informationen för huvudkomponent 3, topp 8 har störst inverkan på huvudkomponent 4, så de 13 kemiska komponenterna i topparna 1~3, 5~8, 11, 13~17 valdes ut som huvudmaterialbasen för Cistanche deserticola för efterföljande spektral effektivitetsanalys.

3.3.2 PCC

ROS IC50 är en negativ indikator på läkemedelseffekt, så en negativ korrelationskoefficient betyder att den beroende variabeln är positivt korrelerad med läkemedelseffektivitet. Korrelationskoefficienterna för de 13 kromatografiska topparna av Cistanche deserticola är alla negativa, vilket indikerar att de alla är positivt relaterade till avlägsnandet av ROS IC50, bland vilka topparna 14 och 3, 7, 11, 1 och 13 var extremt starkt korrelerade med ROSIC50 (P<0.01), and peaks 2, 5, and 15 were strongly correlated (P<0.05); the 13 chromatographic peaks were all positively correlated with SOD, among which peaks 13 and 3 , 15, 11, 2 were extremely strongly correlated with SOD (P<0.01), and peaks 1, 14, 7, 5, and 6 were strongly correlated (P<0.05); 11 peaks were positively correlated with CAT, and peak 5 was positively correlated with CAT. There was a strong correlation (P<0.05). The results are shown in Table 5.

Genom att kombinera PCC-resultaten för ROS IC50, SOD och CAT valdes topparna 1~3, 5, 7, 11 och 13~15 ut som den aktiva ingrediensgruppen för Cistanche deserticola för att utöva antioxidanteffekter.

3.3.3 PLS

In PLS, the ROS IC50 regression coefficients of 13 chromatographic peaks are all negative and positively correlated with the pharmacodynamic activity. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 14, 3, 11, 1, 7, 13, 2, 5, 15 (Figure 7A); in the study of SOD enzyme activity, the coefficients of all peaks are positive, that is, all peaks are positively correlated with drug efficacy. Among them, the chromatographic peaks with VIP>1 are: 13, 3, 15, 11, 2, 1 , 14, 7 (Figure 7B); in the study of CAT enzyme activity, except for peaks 6 and 16, the other chromatographic peaks are positively correlated with drug efficacy, among which the chromatographic peaks with VIP>1 är: 5, 13, 14, 11, 7 (Fig. 7C). Föreningarna representerade av topparna 1~3, 5, 7, 11 och 13~15 sållades bort som potentiella antioxidantaktiva komponenter i PLS-modellen.

3.4 Cistanche deserticola Q-markör aktivitetsverifiering

3.4.1 Effekt av aktiva ingredienser på HEK 293 cytotoxicitet

Baserat på resultaten av spektrum-effektkorrelationsanalys valdes sex ingredienser inklusive genipinsyra, 8-epistrychnoic acid, echinaceosid, verbascoside, antocynosid A och isorbascosid ut för aktivitetsverifiering. De sex aktiva ingredienserna i Cistanche deserticola visade ingen cytotoxicitet vid koncentrationer från 0.781 till 3.125 µmol·mL–1, och cellöverlevnaden var alla högre än 90%. När koncentrationen ökar hämmas cellviabiliteten. Därför valdes de efterföljande doseringskoncentrationerna till 0,781, 1,563 och 3,125 µmol·mL–1.

3.4.2 Aktiva ingredienspar

Antioxidanteffekten av H2O2-inducerade HEK 293-celler verifierades genom att detektera den renande effekten av varje aktiv ingrediens på intracellulär ROS och förmågan att reglera aktiviteten av SOD- och CAT-enzymer för att verifiera om den har en antioxidanteffekt. I ROS-rensande experimentet var skillnaderna mellan medel- och högdos genipinsyragrupper och modellgruppen statistiskt signifikanta (P<0.01, P<0.001, Figure 8A). Compared with the model group, there were statistically significant differences between the low, medium and high dose groups of inulin, anthoside A, verbascoside and isorbascoside (P<0.001, Figure 8B, Figure 8C), indicating that the six monomers All have a certain degree of ROS scavenging effect; in the SOD and CAT enzyme activity measurement test, the enzyme activities of the low, medium and high dose groups of active ingredients were all higher than the model group, indicating that all 6 monomers can increase SOD and CAT Enzyme activity.