Forskning av Cistanche-polysackarider som rensar fria radikaler
Mar 06, 2022
För mer information:ali.ma@wecistanche.com
Wang Guowei Zhao Fang
(School of Chemistry and Chemical Engineering, Shihezi University, Beisi Road, Shihezi City, Xinjiang 832000)
Nyckelord: Cistanche; Cistanche polysackarid,polysackaridfrån cistanche; fria radikaler
Kroppen producerar kontinuerligt olika reaktiva syreradikaler (ROS) i processen för oxidativ metabolism av livsaktiviteter, som är mellanprodukter som produceras av redoxreaktionen av aerob metabolism i människokroppen. Studier har funnit att överskottetfria radikalerkommer att angripa livets makromolekylära ämnen och olika organeller, orsaka olika skador på kroppen på molekylär, cellulär och vävnadsorgannivå, påskynda kroppens åldrandeprocess och framkalla blodproppar, diabetes och åderförkalkning. , Tumörer och andra sjukdomar [1]. Eftersom kemiskt syntetiserade antioxidanter är giftiga för människokroppen, har sökandet efter naturliga antioxidanter med hög effektivitet och låg toxicitet som kan rensa fria syreradikaler blivit en hot spot inom medicin, mat och kemiteknik under de senaste åren.
Cistanche [Cistanche deserticola (YC Ma.)]parasiterar mest på rötterna av Tamarisk, Nitraria och Haloxylon ammodendron. Det är en sällsynt kinesisk medicin i mitt land och är känd som"öken ginseng"[2]. Cistanche cistanche polysackarid är en av de huvudsakliga biologiskt funktionella aktiva komponenterna icistanche, men det har inte rapporterats omcistanche polysackarid har effekten att ta bort fria radikaler. I detta dokument användes metoden för spektralanalys för att bestämmaden renande effekten av Cistanche-polysackarid på superoxidanjonfria radikaler, hydroxylfria radikaler, D PPH-radikaler och singlettsyrefria radikaler, så somför att utvärdera dess antioxidantaktivitet. Utnyttja denna naturresurs fullt ut för att tillhandahålla en vetenskaplig grund.
Klicka till Cistanche stam för fri radikal
Denna forskning studerarCistanche polysackaridin vitroantioxidantaktivitet. Med askorbinsyra som kontroll producerar den Fenton-liknande reaktionen fria hydroxylradikaler, autooxidationen av dopamin producerar superoxidanjonfria radikaler, reaktionen av natriumhypoklorit och väteperoxid för att producera singlettsyre, difenylbittra hydrazinradikaler som experimentmodell, med användning av ultraviolett 2Visible spektrofotometri och kemiluminescensanalysmetod, för första gången för att bestämma den renande effekten avCistanche polysackaride på superoxidanjonfria radikaler, fria hydroxylradikaler, D PPH ·fria radikaler(difenylhydrazinoradikaler) och singlettsyre.Resultaten visade att polysackariderna av Cistanche hade uppenbara eliminerande effekter på de ovan nämnda fria radikalerna, och de eliminerande effekterna var positivt korrelerade med koncentrationen av polysackarider.
Apparatur och reagens: UV 22401 ultraviolett-synlig spektrofotometer (Shimadzu Corporation, Japan); Lum vid LB9507 ultrakänslig rörluminometer (Berthold Technologies, Tyskland); R E252CS rotationsindunstare (Shanghai Yarong Biochemical Co., Ltd.) Instrument Factory); HW 2SY elektronisk konstant temperatur vattenbad potten (Jintan Xinhang Instrument Factory); pH S23C surhetsmätare (Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd.); D ZF26020 vakuumtorkugn (Shanghai Yiheng Technology Co., Ltd.).
Cistanche-extraktär köpt från Kuitun Medicinal Materials Corporation. Luminol (Luminol, Sigma, USA), Dopamine (China National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products), FeSO 4, ED TA, Vitamin C, H 2O 2, NaClO, Na2CO 3, NaHCO 3, etc. Det är en inhemskt analytiskt reagens. Det experimentella vattnet är jonbytat destillerat vatten.
Deeextraktionsmetod förCistanche polysackarider: Ta 30g avcistanche pulveroch placera den i en 500mL Erlenmeyer-kolv och blötlägg i petroleumeter (60-90 grad ), eter och en volymfraktion av 80 procent etanol varm lösning (30 grader) i 6 timmar, och återstoden kommer att avdunsta till torrhet. . Filteråterstoden blötlades i vatten i ett fast-vätskeförhållande av 1:10 under 24 timmar och upphettades vid 30 grader för att extrahera 100 min. Efter att extraktionen var fullbordad erhölls supernatanten genom centrifugering. Supernatanten koncentrerades under reducerat tryck och fälldes sedan ut genom tillsats av 3 gånger volymen 95 procent etanol, stående i 24 timmar vid 4 grader, uppsamlande av fällningen efter centrifugering och vakuumtorkning för att erhålla den råa Cistanche-cistanche-polysackariden. Väg upp 1,00 g oren polysackarid, lös den i vatten och späd till en 50 ml mätkolv och ställ åt sidan för testning.
Testet av cistanche polysackarid på superoxid fri radikal (O) rensningsförmåga: användningen av dopamin auto-oxidation för att producera superoxid fri radikal testacistanche-polysackarid på superoxid-fria radikalerförmåga [3]. Tillsätt 0.1 mm olöL pH=10.12 i det torra och graderade provröret i följd, 3.0mL karbonatbuffert, 3.0mL vatten, och 0.5mL polysackaridprovlösning av olika koncentrationer och placera den i ett 30 graders vattenbad för förvärmning i 5 minuter. Tillsätt 1.0mL 2.0mm olöL dopamin förvärmt i ett vattenbad vid 30 grader, blanda omedelbart, håll reaktionen vid 30 grader i 5 minuter och omedelbart stoppa reaktionen med 2 droppar 10 molöL HCl. Använd buffert som referens, mät absorbansen vid 221 nm (prov A), blankgruppen ersätter provet med 0,5 mL vatten (A blank), och kontrollgruppen ersätter provet med 0,5 mL askorbinsyra. Varje prov testas parallellt 3 gånger och tar sitt medelvärde. O superoxidradikal-fångningshastighet ( procent )=(Ett blank-A-prov) öA blank × 100 procent .
Experiment med rensningsförmågan hos Cistanche-polysackarid på ·OH fri radikal
EDTA 2Fe (Ê) 2 metylenblått 2H 2O 2-systemet användes för att testa förmågan hosCistanche polysackaridför att avlägsna fria hydroxylradikaler. Principen är att den Feton-liknande reaktionen mellan ED TA 2Fe(Ê) och väteperoxid producerar ·OH-radikaler, vilket minskar den karakteristiska absorptionstoppen för metylenblåttlösning vid 660nm. Tillsätt 5 mm oLöL FeSO 4 lösning 1.{{20}}mL, 5 mm oLöL EDTA-lösning 1,2mL, 0 i en serie av 10mL provrör med proppar.{ {29}}3mol N aH 2 PO 4 2 N a2H PO 4 (pH=7.4) buffertlösning 2 ,0 ml, 20 mm olöL väteperoxidlösning 1,3 ml, tillsätt efter skakning 0,2 mm olöL metylen blå lösning 0,7mL, och tillsätt sedan olika koncentrationer av testlösningen, vitamin C 1,0mL, och späd med vatten till 10. 00mL, efter blandning, inkubera vid 37 grader i 30 minuter, mät absorbansen för varje lösning vid 660 nm, och ersätt provlösningen med vatten i blankgruppen. Varje prov testades 3 gånger parallellt och medelvärdet togs. Provets OH-radikalupptagningshastighet ( procent )=[(A 2-A 1) ö(A 0-A 1) × 100 procent . I formeln: A 0 - absorbansvärde för det oskadade röret; Ett 1 - absorbansvärde för det skadade röret; Ett absorbansvärde för 2 - efter tillsats av provet.
Experimentera på rensande förmågan hos Cistanche-polysackarid på D PPH Free Radical
Ta {{0}}.1 mL Cistanche deserticola polysackaridlösning och tillsätt den till 5.0 mL D PPH · lösning, blanda snabbt och efter att ha stått i 10 minuter i rumstemperatur, absorbansförändring vid 517 nm våglängd mäts [4]. Varje prov testades 3 gånger parallellt och medelvärdet togs. Provets clearance-hastighet av D PPH · ( procent )=1- [(AB) öA 0] × 100 procent .
I formeln: A 0 - absorbansvärde för D PPH utan provtillsats (1,9 ml D PPH plus 0,1 ml 50 procent etanol); A - absorbansvärde efter reaktionen mellan provet och D PPH; B - blank Absorbansvärdet för provet (prov 0,1mL plus 1,9mL 50 procent etanol).
Cistanche-polysackarid-rensande singletsyre 1O 2-test
Singletsyre (1O 2) produceras genom den kemiska reaktionen mellan NaClO och H 2O 2 vid 37 grader [5]. Lösningen som används för bestämning av 1O 2 är 100 L 2. 8 mm olöL NaClO-lösning, 400 L 5 mm olöL NaOH-lösning, 300 L 10 mm olöL H 2O 2-lösningar, 50 L 1 mm olöL Luminol-lösning. Under reaktionen tillsätts reaktionslösningen till provlösningen och kemiluminescensanalysatorn registrerar automatiskt reaktionsprocessen samtidigt. Ta NaClO 2H 2O 2 2N NaOH 2 Luminol som en blank kontroll. Starta reaktionen och tillsätt reaktionslösningen från kemiluminescensinstrumentets behållare till provröret enligt den mängd som ställts in av programmet. Därefter registrerades reaktionsblandningens kemiluminescensintensitet på registreringspapperet var 5:e sekund, och varje prov mättes parallellt 3 gånger, och medelvärdet togs. Clearance-hastigheten beräknas enligt följande formel: clearance-hastighet ( procent )=(kontrollljusintensitet-provljusintensitet) ö kontrollljusintensitet × 100 procent 3.
Den renande effekten av cistanche-polysackarider på fria superoxidradikaler
Den kemiska naturen hos superoxidfria radikaler är aktiv, vilket kan orsaka att fettsyror på biofilmen producerar peroxider, som i sin tur förstör celler [6]. I detta dokument användes dopaminmetoden för att bestämma rensförmågan hos superoxidfria radikaler. Se figur 1 förden rensande förmågan hos Cistanche på fria superoxidradikaler.Resultaten visade att:Cistanche-polysackarider kan hämma de producerade superoxidfria radikalernagenom autooxidation av dopamin, och inom det uppmätta koncentrationsintervallet (0-8m gömL), ökar den med ökningen av koncentrationen, men rensförmågan är lägre än askorbinsyrans.
Rengörande effekt av cistanche polysackarid OH superoxid fri radikal
OH-superoxidradikal är en av de mest aktiva syrefria radikalerna i aktivt syre. Den kan reagera med nästan vilken biologisk makromolekyl som helst i levande celler, vilket kan leda till lipidperoxidation av kroppsvävnader, proteinpolymerisation och depolymerisering, nukleinsyrafragmentering etc. Den biokemiska processen utlöser vävnadscellpatologi, vilket leder till uppkomsten av olika sjukdomar och accelererar kroppens åldrande [7]. Figur 2 visar rensförmågan hos cistanche-polysackarider på fria OH-superoxidradikaler. Experimentresultaten visar detpolysackariden av Cistanche har en god renande effekt på ·OHfria radikaler,och den ökar med ökningen av koncentrationen.
Rengöringsförmågan hos Cistanche cistanche polysackarid på D PPH fri radikal
D PPH-radikal (difenyl-bitter hydrazinoradikal) är en stabil fri radikal, som är lila i organiska lösningsmedel och har en stark absorption nära 517nm. Efter tillsats av antioxidanter kommer en del av fria radikaler att elimineras och absorptionen försvagas, vilket kan användas för att utvärdera ämnets antioxidantaktivitet [8]. Rengöringsförmågan hos Cistanche-polysackarider på fria D PPH-radikaler visas i figur 3. De experimentella resultaten visar att rensningsförmågan hos Cistanche deserticola-polysackarid på D PPH-fria radikaler är positivt korrelerad med dess koncentration, och rensförmågan är större än hos askorbinsyra.
Rengöringsförmågan hos cistanchepolysackarider på 1O 2 fria radikaler
Singletsyre är exciterat molekylärt syre med aktiva kemiska egenskaper. Eftersom oparade elektroner har en tendens att para sig, visar fria radikaler mer aktiva kemiska egenskaper [9]. Figur 4 visar upptagningsförmågan hos Cistanche deserticola-polysackarid på 102-fria radikaler. De experimentella resultaten visar att förmågan hosCistanche polysackarideratt avlägsna singlettsyre är lägre än askorbinsyra i intervallet {{0}}.0m gömL. När koncentrationen är större än 4,0 m gömL är avlägsningsförmågan hos Cistanche cistanche-polysackarider större än för askorbinsyra.
Sammanfattningsvis: Genom olika reaktiva syrefria radikalsystem studerades in vitro antioxidantaktiviteten hos Cistanche-polysackarid i detalj. Det kan ses från de experimentella resultaten att inom testkoncentrationsintervallet har Cistanche-polysackaridextrakt renande effekter på fria superoxidradikaler O, OH-superoxidfria radikaler, D PPH fria radikaler och 1 O 2 fria radikaler. Effekterna är inte desamma. Resultaten visade att Cistanche-polysackarid är en effektiv exogen naturlig antioxidant, som är värd ytterligare forskning, utveckling och omfattande användning.
referenser
[1] Ling Guanting. Antioxidant mat och hälsa [M]. Beijing: Chemical Industry Press, 2004. 1-58.
[2] Gao Ming, Tian Ziyu, Cai Hongmei, etc. Alkalisk extraktion och kemisk analys av Cistanche deserticola polysackarider[J]. Agriculture Food Science and Technology, 2008, 2 (3): 32-34.
[3] Shi Shuangqun, Song Xinfang. Autooxidation av dopamin [J]. Journal of Hebei Normal University, 1997, 21(4): 387-389.
[4] Zhang Zhiqing, Tian Yingjuan, Zhang Jing. Studie om antioxidantaktivitet hos Radix-polysackarider[J]. Chinese Materia Medica, 2008, 31(2): 268-271.
[5] Li Haiping, Zhang Shuhai, Zhang Chunsheng. Studie om antioxidantaktivitet av polysackarider från Pleurotus ostreatus [J]. Food Research and Development, 2008, 29(4): 56-60.
[6] Mo Jian. Introduktion till biologi av medicinska fria radikaler [M]. Peking: People's Medical Publishing House, 1989. 21-25.
[7] F Frederick V L. Fria radikaler [J ]. Clinical Chemistry, 1993, 65 (12): 374—377.
[8] M at suda M, N agaham a Y, Sato T et a l. DM Y är en specifik DM-domängen som krävs för manlig utveckling i Medaka Fish [J ]. Nature, 2002, 30: 559—563.
[9] Kanofsky J R. Singlet Oxygen Production av L actoperoxidase[J]. Journal of Biological Chemistry, 1983, 258 (10): 5991—5993.
