SLC37A2, en fosforrelaterad molekyl ökar i släta muskelceller i den förkalkade aortan Ⅱ

Resultat

Sök efter kandidatmolekyler ifosfatinducerad förkalkadAoSMC. För att söka efter molekyler vars uttryck ökar i förkalkat AoSMC, utfördes DNA-mikroarrayanalys av cirka 26,000 gener med användning av förkalkat AoSMC och icke-kalcifierat AoSMC-mRNA. Figur 1 visar HeatMap för olika gener uttryckta mellan AoSMC som inte odlats med 2,6 mM och de som odlats med 2,6 mM P under 12 dagar. Totalt 3 066 gener ökade mer än två gånger på odlad kontra icke-odlad AoSMC. Gener med ökat uttryck var molekyler relaterade till osteoblastbildning såsom osteopontin, periostin osteoblast-specifik faktor (POSTN), Wnt3, interleukin-6 (IL-6), ochfibroblasttillväxtfaktor23 (FGF23) såväl som flera molekyler i SLC-superfamiljen (tabell 1). Bland dessa molekyler fokuserade vi på SLC37A2 för vilken mRNA ökade cirka 3,1 gånger på AoSMC odlad med 2,6 mM P under 12 dagar jämfört med AoSMCnot odlad med 2,6 mM P. SLC37A2 har rapporterats vara relaterad till P-reglering, men dess detaljerade funktion är okänd effekt av inflammation på SLC37A2 uttryck.Vaskulär förkalkninghar rapporterats främjas av inflammation så vi undersökte om SLC37A2 mRNA påverkas av inflammatorisk respons. 24 timmar efter LPS-behandling ökade IL-6 signifikant jämfört med AoSMC som inte behandlats med LPS (Fig. 2A). Dessa resultat sågs också 72 timmar efter LPS-behandling. Det fanns inga signifikanta skillnader mellan grupper i SLC37A2mRNA-uttryck (Fig. 2B).

KLICKA HÄR FÖR ATT FÅ NATURLIGT EKOLOGISKT CISTANCHEEXTRAKT MED 25% ECHINACOSID OCH 9% ACTEOSIDE FÖR NJURFUNKTION

Supportive Service Of Wecistanche - Den största cistanche-exportören i Kina:

E-post:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Tel:+86 15292862950

Handla för fler specifikationer:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Uttryck av SLC37A2 i fosfatinducerad förkalkad AoSMC. För att bestämma om SLC37A2 är involverad i förkalkning undersökte vi uttrycket av SLC37A2 mRNA på icke-förkalkat och förkalkat AoSMC (Fig. 3). Förkalkning observerades i AoSMC odlad med 2,6 mM P under 6 dagar, och mer avancerad förkalkning observerades i AoSMC odlad med 2,6 mM P under 12 dagar (Fig. 3A). Runx2-mRNA ökade signifikant på förkalkat AoSMC jämfört med icke-förkalkat AoSMC (Fig. 3B). SLC37A2-mRNA började signifikant öka på dag 3 i förkalkat AoSMC, och på dag 9 ökade förkalkat AoSMC signifikant ungefär två gånger jämfört med icke-förkalkat AoSMC ( 3C). Uttryck av SLC37A2-protein ökade signifikant ungefär två gånger på dag 6 i förkalkat AoSMC jämfört med icke-förkalkat AoSMC (Fig. 3D).

Uttryck av SLC37A2 i CKD-modellråttor.

För att avslöja om SLC37A2 är involverad i vaskulär förkalkning in vivo, undersökte vi SLC37A2 mRNA-uttryck på kärl hos adenin-inducerade CKD-råttor. Adenin-inducerade CKD-råttor skapades enligt protokollet som visas i Fig. 4A. Tabell 2 visar kroppsvikt och biokemiska data på offerdagen. Kroppsvikten påadenin-inducerad CKDråttor var signifikant lägre jämfört med icke-CKD-råttor. Jämfört med icke-CKD-gruppen hade CKD-grupper högre plasma P- och Cr-nivåer och lägre plasmacalevels och 24-timmars urinutsöndring av P, Ca och Cr. Vidare var dessa resultat mer framträdande i CKD-HP-gruppen, som sett i tidigare studier.37,39) Således minskade njurfunktionen i CKD-gruppen, särskilt i CKD-HP-gruppen. Vi undersökte mRNA-uttryck i aortakärlen hos CKD-råttor (Fig. 4). Även om det inte fanns några signifikanta skillnader i uttrycket av Runx2-mRNA, en transkriptionsfaktor som rör sig tidigt i mekanismen för vaskulär förkalkning, mellan grupperna (Fig. 4B) ökade uttrycket av osteopontin-mRNA signifikant i en CKD-HP-grupp jämfört med icke- CKD-gruppen ochCKD-LP-grupp(Fig. 4C). SLC37A2 mRNA-uttryck ökade också signifikant i CK D-HP-gruppen jämfört med icke-CKD-gruppen och CKD-LP-gruppen (Fig. 4D). Eftersom det fanns stora individuella skillnader i dessa råttor, undersökte vi korrelationen mellan osteopontin och SLC37A2 mRNA och fann en signifikant korrelation mellan dessa molekyler (Fig. 4E). Histologisk undersökning av thoracoabdominal aorta avslöjade medial förkalkning endast i aortan i CKD-HP-gruppen (Fig. 5A). För att undersöka uttrycksstället för SLC37A2 på aortan utförde vi immunfärgning av aortan hos CKD-HPrats. SLC37A2 uttrycktes starkt vid området därvaskulär förkalkninginträffade (fig. 5B).

Fig. 1. HeatMap av olika uttryckta gener mellan AoSMC-icke-odlade med 2,6 mM P och AoSMC odlade med 2,6 mM P. Rött representerar gener med hög signalnivå och grönt representerar gener med låg signalnivå. AOSMC glatta muskelceller i aorta. Se figuren i onlineversionen.

Diskussion

Vi undersökte kandidat P-relaterade molekyler involverade i vaskulär förkalkning. Våra resultat visade att SLC37A2 är en av de molekyler som ökar medvaskulär förkalkningin vitro och in vivo.

SLC37-familjen tillhör SLC-superfamiljen och inkluderar proteiner: SLC37A 1-440) SLC37-familjen innehåller transmembranproteiner i det endoplasmatiska retikulummembranet och har en sekvens som är homolog med den bakteriella organofosfatfosfat-antiportern.(41) SLC37A4 är mer känd somglukos6-fosfattransportör.(2-44 Det finns dock få rapporter om SLC37A2, och detaljer om dess funktion är inte helt klarlagda. SLC37A2, även känd som SPX2, uttrycks rikligt i murina makrofager, mjälte, tymus och vit fettvävnad (WAT) ) av genetiskt feta musmodeller och osteoklastliknande celler härledda från Raw264.7-celler.(45.6) SLC37A2-proteinet transporterar både glukos-6-fosfat/fosfat- och fosfat/fosfatutbyten.(4) Nyligen har rapporter visat ett samband SLC37A2 med djursjukdom. (47-49) En SLC37A2-defekt orsakarkraniomandibulär osteopati(CMO), en självbegränsande proliferativ bensjukdom, hos terrierraser. (47) Hos mjölkboskap är en SLC37A2 homozygot mutation ansvarig för embryonal död. (8.9) Dessutom. SLC37A2 har ansetts vara ett mål för vitamin D-målgener. (så) Potentialen för målgenen för fosfor-Ser294-progesteronreceptorn i utvecklingen av bröstcancer har också övervägts(1)Det har rapporterats att inflammation både kan orsaka och förvärra vaskulär förkalkning. (2s26) Dessutom. SLC37A2 uttrycks rikligt i makrofager och WAT som påverkas av makrofaginfiltration. (s) Därför. vi ansåg att SLC37A2 kan vara en molekyl som uttrycks under inflammation. Våra fynd visade dock ingen ökning av SLC37A2-uttryck i AoSMC utsatt för ett inflammatoriskt svar, denna molekyl verkar inte vara direkt påverkad av inflammatorisk stimulering. SLC37A2 kan vara involverad i vaskulär förkalkning genom en annan mekanism än inflammation.

Det har rapporterats att SLC37A2 fungerar som en P-länkadanti-porter. (41) Dessutom rapporterades SLC37A2 vara en målgen för vitamin D, och SLC37A2-genen innehåller en viktig vitamin Dreceptor-bindningsplats(ss2) Systematiskt korrelerade förändringar i uttrycket av SLC37A2-gener och cirkulerande former av vitamin D. har setts i humana perifera mononukleära blodceller. (50)D-vitaminreceptorer binder till 1a, 25-dihydroxivitamin D, som är en metabolit av vitamin D, och reglerar genuttryck. lo, 25dihydroxivitamin D, fungerar i absorptionen av Ca och P i tarmen, Ca-mobilisering i benet och reabsorption av Cain i njurarna. (3) Det finns en rapport om att hos adenin-inducerade CKD-modellråttor, serum la, 25-dihydroxi-vitamin D, var signifikant högre hos råttor med hög-p-dietintag, med avancerad vaskulär förkalkning, jämfört med råttor med lågt intag. -p diet intag.39) SLC37A2 kan vara relaterat till P-reglering via vitamin D. Ytterligare studier behövs för att klargöra att vitamin D påverkar SLC37A2-uttryck in vitro och vivo.

Det har visat sig att mekanismen för vaskulär förkalkning liknar den för benbildning. Bristen på SLC37A2 orsakad av CMO är kliniskt jämförbar med human infantil kortikal hyperostos, även känd som Caffeys sjukdom.7 Dessutom finns det rapporter om att SLC37A2 uttrycks i benmärg och osteoklaster.o Hytone et al.(7 antog att en dysfunktion av SLC37A2 skulle orsaka en obalans i funktionen av osteoblastisk och osteoklastisk benbildning, och som ett resultat leda till hyperostos.

Runx2 är en viktig transkriptionsfaktor för vaskulär förkalkning. Det har också rapporterats att Runx2 är en osteoblastdifferentierings-transkriptionsfaktor som uttrycks i utvecklande bröstepitelceller. (s435) Runx2 verkar vara nödvändigt för regleringen av fosfor-Ser294 progesteronmålgener, som är associerade med bröstcancerprogression. SLC37A2 anses vara en kandidat-fosfor-Ser294-progesteronreceptormålgen. (s1) Därför anses det att Runx2 kan reglera SLC37A2. I den föreliggande studien var uttrycket av SLC37A2-mRNA i aorta hos CkD-råttor korrelerat med osteopontin-mRNA, som riktar sig mot genen av Runx2.