Studie om östrogena effekter av echinacosid och acteosid från Herba Cistanche
Mar 08, 2022
Kontakt: Audrey Hu Whatsapp / hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com
WANG Lin-lin, LI Wei, SONG Xin-bo*, YU He-Shui, MIAO Lin, ZHANG Li-Juan, TAO Rui
Tianjin University of Traditional Chinese Medicine, Tianjin 300193, Kina
Abstrakt: I denna studie, de östrogena effekterna avechinacosidochakteosidav Herba Cistanche undersöktes. En luciferasreporter plasmidlag användes för att upptäcka de östrogena effekterna avechinacosidochakteosid. Östrogenreceptorkonkurrensbindningsexperimenten användes för att upptäcka deras konkurrenseffekt med östrogen. Resultaten visade attechinacosidochakteosidkan öka ERE:s aktivitet. Närechinacosidellerakteosidtillsätts i östrogenhandlingar, EREdriven reporter genaktivitet kan stimuleras som en östrogenagonist. Därför drogs slutsatsen attechinacosidochakteosidhade en fytoöstrogenaktivitet genom att stimulera ERE-ökning av reportergenaktiviteten.Echinacosidochakteosidvar potentiella SERM.
Nyckelord: echinacosid; akteosid; fytoöstrogener ;
Herba Cistanche Cistanche[1] är en växt av släktet Cistanche. Det är en torr köttig stam med skaliga löv. Den har funktionerna att närma njuryang, närande essens och blod och fuktar tarmen. Det används för brist på njuryang, brist på essens och blod, impotens och infertilitet, ömhet i midja och knän, svaghet i muskler och ben, torra tarmar och förstoppning ̈. 2J. För närvarande är de viktigaste kemiska komponenterna isolerade och identifierade från Cistanche fenylglykosider, iridoider, lignaner, flavonoider, polysackarider, oligosackarider, galaktitol, flyktiga komponenter, alkaloider etc. Bland dem är fenetylalkolglykosider de viktigaste aktiva ingredienserna i Cistanche cistanche och är också de viktigaste detektionsindikatorerna för kvalitetskontroll av Cistanche och representeras avechinacosid och verbascoside. Moderna farmakologiska studier har visat att Cistanche har funktionerna immunreglering, anti-oxidation, anti-aging, anti-trötthet, neuroprotektion och leverskydd. Vissa farmakologiska studier visar också att Cistanche kan främja benregenerering-l"J, hämma bildandet av osteoporos och fytoöstrogener hos postmenopausala kvinnor"]. I detta experiment valde vi echinacosid och verbascoside, som är de viktigaste kvalitetskontrollindikatorerna i Cistanche, och testade östrogeneffekter av echinacosidoch verbascoside av luciferase reporter plasmid metod och östrogenreceptor konkurrenskraftig bindning experiment. Utforska mekanismen för echinacosid och verbascoside östrogen
1 Material och metoder
1.1 Material Hela celler (humana livmoderhalscancerceller), köpt från Shanghai Institute of Cell Biology;echinacosidseparerades och renades från Cistanche deserticola av vårt laboratorium och testades av HPLC-ELSD. Denechinacosidreferensämne (China National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, satsnummer: 111670) användes som kontroll och den uppmätta renheten var 95,1%. Denakteosidseparerades och renades från Cistancheöknen av vårt laboratorium och erhölls av HPLC. ELSD-test, med Verbascum glykosidreferenssubstans (China Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, satsnummer: 111530) som kontroll, var den uppmätta renheten 96,4%; plasmider ERa, ER[3, ERE-luc, Renila (extraherad av vårt laboratorium) ; Östradiol (E), Sigma Company; Fetal Bovine Serum (FBS), PAA Company; Aktivt kolbehandlat fetalt bovint serum (CS-FBS), PAA Company; Fenol rödfri DMEM, Sigma Company; Dimetylsulfoxid (DMSO) ), Amresco Company; LB medium, Shanghai Shenggong Biotechnology Company; Passivlys5X buffert, Promega Company; Lipofectamine2000, Promega Company; Plasmid extraktionssats, TIANGEN Company; Luciferase reporter gendetekteringssats är en produkt från Promega Company.
1.2 Cellodling Hela celler odlades i ett DMEM-odlingsmedium innehållande 10 % serum från fostrets nötkreatur. Minst en generation före experimentet ersattes med ett DMEM-odlingsmedium innehållande 1% aktivt kolbehandlat fetalt bovint serum.
1.3 Transfektion och luciferasaktivitetsbestämning Hella-celler såddes i en 24-brunnsplatta med en densitet av 70% till 80%. När cellerna fäst vid väggen och celldensiteten nådde 90%, följ instruktionerna i lipo. Feetamine2000 transfektionsreagensinstruktioner transfekt ERa, ER[3 uttrycksplasmider och ERE, Renila reporter plasmider, byt medium efter 8 timmar och tillsätt testläkemedel med olika koncentrationer. Efter inkubation över natten, använd en multifunktionell plattläsare för att upptäcka östrogensvaret. Komponent ERE luciferasaktivitet, beräkna läkemedlets relativa påverkan på luciferasaktivitet.
1.4 Databehandling och statistisk analys
Med hjälp av SPSS18.0 statistisk programvara uttrycks data som medelvärde±standardavvikelse (x±S). Envägsanalys av varians (ANOVA) och Dunnetts t-test med flera jämförelser användes för att analysera data mellan grupper. P<0.05 was="" considered="" there="" is="" statistical="">
Acteoside
2 Experimentella resultat
2.1 Effekten av verbascosid på aktiviteten hos östrogenresponselementet ERE luciferas Resultaten visar att jämfört med kontrollgruppen när den medieras av ERa och ER[3, kan E (10nmol) signifikant uppreglera östrogenresponselementet ERE luciferas Aktiviteten hos verbascosid kan uppreglera aktiviteten hos östrogenresponselementet ERE luciferas vid 10, 100, 1, 10 och 50 txmol. När koncentrationen når 50 I ~ mol motsvarar uppregleringen av ERE-luciferasaktiviteten den för östradiol. Det är dosberoende, men selektiviteten för östrogenreceptorerna ERa och EP ~ är inte uppenbar (Figur 2).
2 Effekter av olika koncentrationer avakteosidom ERE:s luciferasaktivitet
Anm.: Jämfört med kontrollgruppen, P
2.2 Effekten avechinacosidpå östrogenresponselementet ERE luciferasaktivitet Resultaten visar att jämfört med kontrollgruppen när den medieras av ERa och ER[3, kan E (10nmol) signifikant uppreglera östrogenresponselementet ERE-fluorescens Echinacosid kan uppreglera östrogenresponselementet ERE luciferasaktivitet vid 10, 100, 1, 10 och 50 Ixmol. När koncentrationen når 50 Ixmol är uppregleringen av ERE-luciferasaktivitet något lägre än östrogen. Diol är också meterberoende men har en liten skillnad i selektivitet för östrogenreceptorerna ERa och E (figur 3).
2.3 Konkurrenskraftig bindande effekt av Verbascum glykosider och östradiol på östrogenreceptorer Resultaten visar att Verbascum glykosider kan konkurrenskraftigt binda till östrogenreceptorer med östradiol och motverka aktiviteten av östradiol på östrogenresponselementet ERE luciferas. Uppregleringseffekten. Jämfört med E (10nmo1) -gruppen kan verbascosider nedreglera östradiolaktiviteten hos östrogenresponselementet ERE i varierande grad vid 1, 10 och 50p, mol och verbascosider visar dosberoende. , När koncentrationen når 50 Ixmol är den antagonistiska effekten på östradiol den mest uppenbara (Figur 4).
2.4 Den konkurrensbindande effekten avechinacosidoch östradiol på östrogenreceptorer. Resultaten visar attechinacosidkan också konkurrenskraftigt binda till östrogenreceptorer med östradiol och antagonisera östradiols svar på östrogen. Uppreglering av ERE luciferasaktivitet. Jämfört med E(10nmol) -gruppen kan verbascosiden nedreglera östradiolaktiviteten på östrogenresponselementet ERE i varierande grad vid 1, 10 och 50 mol, ochechinacosiduppvisar en lat dos. Kön, när koncentrationen når 50lxmol, är den antagonistiska effekten på östradiol mest uppenbar (Figur 5)
3 Diskussion
Detta experiment visade för första gången att tydliga data visade attechinacosidoch verbascosid, de viktigaste aktiva ingredienserna i Cistanche, kan binda till östrogenreceptorerna ERa och EP ~, uppreglera luciferasaktiviteten hos ERE och utöva östrogena effekter, vilket visar SERMs aktivitet. Analysen av ovanstående experimentella data visar att i ERa-systemet motsvarar uppregleringen av verbascosid på östrogenresponselementet ERE luciferasaktivitet vid 50 lxmol 0,977 gånger den för E2 (10nmol), vilket motsvarar den i ERI3-systemet. 0,970 gånger; På samma sätt, i ERa-systemet, motsvarar uppregleringseffekten av echinacosid på östrogenresponselementet ERE luciferasaktivitet vid 50 lxmol den för E (10nmol), vilket motsvarar 0 i ERI3-systemet. 937 gånger är uppregleringen av verbascosid på aktiviteten hos östrogenresponselementet ERE luciferas något högre än förechinacosid, och selektiviteten för östrogenreceptorerna ERa och ER[3 är inte uppenbar, medan echinacea glykosider har svaga selektivitetsskillnader för östrogenreceptorerna ERa och ERI3. Dessa skillnader kan vara relaterade till de olika grupper som är kopplade till R4-positionen för verbascoside och echinacoside. Östrogen verkar huvudsakligen genom östrogenreceptorn. Det finns två huvudsubtyper av östrogenreceptor, ERa och ER [3, östrogen- och östrogenverkande ämnen kombineras med östrogenreceptorn för att bilda en dimer och sedan dimerisera Kroppen kombinerar med östrogenresponselementet ERE och utövar sedan en östrogeneffekt [2l,. Fytoöstrogener och östrogen har liknande strukturer och funktioner. Studier har visat att fytoöstrogener kan reglera benmetabolismen och spela en extremt viktig roll för att upprätthålla balansen mellan benresorption och benbildning. Det är effektivt för osteoporos hos patienter med senil hypofunktion. Har en viss klinisk förebyggande och behandlingseffekt ̈. Därför spekuleras det i att effekten av Cistanche för att främja benregenerering och hämma bildandet av osteoporos hos postmenopausala kvinnor är genom dess fytoöstrogener. Detta experiment visar också att echinacosid och verbascosid kan konkurrenskraftigt binda till östrogenreceptorer med östradiol och motverka uppregleringen av östradiol på ERE luciferasaktivitet. Mekanismen för denna åtgärd är känd för resveratrol. Effekten av fytoöstrogener liknar J. Det förklaras vidare att echinacosid och verbascosid utövar östrogena effekter genom att binda till östrogenreceptorer ERa och ER3. Ovanstående studier om fytoöstrogenaktiviteten hos Cistanche och mekanismen för dess östrogeneffekt indikerar att Cistanche kan fördröja bildandet av postmenopausal osteoporos hos kvinnor genom att förbättra östrogenhalten i kroppen eller behandla behandlingen orsakad av nedgången i östrogenhalten i kroppen. Osteoporos lägger fram möjligheten och ger en teoretisk grund för att utöka omfattningen av klinisk medicinsk användning av Cistanche.
Hänvisning
1 Chinese Pharmacopoeia Commission((国家药典委员)). Folkrepubliken Kinas farmakopé. Peking: Chemical Industry Press, 2010. Band 1:126.
2 Li SZ(李时珍).Kompendium av Materia Medica. Beijing: People * s Medical Publishing House (人民卫生出版社), 1977.727.
3 Zeng LQ(曾群力),Zheng YF(郑一凡),Lv ZL(吕志良). Den immunobiologiska aktiviteten och dess verkningsmekanism för cistanches polysackarider. J Zhejiang Univ,Med Ed (浙江 大学学报,医学版),2002,31:284-287.
