Studie om påverkan av immunitet hos möss

För mer information, vänligen kontaktadavid.wan@wecistanche.com

Två av trettio mänDBA/2NCrl(D2N)möss som används som kontrollstam i bakgrundsdataanalys avDBA/2N-MDXmöss, presenterade med onormala fynd som tyder på infektion. Fall 1: En 4 veckor gammal manlig D2N-mus visade en vit plackskada i vänster njure (inga kliniska symtom), och en patologisk undersökning av njuren utfördes. Inflammatorisk cellinfiltration, främst neutrofiler, observerades i tubulerna och interstitium i vänster njure, och Staphylococcus aureus (S.aureus) detekterades från vänster njursegment. Därför diagnostiserades denna lesion på vänster njure som suppurativtubulointerstitiellnefrit orsakad av S. aureus-infektion. Fall 2: Vänster torticollis med viktminskning upptäcktes i en 9 veckor gammal, manlig D2N-mus. Histologisk utvärdering avslöjade exudativ inflammation runt svalgöppningen i eustachianrör och purulent inflammation i både mellanöron och vänster innerörat med abscessbildning och kluster som grampositiva mikrokolonier. S. aureus identifierades från swabkulturer i båda yttre öronkanalerna. Som ett resultat orsakades detta fall av torticollis av S. aureus-suppurative otitis media och internet. S. aureus är välkänt som en opportunistisk patogen med potential att ofta orsaka suppurativa sjukdomar hos immunkompetenta försöksdjur. Men såvitt vi vet är detta fall av S. aureus-infektion som presenteras med torticollis i en D2N-mus orapporterad.

Klicka här för att läsa mer om Cistanche

Ett meticillinresistent Staphylococcus aureus (MRSA) isolat uppstod i en laboratoriemus vid Center for Laboratory Animal Science vid National Defense Medical College 2018 ochMrsAisolat återfanns från möss även i de andra musrummen därefter. På dessa MRSA-isolat utfördes molekylär typning såsom Multi-locus sequence typing (MLST), Staphylococcus aureus Protein A (spa) typing, SCCmec typing och koagulastypning för bestämning av deras genotyper. Alla isolat avslöjade identiska genotyper (ST1, spa t1784, SCCmec typ IV och koagulas typ VII), vilket tyder på att isolaten var identiska kloner. Före uppkomsten av MRSA 2018 hade inga isolat med sådana genotyper inte isolerats vid denna anläggning, det antogs att MRSA-klonen fördes in i anläggningen via mänskliga eller laboratoriedjur. STl1 är den första samhällsförvärvade MRSA som återhämtats från barn i USA, men ST1 återvinns från människor och djur över hela världen för närvarande. I Japan har ST1- och SCCmec typ IV-stammar isolerats från människor och katter, vilket tyder på att ST1 överförs mellan människor och djur. En MRSA-stam med dessa genotyper men också med spa tl784 har återfunnits från människor. För närvarande är skillnaden mellan sjukhusförvärvad MRSA, samhällsförvärvad MRSA och boskapsrelaterad MRSA mer tvetydig. Dessa resultat tyder på att möss kan fungera som reservoarer av MRSA.

I den senaste cancerimmunterapin hämmas aktiviteten hos molekyler som PD-1 för att öka immuncellernas aktivitet mot cancer. Trots den höga terapeutiska effekten finns det fall där autoimmun sjukdom utvecklas vid cancerimmunterapi. Här etablerade vi ett system som kan bryta ner PD-1 på ett tidsspecifikt sätt i odlade celler och möss med hjälp avSMASh degron system. PD-1-SMASh fusionsprotein i Jurkat-celler och CD3+-splenocyter reducerades med 1 dag efter administrering av Asunaprevir(ASV) eller Grazoprevir(GRV) som är NS3/4A-proteashämmare. Tillväxten av MC-38 adenokarcinomceller inokulerade hos PD-1-cherry-SMASh knockin(KI)-möss med ASV undertrycktes jämfört med vildtypsmöss (WT) och obehandlade KI-möss. Dessutom kan WT-mössen transplanterade med KI-benmärgsceller efter att ha bestrålats med dödlig strålning avvisa MC-38-celler med GRV. KI-möss verkade friska och visade inga tecken på autoimmun sjukdom. Vi föreslår att användningen av degronsystemet i levande organismer förväntas främja inte bara olika biologiska studier utan behandling av sjukdomar.

Progesteron (P4) utsöndras från moderkakan för att upprätthålla graviditeten och fungerar som en immunregulator. Glukokortikoid är en annanimmunreglerandesteroid för att reglera inflammation. I denna studie transplanterades humana mononukleära celler i perifert blod (PBMC) till NOG-möss för att inducera transplantat-mot-värd-sjukdom (GVHD) och användes för jämförelse mellan P4 och kortisol (COR) effekter. PBMC stimulerades i närvaro av olika koncentrationer av P4 eller COR och cellerna analyserades med flödescytometri (FCM). Alikvoter avPBMCtransplanterades till NOG-möss och P4 eller COR injicerades i mössen två gånger i veckan. Efter 28 dagar utfördes FCM- och immunohistokemiska analyser. Som ett resultat hämmade en hög koncentration av P4 T-cellaktivering in vitro, medan hämningen inte fortsatte efter avlägsnandet. Undertryckandet av T-cellaktivering var mindre vid COR-behandling jämfört med P4, och T-cellutmattning var mer framträdande. P4-injicerade möss bar fler splenocyter, särskilt CD8 T-celler, jämfört med kontrollmöss. Det lägre uttrycket av CD25, mindre infiltration av mänskliga T-celler i lungan och levern och färreGVHDsymtom observerades. Å andra sidan var antalet splenocyter, särskilt T-celler, i COR-injicerade möss signifikant lägre och aktiverade / utmattade celler var rikliga. Dessa resultat tyder på att P4 föredrar att behålla T-celler jämfört med COR in vitro.

Helicobacter hepaticus och Helicobacter räkningar är kända som patogener som orsakar hepatit och kolit hos möss. Förekomsten av flera positiva fall bekräftas fortfarande årligen i försöksdjursanläggningar i Japan. Det är bäst att använda cecal innehåll eller färsk avföring som ett prov för PCR-testning av H. hepaticus och H. bilis.

Nyligen har DNA- och RNA-transport- och lagringsreagens tillverkats av olika tillverkare. Det förväntas att dessa reagenser kommer att vara problemen vid transport av prover som används för PCR-tester kommer att rensas. Därför undersöktes användbarheten av nukleinsyralagringsreagenset i denna studie genom att utföra ett PCR-test av Helicobacter med användning av innehållet i cecum konserverat med användning av nukleinsyrakonserveringsreagenset. Som ett resultat kunde prover som lagrats i 7 dagar med användning av konserveringslösningen detekteras Helicobacter på samma nivå som det färska provet. Av ovanstående föreslogs att i PCR-testet av Helicobacter, även om transporten tar dagar, är det möjligt att utföra testet med hög noggrannhet genom att transportera provet nedsänkt i nukleinsyralagringsreagenset genom kyld flygning.

Vi har tidigare utvecklat E.coli-mutanta stammar med signifikant förbättrad vidhäftning till fasta in vitro-ytor genom att modifiera generna som svarar på näringssvält. För att utvärdera interaktionen mellan dessa vidhäftningsförstärkta E. coli-stammar (AEE) och in vivo tarmmiljö bedömde vi deras koloniseringsförmåga till tarmkanalen genom att inokulera möss.

Innan utvärderingsexperimentet transformerade vi AEE med en plasmid som uttrycker luciferas för in vivo-visualisering. som oralt ympades i fastande möss och samlade avföring med några dagars mellanrum. Antalet levandeAEEuppskattades genom att mäta CFU från de insamlade avföringen.

Som ett resultat, jämfört med kontrollstammen, var AEE rikligare i avföringen i mer än en vecka, vilket indikerar förbättrad kolonisering i tarmkanalen. Genom att observera lokaliseringen av luciferasluminescens genom icke-invasiv avbildning med IVIS, fann man också att AEEs tenderade att kolonisera vid cecum och kolon.

[Mål] För närvarande [Pasteurella]pneumotropicahar omklassificerats som ett nytt släkte Rodentibacter. Av dessa är R.pneumotropicus och R. Healy de viktigaste målen för mikrobiologisk övervakning hos gnagare. Vi har isolerat ett antal Rodentibacter sp. som inte kunde identifieras som arter från gnagare. I denna studie undersöker vi egenskaperna hos Rodentibacter sp. isolat, med fokus på bakteriell virulens. [Metoder] Rodentibacter sp. som isolerades från råttstrupen användes för studien. Utkast till genomsekvensering utfördes på nästa generations sequencer, och sedan förutspåddes de virulensassocierade generna. I djurförsök användes Rag2-möss för Rodentibacter sp |. Resultat| Genom utkastet till genomsekvensering hade en unik RTX-toxinkodande gen identifierats i Rodentibacter sp. Proteinsekvensen av RTX-toxin var mer homolog mot de som producerades av Enterobacteriaceae än av Pasteurellaceae. I ett djurförsök bekräftades nästan alla infekterade Rag 2-möss dödlig lunginflammation eller septikemi. Även om isolatet inte kunde identifieras som R. pneumotropicus och R. heylii, kan denna närbesläktade art vara dödlig för immunkomprometterade djur i närvaro av virulensfaktorer såsom RTX-toxin.

I NBRP Basic Technology Development Program (2018-2019) sekvenserade vi genomerna av murina opportunistiska patogena bakterier och utfördeRNAseqav protozoer hos möss, för att utveckla PCR-analyser för dessa organismer. Vi använde dessa resultat för att analysera Rodentibacter spp. och protozoer hos råttor i samarbete med Kyoto University (NBRP Rat). Här rapporterar vi testresultaten i råttprover. [Metoder] 16S rRNA-gensekvenserna på cirka 1,5 kbp lästes av PCR för sex råttisolat av Rodentibacter spp., och utkastet till genomsekvens för ett isolat (# 25) bestämdes med användning av Illumina HiSeq 2500. PCR av råtta cecal innehåll utfördes baserat på RNAseq resultat av mus protozoer. [Resultat] 16S rRNA-gensekvenserna för alla isolat var identiska, och de identifierades som Rodentibacter Ratti genom OTU-analys. Omsekvensering av isolat # 25 avslöjade också att denna stam var R. Ratti.PCR för murina protozoer gav positiva resultat för råttamöba. Inga positiva resultat erhölls för TrichomonasPCRpå råttprover. [Diskussion] De råttisolat av Rodentibacter spp. som undersöktes i denna rapport var alla R. Ratti. Det är viktigt att vara medveten om närvaron av R. Ratti när man utför Rodentibacter-tester på råttor. Vissa råtta fekala prover visade positivt för mus amöba PCR. Detta är det första steget i utvecklingen av PCR för detektion av protozoer hos råttor.

Rodentibacterorganismer 'Pasteurella pneumotropica'är opportunistisk patogen bakterie som orsakar andningssjukdomar hos möss och råttor. De klassificerades tidigare i släktet Pasteurella, och flera stammar föreslogs preliminärt som biotyper. År 2017 omorganiserades de kollektivt till släktet Rodentibacter. MaM- och MaR-stammar isolerades från möss respektive råttor runt 1980-talet. I denna studie bestämde vi genomsekvenserna för båda stammarna och jämförde dem med de av släktet Rodentibacter, material och metoderIThe MaM- och MaR-stammar erhölls från National Institute of Infectious Diseases (NIAID)

(Manabu Saito -- > Yasushi Ami -- >Fumio Ike). Båda stammarna odlades genom flytande kultur för att extrahera genomiskt DNA, och de genomiska sekvenserna bestämdes med hjälp av Illumina Hiseq 2500 och PacBio Sequel. [Resultat] Baserat på 16S rRNA-gensekvensen identifierades MaM-stammen som R.pneumotropicus och MaR-stammen som R. Ratti. Vidare bestämdes den fullständiga genomsekvensen (2 213 961 bp) av MaR-stammen (antalet rRNA-operoner var 6 och antalet gener uppskattades till 2 063). [Diskussion MaM- och MaR-stammarna har använts som standarder för att identifiera 'Pasteurella pneumotropica'i Japan. Från denna analys bestämde vi arten av båda stammarna enligt följande: MaM-stammen är R.pneumotropicus och MaR-stammen är R.ratti. Anmärkningsvärt visar dessa resultat att R. Ratti kan isoleras från råttor i Japan.

Clostridium pili for me (CP) är mottagligt för infektiöst hos olika försöksdjur inklusive råttor och möss och visar asymptomatisk infektion utom hos immunkompromitterade djur. Det anses vara en viktig differentiell diagnos för att upprätthålla djuranläggningar och är välkänt för att påverka experimentella data från djurstudier. Serodiagnos (ELISA, IFA) och PCR används ofta för diagnos av CP eftersom isoleringen i det konstgjorda näringsmediet är svårt för CP. Förekomsten av den icke-specifika antikroppen som indikerar korsreaktiviteten med CP med hjälp av serodiagnosen rapporteras emellertid och erkänns ofta i ett liknande fall i våra anläggningar. Dessutom har PCR-metoden gränser som en tillförlitlig diagnostisk metod med periodisk övervakning, eftersom CP inte kan detekteras i avföring efter den ökande antikroppstitern. Nyligen undersökte vi ett annat tillvägagångssätt, att bevara avföring från djur varje månad. Vi antog PCR-testet för CP som inte påverkas av antikropparnas påverkan som mer tillförlitlig diagnostik med hjälp av avföringen som kontinuerligt bevaras. I den här rapporten visar vi ett aktuellt exempel. (icke-specifik antikropp) för att leda till inspektion av flödet som utvecklas i vårt företag.