Studie om neuroendokrin-immun funktion hos Cistanche Deserticola och dess risvinsångande produkter i glukokortikoid-inducerad råttmodell

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Bonan Liu, Ji Shi, Zhe Li, Chao Zhang, Pengpeng Liu, Wei Yao och Tianzhu Jia

1 School of Pharmacy, Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Dalian 116600, Kina

2 Det andra sjukhuset vid Dalian Medical University, Dalian 116600, Kina

Abstrakt

ÖkenboningenCistanche örtspelades först in i "Shen Nong Herbal Classic" och är listad som den högsta växtbaserade medicinen i denna publikation. /e Kinesiska farmakopén registrerar att bitar av Cistanche deserticola(CD) och risvinsångadCistanche deserticola(WCD) kan användas på kliniken som huvudtyper av avkok. Efter att ha ångats med risvin förstärks antiåldrande och tonifierande njur-yang-effekter. I denna studie upptäckte vi det kemiska innehållet i Cistanche Deserticola och WCD och den farmakologiska mekanismen för uppfriskande njur-yang-brist hos modellråttor. Syfte. Syftet med denna studie var att undersöka effekterna av Cistanche Deseticola och WCD på neuroendokrina-immun funktionav njure-yang-brist hos glukokortikoid-överdoserade modellråttor. Material och metoder. Sprague Dawley (SD)-råttor selekterades. /e-råttor har subkutant injicerat med kortikosteronvattensuspension för de glukokortikoidöverdoserade modellråttorna. /e positiva kontrollråttor gavs med Jinkuishenqi-piller och hög-, medel- och lågdosCistanche Deserticola/WCD-suspensioner (1,646 g/(kg dag), 5,48 g/(kg dag), 2,74 g/(kg dag) respektive 1,37 g/(kg dag); blankkontrollgruppen (BC) och modellkontrollgruppen (MC) gavs samma volym destillerat vatten som de i läkemedelsgruppen under 40 dagar i följd i en dos av 1 ml/100 g. Efter den senaste administreringen samlades blodet från bukaortan och serumnivåerna av T, CRH, ACTH, CORT, kortisol, IL-10, IL-6, IL-2, TNF - och IFN-c mättes. Organindex för tymuskörteln och mjälten beräknades. /e uttryck av Bax, Bcl-2, kaspas-3, Fas och FasL i binjuren mättes med immunhistokemi. /e patologiska förändringar i tymuskörteln och binjuren observerades genom HE-färgning (×200). Undergrupper av T-lymfocyter i perifert blod detekterades med hjälp av andra cytometri, och uttrycket av CaM mRNA i hypotalamus och hypofysvävnader mättes också med RT-PCR. Resultat. Jämfört med MC-gruppen uppvisade Cistanche Deserticola- och WCD-grupperna ökningar i aktivitet, organindex för tymus och mjälte, serumnivåerna av T, CRH, ACTH, CORT, kortisol, IL-2 och IL -10, förhållandet mellan CD4 plus /CD8 plus och uttrycket av Bcl-2, kaspas-3, Fas, FasL och CaM i hypofysvävnaden. /eCistanche Deserticolaoch WCD-grupper uppvisade också minskningar av IL-6-, TNF- och IFN-c-nivåerna i serum och uttrycket av CaM-mRNA i hypotalamus. Slutsatser. Varje dos av Cistanche Deseticola och WCD skulle kunna motverka det oreglerade könshormonet och immunfaktorerna hos glukokortikoidöverdoserade modellråttor, förbättra och återställa effektiviteten hos de hypotalamiska nervcellerna och förbättraimmun funktion.

Introduktion

Cistanche deserticola, som kallas "ökenginseng," är en traditionell kinesisk medicin som har använts i århundraden som en yang-tonisk ört för att stärka njuren och stärka yangen [1]. Åtta arter och en variant av Cistanches Herba har registrerats i Kina och endast Cistanche deserticola YC Ma och Cistanche tubulosa (Schenk) Wight finns registrerade i den kinesiska farmakopén [2]. Farmakologiska studier visade att Cistanches Herba uppvisade neuroprotektiva [3], immunmodulerande [4], hjärtskyddande [5], anti-trötthet [6], antiinflammatoriska [7], leverskyddande [8], antioxidativa [9], antibakteriella [10], laxerande. [11] och antitumöreffekter [12]. Det breda spektrumet av rapporterade biologiska aktiviteter av detta släkte har tillskrivits den komplexa och varierade fytokemiska sammansättningen. Cistanche deserticola innehåller fenyletanoidglykosider, iridoider, polysackarider [13] etc. Innehållet av fenyletanoidglykosider är det högsta i de ursprungliga medicinska materialen [14]. Bearbetning av kinesisk materia Medica (CMM) är en traditionell farmaceutisk teknik för att uppfylla de olika kraven för behandling, dispensering och framställning av preparat enligt traditionell kinesisk medicinteori. Dessa bearbetade produkter kallas avkok, som används på kliniker. /e mål med bearbetningen är att förbättra effektiviteten och/eller minska toxiciteten hos råläkemedel. 2015 kinesiska farmakopén registrerade att Cistanche tjocka skivor (CD) och risvinsångad Cistanche (WCD) kunde användas som avkok på kliniken. Vår forskargrupp visade att den laxerande effekten lindrades, och de antiåldrande och njur-yang-upplivande effekterna förstärktes efter att Cistanche ångades med risvin [15].

Funktionen hos axeln hypotalamus-hypofys-binjure-tymus (HPAT) är störd i njure-yang-bristsyndromet [16]. Patienter med njur-yang-brist har också omfattande immunförsvar. HPA-axeldysfunktion är nära relaterad till immunbrist. Neuroendokrina-immuna nätverk (NEI) teori visar att immunsystemet och neuroendokrina systemen delar många ligander och receptorer [17], och hypotalamus anses vara pivoten för att koppla ihop det neuroendokrina med immunsystemet.

I den här studien replikerade vi njur-yang-brist hos modellråttor med exogen kortikosteroidinjektion och utforskade mekanismen för njur-yang-bristen som svar på olika bearbetade produkter av Cistanche deserticola ur endokrina perspektiv.immun funktion.

Material och metoder

Material och reagens.

Cistanche deserticolasamlades in från Alashan Neimenggu 2019.5 och identifierades som de torkade köttiga stjälkarna av Cistanche deserticola YC Ma av Prof. Yanjun Zhai (School of Pharmacy, Liaoning University of Traditional Chinese Medicine, Kina). Verifikationsexemplaren bevarades i Liaoning Processing Engineering Technology Center.

Standardföreningar av en jugol köptes från Chengdu Pure Chem-Standard Co., Ltd. (Chengdu, Kina); cistanosid F, echinakosid, cistanosid A och iso-acteosid köptes från Must Company (Sichuan Kina); acteosid köptes från Dalian Meilun Bio. Co., Ltd. (Dalian, Kina). Acetonitril och metanol av MS-kvalitet köptes från Merck KGaA (Darmstadt, Tyskland). Myrsyra av HPLC-kvalitet köptes från Merck KGaA (Darmstadt, Tyskland). Risvin köptes från Zhejiang Brand Tower Shaoxing Wine Co., Ltd. (Zhejiang, Kina).

Kortikosteron (CAS: 50-22-6, renhet > 98 procent , TCI Shanghai Development Ltd. Co.), chinkuei shin chewan piller (Beijing Tongrentang Technology Development Co., Ltd.), råtta ACTH, CRH, T, IL{{ 2}}, IFN-c, TNF-, IL-2 och IL-10 ELISA-detektionskit köptes från Nanjing Jian cheng Co., Ltd. /e råttkortisol ELISA-kit tillhandahölls av BOSK Co. ., CD4-antikropp från råtta, CD8a-antikropp (nr 561833 och 559976), RBC-lysat (Solarbio, R1010), PBS-buffertlösning (Solarbio, P1020-500), TRIzol (MAN0001271), CaM och -aktin uppströms och nedströms primers tillhandahölls av Guangzhou Invitrogen Co. Reverse Transcription Kit (nr RR037A) och cDNA Synthesis Kit (nr 10000068167) tillhandahölls av Bole Life Medicine Products (Shanghai) Co., Ltd. Kloroform, isopropanol, 75 procent etanol, och uretanlösning var alla analytiskt rena och producerade av Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd. Ultrarent vatten producerades av Milli-Q-systemet (18,2 MΩ, Millipore, MA, USA).

Experimentella instrument

En enzymmarkör (Thermo, modell 3530911931), automatisk platttvätt (modell HBS- 4009), digital display push-pull kraftmätare (modell VICTOR- 50N), höghastighets fryscentrifug (modell Sigma 3k15 ), ultramikrospektrofotometer (modell B-50Q), genförstärkare (modell L96G), kvantitativ PCR för realtidsfluorescens (modell StepOne), flödescytometer (modell AC66051710132), paraffinmikrotom (modell Laika), mikroskop (Olympus , modell BS-53) och ett instrument för rent vatten (modell F7JA36507) användes.

Beredning av prover för UPLC-Q-TOF-MS och farmakologiska experiment.

WCD bearbetades från samma parti Cistanche deserticola i vårt laboratorium. För framställning av WCD infunderades torra CD-bitar (5 mm tjocka) (100 g) med risvin (30 ml), ångades vid högt tryck (1,25 kPa) i 4 timmar och torkades sedan vid 55 grader.

De grova pulvren av CD och WCD blötlades i 10 gånger 95 procent etanol under 0,5 timmar, återloppskokades 3 gånger varje gång under 1 timme och filtrerades, och filtraten från 3 gånger kombinerades. /e etanol utvanns under reducerat tryck och extraktet erhölls för administrering. /e extrakt (1 ml) sattes till 50 procent metanol, vilket bringade den totala volymen till 20 ml, och lagrades vid 4 grader för innehållsanalys.

UPLC-QqQ-MS Villkor för analys av CD- och WCD-extrakt

UPLC-MS/MS-systemet med MassLynx 4.1 Analyst-mjukvara användes för att utföra datainsamlingen och bearbetningen. /e analytisk kolumn var en Acquity UPLC BEH C18 (1{{10}}0 mm × 2,1 mm, 1,7 μm) vid en temperatur på 40 grader C. /e mobil fas var 0,1 procent myrsyra vattenlösning (A) och acetonitril innehållande 0,1 procent myrsyra (B). /e-elueringsgradienten var 0.00–1.00 min med 3 procent B, 1,01–2.00 min med 3 procent –11,5 procent B, 2,01–3.{{ 29}} min med 12 procent B, 3,01–4.00 min med 15 procent B, 4,01–5.00 min med 20 procent B, 5,01–6.00 min med 22 procent B, 6,01–8.00 min med 25 procent B och 8,01–9.00 min med 10 procent B. /e flödeshastigheten var 0,3 mL/min, och injektionsvolymen var 1,0 μL.

Waters triple quadruple masspektrometer (Xevo TQD, Waters Corp., Milford, MA, USA) utrustad med en elektrosprayjoniseringskälla (ESI) användes i negativ jonmod. /e desolvationsgas var kväve med en flödeshastighet av 500 L/h vid en temperatur av 250 grader. Alla detekterade föreningar mättes i multipel reaktionsövervakning (MRM)-mod; Tabell 1 visar energiparametrarna och Tabell 2 visar kalibreringskurvorna för analyserade komponenter.

Beredning av referensämnen

Tubulosid A (3.02 mg), echinakosid (3.00 mg), 2'-acetylakteosid (2,34 mg), acteosid (2,45 mg), isoacteosid (0,61 mg), cis-tanosid F (2,14 mg), salidrosid (3,39 mg), geniposidinsyra (2,84 mg), ajugol (1,58 mg) och katalpol (2,39 mg) löstes i metanol för att framställa en stamlösning. /e stamlösning späddes med metanol för att få de lämpliga koncentrationerna för arbetsstandardlösningarna. Alla beredda lösningar förvarades vid 4 grader före användning.

Förberedelse och gruppering av djurmodeller

SD-hanråttor (180–220 g) köptes från Liaoning Chang sheng Biotechnological Co., djurtillståndsnummer: SCXK (Liao) 2015–0001. Alla råttor hölls med fri tillgång till mat och vatten vid 25 grader och en relativ luftfuktighet på 30–50 procent. Djuren hölls i 7 dagar före experimenten.

Hundra råttor delades slumpmässigt in i 1{{30}} grupper: blank kontrollgrupp (BC), modellkontrollgrupp (MC), positiv kontrollgrupp (PC), grupp med risvinskontroll (WC), CD högdos (CD-HD) grupp, CD mellandos (CD-MD) grupp, CD lågdos (CD-LD) grupp, WCD hög dos (WCD-HD) grupp, WCD mellandos (WCD-MD) ) grupp och WCD lågdos (WCD-LD) grupp. /e doser av CD-HD/WCD-HD, CD-MD/WCD-MD och CD-LD/WCD-LD var 5,48 g/(kg ∙ d), 2,74 g/ (kg ∙ d) och 1,37 g /(kg ∙ d), respektive. /e-dosen för PC-gruppen var 1,646 g/(kg ∙ d), och för WC-gruppen 1 mL/100 g under 40 dagar. /e 6:e dagen efter administrering injicerades råttorna subkutant med kortikosteronvattensuspensionen (kortikosteron plus 0,1 procent dimetylsulfoxid plus 0,1 procent Tween-80 plus 0,9 procent natrium klorid) förutom BC-gruppen [18]. /e-koncentrationen av kortikosteron var 5 g/L, och dosen var 0,1 mL/100 g. /e-råttor i BC-gruppen gavs normal koksaltlösning plus 0,1 procent dimetylsulfoxid plus 0,1 procent Tween- 80 plus 0,9 procent natriumklorid genom injektion i samma dos.

Bestämning av HPA-axelfunktioner

Test av vikt, temperatur och hållkraft:Ett vikttest utfördes var 3:e dag, och temperaturen togs var 6:e ​​dag. under experimentet. På den 39:e dagen mättes bakbenens maximala styrka med en greppmätare. /e-råttor placerades på släta plattformar, vilket fick deras bakben att ta tag i stången. /e-råttor kommer instinktivt att ta tag i alla föremål för att förhindra att de rör sig bakåt när svansen dras tills dragkraften överstiger greppet. När råttan tappade greppet kunde förförstärkaren automatiskt registrera den maximala greppkraften.

Bestämning av nivån av T, CRH, ACTH, CORT och kortisol i serum: En timme efter den sista administreringen bedövades råttorna genom intraperitoneal injektion av en uretanlösning (20 g/100 ml). /sv, blodproverna samlades in, centrifugerades vid 3500 r i 15 minuter för att erhålla serumet och lagrades vid -20 grader. Koncentrationerna av T, CRH, ACTH, CORT och kortisol mättes med rått-ELISA-kit enligt tillverkarens instruktioner.

Mikroskopobservationer: Den morfologiska strukturen av binjurevävnad observerades genom HE-färgning. Binjurevävnad fixerades i 10 procent paraformaldehyd, dehydrerades i etanol, gjordes genomskinlig med en xylenlösning, bäddades in med konventionella metoder, skars till 4 μm tjocka skivor, avvaxades med xylenlösning, hydratiserades med etanolgradienten och färgades sedan med hematoxylin och eosin färgningslösning. Efter att ha gjorts transparent med xylen förseglades plattan med neutralt gummi och observerades under ett mikroskop.

Immunhistokemisk färgning av Bax-, Bcl-2-, Caspase-3-, Fas- och FasL-proteinuttryck i binjuren

Formalinfixerade, paraffininbäddade råttbinjuresektioner avparaffinerades och rehydrerades efter att ha skurits i en tjocklek av 4 μm. För blockering av endogen peroxidasaktivitet förinkuberades sektionerna i väteperoxidblock under 1 0 min. Sektioner doppades i 0,01 M citrat (pH 6,0) och värmdes till kokning. /e-processen upprepades efter 5–10 min. Efter kylning tvättades sektionerna med PBS (pH 7,2–7,6) 1–2 gånger, lämnades i rumstemperatur i cirka 5 minuter och tvättades med PBS (pH 7,2–7,6) 2–3 gånger. /e 5 % BSA-blockerande lösning tillsattes vid rumstemperatur och överskottsvätskan på sektionen skakades av 20 minuter senare. Utspädda primära antikroppar specifika för Fas/FasL, Bcl-2/Bax och kaspas-3 (1:100 utspädd med PBS) tillsattes och inkuberades vid 37 grader i 1 timme eller 4 grader över natten. /e sektioner tvättades 2–3 gånger med PBS (pH 7,2–7,6). /sv tillsattes biotinylerad get-anti-mus IgG och sektionerna torkades vid 20–37 grader i 20 minuter och tvättades med PBS (pH 7,2–7,6) 4 gånger i 5 minuter. Efter noggrann tvättning i PBS inkuberades sektionerna med en blandning av reagens A och B i 30 minuter, inkuberades med PBS i 45 minuter och utvecklades slutligen med DAB-substrat (DAKO) i 30 minuter innan de motfärgades något med hematoxylin, dehydrerades, och monterad.

Bestämning av immunfunktioner

Beräkning av immunorganindex:En timme efter den sista administreringen bedövades råttorna genom intraperitoneal injektion av uretanlösning (20 g/100 ml), och sedan avlägsnades mjälten och tymuskörteln och vägdes omedelbart i en steril huva. Viktkoefficienterna för mjälten eller tymus (procent) mjälte eller tymus vikt (mg)/kroppsvikt (g).

Experimentella resultat

UPLC-QqQ-MSAnalys:För att uppnå den bästa separationen, toppformen och en kort analystid studerades kromatografiska förhållanden inklusive kolonn, mobil fas och gradientprogram i vårt preliminära experiment. /e typiska kromatogram med MRM-läge presenteras i figur.Från tabell 4 kunde vi se att innehållet av fenyletanolglykosider i WCD ökade jämfört med CD, särskilt för echinakosid och acteosid, medan innehållet av iridoider minskade i WCD.

Reglering för HPA-axelfunktion: Råttorna i MC-gruppen och experimentgrupperna visade njure-yang-bristsymptom gradvis efter att de fått kortikosteron. /e-symtom, såsom viktminskning, hypotermi, förlust av hårglans, hängande ande, eftersläpning av svar, den signifikanta minskningen av vattenförbrukning och aktivitet, förbättrades avsevärt i CD- och WCD-grupperna. Figur 2(a) visar viktförändringarna. /e-vikten för var och en av läkemedelsgrupperna ökade, särskilt i CD-HD- och WCD-HD-grupperna. Viktuppgången i MC-gruppen var lägst. Figur 2(b) visar förändringarna i temperatur, som var den lägsta i MC-gruppen, och temperaturen ökade i grupperna WCD-HD, WCD-MD och WCD-LD.

Nivåer av T, CRH, ACTH, CORT och kortisol: Figur 3 visar att jämfört med BC-gruppens nivåer av T, CRH, ACTH och CORT i råttserumet minskade (P < 0.="" 01)="" och="" kortisolnivån="" minskade="" (p="">< 0.05)="" i="" mc-gruppen.="" jämfört="" med="" de="" i="" mc-gruppen="" ökade="" nivån="" av="" t="" i="" wcd-hd-="" och="" wcd-md-grupperna="" (p="">< 0.01),="" nivån="" av="" crh="" i="" wcd-ld,="" wcd-md-="" och="" wc-grupperna="" förbättrades="" (p="">< 0.01),="" innehållet="" av="" acth="" ökade="" i="" cd-hd-,="" wcd-md-="" och="" wcd-hd-grupperna="" (p="">< 0.01),="" cort-nivån="" uppgraderades="" i="" cd-md-,="" wcd-md-="" och="" wcd-hd-grupperna="" (p="">< 0,01)="" och="" förstärkta="" i="" cd="" hd-="" och="" wcd-ld-grupperna="" (p="">< 0,05),="" och="" kortisolnivån="" ökade="" i="" var="" och="" en="" av="">

Resultat av mikroskopobservation: Binjurevävnad kan delas in i kortikala lagret och medulla lagret. De kortikala skikten inkluderar globulära, bunt- och retikulära skikt. Cellerna innehåller fler lipider, och märglagret består till största delen av feokromocytomceller och en liten mängd fibrös vävnad. Som visas i figur 4 fann vi att allt var normalt i BC-gruppen, medan i MC-gruppen hade binjurebarken uppenbar hyperplasi, cellulär atrofi och ökande täthet. Den lökformiga remsan tjocknade och den genomskinliga fascikulära zonen, smala zona reticularis och mindre celler visade ojämn färgning och kapillärstockning. I PC-gruppen var de kortikala och medullära gränserna synliga. Cellerna i de klotformade banden och buntbanden arrangerades jämnt och den morfologiska strukturen hade återställts. Samma bättre restaurering observerades i WCD-grupperna, och effekterna i WCD-MD-gruppen var bättre än i WCD-HD- och WCD-LD-grupperna. Binjurens morfologi i CD-grupperna var inte lika bra som i WCD-grupperna.

Immunhistokemi: Neuronal apoptos styrs av många apoptotiska och antiapoptotiska gener, främst den apoptosfrämjande genen Bax och de anti-apoptotiska generna i genfamiljen Bcl-2. Bcl-2 är lokaliserad i reaktiva syreproducerande organeller såsom mitokondrierna, endoplasmatiskt retikulum och kärnmembran. Bcl-2 har liten inverkan på fria syreradikaler men kan förhindra oxidativ skada i celler. Bax transporterar från cytoplasman till mitokondriella membranet, ändrar mitokondriella membranstruktur och främjar frisättningen av cytokrom c och induktion av apoptos.

Det fanns ett uttryck i binjurecytoplasman av Bax- och Bcl{{0}}-protein. /e-färgning visade alla gula partiklar. Jämfört med den för BC-gruppen ökade den genomsnittliga optiska densiteten för Bax-proteinet i MC-gruppen signifikant (P < 0.01).="" jämfört="" med="" den="" för="" mc-gruppen="" minskade="" den="" genomsnittliga="" optiska="" densiteten="" i="" cd-ld-="" och="" wcd-ld-grupperna="" signifikant="" (p="">< 0,01)="" (figur="">Resultaten visade att CD och WCD kunde inducera apoptos i inflammatoriska celler och minska binjureskador genom att främja uttrycket av FasL-proteinet och binda till Fas-proteinet, aktivera kaspas-3-protein och utlösa en kaspaskaskad. Effekten av WCD-HD-gruppen var bäst.

Bestämning av immunfunktion

Immunorganindex

Jämfört med de för BC-gruppen minskade tymuskoefficienten och mjältindexet för MC-gruppen signifikant (P < {0}}.01).="" jämfört="" med="" mc-gruppen="" hade="" wcd-md-gruppen="" den="" största="" skillnaden="" (p="">< 0,05).="" tymuskoefficienten="" var="" nästan="" tillbaka="" till="" normal="" nivå.="" för="" mjältindex="" visade="" wcd="" md-,="" wcd-ld-="" och="" cd-md-grupperna="" signifikanta="" skillnader="" jämfört="" med="" mc-gruppens="" (p="">< 0,01)="" (se="" figur="" 6).="" därför="" kunde="" wcd-="" och="" cd-behandling="" skydda="" immunorganen,="" och="" effekterna="" av="" wcd="" var="">

Detektion av T-lymfocytundergrupper i perifert blod

Andelen CD4 plus-celler i den övre vänstra kvadranten och CD8 plus-celler i den högra nedre kvadranten i BC och varje läkemedelsgrupp var högre än i MC-gruppen. Jämfört med BC-gruppen minskade förhållandet mellan CD4 plus /CD8 plus signifikant i MC-gruppen (P < 0.01).="" jämfört="" med="" mc-gruppen="" ökade="" förhållandet="" mellan="" cd4="" plus/cd8="" plus="" signifikant="" i="" pc-gruppen,="" wcd-gruppen="" och="" cd-hd-gruppen="" (p="">< 0,01)="" (figur="" 7).="" bestämning="" av="" nivån="" av="" il{="" {12}},="" il-6,="" il-2,="" tnf-="" och="" ifn-c="" i="">

Figur 8 visar att jämfört med den för BC-gruppen ökade nivån av IL-6, TNF- och IFN-c signifikant (P < 0.01).="" -nivån="" av="" il-10="" och="" il-2="" minskade="" i="" mc-gruppen.="" jämfört="" med="" mc-gruppen="" minskade="" nivån="" av="" il-6,="" tnf-="" och="" ifn-c="" och="" il-10="" och="" il-2="" ökade="" i="" serum="" i="" var="" och="" en="" av="" läkemedelsgrupperna.="" effekten="" av="" wcd="" var="" bättre="" än="" effekten="" av="" cd,="" särskilt="" i="" wcd-md-gruppen,="" där="" effekten="" var="" nära="" den="" för="">

Resultat av tymusvävnadsmikroskopobservationsexperiment

Figur 9 visar att i BC-gruppen fanns ett stort antal lymfocyter närvarande. Lymfocyter och retikulocyter var löst anordnade i mitten med spridda runda eller ovala tymocyter. Det fanns ingen nekros, ingen inflammatorisk cellinfiltration och inga onormala förändringar.

MC-gruppen visade en stor mängd lymfoid nekrosvävnad, med ett oordnat arrangemang av lymfocyter och retikulocyter i centrum. Runda eller ovala tymocyter försvann, massiv celldegeneration eller nekros var uppenbar och inflammatorisk cellinfiltration med onormala patologiska förändringar.

I CD-grupperna hade de morfologiska egenskaperna hos lymfocyter återgått till det normala, och arrangemanget av centrala lymfocyter och retikulocyter var nästan normalt. Runda eller ovala tymocyter hade återhämtat sig, men ett litet antal degenerativa eller nekrotiska lymfocyter och infiltrerande inflammatoriska celler fanns kvar.

I WCD-grupperna och PC-gruppen reparerades de morfologiska egenskaperna hos lymfocyter bättre. /e-lymfocyter och retikulocyter i mitten var väl inriktade, de runda eller ovala tymocyterna var nästan normala, men det återstod ett litet antal infiltrerande och degenerativa lymfocyter.

CaM-proteingenuttryck

RQ-värde (CaM-mRNA/-aktin-mRNA) ansågs undersöka uttrycket av CaM-mRNA. RQ för BC-gruppen var 1. Expressionen av CaM-mRNA i hypotalamus i MC-gruppen ökade signifikant (P < 0.01),="" medan="" värdet="" minskade="" i="" wcd-hd,="" wcd-md-,="" wcd="" ld-="" och="" cd-hd-grupper="" (p="">< {{10}}.05)="" (figur="" 10).="" uttrycket="" av="" cam-mrna="" i="" hypofysen="" i="" mc-gruppen="" var="" lägre="" än="" det="" i="" bc-gruppen="" (p="">< 0,01).="" -uttryck="" i="" grupperna="" wcd-hd,="" wcd-md,="" wcd-ld,="" cd-hd="" och="" cd-ld="" ökade="" (p="">< 0,05),="" och="" effekten="" i="" wcd-grupperna="" var="" bättre="" än="" effekten="" i="">

Diskussion

Den kinesiska farmakopén [2] visar att CD och WCD kan användas på kliniken som huvudtyper av avkoksbitar. Efter att ha ångats med risvin förstärktes antiaging och tonifierande njur-yang-effekter. Genom UPLC-QqQ-MS upptäckte vi de kvantitativa förändringarna i den kemiska materialbasen under processen med risvinsångning. Iridoidglykosider var instabila och innehållet av dessa glykosider minskade och blev till och med odetekterbart. Även innehållet av fenyletanolglykosider förändrades, vilket skulle kunna inducera förändringar i farmakodynamiken och den kliniska effekten.

Den klassiska njur-yang-bristmodellen replikerades genom subkutan injektion av kortikosteron [19]. Överdosering av kortikosteron kan hämma hemligheten av CRH i hypotalamus. Samtidigt hämmades också ACTHs hemlighet. /e nivån av binjurebarkhormon minskade, och därmed minskade HPA-axelns funktion. Hypofunktion av HPA-axeln är ett vanligt kännetecken för njure-yang-brist [20]. Då visar råttorna "utarmning"-fenomen, och symtomen stämmer överens med de för njur-yang-brist på kliniken.

I MC-gruppen minskade nivån av CRH, ACTH, T och CORT i råttserum signifikant (P < 0.01).="" efter="" att="" ha="" behandlats="" med="" cd="" och="" wcd="" ökade="" innehållet="" av="" crh,="" acth,="" t,="" cort="" och="" kortisol="" alla="" i="" någon="" grad,="" och="" effekten="" av="" wcd-md="" var="" bäst,="" nästan="" lika="" med="" den="" i="" pc-gruppen.="" dessa="" resultat="" indikerade="" att="" den="" relativa="" hormonbalansen="" i="" hpa-axeln="" hade="" förstörts="" i="" mc-gruppen,="" cd="" och="" wcd="" kunde="" förbättra="" den="" funktionella="" återhämtningen="" av="" onormala="" binjureaxelhormonnivåer,="" men="" effekten="" av="" wcd="" var="">

Att modulera andelen Bcl{0}} familjemedlemmar är en av kärnmekanismerna genom vilka Fas/FasL förmedlar dödsreceptorvägen, och Bcl-2-familjen reglerar den mitokondriella vägen [21]. Apoptoshämmande faktor Bcl-2 och apoptosinducerande faktorer, såsom Bax, tillhör alla familjen Bcl-2 [22]. Cellapoptos kan bestämmas av det relativa förhållandet mellan apoptoshämmande faktorer och apoptosinducerande faktorer [23]. Mitokondrier hade funktionen som centrala kontrollpunkter för många former av apoptos [24]. Den aktuella studien visade att CD-MD och WCD kunde härleda uttrycket av Bax och öka Bcl-2 för att förbättra njur-yang-bristen. Fas är den huvudsakliga dödsreceptorn som inducerar apoptos genom ligering med Fas-liganden (FasL) [25]. Uttrycket av Fas och FasL i MC-gruppen ökade, medan detta uttryck ökade signifikant i WCD-MD-gruppen (P < 0.01)="" jämfört="" med="" mc-gruppen.="" både="" fas/fasl-="" och="" bax/bcl-2-system="" transducerar="" de="" apoptotiska="" signalerna="" till="" kaspasfamiljen="" [26].="" kaspas-3="" är="" ett="" av="" de="" pivotala="" proteinaserna="" som="" initierar="" cellapoptos.="" aktiveringen="" av="" kaspas-3="" indikerar="" att="" apoptos="" går="" in="" i="" ett="" irreversibelt="" stadium="" [27].="" uttrycket="" av="" kaspas-3="" i="" mc-gruppen="" ökade="" och="" ökade="" signifikant="" i="" wcd-hd-="" och="" wcd-md-grupperna="" (p=""><>

Brist påimmun funktionär en av de viktiga manifestationerna av njur-yang-brist [28]. I denna studie fann vi att indexet för mjälten och tymus i WCD-MD-gruppen återhämtade sig signifikant (P < 0.01,="" p="">< 0.{{3{="" {32}}}}5).="" immunsvar="" av="" immunsystemet="" regleras="" huvudsakligen="" av="" undergrupper="" [29].="" il-2="" är="" tillväxtfaktorn="" för="" t-celler,="" utsöndrad="" av="" t-celler="" och="" makrofager,="" deltar="" i="" inflammatorisk="" reglering,="" reglerar="" immunitet="" och="" ökar="" infektionsresistensen="" [30].="" -nivån="" av="" il-2="" i="" mc-gruppen="" minskade="" (p="">< 0,01),="" och="" efter="" behandling="" med="" cd="" och="" wcd="" återhämtade="" sig="" nivån="" av="" il-2.="" il-6="" och="" tnf-="" är="" proinflammatoriska="" cytokiner.="" ökade="" nivåer="" av="" il-6="" och="" tnf-cytokiner="" orsakar="" cytokinobalanser="" och="" förvärrar="" inflammation.="" -nivåerna="" av="" il-6="" och="" tnf-="" ökade="" i="" mc-gruppen,="" medan="" nivåerna="" av="" il-6="" och="" tnf-="" minskade="" efter="" behandling.="" t-celler="" är="" uppdelade="" i="" cd4-celler="" och="" cd8-celler,="" och="" cd4="" plus="" d8="" plus-förhållandet="" kan="" användas="" som="" ett="" viktigt="" index="" för="" immunreglering="" [31].="" cd4="" plus="" d8="" plus="" i="" mc-gruppen="" minskade="" uppenbarligen="" (p="">< 0,01),="" medan="" hd-grupperna="" i="" wcd-="" och="" cd-gruppen="" ökade="" (p=""><>

HPA-axeln är det viktigaste regleringssystemet eftersom det reglerar glukokortikoidsekretionen och det endokrina systemet för att upprätthålla binjurebarkens sekretoriska funktion [32]. Överuttryck av CaM mRNA i hypotalamusvävnad var relaterat till brist på njuryang. CD och WCD kunde blockera kalciumkanalerna, hämma CaM-mRNA-uttryck i hypotalamus och minska kalciuminflödet, vilket därmed minskar aktiviteten av Ca2 plus ·CaM-komplex.

Bildandet av njur-yang-brist har en kronisk sjukdomsutvecklingsprocess. Njuren är inte längre ett rent anatomiskt begrepp, och det är en allmän term för neuroendokrin-immunitet och genitourinary system. Neuroendokrina-immuna (NEI) nätverk är ett viktigt integrerat regelsystem [33]. CD och WCD kan reglera HPAT-axelns funktion och förbättra återhämtningen av njur-yang-brist. /is resultat ger den experimentella basen för klinisk förebyggande och behandling av njur-yang-brist.

Referenser

[1] Y. Zhang, H. Wu och SN Wang, "Jämförelse av njurens närande och yangstärkande funktioner hos tre olika arter av Herba Cistanches," China J Chin Mater Med, vol. 19, nr. 3, s. 169–171, 1994.

[2] Chinese Pharmacopoeia Commission, Pharmacopoeia of People's Republic of China: One Edition, China Medical Science Press, Beijing, Kina, 2015.

[3] M. Zhu, C. Lu och W. Li, "Övergående exponering för echinakosid är tillräcklig för att aktivera TrK-signalering och skydda neuronala celler från rotenon," Journal of Neurochemistry, vol. 124, nr. 4, s. 571–580, 2013.

[4] LL Li, XW Wang, XF Wang, et al., "Glycosides of Cistanche anti-lipid peroxidation and anti-radiation effect," Traditional Chinese Medicine, vol. 22, nr. 6, s. 364–367, 1997.

[5] E. Preutthipan, CF Ng, CM Koon, ECW Wong, B. Tomlinson och CBS Lau, "/e protective effect of Herba Cistanches on statin-induced myotoxicity in vitro," Journal of Ethnopharmacology, vol. 190, s. 68–73, 2016.

[6] HS Wong, J. Chen, PK Leong, HY Leung, WM Chan och KM Ko, "Herba minskar viktökningen hos diet-inducerade överviktiga möss med hög fetthalt, möjligen genom mitokondriell frånkoppling," Journal of Functional Foods, vol. 10, s. 292–304, 2014.

[7] Y. Jia, Q. Guan, Y. Jiang, et al., "Lättnad av dextransulfatnatrium-inducerad kolit hos möss genom echinacoside-berikat extrakt av Cistanche tubulosa," Phytotherapy Research, vol. 28, nr. 1, s. 110–119, 2014.

[8] Y. Leung, L. Li, T. Wen och Y.-Q. Li, "Skyddande effekter av echinacoside på koltetraklorid-inducerad levertoxicitet hos råttor," Toxicology, vol. 232, nr. 1-2, s. 50–56, 2007.

[9] JH Yang, JP Hu och NS Du, "Struktur-aktivitetsrelationer av fenyletanoidglykosider i växter av Cistanche salsa på antioxidativ aktivitet," Journal of Chinese Medicine, vol. 32, nr. 7, s. 1067–1069, 2009.

[10] XQ Han och YP Zhu, "Cistanche-polysackaridextraktionsprocess och forskning om bakteriostatisk verkan," J Anhui Agric Sci, vol. 37, nr. 32, s. 15855-15856, 2009.

[11] PF Tu, ZG Zhang och ZQ Lou, "Analysis of phenylethanoid glycosider of Cistanche by RP-HPLC," Acta Pharm Sin, vol. 32, nr. 4, s. 294–300, 1997.