Studie om neuroendokrin-immun funktion hos Cistanche Deserticola och dess risvinsångande produkter i glukokortikoid-inducerad råttmodell-Ⅱ

3.2.4. Immunhistokemi

Neuronal apoptos kontrolleras av många apoptotiska och antiapoptotiska gener, främst den apoptosfrämjande genen Bax och de antiapoptotiska generna i genfamiljen Bcl-2. Bcl-2 är lokaliserad i reaktiva syreproducerande organeller såsom mitokondrierna, endoplasmatiskt retikulum och kärnmembran. Bcl-2 har liten inverkan på fria syreradikaler men kanförhindra oxidativ skada i celler. Bax transporterar från cytoplasman till mitokondriella membranet, ändrar mitokondriella membranstruktur och främjar frisättningen av cytokrom c och induktion av apoptos.

NATURLIG CISTANCHE TUBULOSA FÖR ATT FÖRBÄTTRA SEXUELL FUNKTION PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Det fanns ett uttryck i binjurecytoplasman av Bax- och Bcl-2-protein. Färgningen visade alla gula partiklar. Jämfört med den för BC-gruppen ökade den genomsnittliga optiska densiteten för Bax-proteinet i MC-gruppen signifikant (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the average optical density in the CD-LD and WCD-LD groups decreased significantly (P < 0.01) (Figure 5(a)).

Figur 5(b) visar att jämfört med den för BC-gruppen, minskade den genomsnittliga optiska densiteten för Bcl-2-protein i MC-gruppen signifikant (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and CD-HD groups increased significantly (P < 0.01), while those of the WCD-MD and CD-MD groups increased (P < 0.05).

Caspas-3-proteinet är lokaliserat huvudsakligen i cytoplasman i sin ursprungliga form i normala vävnader och har lågt uttryck. Positiva signaler är ljusgula eller brungula. Jämfört med BC-gruppen ökade uttrycket av kaspas-3 i MC-gruppen signifikant (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the expression of caspase-3 in the WCD-HD and WCD-MD groups increased (P < 0.05) (Figure 5(c)).

I normala vävnader reducerades uttrycket av Fas-genen och den positiva signalen för hybridisering in situ var brungul. Som visas i figur 5(d), jämfört med den för BC-gruppen, ökade den genomsnittliga optiska densiteten för Fas-protein i MC-gruppen (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density in the WCD-HD and WCD-LD groups improved (P < 0.05) (Figure 5(d)).

FasL-proteinet finns huvudsakligen i cellmembranet eller cytoplasman och dess positiva signaler är bruna. Jämfört med den för BC-gruppen ökade den genomsnittliga optiska densiteten för FasL-genen i MC-gruppen signifikant (P< 0.05). Compared to that of the MC group, the average optical density of the FasL gene in the WCD-HD, WCD-MD, CDHD, and CD-MD groups increased significantly (P < 0.01) (Figure 5(e)).

Resultaten visade att CD och WCD kundeinducerar apoptos i inflammatoriska celleroch minska binjureskador genom att främja uttrycket av FasL-proteinet och binda till Fas-proteinet, aktivera kaspas-3-protein och utlösa en kaspaskaskad. Effekten av WCD-HD-gruppen var bäst.

3.3. Bestämning av immunfunktion

3.3.1. Immunorganindex

Jämfört med de för BC-gruppen minskade tymuskoefficienten och mjältindexet för MC-gruppen signifikant (P< 0.01). Compared to the MC group, the WCD-MD group had the greatest difference (P < 0.05). The thymus coefficient was almost back to the normal level. For the spleen index, the WCDMD, WCD-LD, and CD-MD groups showed significant differences compared with that of the MC group (P < 0.01) (see Figure 6). Therefore, WCD and CD treatment could protect the immune organs, and the effects of WCD were better.

NATURLIG CISTANCHE TUBULOSA FÖR ATT FÖRBÄTTRA SEXUELL FUNKTION PHGS75% ECH 30% ACT 12%

3.3.2. Detektion av T-lymfocytundergrupper i perifert blod

Andelen CD4+-celler i den övre vänstra kvadranten och CD8+-celler i den högra nedre kvadranten i BC och varje läkemedelsgrupp var högre än i MC-gruppen. Jämfört med BC-gruppen minskade förhållandet mellan CD4+ThCD8+ signifikant i MC-gruppen (P< 0.01). Compared to that of the MC group, the ratio of CD4+ThCD8+ increased significantly in the PC group, the WCD group, and the CD-HD group (P < 0.01) (Figure 7).

3.3.3. Bestämning av nivån av IL-10, IL-6, IL-2, TNF-Α och IFN-C i serum

Figur 8 visar att jämfört med BC-gruppen ökade nivån av IL-6, TNF- och IFN-c signifikant (P< 0.01). The level of IL-10 and IL-2 decreased in the MC group. Compared to that of the MC group, the level of IL-6, TNF-α, and IFN-c decreased and IL-10 and IL-2 increased in serum in each of the drug groups. The effect of WCD was better than the effect of CD, especially in the WCD-MD group, in which the effect was close to that of the PC group.

3.3.4. Resultat av Lymus Tissue Microscope Observation Experiment

Figur 9 visar att i BC-gruppen fanns ett stort antal lymfocyter närvarande. Lymfocyter och retikulocyter var löst anordnade i mitten med spridda runda eller ovala tymocyter. Det fanns ingen nekros, ingen inflammatorisk cellinfiltration och inga onormala förändringar.

MC-gruppen visade en stor mängd lymfoid nekrosvävnad, med ett oordnat arrangemang av lymfocyter och retikulocyter i centrum. Runda eller ovala tymocyter försvann, massiv celldegeneration eller nekros var uppenbar och det förekom inflammatorisk cellinfiltration med onormala patologiska förändringar.

I CD-grupperna hade de morfologiska egenskaperna hos lymfocyter återgått till det normala, och arrangemanget av centrala lymfocyter och retikulocyter var nästan normalt. Runda eller ovala tymocyter hade återhämtat sig, men ett litet antal degenerativa eller nekrotiska lymfocyter och infiltrerande inflammatoriska celler fanns kvar.

I WCD-grupperna och PC-gruppen reparerades de morfologiska egenskaperna hos lymfocyter bättre. Lymfocyterna och retikulocyterna i mitten var väl inriktade, de runda eller ovala tymocyterna var nästan normala, men det återstod ett litet antal infiltrerande och degenerativa lymfocyter.

3.4. CaM-proteingenuttryck

RQ-värde (CaM-mRNA-aktin-mRNA) ansågs undersöka uttrycket av CaM-mRNA. RQ för BC-gruppen var 1. Expressionen av CaM-mRNA i hypotalamus i MC-gruppen ökade signifikant (P< 0.01), while the value decreased in the WCD-HD, WCD-MD, WCDLD, and CD-HD groups (P < 0.05) (Figure 10). The expression of CaM mRNA in the hypophysis in the MC group was lower than that in the BC group (P < 0.01). The expression in the WCD-HD, WCD-MD, WCD-LD, CD-HD, and CD-LD groups increased (P < 0.05), and the effect in the WCD groups was better than the effect in the CD groups.

4. Diskussion

Den kinesiska farmakopén [2] visar att CD och WCD kan användas på kliniken som huvudtyper av avkoksbitar. Efter att ha ångats med risvin, denantiaging och tonifierande njur-yang-effekterförbättrades. Genom UPLC-QqQ-MS upptäckte vi de kvantitativa förändringarna i den kemiska materialbasen under processen med risvinsångning. Iridoidglykosider var instabila och innehållet av dessa glykosider minskade och blev till och med odetekterbart. Även innehållet av fenyletanolglykosider förändrades, vilket skulle kunna inducera förändringar i farmakodynamiken och den kliniska effekten.

NATURLIG CISTANCHE TUBULOSA FÖR ATT FÖRBÄTTRA SEXUELL FUNKTION PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Den klassiska njur-yang-bristmodellen replikerades genom subkutan injektion av kortikosteron [19]. Överdosering av kortikosteron kan hämma hemligheten av CRH i hypotalamus. Samtidigt hämmades också ACTHs hemlighet. Nivån av binjurebarkhormon minskade, och därmed minskade funktionen hos HPA-axeln. Hypofunktion av HPA-axeln är en vanlig egenskap hos njure-yang-brist [20]. Då visar råttorna "utarmningsfenomen" och symtomen överensstämmer med njur-yang-brist på kliniken.

I MC-gruppen minskade nivån av CRH, ACTH, T och CORT i råttserum signifikant (P< 0.01). After being treated by CD and WCD, the content of CRH, ACTH, T, CORT, and cortisol all increased to some degree, and the effect of WCD-MD was the best, almost equal to that in the PC group. These results indicated that the relative hormone balance in the HPA axis had been destroyed in the MC group, CD and WCD could improve the functional recovery of abnormal adrenal axis hormone levels, but the effect of WCD was better.

Modulering av andelen Bcl-2-familjemedlemmar är en av kärnmekanismerna genom vilka FasThFasL förmedlar dödsreceptorvägen, och Bcl-2-familjen reglerar den mitokondriella vägen [21]. Apoptoshämmande faktor Bcl-2 och apoptosinducerande faktorer, såsom Bax, tillhör alla familjen Bcl-2 [22]. Cellapoptos kan bestämmas av det relativa förhållandet mellan apoptoshämmande faktorer och apoptosinducerande faktorer [23]. Mitokondrier har funktionen som centrala kontrollpunkter för många former av apoptos [24]. Den aktuella studien visade att CD-MD och WCD kunde härleda uttrycket av Bax och öka Bcl-2 tillförbättra njur-yang-bristen. Fas är den huvudsakliga dödsreceptorn som inducerar apoptos genom ligering med Fas-liganden (FasL) [25]. Uttrycket av Fas och FasL i MC-gruppen ökade, medan detta uttryck ökade signifikant i WCD-MD-gruppen (P< 0.01) compared with the MC group. Both FasThFasL and BaxThBcl-2 systems transduce apoptotic signals to the caspase family [26]. Caspase-3 is one of the pivotal proteinases that initiate cell apoptosis. The activation of caspase-3 indicates that apoptosis enters an irreversible stage [27]. The expression of caspase-3 in the MC group increased and increased significantly in the WCD-HD and WCD-MD groups (P < 0.05).

Brist på immunfunktion är en av de viktiga manifestationerna av njur-yang-brist [28]. I denna studie fann vi att indexet för mjälten och tymus i WCD-MD-gruppen återhämtade sig signifikant (P< 0.01, P < 0.05). The immune response of the immune system is regulated mainly by the Th subgroups [29]. IL-2 is the growth factor for T cells, secreted by T cells and macrophages, participates in inflammatory regulation, regulates immunity, and increases infection resistance [30]. The level of IL-2 in the MC group decreased (P < 0.01), and after treatment with CD and WCD, the level of IL-2 recovered. IL-6 and TNF-α are proinflammatory cytokines. Increased levels of IL-6 and TNF-α cytokines cause cytokine imbalances and exacerbate inflammation. The levels of IL-6 and TNF-α increased in the MC group, while after treatment, the levels of IL-6 and TNF-α decreased. T cells are divided into CD4 cells and CD8 cells, and the CD4+ThCD8+ ratio can be used as an important index of immune regulation [31]. CD4+ThCD8+ in the MC group decreased (P < 0.01), while in the WCD and CDHD groups increased (P < 0.01).

HPA-axeln är det viktigaste regleringssystemet eftersom det reglerar glukokortikoidsekretionen och det endokrina systemet för att upprätthålla binjurebarkens sekretoriska funktion [32]. Överuttryck av CaM mRNA i hypotalamusvävnad var relaterat till brist på njuryang. CD och WCD kan blockera kalciumkanalerna, hämma CaM-mRNA-uttryck i hypotalamus och minska kalciuminflödet, vilket minskar Ca2+·CaM-komplexaktiviteten.

Bildandet av njur-yang-brist är en kronisk sjukdomsutvecklingsprocess. Njure är inte längre ett rent anatomiskt begrepp, och det är en allmän term för neuroendokrina-immunitet och genitourinära system. Neuroendokrina-immuna (NEI) nätverk är ett viktigt integrerat regelsystem [33]. CD och WCD kan reglera HPAT-axelns funktion och förbättra återhämtningen av njur-yang-brist. Detta resultat ger den experimentella grunden för klinisk förebyggande och behandling av njur-yang-brist.