Studie på fenyletanolglykosider i Cistanche Tubulosa

Abstrakt: Syfte: Att bekräfta fenyletanoidglykosiderna i medicinörten Cistanche deserticola (Xinjiang) och etablera en högpresterande vätskekromatografi (HPLC) metod för samtidig bestämning av fenyletanoidglykosider. Metod: ThermoSyncronis C18 kromatografikolonn (250mm) användes × ４．６ｍｍ,５ μ ｍ）; Acetonitril som mobil fas A, 0,1 procent fosforsyralösning som mobil fas B, gradienteluering (0-10min, 10 procent A{{10}} procent A; 10-20min, 15 procent A-18 procent A; 20-45min, 18 procent A-27 procent A); Flödeshastighet 1,0 ml/min; Kolumntemperatur 30 grader; Detektionsvåglängden är 330 nm; Injektionsvolym 10 μ Ｌ. Resultat: Cistanche deserticola innehåller sex fenyletanolglykosider, inklusive echinasid, antocyanin A, pilosid, isopilosid, 2'-acetylpilosid och antocyanin B, utan några andra fenyletanolglykosider; Den etablerade högpresterande vätskekromatografimetoden för separation av sex fenyletanolglykosider visade goda resultat, från 80.438 till 1287.000 mg/L, 7.552 till 120.834 mg/L, 28.144 till 450.318 mg/L. 865 till 301,840 mg/L respektive 1,100 till 17,593 mg/L. Det linjära sambandet är bra inom intervallet 0,382~6,113 mg/L (R2 större än eller lika med 0,9998); RSD för precision, stabilitet och repeterbarhet är mindre än 3,2 procent; Den genomsnittliga återvinningsgraden är mellan 97,19 procent och 102,51 procent, och metoden är korrekt och pålitlig. Slutsats: Cistanche deserticola (Xinjiang) innehåller sex fenyletanolaminglykosider, inklusive echinakosid, antocyanin A, poolside, isopilosid, 2'-acetylpilosid och antocyanin B. Den etablerade högpresterande vätskekromatografimetoden är enkel, snabb, exakt, och reproducerbar, kan samtidigt bestämma innehållet av sex fenyletanolaminglykosider i Cistanche deserticola. Detta kan ge en vetenskaplig grund för forskning och kontroll av kvaliteten på Cistanche deserticola.

Nyckelord: Tubular Cistanche; Fenyletanolglykosider; ＨＰＬＣ

Denna produkt är en torr köttig stjälk med fjällande blad från Cistanchetu hulosa (Schenk) Wish, en växt av familjen Orobaceae. Det har effekterna att tonifiera njurens yang, närande essens och blod och fuktar tarmarna för att lindra förstoppning. Det används för att behandla njurens yang-brist, brist på essens och blod, impotens och infertilitet, svag midja och knän, svaga muskler och skelett, och tarmtorrhet och förstoppning. Modern forskning har visat att de viktigaste kemiska komponenterna i medicinska örter i släktet Cistanche inkluderar fenyletanolaminglykosider, iridoider, lignaner, polysackarider, alkaloider, flyktiga oljor och andra komponenter [2]. Bland dem är fenyletanoidglykosider de viktigaste aktiva ingredienserna i Cistanche deserticola för dess anti-aging, anti-trötthet, tonifiering av njure och yang, anti-senil demens och andra farmakologiska effekter. Cistanche deserticola innehåller huvudsakligen echinacea, gangliosid A, poolside, isopilosid, krysotil, 2'- acetylglykosid, 2'-acetyl poolside, cistanche glykosid A, cistanche glykosid C Fenyletanolglykosider såsom antocyanin B] [3-7. Denna studie använde HPLC för att identifiera fenyletanolaminglykosider i Cistanche deserticola (Xinjiang) och etablerade en samtidig bestämningsmetod, som kan användas för att särskilja äktheten och kvaliteten hos Cistanche deserticola, vilket ger en vetenskaplig grund för kvalitetsforskning och kontroll av Cistanche deserticola.

Huvudkemiska beståndsdelar i Cistanche deserticola

1 Instrument, testläkemedel och prover

Kromatograf: Ultramate3000-seriens högpresterande vätskekromatografi (LPG 3400SDN kvaternär gradientpump, WPS-3000SL automatisk provtagare, TCC 3000RS kolonntemperaturlåda, VWD 3100-detektor); Kromatografisk kolumn: ThermoSyncronisC18 kolumn (4,6 mm × ２５０ｍｍ, ５ μ ｍ）; Elektronisk våg: 1/100000 elektronisk vågmodell är Sedoris SQP; Modellen för 1/10000 elektronisk våg är Sedoris SQP ;Rent vatten/ultrarent vatten integrerat system: PURELABClassicUV, ultrarent vattensystem.

Echinoside, den huvudsakliga kemiska komponenten i Cistanche deserticola

Echinoside: Lemaitian Pharmaceutical, batchnummer: DST191008-038, innehåll 99,9 procent ; Guanhua-glykosid A: ChemFace, batchnummer: CFN90669, innehåll 98 procent ; Maorui-blommaglykosid: FÖRSIKTIGHET, batchnummer PS011530, innehåll: 94,6 procent ; Isopilosid: ChemFace, batchnummer CFN97049, innehåll 98 procent; 2 '- Acetylpilosid: ChemFace, batchnummer: CFN92452, innehåll: 98 procent . Guanhua glykosid B: Greep, batchnummer: 20120903, innehåll 98,57 procent ; Acetonitril: Fisher kromatografiskt ren; Fosforsyra: Fisher, kromatografiskt ren; Metanol: Kinesisk medicin, analytisk ren.

Den medicinska örten av Guanhua Cistanche köptes från Xinjiang Heji Traditional Chinese Medicine Slice Co., Ltd., med sitt ursprung i Xinjiang. Det har identifierats som Guanhua Cistanche av både Xinjiang Heji Traditional Chinese Medicine Slice Co., Ltd. och Jinpai Zhengtang Pharmaceutical Co., Ltd.

2 Metoder och resultat

2.1 Kromatografiska förhållanden

Användning av oktadecylsilanbunden silikagel som fyllmedel (ThermoSyncronisC18); Med användning av acetonitril (A) -0.1 procent fosforsyralösning (B), gradienteluering (0-10min, 15 procent A → 18 procent A; 10-20min, 18 procent A → 2 0 procent A; 20-45min, 20 procent A → 27 procent A); Flödeshastighet 1,0 ml/min; Kolumntemperatur 30 grader; Detektionsvåglängden är 330 nm; Injektionsvolym 10 μ Ｌ. Kromatogrammet för testlösningen under detta kromatografiska tillstånd visas i figur 1.

Figur 1 Kromatografisk analys av testlösningen av Cistanche deserticola

2.2 Beredning av lösning

2.2.1 Beredning av testlösning

Ta ett prov på cirka 0.1g (siktas genom den 3:e sållen), väg det noggrant, tillsätt 20 ml 50 procent metanol, väg massan, blötlägg i 30 minuter, sonikera (500W, 53kHz) i 40 minuter, låt den svalna, väg massan igen, använd 50 procent metanol för att kompensera för den förlorade massan, skaka ordentligt och ta provet.

2.2.2 Beredning av referenslösning

Väg kontrollproverna av Echinacetin, Antocyanin A, Pilosid, Isopilosid, 2'-acetylpilosid och Antocyanin B noggrant och tillsätt 50 procent metanol för att erhålla koncentrationer på 1287.000mg/L, 120.834mg/L, 4005mg. /L, 301,840 mg/L respektive 17,593 mg/L, 6,113 mg/L blandad referenslösning erhålls. Kromatogrammet för referenslösningen visas i figur 2

Figur 2  6 Kromatogram över referenslösningar för 26 fenyletanoidglykosider

2.3 Bestämning av fenyletanoidglykosider i Cistanche deserticola (Xinjiang)

Förbered en referenslösning för fenyletanolaminglykosider såsom echinakosid, antocyanin A, antocyanin A, är antocyanin, antocyanin, 2'- acetylantocyanin, 2'-acetylantocyanin A, antocyanin C och antocyanin B, och samla in tre partier av prover av antocyanin. från Heji, Xinjiang (ursprung Xinjiang) sedan 2017, Förbered testlösningen enligt beredningsmetoden i "2.2.1", och analysera standardlösningen och testlösningen under de kromatografiska förhållandena "2.1". Resultaten visade att fördelningen av kromatografiska toppar i de tre satserna av Cistanche deserticola-prover var konsekvent. Genom att kombinera retentionstiden med absorptionskurvan för full våglängd för varje fenyletanolaminglykosidförening identifierades de kromatografiska topparna för proverna. Resultaten visade att alla tre satser av Cistanche deserticola-prover hade sex fenyletanolaminglykosider: echinakosid, antocyanin A, antocyanin, är antocyanin, 2'-acetylantocyanin och antocyanin B. Det finns inga andra kromatografiska toppar av fenyletanoider. Identifieringen av kromatografiska toppar visas i figur 3.

Huvudkemiska beståndsdelar i Cistanche deserticola

Klicka här för att se produkter från Cistanche

【Be om mer】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.4 Metodöversyn

2.4.1 Linjärt sambandsinspektion

Späd den blandade referenslösningen (1 #) under "2.2.2" 2 gånger, 4 gånger, 8 gånger och 16 gånger för att få referenslösning 2 # -5 #. Ta varje nivå av referenslösningen och analysera den enligt de kromatografiska förhållandena under "2.1". Använd koncentrationen av varje nivå av referenslösning som x-axel och topparean för varje nivå som y-axel för linjär regression. Resultaten visas i tabell 1, vilket indikerar ett bra linjärt samband mellan komponenterna inom det motsvarande linjära området.

Tabell 1  6 Linjära samband mellan fenyletanoidglykosider

Figur 3 Identifiering av kromatografiska toppar av fenyletanolglykosider i Cistanche deserticola

2.4.2 Precisionstest

Enligt beredningsmetoden för testlösningen i "2.2.1", förbered en portion av testlösningen och analysera den kontinuerligt sex gånger under de kromatografiska förhållandena i "2.1". Innehållet av echinakosid, antocyanin A, antocyanin, antocyanin, 2'-acetylantocyanin och antocyanin B i varje analys erhölls, med RSD-värden på 0,3 procent, 0,3 procent och 0.2 procent , respektive 0,1 procent , 1.0 procent , 3.1 procent , vilket indikerar god instrumentprecision.

2.4.3 Stabilitetstest

Enligt beredningsmetoden för "2.2.1"-testlösningen, förbered en portion av testlösningen och analysera 6 gånger under de kromatografiska förhållandena "2.1" vid 0, 2, 4.5, 1{{16 }}, 13,5 resp är {{20}},6 procent , 0,4 procent , 0,5 procent , 0,4 procent , 1,3 procent respektive 3,1 procent , vilket indikerar att testlösningen har god stabilitet inom 20 timmar.

2.4.4 Repeterbarhetstest

Enligt beredningsmetoden för "2.2.1" testlösning, förbered 6 prover av testlösningen och analysera dem under "2.1" kromatografiska förhållanden för att erhålla innehållet i varje analys av echinakosid, antocyanin A, antocyanin A, är antocyanin, 2'- acetylantocyanin B, och antocyanin B, med RSD-värden på 0,6 procent , {{10}},6 procent , 0,6 procent , 1,5 procent respektive 1,5 procent indikerar god repeterbarhet av denna metod.

2.4.5 Märkningsåtervinningstest

Ta ungefär {{0}},05 g av det kända innehållet i läkemedelspulver, väg det noggrant och väg parallellt 9 portioner. Tillsätt referenslösningar motsvarande 50 procent, 100 procent och 150 procent gånger innehållet av de 6 komponenterna som ska testas i det medicinska materialet, och förbered 3 portioner parallellt. Förbered testlösningen enligt "2.2.1"-metoden, analysera den under "2.1" kromatografiska förhållanden och beräkna utvinningsgraden för varje komponent. Resultaten visas i tabell 2, vilket indikerar att noggrannheten för denna metod är god . 2.5 Provinnehållsbestämning: Väg upp cirka 0,1 g av olika satser av medicinskt pulver (siktat genom sikt nr 3), väg noggrant, förbered testlösningen enligt metoden som beskrivs i "2.2.1", mät enligt de kromatografiska förhållanden som beskrivs i "2.1", registrera topparean och beräkna innehållet av sex fenyletanoidglykosider med hjälp av regressionsekvationen. Resultaten visas i tabell 3.

3 Diskussion

3.1 Bestämning av fenyletanoidglykosider

De tre satserna av Cistanche deserticola (Xinjiang) som testades innehåller alla sex fenyletanoidglykosider, nämligen echinakosid, antocyanin A, poolside, isopilosid, 2'-acetylpilosid och antocyanin B, och ingen av dem innehåller andra fenyletanolkomponenter. Detta indikerar att typerna av fenyletanolglykosider i Cistanche deserticola (Xinjiang) är relativt konsekventa, inklusive echinaside och pilosid. Innehållet av glykosider i Isomeria-blomman är högre än 1 procent.

Fenyletanolglykosid är den huvudsakliga aktiva komponenten i Cistanche deserticola

3.2 Optimering av utvinningsförhållanden

Detta experiment genomförde en enfaktorstudie på extraktionslösningsmedlet (10 procent ~90 procent metanol) och fastställde slutligen 50 procent metanol som det optimala lösningsmedlet; En enfaktorsundersökning utfördes på ultraljudsextraktionstiden (20-60 minuter), och det visade sig att 2'-acetyl vid poolen nådde en topp inom ultraljudsextraktionstiden på 30-40 minuter. Innehållet minskade dock efter 60 minuters ultraljud, och denna komponent kan skadas på grund av förlängd ultraljudstid. Med hänsyn till extraktionseffekterna av andra komponenter är ett ultraljud på 40 minuter den optimala extraktionstiden.

3.3 Optimering av kromatografiska förhållanden

Fullvåglängdsskanning (190-400nm) utfördes med användning av en dioduppsättningsdetektor, vilket indikerar att fullvåglängdsabsorptionskurvorna för de sex fenyletanoidglykosiderna överensstämde, med absorptionstoppar vid 195nm och 330nm. Låga våglängder påverkades allvarligt av absorptionsinterferensen från den mobila fasen och föroreningsbakgrunden, så 330 nm var den optimala absorptionsvåglängden. Separationseffekterna av olika kromatografiska kolonner undersöktes, och det visade sig att kromatografikolonnerna DiamonsilC18, AgilentZORBAXSB-AqC18 och ThermoSyncronis C18 kunde separera dessa sex fenyletanoidglykosider från testprovet av Cistanche deserticomatografiska kolumn, bland vilken Cstanche deserticomoS18, hade den bästa separationseffekten.

Tabell 2 Resultat av spiked recovery test

Tabell 3 Innehåll av 6 fenyletanolglykosider i Cistanche deserticola ( procent )

4. Slutsats

Detta experiment identifierade fenyletanolaminglykosiderna i Cistanche deserticola (Xinjiang) och etablerade en samtidig bestämningsmetod för innehållet av sex fenyletanolaminglykosider i Cistanche deserticola, inklusive echinasid, antocyanin A, antocyanin, isoantocyanin, antocyanin, B-antocyanin, B-antocyanin. Metoden är enkel, snabb, korrekt och har en dubbel roll i kvalitativ och kvantitativ analys, Detta ger analytiska metoder och vetenskaplig grund för att effektivt kontrollera kvaliteten på Cistanche deserticola.

Cistanche-extraktpulver

referens:

[1] National Pharmacopoeia Commission. Folkrepubliken Kinas farmakopé [M]. Peking: China Medical Science and Technology Press, 2020:140-141

[2] Wang Jia, Yang Wen, Wang Dong, et al. Jämförande studie av fyra arter av Cistanche deserticola baserat på HPLC-karaktäristiska spektra [J]. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2021, 41 (3): 384-393

[3] Ding Yanxia, ​​Wang Xiaoqin, Zhang Ying. Innehållsbestämning av sex huvudsakliga fenyletanolaminglykosider i medicinska örter av släktet Cistanche baserat på högpresterande vätskekromatografi [J]. Shi Zhen Guoyi Guoyao, 2020, 31 (4): 813-816

Xiong Hui, Liu Yuqi, Qu Wenjia, et al. HPLC karakteristiskt spektrum av Cistanche deserticola och bestämning av fem fenyletanolaminglykosider ［ J ］. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2019, 39 (2): 233-239

[5] Ma Zhiguo, Tan Yongxin. Förändringar av sex fenyletanoidglykosider i Cistanche deserticola vid olika tidpunkt för ångning [J]. traditionella kinesiska patentläkemedel och enkla preparat, 2011, 33 (11): 1951-1954

［ 6 ］ Ma Xueqin, Dong Yanhong, Guo Qi, et al. Bestämning av sex fenyletanolaminglykosider i Cistanche deserticola-örter genom ett test med flera utvärderingsmetod ［ J］. Shi Zhen Guoyi Guoyao, 2018, 29 (10): 2309-2312

[7] Liang Jiansong, Xue Cuili, Wu Menghua, et al. Bestämning av sex fenyletanolglykosider i Cistanche deserticola och Cistanche deserticola genom UPLC och kemometrisk utvärdering [J]. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2021, 41 (2): 226-235