Studie om de terapeutiska effekterna och mekanismerna hos monomerer från traditionell kinesisk medicin på en råttmodell av sen hypogonadism

 

Abstrakt

Mål
För att utvärdera de terapeutiska effekterna och mekanismerna hos tre monomerer för traditionell kinesisk medicin (TCM)icariin, verbascoside, ochginsenosid Rg1-påsen debuterande hypogonadism (LOH)i en råttmodell, och att utforska deras potential somnaturliga ingrepp för åldersrelaterad testosteronminskninghos medelålders män.

Metoder
En sen-debut hypogonadism (LOH) modell etablerades i åldrade mänSprague-Dawley råttorvia intraperitoneal injektion avcyklofosfamid, simulerar androgenbrist. Tre TCM-monomerer-icariin, verbascoside, ochginsenosid Rg1- administrerades oralt i 60 dagar.

Vid slutet av behandlingen mättes kroppsvikten och vikten av reproduktionsorgan (testiklar, bitestiklar, sädesblåsor, etc.).Histopatologiska förändringari testikelvävnad bedömdes med användning avhematoxylin-eosin (H&E) färgning. Serumnivåer avFSH, LH, ochtestosterontestades viaELISA. Uttrycket förandrogenreceptor (AR)protein och mRNA utvärderades med användning avWestern blotochkvantitativ realtids-PCR (qRT-PCR).

 

 

 

Resultat

Ginsenosid Rg1visade den mest betydande förbättringen ikroppsviktochreproduktionsorganens vikt(P < 0,01).

Icariinavsevärt ökat vikten avtestiklar, bitestikel, ochsädesblåsor(P < 0,01).

Verbascosidemåttligt förbättrad seminal vesikelvikt (P < 0,05).

Alla tre TCM-monomerer effektivtomvänd testikeldegenerationi LOH-råttor, återställande av seminiferous tubuli struktur och öka antaletspermatogena cellerochmogna spermier.

Alla monomergrupper visade förmågan attlägre FSH- och LH-nivåer i serummedanhöjer serumtestosteron. Deicariin gruppvisade de mest signifikanta endokrina förbättringarna (P < 0,01).

Uttrycksnivåer avandrogenreceptor (AR)i både protein och mRNA var signifikant uppreglerade i alla behandlade grupper. Effekten avicariinvarmer uttalad än testosteronpropionat, vilket indikerar astark reglerande effekt på AR-signalering.

 

Slutsats

Den här studien tyder på detginsenosid Rg1är mest effektiv för att förbättrakropps- och organvikti LOH-råttor, medanicariinvisar den starkaste effekten iöka testosteronproduktionenochförbättra AR-uttryck. Alla tre monomerer-icariin, verbascoside, ochginsenosid Rg1-demonstreradeskyddande effekter mot testikeldegenerationochstödja manlig reproduktiv endokrina funktion, erbjuder lovande naturliga alternativ för hantering avåldersrelaterad hypogonadism.

 

Nyckelord

Sen debuterande hypogonadism (LOH); Icariin; Verbascoside; ginsenosid Rgl; Traditionell kinesisk medicin; Naturlig testosteronbooster; Åldrande manligt syndrom; androgenreceptoruttryck; Örtterapi för manlig hälsa

Klicka på bilden för att lära dig mer om TCM-örten för sexuell hälsa

 

 

Bakgrund

Sen debuterande hypogonadism (LOH)hos medelålders och äldre män är nära förknippad medåldersrelaterad minskning av androgennivåerna, särskilt testosteron. En befolkningsbaserad epidemiologisk studie från 2021 genomförd i sex representativa provinser i Kina, som involverade6 296 män i åldern 40–79, avslöjade följande prevalensfrekvenser av LOH:

3.2%hos män i 50-årsåldern

11.2%i 60-årsåldern

24.0%i 70-årsåldern [1]

LOH kännetecknas avminskat serumtestosterontillsammans med en konstellation avsymtom på androgenbristsåsom:

Låg libido

Erektil dysfunktion

Depression och irritabilitet

Kognitiv försämring och minnesförlust

Dessa symtom kanavsevärt försämra det fysiska och psykiska välbefinnandet, liksomlivskvalitet [2–3].

För närvarande,testosteronersättningsterapi (TRT)är den vanliga behandlingen för LOH och kan tillfälligt lindra symtomen. Däremot oro överkardiovaskulär risk, prostatahälsa, ochlångsiktig säkerhetkvar [4]. Därför finns det ett växande intresse för att utforskanaturliga, säkrare alternativ, särskilt frånTraditionell kinesisk medicin (TCM).

Denna studie syftar till att utvärderaterapeutiska effekter och mekanismerav tre TCM-monomerer-icariin, verbascoside, ochginsenosid Rg1- med hjälp av enråttmodell av LOH.

 

1. Material och metoder

1.1 Försöksdjur

Sextio15 månader gamla Sprague-Dawley (SD) hanråttor(700–800 g) erhölls i januari 2022 från Animal Experimental Center of China Three Gorges University. Licensnummer:

Djurcertifikat: Nej. 42010200007997

Produktionslicens: SCXK (E) 2022-0012

Råttor hölls i en kontrollerad miljö (temperatur: 19–23 grader, relativ luftfuktighet: 55 %–65%), med en naturlig ljus-mörkercykel och fri tillgång till mat och vatten. Efter1 veckas acklimatisering, började experiment.

1.2 Reagens och instrument

Cyklofosfamid(Nanjing Jiancheng)

Icariin(Nanjing Guangrun Biotech)

Ginsenosid Rg1(Shanghai Macklin)

Verbascoside(Shanghai Zhenzhun Biotech)

AR-antikropp(Santa Cruz, USA)

-aktinantikropp(Sigma, USA)

H&E färgningssatser(Shanghai Yiji Industrial)

ELISA-kit för serum FSH, LH, testosteron(Shanghai Meilian)

qRT-PCR-reagens (SYBR Green I)(Shanghai Julu Biotech)

Instrument: Termomikroplattläsare, Olympus optiskt mikroskop, LI-COR Odyssey bildsystem, ABI qRT-PCR-maskin

 

1.3 Djurgruppering och LOH-modellinduktion

Råttor tilldelades slumpmässigt till6 grupper (n=10 per grupp):

Kontrollgrupp:

Intraperitoneal (ip) injektion av 0,9% saltlösning i 5 dagar

Oral koksaltlösning (1 ml/100 g) i 60 dagar

Modellgrupp:

ip cyklofosfamid 20 mg/kg/dag i 5 dagar

Följt av oral koksaltlösning i 60 dagar

Testosteronpropionat (positiv kontroll):

ip cyklofosfamid (samma som ovan)

Subkutan injektion av testosteronpropionat 5 mg/kg/dag i 7 dagar

Icariin grupp:

ip cyklofosfamid (samma)

Oral icariin 200 mg/kg/dag i 60 dagar

Verbascoside grupp:

ip cyklofosfamid (samma)

Oral verbascoside 200 mg/kg/dag i 60 dagar

Ginsenoside Rg1-grupp:

ip cyklofosfamid (samma)

Oral ginsenosid Rg1 200 mg/kg/dag i 60 dagar

Alla behandlingar administrerades mellan8.00–11.30. Bedömningar gjordes24 timmar efter den sista dosen.

 

1.4 Kroppsvikt och reproduktionsorganindex

Efter vägning avlivades råttor genom cervikal dislokation. Detestiklar, epididymis och sädesblåsordissekerades och vägdes.

Entestis från varje råttafixades in4% paraformaldehydi 72 timmar, dehydrerad med graderad alkohol, paraffininbäddad, sektionerad (5 μm) och färgad medHematoxylin-Eosin (H&E). Morfologiska förändringar observerades under ljusmikroskopi.

 

1.5 Serumhormonanalyser

Råttor sövdes med3% pentobarbitalnatrium, och blod samlades in viahjärtpunktion. Serum separerades avcentrifugering vid 3000 rpm under 10 min vid 4 grader. ELISA-kit användes för att mätaFSH, LH och testosteronnivåer enligt tillverkarens protokoll.

 

1.6 AR-proteinuttryck (Western Blot)

Testikelvävnad lyserades och proteinkoncentrationen mättes. Lika mängder protein löstes av10 % SDS-SIDA, överförs till PVDF-membran och inkuberades med primära antikroppar motARoch-aktin (1:1000)över natten. Sekundär antikroppsinkubation följdes av kemiluminescensdetektion.ImageJanvändes för analys.

 

1,7 AR mRNA-uttryck (qRT-PCR)

Totalt RNA extraherades från testikelvävnad. cDNA syntetiserades via omvänd transkription. qRT-PCR utfördes med SYBR Green-metoden.

AR primers:

Forward: 5′-CAGGGACCA CGTTTTACCCA-3′

Omvänd: 5′-TTCCCTTCCGCAGCTCTTTT-3′

-aktinprimers (intern kontroll):

Framåt: 5′-CCACCATGTACCCAGGCATT-3′

Omvänd: 5′-CGGACTCATCGTACTCCTGC-3′

Termisk cykling: 95 grader i 15 minuter (fördenaturering), följt av 40 cykler på 95 grader i 15 s och 60 grader i 1 min. Data analyserades med användning av2^-ΔACtmetod.

 

1.8 Statistisk analys

Data analyserades med användning avSPSS 26.0.

Resultat presenteras sommedelvärde ± standardavvikelse (x̄ ± s)

t-testanvändes för jämförelser mellan två grupper

Enkelriktad ANOVAanvändes för flera gruppjämförelser

P < 0,05ansågs statistiskt signifikant