Effekter av Xiaoyaosan på CAMP-signalvägen i hjärnbarken hos deprimerade råttor
Nov 26, 2025
Abstrakt
Mål:För att utvärdera förändringar i serumprostaglandin E2 (PGE2) och substans P (SP) och mRNA-uttrycket av cykliskt adenosinmonofosfat (cAMP) och cAMP-responselementbindande protein 1 (CREB1) i hjärnbarken hos deprimerade råttor, och att utforska den molekylära mekanismen genom vilken Xiaoya-depressiv effekt utövar.
Metoder: Fyrtioåtta SD-hanråttor tilldelades slumpmässigt i fyra grupper (n=12 vardera): normal, modell, Xiaoyaosan och fluoxetin. En depressionsmodell etablerades med hjälp av kronisk immobiliseringsstress (CIS). Xiaoyaosan administrerades genom sondmatning 30 minuter före daglig modellering under 21 dagar. Antidepressiva-liknande effekter utvärderades genom makroskopisk beteendeobservation, sackarospreferenstest, öppet fälttest och forcerat simtest. Kortikal cAMP och CREB1 mRNA-nivåer kvantifierades med realtidsfluorescens qPCR. Serum PGE2 och SP mättes med enzymkopplad immunosorbentanalys (ELISA).
Resultat: Jämfört med modellgruppen försvagade både Xiaoyaosan och fluoxetin signifikant depressionsliknande beteende; ökad sackaroskonsumtion, vertikala uppfödningsräkningar, horisontella korsningar och grooming i öppna fälttestet; och minskad kumulativ orörlighetstid i det forcerade simtestet. Båda behandlingarna förbättrade kortikal histopatologi, förhöjda cAMP- och CREB1-mRNA-uttryck i hjärnbarken och minskade PGE2- och SP-nivåer i serum (P < 0,01).
Slutsats:Xiaoyaosan utövar tydliga antidepressiva effekter på deprimerade råttor, potentiellt via reglering av den kortikala cAMP-signalvägen.
Nyckelord: Xiaoyaosan; Depression; läger; CREB1; prostaglandin E2 (PGE2); Ämne P (SP)
Introduktion
Depression är en ledande orsak till sjuklighet och funktionshinder över hela världen, vilket kraftigt försämrar livskvaliteten. Xiaoyaosan, en klassisk multi-ört traditionell kinesisk medicin (TCM) formel, har visat klinisk användbarhet över vanliga depressiva presentationer, vilket stödjer dess fortsatta utveckling som en botanisk terapi.
Mekanistiskt är cAMP-proteinkinas A (PKA) -CREB-signaleringskaskaden central för regleringen av humör och affektivt beteende. Nedreglering av denna väg kan utlösa depressiva fenotyper. CREB är inblandat i patofysiologin för depression, och aktivering av cAMP förbättrar transkriptionen av nedströms gener; polymorfismer och funktionella minskningar i denna axel har ansetts vara depressionskänslighetsfaktorer.
Inflammatoriska mediatorer bidrar också till depression. Prostaglandin E2 (PGE2) medierar inflammatoriska svar, och förhöjd PGE2 kan inducera depressiva beteenden. Substans P (SP), en neuropeptid kopplad till stress och affekt, är ofta förhöjd i serum hos patienter med depression. Således kan förändrat kortikalt cAMP- och CREB1-mRNA-uttryck tillsammans med förhöjt serum PGE2 och SP representera en molekylär mekanism som ligger bakom kortikal skada vid depression.
Även om många formler av TCM-föreningar har undersökts för antidepressiva mekanismer, förblir inflytandet av de flesta formler på cAMP-vägen oklart. Genom att använda ett paradigm för kronisk immobiliseringsstress (CIS) för att framkalla depressionsliknande beteende hos råttor, undersöker denna studie ytterligare den antidepressiva mekanismen hos Xiaoyaosan och jämför den med fluoxetin, i syfte att informera framtida utveckling av botaniska terapier och ge praktiska insikter för personer som söker hjälp för depression.
HUR TCM-ÖRTTILLSKOTT LITERAR PROSTATITSymtom
Material
Djur
Fyrtioåtta friska vuxna Sprague-Dawley-hanråttor av SPF-grad (8 veckor gamla, 200–220 g) köptes från Beijing Viton Lihua Experimental Animal Technology Co., Ltd. [Licensnr: SCXK (Beijing) 2016-0006]. Råttor hölls i barriärdjursanläggningen vid Guizhou University of Traditional Chinese Medicine vid 22 ± 2 grader, relativ luftfuktighet 35%–55%, 12 timmar ljus/12 timmar mörkt (7:00–19:00), fyra råttor per bur, med 7 dagars acklimatisering. Etikgodkännande: Guizhou University of TCM (Nr. 20210142).
HUR TCM-ÖRTTILLSKOTT LITERAR PROSTATITSymtom
TCM-ÖRTTILLSKOTT TILL SALU
Narkotika
Xiaoyaosan-formeln följde Taiping Huimin Heji Ju Fang-proportionerna. Råa örter köptes från Beijing Tongrentang (Bozhou) Decoction Pieces Co., Ltd.: Bupleurum (Chaihu), White Peony (Baishao), Angelica sinensis (Danggui), wokade Atractylodes (Baizhu), Poria (Fuling), Honungsstekt lakrits (Zhigansh (Bocao), i Menthagansh (Bocao), i kombinerad ett förhållande av 5:5:5:5:5:4:1:5. Avkoket och koncentrationen bereddes i enlighet med 2020 års upplaga av Folkrepubliken Kinas farmakopé av Hunan Jiuzhitang, som fungerade som TCM-intervention. Doserna omvandlades för råttor, löstes i avjoniserat vatten och bereddes som en suspension.
Fluoxetinhydrokloridkapslar (Patheon France; förpackade av Eli Lilly Suzhou Pharmaceutical Co., Ltd.; batch nr. 6663B; 20 mg/kapsel) användes som referensantidepressivt medel.
Reagens
ExTaq (TAKARA, Kat. DRR100A); SYBR Green/Fluorescein qPCR Master Mix (2×) (Fermentas, Kat. #K0242); primers (Qingke Bio); Rat PGE2 och SP ELISA kit (Shanghai Yuanju Biotechnology Center, Cat. CK-E30697 och CK-E30122).
Instrument
7900 fluorescens-qPCR-system i realtid (Applied Biosystems, USA); mikropipetter (Eppendorf); paraffinmikrotom (HY1508, Jinhua Huiyou); Aquapro ultrarent vattensystem (AJY-0501, Aikepu).
Metoder
Gruppering och modellering
Råttor tilldelades slumpmässigt till normal-, modell-, Xiaoyaosan- och fluoxetingrupper (n=12 vardera). Förutom den normala gruppen genomgick alla grupper CIS i 3 timmar/dag vid randomiserade tidpunkter under 21 dagar. Normala råttor var inte fasthållna utan fick mat- och vattenberövade under samma tidsfönster för att matcha hanteringen.
Läkemedelsadministration
Baserat på tidigare studier administrerades Xiaoyaosan genom sondmatning vid 2,22 g råläkemedel·kg−1·dag−1; fluoxetin vid 2,0 mg·kg−1·dag−1. Läkemedel löstes i avjoniserat vatten. Doserna beräknades genom omvandling av kroppsytan; sondmatningsvolymen var 10 ml/kg, givet 30 minuter före varje daglig fasthållningssession. Normal- och modellgrupper fick lika volymer avjoniserat vatten.
Resultatmått och rutiner
3.1 Makroskopiska observationer
Dagliga observationer registrerade mental status, rörelse och allmänt utseende.
3.2 Sackarospreferenstest
Råttor tränades i 3 dagar. Dag 1: två flaskor med 1 % sackaros per bur. Dag 2: en flaska ersätts med dubbeldestillerat vatten med lika stor volym. Efter 24 timmars mat- och vattenbrist fick varje råtta en flaska 1% sackaros och en dubbeldestillerat vatten under 1 timme. Flaskor vägdes för att beräkna sackarospreferens (%): sackarosintag / (sackaros + vattenintag) × 100%.
3.3 Öppet fälttest
Ett öppet fält med svart vägg (125 cm × 125 cm × 50 cm) användes i ett tyst rum. Råttor placerades i mitten; över 5 minuter registrerades vertikala uppfödningsräkningar, horisontella rutkorsningar och groominghändelser. Arenan städades med 75 % etanol och vatten mellan försöken.
3.4 Tvångssimprov
Råttorna placerades individuellt i glascylindrar med 35 cm vatten vid 20 ± 2 grader. Från nedsänkning registrerades beteende i 5 minuter med en högupplöst kamera. Kumulativ orörlighetstid över 5 minuter mättes (orörlighet definierad som minimal rörelse för att hålla näsan ovanför vattnet, lätt kroppsböjning för balans). Vatten byttes mellan djur.
3.5 Histopatologi
Råttor bedövades med 3% natriumpentobarbital (0,15 ml/100 g). Sex råttor per grupp genomgick transkardiell perfusion med 4 % paraformaldehyd följt av 0,9 % saltlösning för fixering, halshuggning och hjärnextraktion. Hjärnor nedsänktes i 4% paraformaldehyd (4 grader) i 72 timmar, paraffininbäddades, trimmades och sektionerades vid ~5 μm. Sektioner flöts vid 48 grader, monterades, gräddades vid 60 grader i 4 timmar, avparaffinerades och rehydrerades, färgades med hematoxylin, differentierades, sköljdes, motfärgades med eosin, dehydrerades, rensades och täckglas för mikroskopisk undersökning. De återstående sex råttorna per grupp avlivades; cerebral cortex dissekerades snabbt på is och lagrades vid -80 grader för RNA-extraktion.
3,6 mRNA kvantifiering
Målsekvenser hämtades från NCBI och primrar designades med Primer 6.0.
cAMP: Framåt 5′-CCGTGCTGTGGATGACTTCAACC-3′; Omvänd 5'-AGTCTCCTTCACTCGGAACCTCA-3'; 133 bp.
CREB1: Framåt 5′-GGAGCAGACAACCAGCAGAGTG-3′; Omvänd 5′-GGATACCTGGGCTAATGTGGCA-3′; 105 bp.
GAPDH: Framåt 5′-AGGGCTCATGACCACAGTC-3′; Omvänd 5′-GGATGCAGGGATGATGTTCT-3′; 116 bp.
qPCR-förhållanden: fördenaturering 90 grader i 30 s; 45 cykler på 95 grader 10 s, 60 grader 30 s, 72 grader 30 s. Smältkurvanalys: 95 grad 1 min, 55 grad 1 min, 95 grad 1 min.
3.7 Seruminflammatoriska faktorer
För ELISA: (i) Sätt standarder och prover; tillsätt 50 μL standarder i graderade koncentrationer till standardbrunnar; (ii) tillsätt 40 μL provspädningsmedel till blank- och provbrunnar, sedan 10 μL prov och blanda; (iii) tillsätt 100 μL enzymkonjugat till alla utom blankprov; (iv) försegla och inkubera vid 37 grader i 1 timme; (v) utspädd koncentrerad tvättbuffert 1:20; (vi) tvätta 5 gånger och torka; (vii) tillsätt 50 μL Substrat A sedan 50 μL Substrat B, inkubera vid 37 grader skyddat från ljus i 15 minuter; (viii) tillsätt stopplösning; (ix) avläs absorbansen vid 450 nm med ämnen inställda på noll.
Statistisk analys
Data analyserades i SPSS 26.0 och uttrycktes som medelvärde ± SD. Efter att ha bekräftat normalitet och varianshomogenitet användes envägs ANOVA. P < 0,05 ansågs vara statistiskt signifikant.
Läsanteckning för utövare och personer som söker hjälp
För utvecklare av botaniska/TCM-antidepressiva medel: Studien kopplar en klassisk formel till en specifik neurobiologisk väg (cAMP-CREB) och inflammatoriska mediatorer (PGE2, SP). Sådan dubbelmodulering-neuroplasticitetssignalering plus inflammation överensstämmer med modern depressionsbiologi och kan vägleda formeloptimering, biomarkörval och kombinationsstrategier med SSRI som fluoxetin.
För individer som utforskar hjälp för depression: Prekliniska resultat kan inte ersätta medicinsk vård, men de tyder på att Xiaoyaosan kan förbättra depressiva beteenden genom att normalisera hjärnans signalering och minska inflammatoriska signaler. Om du överväger växtbaserade alternativ, konsultera en kvalificerad läkare, särskilt om du använder antidepressiva medel, för att undvika interaktioner och säkerställa dosering och kvalitetskontroll.
Övergångs takeaway
Xiaoyaosan förbättrade beteende, hjärnhistologi och molekylära markörer hos CIS-inducerade deprimerade råttor, troligen via uppreglering av kortikal cAMP/CREB-signalering samtidigt som den sänkte perifer PGE2 och SP. Utifrån detta kommer nästa studie att dissekera uppströmsregulatorer av cAMP (t.ex. adenylylcyklasisoformer och fosfodiesteraser) och avgöra om Xiaoyaosan direkt modulerar dessa mål eller verkar primärt genom antiinflammatoriska vägar som konvergerar på CREB.
