Effekten av humusämnen i kosten på cellulär immunitet och blodegenskaper hos smågrisar

Abstrakt: Syftet med denna studie var att fastställa effekten av humusämnen i kosten på immunsvar och blodprofiler hos smågrisar. Totalt 24 korsningsgrisar (slovakisk vit × lantras; 35 dagar gammal; genomsnittlig kroppsvikt på 11,67 kg) tilldelades två dietgrupper med (experimentell; 5 g·kg−1 ) eller utan (kontroll; 0 g·kg−1 ) tillskott av naturliga humusämnen. I denna studie observerade vi en signifikant ökning av andelen CD4+CD8--lymfocyter (p < {{10}}.001) i experimentgruppen. Resultaten visade också en tendens till en ökning av den fagocytiska aktiviteten och uppslukningskapaciteten hos fagocyter och antalet andra övervakade lymfocytsubpopulationer (CD3+, CD21+, CD4-D 8+, CD4+CD8+, CD4+CD25+) hos smågrisar i experimentgruppen jämfört med kontrollgruppen. Tillskott av humussubstanser ökade alkaliskt fosfatas i serum jämfört med kontrollgruppen (p < 0,05). Andra övervakade blodparametrar påverkades inte signifikant av dietbehandling. Den drog slutsatsen att införandet av humusämnen i dieten av smågrisar kan ha en stimulerande effekt på cellulär immunitet, utan en negativ effekt på hematologiska och biokemiska parametrar.

Nyckelord: humusämnen; fagocytos; lymfocyt; blodbiokemi; hematologi; smågrisar

Cistanche tillägg fördelar-hur man stärker immunförsvaret

1. Introduktion

Humussubstanser (HS) är en klass av icke-närande naturliga organiska bioaktiva föreningar som bildas i jordar [1]. De är viktiga humuskomponenter vars primära funktion är att överföra näringsämnen från jorden till levande organismer. HS inkluderar specifikt humussyra, fulvinsyra och humin som deras huvudsakliga beståndsdelar [2]. Dessa komponenter är viktiga för växttillväxt [3] och kan främja ett effektivt utnyttjande av näringsämnen av växten [4]. På grund av förbudet mot användning av antibiotika som tillväxtfrämjare i EU har intresset för alternativa fodertillsatser för animalieproduktion ökat [5]. Under de senaste två decennierna har intresset för användning av HS i djurfoder ökat [2,6]. Många författare observerade en förbättring av produktionsparametrarna efter tillsats av HS i foder under sina studier. Under de senaste åren har det visat sig att HS som tillsätts i fodret till enmagade djur som svin, fjäderfä och kaniner främjar tillväxten [7–10]. Dessutom har HS använts som ett immunstimulerande, antidiarrémedel, smärtstillande och antimikrobiellt medel i veterinärmedicinska metoder [11–13]. Tillsatsen av biologiskt aktiva kosttillskott av humisk natur till djurens kost stimulerade metaboliska processer och smältbarheten av näringsämnen och aktiverade även absorptionen av vissa mineralelement [14]. Andra studier fann att HS hjälper till att minska ammoniakutsöndringen från gödsel och förbättrar det relativa antalet blodlymfocyter. Modifikationerna som nämns ovan hjälper djurens immunitet [2,8,15]. Men på grund av de olika källorna och typerna av HS-preparat, samt det faktum att det inte finns någon enskild standard för att mäta äkta HS-effekter, beror deras bioeffekt på specifikation. Baserat på våra tidigare resultat och erfarenheter från fjäderfästudier (broilers och värphöns) om effekten av humusämnen (i koncentrationer av 0,8 % respektive 0,5 %) på immunstatus och immunsvar beslutade vi att verifiera denna effekt hos smågrisar. Vi observerade en signifikant ökning av fagocytaktivitet och B-cellssvar, såväl som en signifikant ökning av CD4+:CD8+ lymfocytkvot [16,17]. Generellt sett har tillskott som fodertillsats hos grisar inte rapporterats väl jämfört med fjäderfä, och vetenskapliga studier om påverkan av HS-tillskott i grisars dieter på immunitet och ämnesomsättning är fortfarande relativt begränsade. Därför genomfördes denna studie, som ett pilotförsök, för att bedöma effekten av 0,5 % HS-tillskott på immunindikatorerna, såväl som biokemiska och hematologiska variabler i blodet hos smågrisar.

Cistanche tillägg fördelar-hur man stärker immunförsvaret

Klicka här för att se produkter från Cistanche Enhance Immunity

【Be om mer】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2. Material och metoder

2.1. Experimentell design

Experimentet utfördes i enlighet med "Europeiska direktivet om skydd av djur som används för vetenskapliga ändamål" [18]. Djuren hölls i ackrediterade stall vid institutionen för djurfoder och djurhållning vid universitetet för veterinärmedicin i Košice, Slovakien, under erforderliga zoohygieniska förhållanden. Under experimentet var medeltemperaturen i stallet 20,2 ± 1,5 ◦C, och den relativa luftfuktigheten var 68,5 ± 4,8%. Försöket godkändes av etikkommissionen vid University of Veterinary Medicine and Pharmacy i Košice (protokoll nr. EKV/2022-11). Totalt 24 korsade (slovakiska vita x lantras) 35-daggamla smågrisar delades in i två grupper (n=12; 50 % hanar och 50 % honor i båda grupperna). Före starten av experimentet registrerades en initial genomsnittlig djurkroppsvikt (BW) på 11,68 ± 1,35 kg i kontrollgruppen och 11,65 ± 1,34 kg i experimentgruppen. Följande försöksgrupper ingick i studien: kontrollgruppen och försöksgruppen, där försöksgruppens kost kompletterades med 0,5 % HS-tillskott. Experimentet varade i 4 veckor. Samma dieter för båda grupperna användes i experimentet (tabell 1). Införandet av HS-tillskottet i kosten genomfördes på bekostnad av korn i experimentgruppen. Grisarna utfodrades två gånger per dag med helfoderblandningar. Dricksvatten var tillgängligt för djuren ad libitum under hela försöksperioden. Helfoderblandningarna i experimentet formulerades enligt näringskraven av Šimeˇcek et al. [19]. Det naturliga kosttillskottet HS (HUMAC® Natur AFM; Humac, Ltd., Košice, Slovakien) maldes och renades fysiskt med Leonardite utan kemisk behandling. Helfoderblandningarna analyserades för torrsubstans, råprotein, råfiber, total aska, stärkelse och total fosfor enligt EG-kommissionens förordning 152/2009 [20]. Nivån av kalcium och natrium i kosten analyserades med användning av flammetoden för en atomabsorptionsspektrometer (Unicam Solar 939, Camberley, Surrey, Storbritannien). De metaboliserbara energivärdena för helfoderblandningar beräknades med formeln enligt Šimeˇcek et al. [19].

2.2. Provtagning och mätningar

I vecka 4, på morgonen den sista dagen av experimentet, togs blodprover genom orbital sinuspunktion från alla grisar individuellt i båda grupperna för efterföljande analys. Serum erhölls genom centrifugering (3000 rpm under 30 min) och lagrades vid -20 ◦C fram till analys. Hepariniserat blod användes för att bestämma hematologiska parametrar, testa fagocytaktivitet och identifiera lymfocytsubpopulationer.

Tabell 1. Formel och kemisk sammansättning av foderblandningar för grisar (som utfodrat).

2.2.1. Hematologiska och serumbiokemiska parametrar

En fullständig blodräkning utfördes med en automatisk hematologianalysator (scil Vet ABC™ Hematology Analyzer, Tyskland). Variablerna som utvärderades i vår studie var hematokritvärde (HCT), hemoglobinkoncentration (Hb), antal röda blodkroppar (RBC), genomsnittlig korpuskulär volym (MCV) och totalt antal vita blodkroppar (WBC). Serumbiokemiska parametrar - totalt protein, albumin, glukos, urea, triglycerider, kolesterol, kreatinin, aspartataminotransferas (AST), alkaliskt fosfatas (ALP) och fosfor mättes med hjälp av en helautomatisk direktåtkomstanalysator (Ellipse, Italien). Koncentrationen av kalcium i serum bestämdes med hjälp av en flamatomabsorptionsspektrometer (Unicam Solar 939, Camberley, Surrey, Storbritannien).

2.2.2. Biomarkör för lipidperoxidation

Koncentrationerna av lipidperoxidationsprodukter (malondialdehydnivåer, MDA) i serum mättes som tiobarbitursyrareaktiva substanser (TBAR) enligt den spektrofotometriska modifieringsmetod som beskrivs av Costa et al. [21]. I korthet blandades serumprover med en lösning bestående av triklorättiksyra (15 %; Merck, Darmstadt, Tyskland), tiobarbitursyra (0,38 %; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) och saltsyra (0.25 N; Mikrochem, Pezinok, Slovakien) och upphettas i 30 minuter i ett kokande vattenbad. Efter kylning i isvatten och centrifugering mättes supernatantens absorbans vid 535 nm. Koncentrationen av TBAR bestämdes från standardkurvan framställd med användning av 1,1,3,3-tetrametoxipropan (malondialdehyd-bis (dimetylacetal); Acros Organics, Geel, Belgien). Resultaten uttrycktes som nmol MDA/ml serum.

cistanche växthöjande immunförsvar

2.2.3. Fagocytaktivitetstestning och identifiering av lymfocytsubpopulationer

En kommersiell Phagotest®-analys (Celonic, München, Tyskland) användes för att bestämma den fagocytiska aktiviteten och uppslukningskapaciteten hos fagocyterna. Tillverkarens instruktioner följdes när testet utfördes. Direkt immunfärgningsanalys användes för att identifiera utvalda subpopulationer av lymfocyter. Två kombinationer av konjugerade mus anti-porcina monoklonala antikroppar: CD3e/CD21 och CD4/CD8a/CD25 användes enligt specifikationerna i tabell 2. Hepariniserat blod i mängden 50 µL inkuberades med monoklonala antikroppar i 15 minuter i mörker vid laboratorietemperatur. Efter inkubation sattes 1 ml BD FACS-lyslösning till rören. Rören inkuberades i ytterligare 20 minuter i mörker vid laboratorietemperatur och centrifugerades sedan (300 x g under 5 minuter). Cellpellets tvättades sedan och centrifugerades två gånger med 1 ml fosfatbuffertsaltlösning (PBS; MP Biomedicals, Illkirch-Graffenstaden, Frankrike) vid 300 x g under 5 min. Slutligen återsuspenderades celler i 200 µL PBS för efterföljande cytometrisk analys.

Tabell 2. Specifikation och mängder av använda mus anti-porcina monoklonala antikroppar.

Fagocytisk aktivitetsanalys såväl som identifieringen av lymfocytsubpopulationer utfördes på en sexfärgad BD FACSCantoTM flödescytometer (Becton Dickinson Biosciences, San Jose, CA, USA) med hjälp av BD FACS DivaTM programvara. Positionen för de analyserade cellerna var gated i FSC vs. SSC dot plots. Granulocyter, monocyter och båda cellpopulationerna tillsammans var respektive gated för analys av fagocytisk aktivitet. Baserat på det låga DNA-innehållet i det röda fluorescenshistogrammet (FL-2), uteslöts bakterieaggregat från ytterligare analys. Procentandelen aktiva fagocyter och medelfluorescensintensiteten bestämdes i det gröna fluorescenshistogrammet (FL-1). Gated lymfocyter (Figur la, b) användes för identifiering av lymfocytsubpopulationer. CD3+-lymfocyter representerar T-lymfocyter och CD21+ B-lymfocyter (Figur 1c). CD4+CD8--subpopulationen utvärderades som T-hjälparlymfocyter, CD4-CD8+ som cytotoxiska lymfocyter, CD4+CD8+ som dubbla positiva T-lymfocyter (Figur 1d) och CD4+CD25+ som regulatoriska T-lymfocyter (Figur 1e). Proportioner av lymfocyter uttrycks i procent.

2.3. Statistisk analys

Resultaten utvärderades statistiskt genom ett oparat t-test med statistisk programvara GraphPad Prism 8.0. Ett värde på p < 0.05 ansågs vara statistiskt signifikant. Resultaten som erhölls i detta experiment uttrycktes som medelvärde ± standardfel för medelvärdet (SEM).

Figur 1. Gatingstrategi: (a) bestämning av positionen för lymfocyter (röd) på den grundläggande punktdiagrammet (FSC-A mot SSC-A); (b) avlägsnande av dubbletter och agglomerat från analysen; (c) analys av representationen av CD3+- och CD21+-lymfocyter; (d) analys av representationen av CD4+- och CD8+-lymfocyter; (e) bestämning av representationen av CD4+CD25+-lymfocyter på histogram från CD4+-positiva celler (gärda med grönt).

3. Resultat

3.1. Hematologiska och serumbiokemiska parametrar

Effekterna av HS på hematologiska och biokemiska blodprofiler presenteras i tabell 3. De bestämda blodparametrarna inklusive innehållet av röda blodkroppar, vita blodkroppar, hemoglobin, hematokrit, medelkroppsvolym, totalt protein, albumin, glukos, urea, triglycerider , kolesterol, kreatinin, AST, Ca och P var opåverkade av dietbehandlingen med HS. Men kosttillskott med HS ökade aktiviteten av ALP (p < 0.05).

Tabell 3. Effekt av humusämnen på vissa hematologiska och serumbiokemiska parametrar hos smågrisar

Serum-TBAR-nivån, sekundära produkter av lipidperoxidation (som är en viktig parameter som används vid bestämning av lipidperoxidation), påverkades inte av tillsatsen av HS.

3.2. Cellulärt immunsvar

Tillsatsen av HS till smågrisarnas foder hade ingen signifikant effekt på andelen aktiva fagocyter (tabell 4) och uppslukningskapaciteten hos fagocyterna (tabell 5). De högre värdena för dessa medfödda immunsvarsparametrar hittades i experimentgruppen jämfört med kontrollgruppen.

Tabell 4. Effekt av humussubstanser på fagocytaktiviteten i smågrisars blod utvärderad som procent aktiva fagocyter - fagocytisk aktivitet

Tabell 5. Effekt av humussubstanser på uppslukningsförmågan hos fagocyterna uttryckt som medelfluorescensintensitet (MFI).

Figur 2. Forts.

Figur 2. Effekt av humussubstanser på procentandelen lymfocyter: (a) CD3+; (b) CD21+; (c) CD4+CD8-; (d) CD4-CD8+; (e) CD4+CD8+; (f) CD4+CD{{10}}; och (g) förhållandet mellan CD4:CD8-lymfocyter i blodet hos smågrisarna. Kolumnen märkt med en asterisk skiljer sig signifikant från kontrollen (*** p < 0,001).

4. Diskussion

4.1. Cellulärt immunsvar

Vår studies huvudsakliga mål var att spåra hur humussubstanser (HS) påverkade några olika cellulära immunitetsindikatorer. Andelen aktiva fagocyter och deras uppslukningskapacitet valdes ut som indikatorer för att övervaka effekten på medfödd cellulär immunitet. I vår tidigare studie fann man att tillsatsen av HS till dieter ({{0}}}.8%) av broilers signifikant ökade fagocytisk aktivitet såväl som genomsnittlig fluorescensintensitet [16]. Dessutom observerade ELnaggar och El-Kelawy [22] en ökning av fagocytisk aktivitet och fagocytiskt index efter humussyratillskott till kosten (0.1, 0.2 och 0. 4 %) Sacco-kycklingar. Liknande fynd erhölls med värphöns [17]. I den aktuella studien hade tillskottet av HS till dieten av smågrisar ingen signifikant effekt på fagocytos. Däremot var andelen aktiva fagocyter såväl som deras uppslukningskapacitet numeriskt högre hos smågrisar kompletterade med HS än hos smågrisar i kontrollgruppen. Enligt Sanmiguel och Rondón [23] är effekten av HS på fagocyter tidsberoende. De fann att tillskott av HS till dieter (0.1 och 0.2%) för värphöns ökade fagocytiskt index på dag 8 och 30 av appliceringen, men jämförde till de av Wang et al. [2], som fann att grisar vars foder hade 10% HS tillsatt, hade högre relativa lymfocytantal. Liknande resultat erhölls för fjäderfän, som fick en diet kompletterad med 0,15 % humat [24], eller kompletterades med 20 mg humussyra/kg kroppsvikt i dricksvatten [25]. Enligt Cetin et al. [24], tillskott av värphönsfoder med humusföreningar resulterar i en signifikant ökning av lymfocytantalet, vilket kan tillskrivas ökad produktion av IL-2, såväl som uttryck av IL{{29} } receptor på lymfocyter. Humusämnen verkar öka aktiviteten hos IL-2-producerande celler. Andra författare observerade dock inte någon signifikant effekt på antalet lymfocyter hos grisar som utfodrats med humussyratillsatt foder [26] samt hos kycklingar som fick humussyror i dricksvattnet [27] eller deras dieter [22] . Våra resultat liknar observationerna av Mudro ˇnová et al. [16], som fann att andelen CD4-lymfocyter ökade signifikant för slaktkycklingar som fick HS-tillskott (0,8%) jämfört med kontrollgruppen. De noterade också en signifikant minskning av CD8+-lymfocyter (T-cytotoxiska lymfocyter), vilket resulterade i ett statistiskt högre CD4:CD8-förhållande, vilket används som en markör för immunstimulering. Å andra sidan ökade utfodring av värphöns med en diet på 0,5 % HS signifikant andelen IgM+-lymfocyter som representerar en subpopulation av B-lymfocyter och minskade signifikant andelen CD3+-lymfocyter som representerar totala T-lymfocyter. Andelen T-hjälpare och T-cytotoxiska lymfocyter påverkades inte [17]. Baserat på våra resultat, såväl som olika studier, följer att HS kan ha en immunstimulerande effekt som kan påverkas av sammansättningen och mängden av använda humater, administreringssättet, djurarten och, enligt ELnaggar och El -Kelawy [22], genom uppfödning av djur i olika regioner i världen, olika i klimat. Immunmoduleringen av HS kan teoretiskt bestå av bildningen av komplex av humater med sackarider. Dessa komplex binder till ytan av T-lymfocyter och NK-celler och påverkar deras funktion, inklusive produktionen av cytokiner, som ytterligare påverkar andra celler i immunsystemet [28].

cistanche tubulosa-förbättra immunförsvaret

4.2. Hematologisk och serumbiokemisk parameter

Ett annat syfte med den här studien var att utvärdera utvalda hematologiska och biokemiska blodparametrar för smågrismatade dieter kompletterade med HS. Ingen signifikant skillnad i utvalda variabler för protein-, energi- och mineralmetabolism, såväl som i hematologiska index, hittades mellan den experimentella gruppen av djur med kosttillskott av HS och kontrollgruppen, förutom ALP-aktivitet i den aktuella studien. Biokemiska indikatorer i vår studie låg inom referensintervallet hos alla smågrisar, enligt Doubek et al. [29] och Kraft och Dürr [30]. Våra resultat är i linje med tidigare arbete av Wang et al. [2], som inte fann några signifikanta förändringar i de röda och vita blodkropparna under loppet av försöket i sin studie för att ta reda på effekterna av HS på blodvariabler hos slaktgrisar. Efter behandling med en HS-innehållande diet har Herzig et al. [31], och även Šamudovská och Demeterová [32], observerade icke-signifikant ökad ALP-aktivitet hos kycklingar. I vår undersökning fann vi att experimentgruppen hade signifikant högre ALP-aktivitet än kontrollgruppen. Deras värden höll sig under tiden inom referensintervallet för ALP-nivåer hos gris (2–17 kat·L −1 ) [29,30]. Å andra sidan, Jad'uttová et al. [33] och Rath et al. [34] noterade en signifikant minskning av ALP-aktivitet hos kycklingar efter utfodring med HS. Blodnivåerna av ALP i slaktkycklingar som gavs 1,00 % HS fodertillskott minskade, enligt dessa författare. Även om de minskade värdena för ALP-aktivitet i Rath et al. [34] studien var statistiskt annorlunda än kontrollerna, de återspeglade inte någon toxisk effekt av HS på selektiva organ (muskel, njure, hjärta eller lever). Mängden HS som kosten tillhandahåller kan påverka koncentrationen av mineraler i blodet. Halterna av kalcium och fosfor i smågrisarnas blodserum påverkades inte av administrering av HS i en koncentration av 0,5 %. Förmågan hos HS att kelera metaller, som påverkas av en betydande mängd karboxylsyrasidokedjor, kan vara orsaken till minskningen av mineralserumkoncentrationer [34]. I vår studie sänktes inte koncentrationerna av kalcium och fosfor i smågrisars blod under referensvärdena genom tillsats av HS till foderblandningen i försöksgruppen. MDA är produkten av lipidperoxidation orsakad av fria syreradikaler, som kan användas som en markör för att bedöma antioxidantstatus och lipidperoxidation [35]. MDA bestämdes som en biomarkör för oxidativ stress genom att mäta nivåerna av tiobarbitursyrareaktiva substanser (TBAR) i blodet. En minskning av oxidativ stress kännetecknas av en minskning av MDA-nivåerna. Tidigare forskning har visat att HS kan ha antioxidantegenskaper, vilket skyddar mot en mängd olika störningar kopplade till den oxidativa stress som fria radikaler vanligtvis orsakar. Till exempel, Wang et al. [15] fann att kosttillskott av natriumhumat (2000 mg·kg−1) kan förbättra antioxidantstatusen hos avvanda smågrisar. De observerade en signifikant minskning av innehållet av MDA i serumet, såväl som en signifikant ökning av den totala antioxidantkapaciteten. Men HS är naturliga material med varierande sammansättning, vilket kan orsaka olika effektivitet, vilket också kan bero på deras administrerade mängd. I det aktuella experimentet observerades ingen variation i serum-MDA (TBAR)-nivåer hos smågrisar som utfodrats med HS i jämförelse med kontrollgruppen. Våra resultat överensstämmer med Zhang et al. [36], som fann att tillsatsen av natriumhumat till dieterna (0,1, 0,3 och 0,5%) av värphöns inte hade någon effekt på serumets totala antioxidantkapacitet och MDA-värden.

Cistanche tillägg fördelar-hur man stärker immunförsvaret

5. Slutsatser

Baserat på resultaten från denna studie kan man dra slutsatsen att ett kosttillskott med 0,5 % humussubstanser kan ha en stimulerande effekt på vissa immunceller hos smågrisar. Det var en signifikant ökning av andelen CD4+CD8--lymfocyter i blodet. Tillskott med humusämnen ökade serum ALP. Dessa värden låg dock fortfarande inom referensintervallet. Resultaten visade att även en så låg koncentration av HS kan påverka cellimmuniteten positivt hos smågrisar. På grund av det faktum att koncentrationen av humusämnen vi valde endast hade en signifikant effekt på vissa indikatorer på cellulär immunitet, kommer ytterligare studier att vara nödvändiga för att välja en lämplig koncentration och bekräfta den stimulerande effekten på immuniteten hos denna kategori av djur.

Referenser

1. Peña-Méndez, EM; Havel, J.; Patoˇcka, J. Humussubstanser-föreningar av ännu okänd struktur: Tillämpningar inom jordbruk, industri, miljö och biomedicin. J. Appl. Biomed. 2005, 3, 13–24. [CrossRef]

2. Wang, Q.; Chen, YJ; Yoo, JS; Kim, HJ; Cho, JH; Kim, IH Effekter av extra humusämnen på tillväxtprestanda, blodegenskaper och köttkvalitet hos slaktgrisar. Livest. Sci. 2008, 117, 270–274. [CrossRef]

3. Visser, SA Effekt av humusämnen på högre djur och människa, möjlig användning av humusföreningar i medicinska behandlingar. I Proceedings of the International Humic Acid Society Meeting, Sevilla, Spanien, 1988; sid. 27.

4. Stevenson, FJ Humuskemi: Genesis, sammansättning, reaktioner; Wiley-Inter-Science: New York, NY, USA, 1994; s. 34–41.

5. Hassan, HMA; Mohamed, MA; Youssef, AW; Hassan, ER Effekten av att använda organiska syror för att ersätta antibiotiska tillväxtfrämjare på prestanda och tarmmikroflora hos broilers. Asien-Österrike. J. Anim. Sci. 2010, 23, 1348–1353. [CrossRef]

6. Gálik, B.; Hrnˇcár, C.; Gašparoviˇc, M.; Rolinec, M.; Hanušovský, O.; Juráˇcek, M.; Šimko, M.; Zábranský, L.; Kovacik, A. Effekten av humusämnen på köttkvaliteten vid gödning av gårdsfasaner (Phasianus colchicus). Jordbruk 2023, 13, 295. [CrossRef]

7. Karaoglu, M.; Macit, M.; Esenbuga, N.; Durdag, H.; Turgut, L.; Bilgin, OC Effekt av tilläggshumat på olika nivåer på slaktkycklingars tillväxtprestanda, slakt och slaktkroppsegenskaper. Int. J. Poult. Sci. 2004, 3, 406–410.

8. Ji, F.; McGlone, JJ; Kim, SW Effekter av humusämnen i kosten på grisens tillväxtprestanda, slaktkroppsegenskaper och ammoniakutsläpp. J. Anim. Sci. 2006, 84, 2482–2490. [CrossRef]

9. Lackova, Z.; Zigo, F.; Farkašová, Z.; Ondrašoviˇcová, S. Effekten av humusämnen som ett organiskt tillskott på gödningsprestanda, köttkvalitet och utvalda biokemiska parametrar hos kaniner. Life 2022, 12, 1016. [CrossRef]

10. Kaevska, M.; Lorencova, A.; Videnska, P.; Sedlar, K.; Provaznik, I.; Trckova, M. Effekt av natriumhumat och zinkoxid som används vid profylax av diarré efter avvänjning på fekal mikrobiotasammansättning hos avvanda smågrisar. Veterinär. Med. 2016, 61, 328–336. [CrossRef]

11. Trckova, M.; Matlova, L.; Hudcova, H.; Martin, F.; Zraly, Z.; Dvorska, L.; Beran, V.; Pavlik, I. Torv som fodertillskott för djur: En recension. Veterinär. Med. -Tjeckiska. 2005, 50, 361–377. [CrossRef]

12. Weber, TE; van Sambeek, DM; Gabler, NK; Kerr, BJ; Moreland, S.; Johal, S.; Edmonds, MS Effekter av dietary humus och smörsyra på tillväxtprestanda och svar på lipopolysackarid hos unga grisar. J. Anim. Sci. 2014, 92, 4172–4179. [CrossRef]

13. Mao, Y. Modulering av tillväxtprestanda, köttsammansättning, oxidativ status och immunitet hos broilers med fulvinsyror i kosten. Poult. Sci. 2019, 98, 4509–4513. [CrossRef] [PubMed]

14. Stepchenko, LM Humuspreparatens roll i hanteringen av metaboliska processer vid bildandet av biologiska produkter från jordbruksdjur. I Achievements and Prospects for Use of Humic Substances in Agriculture; Lantbruksinstitutets förlag: Dnepropetrovsk, Ukraina, 2008; s. 70–74. (På ryska)

15. Wang, Q.; Ying, J.; Zou, P.; Zhou, Y.; Wang, B.; Yu, D.; Li, W.; Zhan, X. Effekter av kosttillskott av humussyranatrium och zinkoxid på tillväxtprestanda, immunstatus och antioxidantkapacitet hos avvanda smågrisar. Djur 2020, 10, 2104. [CrossRef] [PubMed]

16. Mudro ˇnová, D.; Karaffová, V.; Pešulová, T.; Košˇcová, J.; Marušˇcáková, IC; Bartkovský, M.; Marcinˇcáková, D.; Ševˇcíková, Z.; Marcinˇcák, S. Effekten av humusämnen på tarmmikrobiota och immunsvar hos broilers. Food Agric. Immunol. 2020, 31, 137–149. [CrossRef]

17. Mudro ˇnová, D.; Karaffová, V.; Semjon, B.; Nad', P.; Košˇcová, J.; Bartkovský, M.; Makiš, A.; Buj ˇnák, L.; Nagy, J.; Mojžišová, J.; et al. Effekter av kosttillskott av humusämnen på produktionsparametrar, immunstatus och tarmmikrobiota hos värphöns. Jordbruk 2021, 11, 744. [CrossRef]

18. Europeiska kommissionen. Europaparlamentets och rådets direktiv 2010/63/EU av den 22 september 2010 om skydd av djur som används för vetenskapliga ändamål. Av. J. Eur. Unionen 2010, 276, 33–79.

19. Šimeˇcek, K.; Zeman, L.; Heger, J. Näringsbehov och tabeller över näringsvärden för grisfoder, 3:e uppl.; Tjeckiska akademin för jordbruksvetenskap: Brno, Tjeckien, 2000; 125p. (på tjeckiska)

20. Europeiska kommissionen. Kommissionens förordning (EG) nr 152/2009 av den 27 januari 2009 om fastställande av metoder för provtagning och analys för den officiella kontrollen av foder. Av. J. Eur. Union. 2009, 54, 2–54.

21. Costa, CM; Santos, RCC; Lima, ES En enkel automatiserad procedur för tiolmätning i humana serumprover. J. Bras. Patol. Med. Labb. 2006, 42, 345–350. [CrossRef]

22. ELnaggar, AS; El-Kelawy, MI Effekten av humussyratillskott på produktiv prestanda, blodbeståndsdelar, immunsvar och slaktkroppsegenskaper hos Sasso-kyckling. Egypten. J. Anim. Driva. 2018, 55, 75–84.

23. Sanmiguel, PR; Rondón, BI Tillskott med humusämnen påverkar den medfödda immuniteten hos lagerhöns i pos-fastefasen. Rev. MVZ Córdoba 2016, 21, 5198–5210. [CrossRef]

24. Cetin, E.; Guclu, BK; Cetin, N. Effekt av kosttillskott av humat och organisk syra på social stress inducerad av hög beläggningstäthet hos värphöns. J. Anim. Veterinär. Adv. 2011, 10, 2402–2407.

25. Salah, H.; Mansour, E.; Reham, RR; Abd El Hamid, ES Studie om effekten av humussyra på tillväxtprestanda, immunologiska, vissa blodparametrar och kontroll av intestinal Clostridium hos slaktkycklingar. Zag. Veterinär. J. 2015, 43, 102–109. [CrossRef]

26. Kim, K.; Bae, I.; Cho, J.; Choi, Y.; Ha, J.; Choi, J. Effekter av tillskott av humussyra och blåbärsbladspulver i foder på produktiviteten, blod- och köttkvaliteten hos slaktgrisar. Food Sci. Anim. Resur. 2019, 39, 276–285. [CrossRef] [PubMed]

27. Lala, AO; Okwelum, N.; Irekhore, OT; Ogunlade, BA; Adigun, AA; Elegbede, LA; Oyedeji, MM Hematologiska och biokemiska parametrar för slaktkyckling kompletterad med humussyra i dricksvattnet. Appl. Trop. Agric. 2016, 21, 74–78.

28. Terratol, LLC Effekter av humussyra på djur och människor. Tillgängligt online: https://fulvic.info/wp-content/uploads/2019 /01/M-Terratrol_Article-1.pdf (tillgänglig den 10 augusti 2022).

29. Doubek, J.; Šlosárková, S.; ˇReháková, K.; Bouda, J.; Scheer, P.; Piperisová, I.; Tomenendálová, J.; Matalová, E. Tolkning av grundläggande biokemiska och hematologiska fynd hos djur, 2:a upplagan; Noviko: Brno, Tjeckien, 2010; sid. 102. (på tjeckiska)

30. Kraft, W.; Dürr, UM Klinická Laboratórna Diagnostika vo Veterinárnej Medicine, 1st ed.; Hajko & Hajková: Bratislava, Slovakien, 2001; s. 1–380. (på slovakiska)

31. Herzig, I.; Navrátilová, M.; Totušek, J.; Suchý, P.; Veˇcerek, V.; Blahová, J.; Zralý, Z. Effekten av humussyra på zinkackumulering i kycklingbroilervävnader. Tjeckiska J. Anim. Sci. 2009, 54, 121–127. [CrossRef]

32. Šamudovská, A.; Demeterová, M. Effekten av kost kompletterad med naturliga humusföreningar och natriumhumat på prestanda och utvalda metabola variabler hos slaktkycklingar. Acta Vet. Brno 2010, 79, 385–393. [CrossRef]

33. Jad'uttová, I.; Marcinˇcáková, D.; Bartkovský, M.; Semjon, B.; Harˇcárová, M.; Nagyová, A.; Váczi, P.; Marcinˇcák, S. Effekten av humusämnen i kosten på gödningsprestanda, slaktavkastning, blodbiokemiparametrar och benmineralprofil hos slaktkycklingar. Acta Vet. Brno 2019, 88, 307–313. [CrossRef]

34. Rath, NC; Huff, VI; Huff, GR Effekter av humussyra på slaktkycklingar. Poult. Sci. 2006, 85, 410–414. [CrossRef]

35. Sumida, S.; Tanaka, K.; Kitao, H.; Nakadomo, F. Träningsinducerad lipidperoxidation och läckage av enzymer före och efter vitamin E-tillskott. Int. J. Biochem. 1989, 21, 835-838. [CrossRef]

36. Zhang, AR; Pirzado, SA; Liu, GH; Chen, ZM; Chang, WH; Cai, HY; Bryden, WL; Zheng, AJ Kosttillskott med natriumhumat förbättrar äggkvaliteten och immunfunktionen hos värphöns. J. Appl. Anim. Nutr. 2020, 8, 93–99. [CrossRef]