Effekterna av Cistanche Shenqiwan på njurskador, GRP78 och autofagirelaterade faktorer hos Zucker-diabetes feta råttor med typ 2-diabetes mellitus

mängd normal saltlösning. Råttor administrerades kontinuerligt under 4 veckor. Det allmänna tillståndet hos råttor observerades regelbundet. Nivåerna av fasteblodsocker (FBG) och 24-timmars mikroalbumin i urin (24 timmar U-mAlb) mättes. Njurvävnad färgades och morfologi observerades. Ultramikrostrukturen observerades genom transmissionselektronmikroskopi. mRNA-nivåerna av GRP78, Beclin-1 och LC3 i njurvävnad från råtta undersöktes med realtids-PCR och proteinnivåerna undersöktes med Western blotting. Resultat Jämfört med modellgruppen visade råttor i Shenqiwan-gruppen

förbättrad pälsglans, mer viktökning och mer aktivitet; både FBG och 24 timmars U-mAlb-nivåer minskade (P < 0.05). Denjurarav råttor i modellgruppen visadevidgade glomerulära kapillärer, oregelbundet förtjockade basalmembran, vidgade mesangiala områden och segmentell skleros; renal tubulär atrofi och renal interstitiell fibrös vävnad observerades också i dessa njurar. Dessa patologiska förändringar lindrades i Shenqiwan-gruppen. Jämfört med modellgruppen minskade både gen- och proteinnivåer av GRP78 (P < 0.05) i Shenqiwan-gruppen; proteinnivån i Beclin-1

minskade (P < {{0}}.05); och proteinnivån av LC3 ökade (P < 0,05). Slutsats Shenqiwan kan lindra njurskador hos ZDF-råttor och fördröja utvecklingen av diabetisk njursjukdom genom att minska endoplasmatisk retikulumstress och förstärka autofagi.

 

Nyckelord: Shenqiwan;typ 2 diabetes mellitus; diabetisk njursjukdom; endoplasmatisk retikulumstress;autofagi; GRP78; Zucker-diabetiska feta råttor

Klicka här för att veta mer information om Cistanche-produkter för behandling av diabetisk njursjukdom

BE OM MER INFORMATION:

wallence.suen@wecistanche.com 0015292862950

 

 

Diabetisk njursjukdom(DKD) är en viktig mikrovaskulär komplikation avdiabetes mellitusoch en viktig orsak tillnjursjukdom i slutskedet[1]. DKD är en viktigmikrovaskulär komplikation av diabetesochen viktig orsak till njursjukdom i slutstadiet[1]. Patienter med DKD kan uppvisa ihållande proteinuri och ihållande reduceradglomerulär filtrationshastighet[2]. Depatogenes av DKDär komplex, och nyare studier har visat att endoplasmatisk retikulumstress (ERS) i njurarna är den vanligaste orsaken till njursjukdom i slutstadiet. （Endoplasmatisk retikulumstress (ERS) och autofagi är också nära besläktade med DKD, och studiet av deras patogenes kan vara viktigt för behandlingen av DKD. DKD liknar mer "lägre utsläckning" i kategorin törststörningar inom kinesisk medicin.
De typiska symtomen på törst och överdrivet drickande och urinering finns registrerade i Jin Kui Yao (Essentials of the Golden Horoscope), ochNjure Qi-pillerföreslås som den huvudsakliga terapeutiska formeln. Jin Kui Yao (金匮要略) registrerade de typiska symtomen på törst och överdriven urinering och föreslogNjure Qi-pillersom den huvudsakliga behandlingsformeln. Behandlingen av DKD med TCM kan verkligen effektivt skydda njurfunktionen och har säkra och pålitliga egenskaper [5-6]. Behandlingen av DKD med kinesisk medicin kan effektivt skydda njurfunktionen och har säkra och pålitliga egenskaper [5-6]. Effekten av Kidney Qi Pill för att tonifiera njuren och hjälpa Yang har bekräftats i relaterade studier [7]. Vår tidigare studie också Vår tidigare studie visade också att njur-qi-piller har goda skyddande effekter på strukturen och funktionen av njurvävnad hos diabetiska möss [8]. I den aktuella studien observerade vi effekterna av njur-qi-piller på I den här studien observerade vi effekterna av njur-qi-piller på njurvävnadsskada, ERS och autofagi-associerade faktorer i Zucker diabetisk fet råtta (ZDF). I denna studie undersökte vi de möjliga mekanismerna för njurskador hos ZDF-råttor genom att observera effekterna av njur-qi-piller pånjurvävnadsskadaERS och autofagi-relaterade faktorer medierade av njur-qi-piller.

1 Material
1.1 Försöksdjur
Tjugo 12-veckogamla ZDF-hanråttor med SPF (kroppsmassa 390-410 g, matade med 5C08 högkvalitativ gnagarmat i 4 veckor för att fullborda induktion av typ 2-diabetes) och sju 12-veckor- gamla SPF Zucker Lean (ZL) hanråttor (kroppsmassa 350-380 g) köptes från Beijing Viton Lehua Laboratory Animal Technology Co. Alla råttor hölls i barriärmiljön vid Institute of Clinical Medicine, China-Japan Friendship Hospital , licensnummer: SYXK (Beijing) 2016-0043, och plattformen tillhandahöll ett oberoende ventilationssystem inuti barriären, som bibehöll en 12-h växling av ljus och mörker, en rumstemperatur på 23-25 grader , och en relativ luftfuktighet i rummet på 50 procent -60 procent . Alla råttor fick dricka och äta fritt under matningsperioden.

1.2 Etikprövning
Djurförsöken godkändes av underkommittén för experimentell djuretik vid den akademiska kommittén vid Beijings universitet för traditionell kinesisk medicin (BUCM) med godkännandenumret BUCM-4-2021102801-4034.
1.3 Huvuddroger och reagenser
Tabletterna (Shu Di Huang, Shan Yu Fei, Shan Yao, Mudan Pi, Fu Ling,Cistanche, Ze Xie, Gunner's Fructus, Gui Zhi) för avkok avNjure QiPiller köptes från Beijing Tong Ren Tang Co. Fysiologisk koksaltlösning, specifikation: 500 mL, tillhandahållen av Shandong Hualu Pharmaceutical Co. Silverfärgningslösning (Beijing Regen Biotechnology Co., Ltd., partinummer DG0090), Magic SYBR Mixture (Jiangsu Kangwei) Century Biotechnology Co., Ltd.), mRNA Reverse Transcription Kit (Thermo Fisher Scientific, Inc.), RNA TRIzol-reagens (RNA TRIzol-reagens), RNA TRIzol-reagens (RNA TRIzol-reagens). RNA TRIzol Reagent (Beijing Solabao Technology Co., Ltd.), Rat Urine Microalbumin ELISA Kit (Jiangsu Kote Biotechnology Co., Ltd., Lot No. KT8560-A), GRP78 BiP Antibody, LC3B Antibody and Beclin{ {5}} Antikropp (Abcam, Storbritannien) (batchnummer: ab108613, ab192890, ab207612), kanin-anti-GAPDH polyklonal antikropp (Proteintech, USA), get-anti-kanin IgG(H&L)-HRP (Beijing Baiao Yijie Technology Co. Ltd.).

 

Blodsockermätare, blodsockertestremsor (Shanghai Roche Diagnostic Products Co. Ltd.), lågtemperatur höghastighetscentrifug (Eppendorf, Tyskland), fluorescenskvantitativt PCR-instrument, dubbelt vertikalt elektroforesinstrument och överföringselektroforesinstrument (Burroughs Life Medical Products Co. Ltd.), gelbildapparat (Protein Simple, USA), ljusmikroskop (Leica, Tyskland), transmissionselektronmikroskop (Leica, Tyskland) och gelbildapparat. (Leica, Tyskland), transmissionselektronmikroskop (Hitachi, Japan).

2 metoder
2.1 Beredning av experimentella läkemedel
Avkoket avNjur-Qi-pillerframställdes genom att konvertera dosen av Kidney-Qi-piller i Jin Kui Yao [9] enligt de gamla och moderna förhållandena i Han-systemet för metrologi i den första upplagan av "Study on the Dose and Proportion of Typhoid Prescriptions" [2015] ], och den dos av avkoket som krävdes för experimentet var följande: Shu Di Huang 24 g, Shan Yu Fei 12 g,Cistanche10 g, Shan Yao 12 g, Mudan Pi 9 g, Fu Ling 9 g, Ze Xie 9 g, Gunnera 3 g och Gui Zhi 3 g. Läkemedlen blötlades i destillerat vatten i 2 timmar. Avkoket koncentrerades sedan under 30 minuter och filtrerades genom steril gasväv. Avkoka örterna i 30 minuter, tillsätt sedan de återstående drogerna och avkoka i 1 timme. Efter att temperaturen på lösningen har sänkts till rumstemperatur koncentreras lösningen och filtreras genom steril gasväv, och filtratet packas och förvaras vid -20 grader. Läkemedlet bör förvaras i högst 1 vecka, och lösningen bör bringas till rumstemperatur före administrering.

2.2 Etablering och gruppering av djurmodeller
ZDF-råttorna inducerades med 5C08 diet med hög fetthalt under 4 veckor, och blodsockret mättes genom bloduppsamling i svansen vid 12 veckors ålder. Råttorna i gruppen med njur-qi-piller fick vattenhaltigt avkok av njur-qi-piller, och den dagliga dosen på 8,12 g/kg per råtta beräknades enligt formeln i "Sjukdomsmodeller i försöksdjur" [10] och doseringskoncentrationen var 0,812 g/ml, och råttorna i modell- och kontrollgrupperna fick koksaltlösning i motsvarande volym under 4 veckor.

2.3 Allmänt tillstånd och test av fasteblodsocker (FBG) hos råttor
Råttornas allmänna tillstånd observerades och registrerades dagligen och kroppsmassorna vägdes regelbundet. I slutet av 12 veckors och 16 veckors ålder samlades blod från svansspetsen på råttor efter 8 timmars fasta, och FBG mättes med Roches blodsockermätare och teststickor. 2.4 24-h urinmikroalbumin (24-h U-mAlb) mättes i slutet av 16 veckors ålder, och 24-h U-mAlb-koncentrationen mättes enligt instruktionerna av LISA kit.

2.5 Provtagning av njurvävnad
I slutet av 16 veckors ålder fastade alla råttor i 8 timmar. Efter anestesi öppnades bukhålan och de bilaterala njurarna exponerades och bukhinnan avlägsnades intakt och skalades av. Njurbarken separerades och fixerades delvis i 4 procent paraformaldehyd för beredning av 3 μm paraffinsnitt; delvis skuren i 1 mm3 vävnadsblock och fixerad i 2,5 procent glutaraldehyd för beredning av ultratunna snitt. De återstående njurvävnaderna lagrades i -80 grad för Realtime PCR och Western blotting-analyser.

 

2.6 Tillämpning av morfologisk observation av njurvävnad
PAS-färgning, Masson-färgning och hexaammonium-silver-hematoxylin-eosin-färgning användes för att observeranjurhistopatologiska förändringarunder ett ljusmikroskop och för att ta bilder. Transmissionselektronmikroskopi användes för att observera de ultrastrukturella förändringarna av njurvävnad och bilder samlades in.

 

2.7 PCR-analys i realtid
Frystanjurvävnadermaldes på is och TRIzol-reagens tillsattes för att extrahera totalt RNA och centrifugerades vid 4 grader med en radie av 9,5 cm. Supernatanten extraherades genom centrifugering vid 12 000 r/min under 10 min och centrifugerades sedan under 15 min med kloroform. Supernatanten centrifugerades igen under 15 minuter vid rumstemperatur under 10 minuter, och supernatanten tvättades med 75 % etanol. uttryck på mRNA-nivå. Primerna designades med användning av Primer Premier 5.0-mjukvara och syntetiserades av Shanghai Bioengineering Co. Ltd. Primersekvenserna är följande.