Skyddande effekter av echinakosid på diabetisk nefropati

För mer information:ali.ma@wecistanche.com

Skyddseffekter av echinakosid från cistanche på njurfunktion, njurvävnad och mesangial cellskada hos råttor med diabetisk nefropati

He Qin, Liu Fan, Wang Hongli, Li Jianping, Duan Jun (Department of Cadre Medical Care, Caotang Ward, Sichuan Academy of Medical Sciences, Sichuan Provincial People's Hospital, Chengdu, Sichuan)

Nyckelord: Cistanche; echinakosid;Cistanche extrakt,Diabetisk nefropati; renal interstitiell fibros; apoptos; råtta

Diabetikernefropati(DN) är en vanligdiabetikermikrovaskulär komplikation, som inte bara kan orsaka njurskador utan även påverka andra organ. Renal tubulointerstitiell fibros är den huvudsakliga patologiska egenskapen i klinisk [1]. Patogenesen avDiabetisk nefropatiär komplicerat. Tidigare studier [2-3] trodde att sjukdomen främst orsakades av hyperglykemi idiabetikerpatienter, vilket orsakade njurhemodynamiska förändringar och onormal metabolism. De kliniska manifestationerna var proteinuri och minskad glomerulär filtrationshastighet. Vänta. För närvarande patienter medDiabetisk nefropatifortfarande saknar effektiva kliniska behandlingsmetoder och att hitta nya effektiva läkemedel är nyckeln till behandlingen avDiabetisk nefropati.

Echinacoside(ECH) är ett av utdragen avCistanchetubulosa, som har effekten att ge näring till njuren och stärka yang [4]. Modern farmakologisk forskning [5] visar detechinakosidfråncistanchehar antioxidation, anti-apoptos, antiinflammatoriska och farmakologiska effekter som att förbättra blodflödet och mikrocirkulationen.Echinacosidefråncistanchekan också reglera kroppens glukosmetabolism och förbättra glukostoleransen. Under senare år har studier [6] visat detechinakosidfråncistanchekan hämma njurfibros avDiabetisk nefropatiråttor genom att hämma signalvägen för transformerande tillväxtfaktor (TGF-) och skydda råttnjurvävnad. Det finns dock få rapporter i litteraturen om behandling avDiabetisk nefropatimedCistancheechinakosidoch dess specifika mekanism för att skyddaDiabetisk nefropatihos råttor är fortfarande oklart. Därför undersökte denna studie ytterligare effekterna och möjliga mekanismer avechinakosidfrånCistancheom njurfibros och njurvävnadscellapoptos iDiabetisk nefropatiråttor och syftade till att ge en teoretisk grund för den kliniska tillämpningen avechinakosidfrånCistanche.

Echinacoside från CistancheskyddarDiabetisk nefropati

Klicka för att Cistanche tubulosa fördelar och biverkningar

1 Material och metoder

1.1 Djur

60 SD-råttor, hanar, SPF-klass, 8 veckor gamla, kroppsvikt 240-280 g, tillhandahållen av Beijing Weitong Lihua Laboratory Animal Technology Co., Ltd., djurlicensnummer: SCXK (Beijing) 2015-0001, djur Kvalitetscertifikat nummer: 11400700106210, uppvuxet i djurcentrets laboratorium på sjukhuset, håller rumstemperaturen konstant på 25 grader, simulerar dag och natt, ändrar ljusförhållandena en gång var 12:e timme och djuren är fria att äta och dricka.

1.2 Läkemedel och reagens

Echinacoside, China Food, and Drug Control Research Institute, partinummer: 111670-201706; Losartan Potassium, Hangzhou Merck Pharmaceutical Co., Ltd., National Medicine Standard: H20030654; Streptozotocin, American Sigma Company, partinummer: 040103; Urinproteininnehållstestsats, Ningbo Meikang Biotechnology Co., Ltd. Science And Technology Co., Ltd., batchnummer: 20170612; TUNEL-detektionskit, Amictech Technology Co., Ltd., batchnummer: 20180406; RNA-extraktionssats, omvänd transkriptionssats, Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd., batchnummer: 20180705, 20180904; Serumhyaluronsyra (HA), vävnadsmetalloproteinashämmare-1 (TIMP-1) ​​och laminin (Laminin, LN) detektionskit, Shanghai Yuanmu Biotechnology Co., Ltd., batchnummer är: 20180612, 20180624, 20180706; Vaskulär celladhesionsmolekyl 1 (Vascular cell adhesion molecule- 1, VCAM- 1), transformerande tillväxtfaktor (Transforming growth factor, TGF-) och -Smooth muscle actin (-SMA) antikroppar, Santa Cruz Company, USA, batchnummer: sc13160, sc130348, sc-324317; pepparrotsperoxid Enzym (pepparrotsperoxidas, HRP) märkt get anti-kanin IgG, Danmark DAKO företag, batchnummer: P0447.

1.3 Apparatmodell

7600 automatisk biokemisk analysator, Japan HITACHI företag; bärbar blodsockermätare, Beijing Yicheng Bioelectronics Technology Co, Ltd; BX60 optiskt mikroskop, Japan OLYMPUS företag; SN-695B radioimmunoanalysanalysator, Shanghai Rihuan Instruments Shenbei Co., Ltd.; IQTM5 fluorescerande kvantitativt PCR-instrument, American Bio-Rad Company; DYY-6C elektroforesinstrument, Beijing Liuyi Instrument Factory; AlphaImager HP gelbildanalyssystem, American Alpha Innotech Company.

1.4 Gruppering, modellreplikering och administrationsmetoder

60 råttor förmatades i 1 vecka och delades slumpmässigt in i kontrollgrupp, modellgrupp,echinakosidhög-, medel- och lågdosgrupper och Losartan-kaliumgruppen, 10 råttor i varje grupp. Modellgruppen,echinakosidgruppen och losartan kaliumgruppen behandlades med en diet med hög fetthalt och hög socker i kombination med lågdos streptozotocin för att inducera en råttmodell avDiabetisk nefropati[6]. Innan modellen replikerades fastade råttorna med vatten i 12 timmar. Råttorna i kontrollgruppen fick vanligt foder och de andra grupperna fick foder med hög fetthalt och hög sockerhalt. Efter 4 veckors kontinuerlig matning fick råttorna i kontrollgruppen en enda intraperitoneal injektion av en lika stor volym citratbuffert, och de återstående grupperna fick en enda intraperitoneal injektion av streptozotocin Bacteriocin (40 mg·kg-1) till replikera råttmodellen avDiabetisk nefropati. 72 timmar efter att råttorna injicerades med streptozotocin var blodsockret större än eller lika med 16,7 mmol·L-1 och 24-timmars proteinutsöndring i urin efter 3 veckor var högre än den för kontrollgruppen och 24-timmes urinproteinkvantifiering var större än 50 procent innan modellen replikerades, vilket indikerar att modellen Kopian var framgångsrik. Fyra veckor efter injektionen av streptozotocin, låg, medel och hög dosechinakosidgrupperna gavs 20 mg·kg-1, 50 mg·kg-1 och 100 mg·kg-1echinakosid(Lös upp i normal koksaltlösning vid 37 grader enligt standarden 5 mL·kg-1 för kroppsvikt hos råttor. Råttor i Losartan Potassium Group ges oral administrering av Losartan Potassium 16 mg·kg-1 Modellgruppen och kontrollgruppen ges samma volym. Den normala koksaltlösningen gavs en gång om dagen i 2 veckor.

1.5 Provtagning

Efter den senaste administreringen har råttorna fastat utan mat och vatten, och mängden vatten som råttorna konsumerade under 24 timmar registrerades och urinen samlades upp under 24 timmar. Tidigt på morgonen den andra dagen vägdes råttorna. Efter uppsamling av urin, intraperitoneal injektion av 2 procent pentobarbitalnatriumlösning 2 mL·kg-1 för anestesi, separation av abdominalt aortablod från råtta, centrifugering (3 500 r·min-1, 15 min) och serum uppsamlades. Förvara tillfälligt i kylskåp vid -20 grader ; separera råttnjurvävnad och dela i två delar, en del fixeras i 4 procent paraformaldehyd, den andra delen bereds som 10 procent homogenat och placeras i ett -80 graders kylskåp för senare användning.

1.6 Bestämning av glukos- och lipidmetabolism hos råttor

Ta serum från varje grupp av råttor, använd en blodsockermätare för att mäta fastande blodsocker och en automatisk biokemisk analysator för att upptäcka triglyceriderester, kolesterol, lipoproteinnivåer med låg densitet.

1.7 24 urinprotein, njurfunktion och njurfibrosrelaterade indikatorer togs

24 timmars urin från varje grupp av råttor, 24-h urinens mikroproteininnehåll bestämdes genom radioimmunoanalys, och operationen utfördes strikt enligt instruktionerna. Serumet från varje grupp av råttor samlades in, och innehållet av blodkreatinin och ureakväve detekterades med en automatisk biokemisk analysator, serum TIMP-1-nivån detekterades med ELISA och HA- och LN-nivåerna detekterades av radioimmunoanalys. Operationen utfördes strikt enligt instruktionerna.

1.8 HE-färgning för att observera patologiska förändringar av njurvävnad och TUNEL-färgning

Observera apoptos av njurvävnadsceller. Ta de fixerade njurvävnaderna från varje grupp, bädda in dem i paraffin och snitt dem. En sektion används för HE-färgning för att observera de morfologiska förändringarna av njurtubuli, glomeruli och njurinterstitium under ett ljusmikroskop; den andra sektionen används för TUNEL-färgning, arbetar enligt satsens instruktioner och observerar antalet och positiviteten hos njurvävnadsceller under mikroskopet. Antalet celler, förhållandet mellan antalet positiva celler och antalet njurvävnadsceller är beräknas, vilket är apoptosfrekvensen.

2 resultat

1. Western Blot-metod för att bestämma uttrycket av VCAM-1-, TGF- och -SMA-protein i njurvävnad

Ta cirka 50 mg av råttnjurevävnadshomogenat, lös upp det med cellysat som innehåller proteashämmare och extrahera totalt protein med cellysat, med hjälp av BCA-metoden för proteinkvantifiering. Det totala proteinprovet extraherat med 50 μmol·L-1 överfördes till ett nitrocellulosamembran genom polyakrylamidgelelektrofores och förseglades med 5 procent skummjölk, och sedan tillsattes den primära antikroppen (1∶1000) respektive -aktinproteinet Monoklonal antikropp (1:300), inkubera över natten vid 4 grader. Tillsätt slutligen den sekundära antikroppen och inkubera i 2 timmar vid 37 grader och övervaka med elektrokemiluminescens. Använd Photoshop bildanalysprogram för att analysera gråvärdet av proteinband.

2 Resultaten visar effekten av echinakosid på glukos- och lipidmetabolism hos råttor med diabetesnefropati.

Jämfört med kontrollgruppen ökade det fastande blodsockret hos modellgruppen råttor signifikant, och skillnaden var statistiskt signifikant (P<0.05); triglycerides,="" cholesterol,="" and="" low-density="" lipoprotein="" increased,="" but="" the="" difference="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05) ). Jämfört med modellgruppen, fastande blodsocker hos råttor i mitten och hög dos grupper avechinakosidoch losartan-kaliumgruppen reducerades signifikant, och skillnaden var statistiskt signifikant (P<0.05); triglycerides,="" cholesterol,="" and="" low-density="" lipoprotein="" were="" reduced,="" but="" the="" difference="" was="" not="" statistically="" significant="" (p="">0.05).

3 Effekterna av echinakosid på 24-timmes urinprotein och njurfunktionen hos råttor med diabetesnefropati.

Jämfört med kontrollgruppen ökade nivåerna av urinmikroalbumin, ureakväve och kreatinin i modellgruppen signifikant, och skillnaderna var statistiskt signifikanta (P<0.05); compared="" with="" the="" model="" group,="" the="" middle="" and="" high="" dose="">echinakosidgrupper Nivåerna av urin mikroalbumin, ureakväve och kreatinin hos råttor i kalium- och losartan-kaliumgruppen minskade signifikant och skillnaderna var statistiskt signifikanta (P<>

4 Effekterna av echinakosid på njurfibros hos råttor med diabetesnefropati.

Jämfört med kontrollgruppen ökade serumnivåerna av HA, TIMP-1 och LN i modellgruppen signifikant, och skillnaderna var statistiskt signifikanta (P<0.05); the="" levels="" of="" ha,="" timp-1,="" and="" ln="" of="" rats="" in="" the="" sartan="" potassium="" group="" were="" significantly="" reduced,="" and="" the="" differences="" were="" statistically="" significant=""><>

5 HE-färgning för att observera patologiska förändringar av njurvävnad hos råttor med diabetisk nefropati.

Cellstrukturen i njurvävnaden var fullständig och inga uppenbara patologiska förändringar sågs. HE-färgningen av råttor i modellgruppen och lågdosenechinakosidGruppen visade: glomerulus svällde och ökade i volym, njurtubulära epitelceller svällde eller tappade, renalt interstitium åtföljt av inflammatorisk cellinfiltration och viss mesangial hyperplasi och interstitiell proliferation var också synliga. Fibros. HE färgning av råttor i mitten och höga doser avechinakosidoch losartan-kaliumgruppen visade att njurvävnadsskadorna var signifikant reducerade, med en liten mängd inflammatorisk cellinfiltration, mesangial hyperplasi och interstitiell fibros var också lättare än modellgruppen.

6 Effekten av echinakosid på apoptos av njurvävnad hos råttor med diabetisk nefropati.

TUNEL-färgning visade att jämfört med kontrollgruppen ökade apoptosfrekvensen hos råttor i modellgruppen signifikant och skillnaden var statistiskt signifikant (P＜0.05); Den apoptotiska frekvensen av råttor i den bruna kaliumgruppen reducerades signifikant, och skillnaderna var statistiskt signifikanta (P<>

7 Effekterna av echinakosid på uttrycket av apoptosrelaterade gener i njurvävnad hos råttor med diabetesnefropati.

RT-PCR-resultat visade att jämfört med kontrollgruppen var uttrycket av Bax- och Caspase-3-mRNA i modellgruppen signifikant uppreglerat, och uttrycket av Bcl-2-mRNA var signifikant nedreglerat , och skillnaden var statistiskt signifikant (P<0.05); compared="" with="" the="" model="" group="" in="" comparison,="" the="" expression="" of="" bax="" and="" caspase-3="" mrna="" was="" significantly="" down-regulated="" in="" the="" middle="" and="" high-dose="">echinakosidgrupper och losartankaliumgruppen, och uttrycket av Bcl-2 mRNA var signifikant uppreglerat och skillnaderna var statistiskt signifikanta (P<>

8 Effekterna av echinakosid på uttrycket av VCAM-1-, TGF- och -SMA-proteiner i råttor med diabetesnefropati.

Jämfört med kontrollgruppen var uttrycket av VCAM-1-, TGF- och -SMA-protein i modellgruppen signifikant uppreglerat, och skillnaden var statistiskt signifikant (P<0.05); the="" expressions="" of="" vcam-1,="" tgf-β,="" and="" α-sma="" proteins="" in="" rats="" in="" the="" dose="" group="" and="" the="" losartan="" potassium="" group="" were="" significantly="" down-regulated,="" and="" the="" differences="" were="" statistically="" significant=""><>

3 Diskussion

Uppkomsten avDiabetisk nefropatiär dold, och patogenesen är komplex och mångsidig. När det väl bildats är det svårt att bota. Det är en kronisk sjukdom med stor skada och en viktig orsak till njursjukdom i slutstadiet [8]. Patienter medDiabetisk nefropatibehandlas ofta med angiotensinomvandlande enzymhämmare och angiotensinreceptorantagonister, men den kliniska behandlingseffekten är inte särskilt tillfredsställande [9]. Losartankalium är en angiotensin Ⅱ-receptorantagonist som kan användas för att behandla essentiell hypertoni. Vissa studier [10-11] visar att losartankalium också kan hämma det renala interstitium hos råttor medDiabetisk nefropatiFibros, skydda njurfunktionen. Därför valde denna studie Losartan kalium som den positiva kontrollen att jämföra de skyddande effekterna avechinakosidpå njurvävnaden hos råttor medDiabetisk nefropati.Kliniska studier [12-13] har visat att innehållet iechinakosidi Changui Yishen Capsules är cirka 3,104 mg · kg-1. Efter konvertering baserat på human och mus administreringsdos, den lägsta dosen av Changui Yishen Kapslar förDiabetisk nefropatiråttor är 0.648 g·kg-1, och dosen omvandlas tillechinakosidär cirka 2 mg·kg-1. Eftersom det finns få kliniska rapporter om behandling avechinakosidför diabetes eller nefropati väljer denna studie 10 gånger den lägsta kliniska dosen, det vill säga 20 mg·kg-1 echinakosid som låg dos, och ökar i sekvens. 50 mg·kg-1echinakosidär en medeldos och 100 mg·kg-1echinakosidär en hög dos.

Echinacoside från cistanche behandlar diabetisk nefropati

I denna studie låg dosechinakosidhar ingen uppenbar effekt på njurvävnaden avDiabetisk nefropatiråttor, medan medelstora och höga doser avechinakosidkan avsevärt förbättra de patologiska förändringarna av njurvävnad och förbättra njurvävnadsskada iDiabetisk nefropatiråttor. , Föreslår att medelstora och höga doser avechinakosidkan skydda njurvävnadsskadan avDiabetisk nefropatiråttor på ett koncentrationsberoende sätt, och det förväntas användas vid behandling av kliniskaDiabetisk nefropati. I denna studie, medelstora och höga doser avechinakosidkan avsevärt öka kroppsmassan hos råttor medDiabetisk nefropatioch minska deras vattenintag, urinproduktion och fastande blodsocker. Kliniska studier [14] har visat att insulin hos patienter medDiabetisk nefropatihar absolut eller relativ brist, och blodsockernivåerna är förhöjda. Överdriven blodsockerkoncentration kommer att överstiga den glomerulära reabsorptionskapaciteten, utsöndras med urin, urineringsfrekvensen ökar och dricksvatten ökar. Minskningen av kroppsmassa överensstämmer med resultaten av denna studie, vilket tyder på detechinakosidkan öka kroppsmassan avDiabetisk nefropatiråttor genom att sänka blodsockret och minska deras drickande och urinproduktion.

I denna studie, medelstora och höga doser avechinakosidkan avsevärt minska urin mikroalbumin, kreatinin och urea kväve hos råttor medDiabetisk nefropati. Kreatinin och ureakväve utsöndras huvudsakligen från kroppen genom glomerulär filtration, vilket mer exakt kan återspegla njurfunktionen. Vid nedsatt njurfunktion minskar den glomerulära filtrationshastigheten, koncentrationen av blodkreatinin och ureakväve kommer att öka signifikant [15]. Urinproteinnivån är en av de mest använda indikatorerna för att återspegla graden av glomerulär skada, som direkt kan skada mesangiala celler och även kan förvärra njurskador och njurfunktion [16]. Forskning av Zhang Yun et al. [17] visade att hyperglykemi hos råttor medDiabetisk nefropatikan orsaka en minskning av glomerulär filtrationshastighet, vilket leder till en ökning av blodkreatinin, ureakväve och urin mikroalbuminnivåer. Resultaten av denna studie tyder på detechinakosidkan minska blodsockret, förbättra njurfunktionen, minska blodkreatinin, ureakväve och urin mikroalbuminnivåer och förbättra njurvävnadscellskada.

I denna studie, medelstora och höga doser avechinakosidkan signifikant nedreglera uttrycket av Bax och Caspase-3 mRNA iDiabetisk nefropatiråttor, uppreglerar uttrycket av Bcl-2 mRNA och hämmar apoptos av njurvävnadsceller. Bax-genen är en pro-apoptotisk medlem av Bcl-2-familjen. Under fysiologiska förhållanden bildar Bax och Bcl-2 en heterodimer, vilket minskar cellmembranets permeabilitet och cytokrom C-frisättning. När uttrycket av Bcl-2 väl är nedreglerat kommer det att orsaka ökning av cellpermeabilitet, frisättning av cytokrom C, aktivera nedströms Caspase-kaskaden och inducera cellapoptos [18]. Caspase-3 är en verkställande apoptosmolekyl som kan bryta ned en mängd viktiga proteiner i celler och delta i cellapoptos [19]. Studien av Dong et al. [20] visade detechinakosidkan hämma apoptos av en mängd olika celler, vilket är förenligt med resultaten av denna studie, vilket tyder på attechinakosidkan hämma apoptos av njurvävnadsceller och därigenom skydda njurvävnadsskada. I denna studie, medelstora och höga doser avechinakosidkan avsevärt nedreglera uttrycket av VCAM-1-protein iDiabetisk nefropatiråttor. VCAM-1 är en viktig vaskulär celladhesionsmolekyl, som är nära relaterad till förekomsten och utvecklingen avdiabetisk nefropaty och kan användas för klinisk utvärdering av patienter medDiabetisk nefropati[21]. Studien av Zhang et al. [22] visade att VCAM-1 kan inducera neuronal apoptos efter intracerebral blödning hos råttor. Resultaten av denna studie tyder på att medelstora och höga doser avechinakosidkan hämma uttrycket av VCAM-1 och hämma njurcellsapoptos hos råttor med diabetisk nefropati.

I denna studie, medelstora och höga doser avechinakosidkan avsevärt minska nivåerna av HA, TIMP-1 och LN hos råttor medDiabetisk nefropati.HA är huvudkomponenten i den extracellulära matrisen, och LN är ett viktigt strukturellt glykoprotein, vilket är en vanlig klinisk indikator på vävnadsfibros [23]. TIMP-1 är en hämmare av matrismetalloproteinaser (MMP), som kan hämma uttrycket av MMP, hämma nedbrytningen av extracellulär matris och främja njurvävnadsfibros [24]. Studien av Bieniaa et al. [25] visade att TIMP-1 kan hämma uttrycket av MMP, främja uttrycket av HA och LN och främja förekomsten och utvecklingen av njurvävnadsfibros. Detta stämmer överens med resultaten av denna studie, vilket tyder på detechinakosidkan hämma HA-, TIMP-1- och LN-nivåer, hämma förekomsten och utvecklingen av njurfibros. I denna studie, medelstora och höga doser avechinakosidkan signifikant nedreglera uttrycket av TGF- och -SMA-proteiner iDiabetisk nefropatiråttor. Ett stort antal studier [26-27] har visat att TGF-/Smad-signalvägen spelar en viktig roll i uppkomsten och utvecklingen av njurinterstitiell fibros. När TGF- binder till sin receptor i cellmembranet kan den fosforylera Smad2 och Smad3, och den aktiverade Smad bildar en trimer, som överförs till kärnan för att reglera uttrycket av nedströms effektormolekyler såsom -SMA och matrismetalloproteinaser. Framkalla produktionen av njurinterstitiell fibros [28]. -SMA är ett tecken på omvandlingen av fibroblaster till myofibroblaster, vilket kan främja utsöndringen och avsättningen av extracellulär matris, och främja förekomsten av njurinterstitiell fibros. Nackdelen är att provstorleken är liten, vilket kan orsaka vissa statistiska fel i resultaten, men det kan ge en viss teoretisk grund för dosval och klinisk tillämpning avechinakosid.

referenser:

[1] ZANCHI C, MASSONI D, TRIONFINI P, et al. MicroRNA-184 är en nedströms effektor av albuminuri som driver njurfibros hos råttor medDiabetisk nefropati[J]. Diabetologia, 2017, 60(6): 1114-1125.

[2] TENCEL GC, YILDIRIM S. Ökade uttryck av eNOS och iNOS korrelerar med apoptos avDiabetisk nefropativid streptozotocin-inducerad typ 1diabetikerråttor [J]. J Comp Pathol, 2016, 154(1): 63.

[3] SCHALKWIJK CG, CHATURVEDI N, TWAAFHOVEN H, et al. Amadori-albumin korrelerar med mikrovaskulära komplikationer och föregår nefropati i typ 1diabetikerpatienter.[J]. Eur J Clin Invest, 2015, 32(7): 500-506.

[4] Wei Dawei, Ge Xinyu, Liu Yihan, et al.Echinacosideinducerar benmärgsmesenkymala stamceller att växa. Studie om differentiering av osteoblaster[J]. Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica, 2017, 33(2): 48-52.

[5]MORIKAWA T, NINOMIYA K, IMAMURA M, et al. Acylerade fenyletanoidglykosider,echinakosidoch acteosid frånCistanchetubulosa, förbättra glukostoleransen hos möss[J]. J Nat Med, 2014, 68(3): 561-566.

[6]Guo Congcong, Jiao Mingwen, Zhang Yaqin, et al. Förbättring och utvärdering av modelleringsmetoden för unilateralnefrektomikombinerat med streptozotocin-induceradDiabetisk nefropatihos råttor[J]. Advances in Veterinary Medicine, 2019, 40 (2): 135-139.

[7] He Zhu, Kuang Shixiang, Zhang Shusen, et al. Naotong-avkok på hippocampusneuronerna hos råttor med hypoxi/reoxygenering Inverkan av Bcl-2, Bax och Caspase-3 uttryck[J]. Chinese Journal of Gerontology, 2015, 23 (24): 6973-6976.

[8]ROSSING P. Främjande, förutsägelse och förebyggande av progression avnefropativid typ 1-diabetes mellitus[J].DiabetikerMed, 2015, 15 (11): 900-919.

[9] Bao Jianzhou, Zhou Baohua. Klinisk studie på 68 fall avDiabetisk nefropatibehandlad av Yiqi Yangyin Huoxue Decoction [J]. Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica, 2015, 31(2): 177-178.