Har cistanche totalglykosid effekter på lukten?

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Effekten av cistanche-totalglykosider på råttolfaktoriska celler och deras utsöndring av neurotrofiska faktorer

Li Chuangfeng, Guo Jinyu, Zhang Xu, Liu Yunnan

Ryggmärgsskada (SCI) är en allvarlig skada på den centralanervsystem, vilket står för {{0}},2 procent —0,5 procent av det totala traumat. Vid ryggradsfrakturer kompliceras 16 procent – ​​40 procent av ryggmärgsskada, vilket ofta ger allvarliga funktionshinder, vilket leder till att svårigheter i det dagliga livet påverkar patienternas livskvalitet och orsakar en stor börda för familjen och samhället.LuktEnsheathing celler (OEC) är en speciell typ av nervlim. Plasmaceller kan migrera in i hjärnan medlukt-nervaxoner och kan utsöndra många tillväxtfaktorer såsom NGF, GDNF, BDNF, NT-3, neuropeptid-Y och S-100. På grund av dessa egenskaper hoslukt-OECs anses vara en av de lovande fröcellerna för celltransplantation för att reparera SCI. För närvarande baseras behandlingen av SCI inom området rehabiliteringsmedicin huvudsakligen på omfattande rehabilitering. För att hitta en mer effektiv metod har följande forskning genomförts kring effekten avcistanchetotalglykosiderpå OEC:er:

Cistanche total glykosid för olfaktoriska ensheathing celler

1 Material och metoder

1.1 Experimentmaterial

Wistar-råtta (tillhandahålls av Animal Center of Inner Mongolia University);cistanchetotalglykosider, DMEM/F12-medium, fetalt kalvserum (FCS), poly-D-lysin, arabinosid (Ara-C), trypsin, D-Hanks-lösning, kanin anti-p75NGFR (Santa Cruz), ELISA-kit (Promega), cellinkubator (Thermo-HEPA Class 100), inverterat faskontrastmikroskop (Olympus CKX41, Japan), ultraren arbetsbänk (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) Företaget, SW-CJ-2FD), enzym etikettanalysator (Wellscan MKH), flödescytometer m.m.

1.2 Forskningsmetoder

1.2.1 OECs odling, rening och identifiering: Wistar-råttor avlivades genom halshuggning och blötlades i vin i 5 minuter. Den främre skallen öppnades för att exponeralukt-Glödlampa. De tvålukt-lökar avlägsnades fullständigt under ett dissektionsmikroskop. Tvätta i D-Hanks lösning; skärlukt-glödlampa med mikrokirurgisk sax, tillsätt 2 ml 0.25 procent pankreatin och inkubera vid 37 grader i 20 minuter; tillsätt D MEM/F12 odlingsmedium innehållande 10 procent kalvserum till ett 2 ml centrifugrör Digestion avslutades i mitten; buspipetten aspirerade den ofullständigt digererade vävnaden vid 800 rpm och centrifugerades under 5 min, kasserade supernatanten; använde slutligen det konditionerade mediet (20 procent FCS plus 20|i, mol/LForskolin plus 20|ig/mlBPE plus DMEM/F12) Gör det till lx 107ml encellssuspension, inokulera det i en polylysinbelagd cellodlingskolv, placera det i en 37 graders, 5 procent CO2 inkubator, och sedan tillsätt Arac Rening utfördes vid 36h. Använd kanin anti-p75E och FITC-märkt get anti-kanin IgG sekundär antikropp för immunhistokemisk cellidentifiering och fluorescensmikroskopobservation.

1.2.2 Använd MTT och flödescytometri för att bestämma effekten avcistanche totala glykosiderpålukt-inkapslande celler: inokulera de odlade och renadelukt-täcka in cellerna i en 96-brunnsplatta vid 1X106 och tillsättcistanche totala glykosider(verkanskoncentrationer är Ijig/ml, 10mg/ml, 100mg/ml), mät OD-värdet och mät cellflödescytometrin efter 24 timmars verkan. Ställ in kontrollgrupp ochCistanche totala glykosiderolika koncentrationsgrupper: Grupp A (Kontrollgrupp): Seruminnehållande odlingsmedium används som negativ kontroll; Grupp B (cistanche totala glykosiderlågkoncentrationsgrupp: llig/ml); Grupp C (cistanche totala glykosider medelkoncentration Grupp: L10jxg/MK); Grupp D (cistanche totala glykosiderhögkoncentrationsgrupp: 100|xg/ml): 15 råttor i varje grupp.

1.2.3 Bestämning av neurotrofisk faktorinnehåll i supernatanten med ELISA: inokulera den odlade och renadelukt-inkapsling av celler i en 6-brunnsplatta vid 1x106, lägg tillcistanche totala glykosider(samma koncentration som ovan) efter 24 timmar och agera i 24 timmar och samla upp supernatanten separat, Sparad vid -80 lång. Innehållet av nervtillväxtfaktorer i vätskan bestämdes med ELISA-metoden.

1.3 Statistisk analys

Data i denna studie behandlas som mätdata, och de erhållna data uttrycks som medelvärde ± standardavvikelse, och SPSS 11.0 statistisk programvara används för statistisk analys. De erhållna uppgifterna analyseras med variansanalys och P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 resultat

2.1 Effekten avcistanchetotala glykosider pålukt-omslutande celler

2.1.1 Bestämningsresultat för metyloxazolyltetrazolmetoden (MT): Grupp A: 0.617±0.149; Grupp B: 0.589±0.147; Grupp C: 0.761±0.138; Grupp D: 0.732±0.234. Jämförelse mellanCistanche totala glykosider group (B) and Control group (A), P>0.05, skillnaden var inte signifikant;Cistanche totala glykosider10 mg/ml, 100 mg/ml koncentrationsgrupp (C, D) jämfört med kontrollgrupp (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 Resultatet av flödescytometribestämningen visas i figur 1. Jämfört med kontrollgruppen,cistanche totala glykosidergruppen var högre än kontrollgruppen och andelen apoptotiska celler var lägre än kontrollgruppen.

2.2 Enzym-linked immunosorbent assay (ELISA) resultat

Testresultaten visade att innehållet av gliacellinjehärledd neurotrofisk faktor (GDNF): före dosering: 302,1±16,6 pg/ml, grupp A: 340,5±13,2pg/ml; grupp B: 333,2±23,6 pg/ml; Grupp C: 355,2±17,6 pg/ml; grupp D; 379,2±15,3 pg/ml. Jämfört med föradministrationen ökade GDNF-innehållet signifikant; jämfört med kontrollgruppen (A), GDNF-innehållet iCistanche totala glykosider100 mg/ml koncentrationsgrupp (D) ökade signifikant.

3 Diskussion

Svårigheter med att regenerera axoner är en av huvudorsakerna till att det är svårt att återhämta sig efter ryggmärgsskada. OEC har en roll i regenereringen av centrala neuronaxoner som andra typer av celler är svåra att ersätta. Under senare år har forskningen avlukt-inkapsling av celler har blivit en hot spot.LuktEnsheathing-celler är en speciell typ av gliaceller som har egenskaperna hos Schwann-celler och astrocyter. De härstammar frånlukt-basalmembran och är brett fördelade på ytan avlukt-slemhinna,lukt-nerv ochlukt-Glödlampa. Den har förmågan att dela och regenerera för livet och kan följa medlukt-nervaxoner för att migrera in i hjärnan. Axonerna ilukt-nerv kan passera genom korsningen mellan det perifera nervsystemet och det centrala nervsystemet var 30-60 dag, återväxa in ilukt-hölje och upprätta synaptiska förbindelser4.LuktEnhöljande celler kan utsöndra många tillväxtfaktorer såsom NGF, BDNF, GDNF, NT-3, neuropeptid-Y och S-100. Studier har visat att nervtillväxtfaktor (NGF) kan förhindra spinal röda kärna nervceller från atrofi och stärka kortikospinalkanalen Grout och främja regenerering av den röda kärnan ryggmärgs nervbanan; både den hjärnhärledda neurotrofiska faktorn (BDNF) och neurotrofin-3 (NT-3) kan förhindra apoptos av den röda kärnan i ryggmärgsceller hos vuxna råttor med axotomiserad skada och rädda döende neuroner och främja axonal regenerering P. För övrigt,lukt-Höljeceller uttrycker också andra faktorer på sina cellmembran, såsom nervcellsadhesionsfaktor (N-CAM), som är involverade i celladhesion och axontillväxt. På grund av dessa egenskaper hoslukt-OECs anses vara en av de lovande fröcellerna för celltransplantation för att reparera SCI.

De kemiska komponenterna iCistancheinkluderar huvudsakligen fenyletanoidglykosider, iridoider, flyktiga komponenter, lignaner, polysackarider och alkaloider. Studien fann detCistancheoch dess kemiska komponenter har neuroprotektiva effekter. Deng et al. studerade effekten av tubulosa B på apoptos av SH-SY5Y-neuroner inducerade av tumörnekrosfaktor (TNF ). Resultaten visade att efter 100 ug/ SH-SY5Y-neuronerna efter 36 timmars TNF-behandling med L visade typiska apoptosegenskaper, medan behandlingen av tubulin B under 2 timmar signifikant kunde minska apoptosen inducerad av TNF. Dessutom har studier också visat att fenyletanoidglykosider kan hämma apoptos av cerebellära granulceller från råtta genom att hämma kaspas-3 och kaspas-8 och mot C57-mussvart orsakad av metylfenyltetrahydropyridin (MPTP). Skadan av kvalitetsdopaminerga neuroner har en skyddande effekt. Inte bara det, utanCistanchekan också lindra olika skador såsom ischemi-reperfusion av nervsystemet. Experimentet med ischemiskada i mushjärna visar att infarktintervallet 24 timmar och 48 timmar efter ischemi i gruppen cerebral ischemi-reperfusion är 72,98 procent och 60,45 procent i genomsnitt. Däremotcistanchetotala glykosider stora, medelstora och låga dosgrupper (250.0mg·kg/d; 125.0mg·kg/d; 62.5mg·kg/d) kan göra hjärnan hos möss. efter cerebral ischemi-reperfusion 24h. Infarktstorleken reducerades till 25,94 procent, 25,81 procent och 31,13 procent, och hjärninfarktstorleken reducerades till 22,14 procent, 20,06 procent och 22,27 procent efter 48 timmar. Det fanns en signifikant skillnad mellan de två, vilket visade en signifikant hämmande effekt på neuronal apoptos.

I denna studie har olika koncentrationer avcistanche totala glykosidertillämpades på OEC. MTT-metoden och flödescytometrimätning bekräftade att 10mg/ml100mg/mlcistanche totala glykosiderkan främja spridningen avlukt-omslutande celler. Resultaten av flödescytometri visade detcistanche totala glykosiderkan främja spridningen avlukt-ensheathing celler Det främjar främst spridningen av G1-cykeln avlukt-spermieceller och minskar avsevärt apoptotiska celler. Därför,Cistanche totala glykosiderkan inte bara främja spridningen avlukt-omsluter celler men ökar också cellaktiviteten och hämmar deras apoptos. Enzymkopplad immunosorbentanalys bevisar detCistanche totala glykosiderkan avsevärt främja utsöndringen av GDNF genomlukt-omslutande celler. Ovanstående resultat ger en experimentell grund för den kliniska tillämpningen avCistanche totala glykosider.

Referenser

[1] Qiu Weihong, Zhu Hongxiang, Zhang Baixiang, et al. Faktorer som påverkar livskvaliteten för patienter med ryggmärgsskada under rehabilitering [J]. Chinese Journal of Rehabilitation Medicine, 2009, 4(24): 313.

[2] Richter MW, Fletcher PA, Liu J, et al. Lamina propria ochlukt-tjurskyddande celler uppvisar differentiell integrering och migration och främjar deferentiella axoner i den skadade ryggmärgen [J]. J Neurosci, 2005.25(46):10700 -10711.

[3] Fairless R, Bamet SC. luktskyddande celler: deras roll vid reparation av centrala nervsystemet[J.Int J Biochem Cell Biol. 2005,37(4):693-699.

[4] Chen X, Fang H. Schwob JE. Multipotens av renat. transplanterade glukosbasalceller inlukt-epitel[J]. J Comp Neurol,2004, 46914):457—474.

[5] La P, Jones LL. Tuszynski MH. BDNF-uttryckande marostromal cell; stöder omfattande axonal tillväxt på platser d ryggmärgsskada[J]. Exp Neurol, 2005,191(2):344—360.

[6] Deng M, Zhao JY, Ju XD, et al. Skyddande effekt av tubulosa B på TNF-inducerad apoptos i neuronala celler [J]. Acta Pharmacol Sin, 2004,25(102 1276

[7] TianXue-Fei, PuXiao-Ping.FenyletanoidglykosiderfrånCistanchersalsa hämmar apoptos inducerad av 1-metyl-4-fenylpyridiniumjon i neuroner[J]. J Ethnopharmacol, 2005,97 (1):59.

[8] Geng X, Song L.Pu X, et al. Neuroskyddande effekt