Den vetenskapliga grunden för den nya tillämpningen av Cistanche

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Sun Weidong1, Chen fei2, Sun yun2

(1. Yangzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine, Yangzhou 225009, Jiangsu; 2. School of Medicine, Yangzhou University, Yangzhou 225001, Jiangsu)

ABSTRAKT: Råttmodellen för nybörjarprostatahyperplasi (BPH) etablerades och tre dosgrupper av akteosid administrerades oralt under 4 veckor för att studera effekten av akteosid destillerad frånCistanche tubulosaom apoptos och ultramikrostruktur prostatakörtel hos råttor med BPH. Den ultrastrukturella förändringen av prostatakörteln observerades genom transmissionselektronmikroskopi. Resultaten visade att Apoptos av normal råttprostata inte var uppenbar, det fanns en låg

frekvens av prostataapoptos i modellgruppen, i högdos akteosid frånCistanche tubulosabehandling var råttprostataapoptos signifikant högre än modellens.

NYCKELORD:Cistanche, Cistanche tubulosaakteosid; råtta; börja prostatahyperplasi; apoptos; ultrastrukturell

Ört Cistanche

I processen med benign prostatahyperplasi (BPH) är cellapoptos en av de mekanismer som för närvarande väcker uppmärksamhet. Genkodning bestämmer det och gör det möjligt för celler att kontrollera programmerad celldöd genom att svara på specifika signaler.

Efter att prostatan utvecklats till vuxenstorlek, bibehålls proliferationshastigheten för prostataceller på 1 procent till 2 procent genom balansen av den genomsnittliga apoptoshastigheten. När balansen är bruten anses det vara orsaken till BPH. Under normala förhållanden är nivåerna av östrogen och androgen och normal cirkulation i prostatan ett slags självbalanstillstånd som existerar i processen av proliferation och apoptos. När balansen mellan proliferation och apoptos är i obalans kommer det att leda till ytterligare tillväxt och expansion av körteln, vilket främst orsakar expansionen av epitelcellsutrymmet [1].

I detta experiment etablerade vi en råttprostatahyperplasimodell för att observera och analysera effekten av akteosid (koaktionsliknande glykosid), en av de kemiska komponenterna iCistanchepå apoptos och ultrastrukturella förändringar av prostataceller från råtta, för att utvärdera effekten av akteosid Effekten av att hämma prostatahyperplasi ger en vetenskaplig grund för utveckling och användning av nya användningsområden för kinesisk medicin Cistanche.

Cistancheextrahera

1 Material och metoder

1. 1 försöksdjur

Femtio SD-hanråttor i åldern 6-7 veckor, ren kvalitet, väger 80-100 g, tillhandahålls av Center for Comparative Medicine vid Yangzhou University.

1. 2 Reagens och läkemedel

Testosteronpropionatinjektion är från Shanghai General Pharmaceutical Co., Ltd., specifikationen är 25 mg·mL-1 och batchnumret är 060708. PI-färglösning är från Yangzhou University Testing Center. Innehållet av Aktiside är 945 g·kg^-1, utarbetad av Institutionen för kinesisk medicinanalys, China Pharmaceutical University.

1. 3 Experimentell utrustning

Philips Tecnai 12 transmissionselektronmikroskop är från Philips i Nederländerna; FACSAria flödescytometer är från BD i USA.

1. 4 Grupperingar och modellering

Efter kastrering enligt litteraturmetoden [3] injicerades råttor med 5 mg·(kg·d)^-1testosteronpropionat på ryggen av råttorna i 4 veckor för att etablera en prostatahyperplasimodell. Modellråttorna delades slumpmässigt in i modellgrupper: modell plus akteosid högdosgrupp, modell plus akteosid medeldosgrupp, modell plus akteosid lågdosgrupp, tio råttor i varje grupp; ytterligare tio normala råttor var som kontrollgrupp.

1. 5 Administrationsmetod

En vecka efter modellering gavs hög-, medel- och lågdosgrupper av akteosid 60, 30, 15 mg·(kg·d)-1 genom sondmatning, respektive. Modellgruppen och kontrollgruppen tillsattes en lika stor volym normal koksaltlösning en gång om dagen i fyra veckor, vägdes en gång i veckan och justerade dosen efter kroppsvikten.

1. 6 Provtagning och bearbetning

1) Material och provberedning: 24 timmar efter den senaste administreringen, väg de fastande råttorna och avliva råttorna genom cervikal dislokation. Öppna omedelbart nedre delen av buken, dra av vävnaderna runt prostatan, frigör prostatan och ta en del av prostatan för användning i ett isbad. Vävnadshomogenisator homogeniserad, preparerad prostata encellssuspension och färgad med propidiumjodid enstegsmetod [4]; en annan del av prostatavävnaden fixerades i 25 g·L-1 glutaraldehyd för att förbereda ultratunna snitt.

2) Förbered en enstaka cellsuspension: Under aseptiska förhållanden, ta bort råttprostatan helt och hållet och flytta den till en petriskål, tvätta blodet och blodpropparna på ytan av prostatavävnaden med PBS och ta bort det omgivande fettet, överflödiga fibrer, och cellmembran. Från samma råttprostata, färsk prostatavävnad med storleken cirka 0,5 cm³togs och skars i bitar för att förbereda en prostatacellsuspension [5]. Placera prostatavävnadsblocket i en petriskål och tillsätt en liten mängd PBS; använd oftalmologisk sax för att klippa vävnaden i ett isbad, mal homogenisatorn till en suspension, tillsätt 10 mL PBS, pipettera vävnadshomogenatet och använd 0,074 mm porstorlek nylonnät filtrerades in i provröret, centrifugerades vid 1 500 r min^-1under 3 min, och fällningen tvättades tre gånger med PBS, varje gång vid 500 r min.^-1kortvarig låghastighetscentrifugering för att avlägsna cellskräp, till 0.037 mm porstorlek nylonnätfilter för att ta bort cellklumpar. Räkna cellerna och justera cellkoncentrationen till 2×109 celler·L^-1. Färga med 1 mL PI-färgningslösning, skydda mot ljus vid 4 grader i 10 min.

3) Beredning av ultratunna snitt: För beredning av ultratunna vävnadssnitt, se litteratur [6].

2 Resultat och analys

Fig. 1 Apoptos av BPH-råttmodellen och inducerad verkan av akteosid

a. Normal grupp; b. Modellgrupp; c. Acteosid högdosgrupp; d. Acteosid lågdosgrupp

2. 1 Effekten av akteosid på apoptos av råttprostata

Figur 1 visar toppen av apoptos detekterad med flödescytometri, vilket visar att akteosid har en pro-apoptotisk effekt. Den statistiska analysen av cellapoptosresultaten visade att råttcellapoptosfrekvensen ökade signifikant (24,7±1,85) procent och (16,1±1.04) procent efter behandling med höga, medelhöga och låga doser av akteosid. , (14,5±0,68) procent , och normalgruppen (1,1±{{20}}},06) procent , modellgrupp (9,5±0,5) procent , positiv grupp (9,83± 0,76) Skillnaden i procentjämförelse är signifikant (P<0.01), indicating="" that="" aktidine="" can="" induce="" cell="" apoptosis,="" the="" effect="" is="" stronger="" than="" that="" of="" the="" positive="" control="" drug="" qianliekang="" (figure="">

Fig. 2 Radion för apoptos i BPH-råttmodellen och effekt av akteosid

2.2 Effekten av akteosid på ultrastrukturen av prostatahyperplasiceller.

Elektronmikroskopiobservationer visar att den normala råttprostatan har fullständiga kärnor, uppenbarligen nukleoler, och enhetlig nukleär kromatinfördelning; det grova endoplasmatiska retikulumet har samma storlek, är snyggt arrangerat och har ingen vakuolation. Det finns inga fingerliknande mikrovilli på epitelets yta, ingen svullnad av mitokondrier och få sekret i kaviteten. Kärnorna i prostataceller i modellgruppen deformerades och krympte, och cytoplasman var riklig. Det grova endoplasmatiska retikulumet expanderades till en cystliknande form och cystan fylldes med högdensitetsproteinpartiklar. Mitokondrierna var lätt svullna (det fanns också vakuoler), Det finns sekret med medeldensitet i hålrummet och täta runda sekretgranuler hittades i vissa celler. Hos råttor behandlade med akteosid var kärnan intakt jämfört med modellgruppen. Kärnan koncentrerades, kärndensiteten ökades, heterokromatin ackumulerades, cytoplasman hade vakuoler och de grova endoplasmatiska retikulumvakuolerna reducerades. Den lågdoserade akteosidgruppen hade lätt skrynkliga kärnor. Krympning, oregelbunden, rikare cytoplasma och reducerat grovt endoplasmatiskt retikulum (Figur 3).

Fördelen med cistanche: anti-Apoptos

3 Diskussion

Apoptos är en process av programmerad celldöd i flercelliga organismer som reglerar utvecklingen av kroppen och upprätthåller stabiliteten i den inre miljön, och genetiska koder bestämmer det.

Apoptotiska celler har sina unika morfologiska och biologiska egenskaper: kärnkromatinkrympning, omfattande DNA-nedbrytning och fragmentering, fullskalig krympning av celler, krympning av cellmembran och yttre utsprång som täcker organeller (som mitokondrier och ribosomer), och nukleär bildning av karaktäristiska celler. fragment Apoptotiska kroppar, apoptotiska celler behåller inte bara en komplett cellmembranstruktur och funktion utan har också en komplett struktur av organeller, som skiljer sig från cellnekros.

Den molekylära mekanismen för cellapoptos har inte helt klarlagts hittills. Studier [7] har visat att det finns många gener involverade i genregleringen av cellapoptos.

Apoptos är processen av BPH för närvarande lockar mer uppmärksamhet. Det bestäms av genkodning och gör det möjligt för celler att kontrollera celldöd genom att svara på specifika signaler [1]. Efter att prostatan utvecklats till vuxenstorlek, bibehålls proliferationshastigheten för prostataceller på 1 procent till 2 procent genom balansen av apoptoshastigheten. Förstörelsen av denna balans har alltid ansetts vara orsaken till BPH [8]. Under normala förhållanden är nivån av östrogen och androgen och regelbunden cirkulation i prostatan ett slags självbalanstillstånd som existerar i processen av proliferation och apoptos. När proliferationen och apoptosen är i obalans kommer det att få körtlarna att växa och expandera ytterligare, främst på grund av expansionen av epitelcellsutrymmet [9]. Avbrottet i denna balans kan bero på förändringar i androgennivåer eller funktioner; det kan också bero på någon respons som produceras av AR-stimulering av DHT eller förändringar i DHT-medierade tillväxtfaktornivåer [2]. I denna studie upptäckte FCM cellapoptos och fann att apoptosfrekvensen för prostataceller hos råttor som fick höga doser av akteosid ökade markant. Elektronmikroskopiresultat visade att kärnorna i prostataceller i modellgruppen deformerades, det grova endoplasmatiska retikulumet var kraftigt expanderat i en cystaliknande form och cystan fylldes med högdensitetsproteinpartiklar och vakuolering hittades. Mitokondrierna var lätt svullna och relaterade studier[ 10-11 ] Rapporten är konsekvent.

Efter akteosidintervention var graden av prostatahyperplasi hos råttor lägre. Högdosgruppen visade också tidiga tecken på apoptos: kärnan i prostatacellerna förblev intakt och endoplasmatiska retikulumvakuoler var betydligt lägre. Kondensering av kärnor, ökad kärndensitet, ackumulering av heterokromatin, liknande karakteriseringen av prostatavävnadsceller hos råttor efter kastrering [12-13]. Det visar att acteoside fråncistanchekan inducera cellapoptos hos råttor med prostatahyperplasi, reglera och återställa balansen mellan prostatacellapoptos och proliferation, och spela en roll för att hämma prostatacellproliferation. Resultaten av denna studie och tidigare studier [14] indikerar att den hämmande effekten av akteosid, en kemisk komponent iCistanche tubulosa, på prostatahyperplasi kan vara relaterat till dess främjande av cellapoptos, minskning av AR och TGF-UR1-överuttryck. Den detaljerade verkningsmekanismen behöver fortfarande studeras ytterligare.

Cistanche fördel: förbättra immuniteten

Referenser:

[1] Giacomo N, Antonio G, Ra fa el BB, et al. Inflammation, apoptos och BPH, vad är beviset [J]. European Urology Supplements, 2006(5): 401-408.

[2] Car son IC, Rittmaster R. Dihydrotestosterons roll vid benign prostatahyperplasi [J]. Urology, 2003, 61: 2-7.

[3] Xu Shuyun, Bian Julian, Chen Yuxiu. Farmakologisk experimentmetodik[M]. 3:e upplagan. Peking: People's Medical Publishing House, 2002: 1552-1553.

[4] Zhai Qiwei, Ji Hongbin, Yan Mingda, et al. Använda ett tet-off inducerbart uttryckssystem för att studera funktionen av Akt[J]. Chinese Science Bulletin, 2000, 45( 16): 1738-1741.

[5] Xia Anzhou, Xing Shuhua, Zhu Xuewen, et al. Jämförande studie av beredningsmetoderna för encellssuspension i njurvävnad [J]. Journal of Xuzhou Medical College, 2004, 24( 1):50-53.

[6] Sun Yun, Wang Dejun, Liu Xiaomei, et al. Förändringarna av lungultrastruktur i experimentella åldrande möss och effekten av Cistanche deserticola polysackaride [J]. Chinese Pharmacological Bulletin, 2002, 18(1): 84-87.

[7] Liu Qingming, Lu Mingzhi. Forskningsframsteg i patogenesen av benign prostatahyperplasi cellproliferation och apoptos [J]. Jiangxi Medical Laboratory Science, 2005, 23( 2): 141-143.

[8] Sharia t SF, Ashfaq R, Roehrborn CG, et al. Uttryck av survivin och apoptotiska biomarkörer i benign prostatahyperplasma [J]. J Urol, 2005, 174: 2046-2050.

[9] Unter G, Madersbacher S, Berg er P. Benign prostatahyperplasi: åldersrelaterad vävnadsremodellering [J]. Exp Gerontol, 2005, 40: 121-128.

[10] Zheng Heng, Shao Chunli, Qian Jiaqing. Den hämmande effekten av hydroklorid på prostatahyperplasi hos råttor [J]. Journal of Tongji Medical University, 1999, 28(3):227-229.

[11] Zhong Wei, Qiu Shudong, Jiang Sailing. De morfologiska förändringarna av benign prostatahyperplasi och skillnaden mellan ARmRN A-uttryck [J]. Journal of Xi'an Medical University, 1999,20( 2): 145-149.

[12] Niu Yuanjie, Dong Kequan, Bai Jingwen, et al. Dynamiska patologiska förändringar av prostata hos hund efter kastrering[J]. Chinese Journal of Urology, 1998, 19( 7): 429-433.

[13] Ye Zhangqun, Lan Ruzhu, Zhou Yusheng, et al. Dynamiska förändringar i mikrostrukturen hos råttans ventrala prostata efter kastrering [J]. Chinese Journal of Urology, 2001,22( 8): 468-472.

[14] Sun Weidong, Chen fei, Sun yun. Den hämmande effekten av Aktiside på experimentell benign prostatahyperplasimodell [J]. Journal of Yangzhou University: Agriculture and Life Sciences

Upplaga, 2008, 29(3): 55-58.