Terapeutisk effekt av cistanoside A på benmetabolism hos ovariektomiserade möss

Kontakt: Audrey Hu Whatsapp/hp: 0086 13880143964 E-post:audrey.hu@wecistanche.com

Abstrakt

Cistanoside A (Cis A), är en aktiv fenyletanoidglykosid isolerad frånCistanche deserticola YC Mahar fått vår uppmärksamhet på grund av dess möjliga roll i behandlingen avosteoporos. I den aktuella studien utvärderade vi effekterna av Cis A på en ovariektomerad (OVX) mössmodell och undersökte dess underliggande molekylära verkningsmekanismer. Efter 12 veckors oralt administrerad intervention uppvisade Cis A (20, 40 och 80 mg/kg kroppsvikt/dag) signifikanta antiosteoporotiska effekter på OVX-möss, vilket framgår av förbättrad benstyrka, benmineraltäthet och förbättrad trabekulär benmikroarkitektur. Samtidigt minskade aktiviteterna för benresorptionsmarkörer, inklusive tartratresistent surt fosfatas (TRAP), deoxipyridinolin (DPD) och katepsin K, och bioaktiviteten hos benbildningsmarkören alkaliskt fosfatas (ALP) ökade. Mekanistiskt hämmade Cis A uttrycket av TNF-receptorassocierad faktor 6 (TRAF6), en uppströmsmolekyl som delas av både nukleär faktor kappa lättkedjeförstärkare av aktiverade B-celler (NF-KB) och fosfatidylinositol 3-kinas ( PI3K)/Akt-vägar och undertryckte därefter nivåerna av receptoraktivatorer av nukleär faktor kappaB-ligand (RANKL), nedreglerade uttrycket av NF-KB och uppreglerade osteoprotegerin (OPG), PI3K och Akt, vilket betyder att Cis A hade antiosteoporotisk aktivitet i ovariektomiserade möss via TRAF6-förmedlad NF-kappaB-inaktivering och PI3K/Akt-aktivering. Tillsammans presenterar vi nya fynd att Cis A, genom att nedreglera TRAF6, koordinerar hämningen av NF-KB och stimulering av PI3K/Akt-vägar för att främja benbildning och förhindra benresorption. Dessa data visade potentialen hos Cis A som ett lovande medel för behandling avosteoporossjukdom.

Nyckelord: cistanoside A; ovarieektomiserade möss; antiosteoporotisk; TRAF6; RANKL

Introduktion

Osteoporos, en systemisk skelett "tyst mördare", har blivit en stor hälsorisk som drabbar över 2000 miljoner människor världen över under de senaste åren [1]. Det kännetecknas av låg bentäthet (BMD) och mikroarkitektonisk försämring, som härrör från ett överskott av benresorption över benbildningen och slutligen resulterar i osteoporotisk fraktur [2,3]. Nuförtiden är identifieringen av medel för att blockera osteoklastisk differentiering och resorption de vanliga och framgångsrika strategierna för utveckling av terapeutiska läkemedel förosteoporos[4], och det finns verkligen många syntetiska medel, inklusive östradiolvalerat och alendronatnatrium, som kan förebygga och behandlaosteoporos. Läkemedlen mot sjukdomarna är dock långt ifrån idealiska; vissa av dessa läkemedel kan öka risken för endometrie- och bröstcancer och även ha en viss grad av biverkningar, såsom hyperkalcemi, hyperkalciuri, etc. [5], som begränsar deras kliniska tillämpningar. I mer än ett årtusende har därför traditionell kinesisk medicin (TCM), särskilt den ätbara TCM med de isolerade bioaktiva föreningarna och fraktionerna, använts i stor utsträckning säkert och effektivt i asiatiska länder för att förebygga och behandla olika sjukdomar, inklusiveosteoporos[6,7].

Osteoporoskarakteriseras som förstärkt benresorption på grund av ökad osteoklastogenes, och denna process involverar engagemang av hematopoetiska monocyter till osteoklastprekursorer, som smälter samman för att bilda multinukleära osteoklaster som riktar sig mot benställen som genomgår ombyggnad [4]. Receptoraktivator för nukleär faktor-KB-ligand (RANKL), en nyckelfaktor som utsöndras från osteoblaster, stimulerar monocytdifferentiering till osteoklaster [8,9]. Interaktionen mellan RANKL och dess receptor RANK resulterar i en kaskad av intracellulära händelser, inklusive NF-KB, PI3K/Akt, kalcium/kalmodulinberoende kinas genom att rekrytera adaptersignalproteinet TNF-receptorassocierad faktor (TRAF6). Som ett resultat uppregleras flera osteoklastrelaterade markörgener, inklusive TRAP, cathepsin K och DPD, och processen för benresorption påskyndas.

Fenyletanoidglykosider kännetecknas av kanelsyra och hydroxylfenyletylgrupper som är bundna till en -glukospyranos (apiose, galaktos, ramnos, xylos, etc.) via en glykosidbindning, som är brett spridda i medicinalväxter [10]. Cistanoside A (Cis A) är en aktiv fenyletanoidglykosid iCistanche deserticola YC Ma. Enligt uppgifter från kinesisk farmakopé användes C. deserticola traditionellt för att behandla njur-yin-brist, muskelsvaghet, ländryggssvaghet, etc., och fenyletanoidglykosider är de huvudsakliga bioaktiva beståndsdelarna i denna ört [11]. Baserat på "njure"-teorin om TCM, kan njuren styra bensystemet, vilket innebär att benens utveckling och funktioner beror på njuressensen, och denna njuressens kan omvandlas till benmärgen för att ge näring åt benen, främja tillväxt och reparation av skelettet och stärka skelettet [12]. Eftersom C. deserticola kunde stärka njuren, antog vi att Cis A kunde förebygga och behandlaosteoporos. Den aktuella studien utformades därför för att validera potentialen hos Cis A för att förebyggaosteoporosgenom att använda en ovariektomerad mössmodell, och benbildnings- och resorptionsmarkörer, såväl som de relaterade potentiella mekanismerna, bestämdes för att uppskatta den antiosteoporotiska bioaktiviteten av detta medel.

Resultat

Effekter av Cis A på bentrepunktsböjningstestning

För att analysera om behandling med Cis A gör benet starkare, utsatte vi lårbenen för trepunktsböjningstestet. Som visas i figur 1 var den maximala belastningen som applicerades vid benbrott 21,5 procent och 22,0 procent högre hos djuren som behandlades med 20 mg/kg och 80 mg/ kg Cis A, respektive, jämfört med djur i den ovarieektomerade (OVX) gruppen (p < 0.05).="" samtidigt="" förstärkte="" behandling="" med="" cis="" a="" också="" benstyvheten;="" alla="" de="" cis="" a-behandlade="" mössen="" visade="" signifikant="" ökad="" styvhet="" med="" data="" på="" 121.="" 0="" ±="" 12,1="" (p="">< 0,05),="" 124,1="" ±="" 16,2="" (p="">< 0,05)="" respektive="" 127,7="" ±="" 9,6="" (p="">< 0,01)="" ,="" jämfört="" med="" 102,2="" ±="" 10,7="" av="" ovx-mössen.="" resultaten="" indikerar="" att="" den="" ökade="" benstyrkan="" hos="" ovx-mössen="" som="" behandlats="" med="" cis="" a="" berodde="" på="" en="" ökad="" mängd="" ben="" och="" en="" förbättring="" av="">

Effekter av Cis A på benmikroarkitektur

Tredimensionell trabekulär benmikroarkitektur hos möss mätt med mikro-CT (Figur 2 och Tabell 1) visar intuitivt att mössen i OVX-gruppen uppvisade en anmärkningsvärd minskning av trabekulärt område och trabekulärt antal jämfört med skengruppen, vilket indikerar att ovariektomi kan inducera en märkbar minskning av bentäthet (BMD, -46 procent), benmineralhalt (BMC, -66 procent), vävnadsmineralinnehåll (TMC, -85 procent), benvolymfraktion (BVF, -82 procent), trabekulärt antal (Tb. N, −76 procent ) och en ökning av trabekulär separation (Tb. Sp, plus 80 procent ) utan någon modifiering av total vävnadsmineraltäthet (TMD) och trabekulär tjocklek (Tb. Th) efter operationen på 12 Veckor.

OVX-mössen behandlade med Cis A resulterade dock i dosberoende ökad BMD (plus 43 procent ~57 procent), BMC (plus 65 procent ~73 procent), TMC (plus 83 procent ~90 procent), BVF (plus 80 procent ~88 procent), större minskning av Tb. Sp (−79 procent ~88 procent) och ytterligare förstärkt Tb. N (plus 73 procent ~82 procent) jämfört med OVX-gruppen. TMD verkade inte påverkas av ovariektomi men ökade signifikant av behandling med östradiolvalerat (EV).

Effekter av Cis A på både benbildnings- och resorptionsmarkörerna

Effekterna av Cis A på benresorptionsmarkörer, inklusive TRAP, DPD, cathepsin K och benbildningsindex ALP och ben Gla-protein (BGP), visas i figur 3. Efter 12 veckors ovariektomioperation, aktiviteterna av TRAP, DPD , och cathepsin K i OVX-gruppen ökade signifikant, särskilt DPD, som ökade med nästan 55,6 procent; TRAP och cathepsin K förstärktes med 43,5 procent respektive 38,1 procent jämfört med skengruppen. Cis A, administrerat oralt i 12 veckor, visade en märkbar potential för att förhindra alla ovan nämnda benresorptionsmarkörer, särskilt den höga dosen (80 mg/kg) som uppvisar en signifikant effekt på att undertrycka aktiviteterna av DPD med 45.0 procent , TRAP med 49.0 procent respektive cathepsin K med 44.0 procent (p < 0.01),="" jämfört="" med="" ovx-grupp="" (figur="" 3).="" även="" om="" en="" ökande="" trend="" av="" alp-="" och="" bgp-aktiviteter="" påvisades="" i="" ovx-gruppen,="" observerades="" inga="" statistiskt="" signifikanta="" förändringar.="" en="" signifikant="" förbättring="" av="" alp-aktivitet="" observerades="" emellertid="" i="" grupper="" som="" behandlats="" med="" låg="" och="" hög="" cis="" a="" jämfört="" med="" skengruppen="" (p=""><>

Effekter av Cis A på proteinuttrycksnivåer av TRAF6, NF-KB PI3K, Akt, OPG och RANKL

Western blot-analys visade att jämfört med skengruppen ökade proteinnivåerna av TRAF6, NF-KB och RANKL i OVX-gruppen signifikant (p < 0.05),="" medan="" opg,="" pi3k="" och="" akt="" minskade="" signifikant="" (figur="" 4).="" cis="" a="" (20="" mg/kg="" eller="" 80="" mg/kg)="" nedreglerade="" traf6-uttrycket="" signifikant="" (p="">< 0.05),="" följt="" av="" att="" rankl-uttrycket="" var="" minskade="" och="" opg="" ökade,="" vilket="" innebär="" att="" opg/rankl-förhållandet="" uppreglerades.="" följaktligen="" nedreglerades="" signalkaskaderna="" för="" nf-kb="" och="" pi3k/akt="" uppreglerades="" genom="" cis="" a-behandling="" (p="">< 0,05).="" molecules="" 2017,="" 22,="" 197="" 5="" of="" 11="" 2.1.4.="" effekter="" av="" cis="" a="" på="" proteinuttrycksnivåer="" av="" traf6,="" nf-kb="" pi3k,="" akt,="" opg="" och="" rankl="" western="" blot-analys="" visade="" att="" jämfört="" med="" skengruppen="" var="" proteinnivåerna="" för="" traf6,="" nf-kb="" och="" rankl="" i="" ovx-gruppen="" ökade="" signifikant="" (p="">< 0,05),="" medan="" opg,="" pi3k="" och="" akt="" minskade="" signifikant="" (figur="" 4).="" cis="" a="" (20="" mg/kg="" eller="" 80="" mg/kg)="" nedreglerade="" traf6-uttrycket="" signifikant="" (p="">< 0,05),="" följt="" av="" att="" rankl-uttrycket="" minskade="" och="" opg="" ökade,="" vilket="" innebär="" att="" opg/rankl-förhållandet="" uppreglerades.="" följaktligen="" nedreglerades="" signalkaskaderna="" för="" nf-kb="" och="" för="" pi3k/akt="" uppreglerades="" av="" cis="" a-behandling="" (p=""><>

Diskussion

Med tanke på begränsningarna av nuvarande terapeutiska alternativ förosteoporossjukdom finns det ett behov av alternativ från mat eller naturliga ätbara medicinalväxter. Som en del av vår pågående ansträngning att upptäcka effektiva antiosteoporotiska medel från TCM, hittade vi en serie extrakt, fraktioner och föreningar som har effekten av antiosteoporotiska egenskaper [13,14].Cistanche deserticolaär en viktig klassisk TCM, som visade sig ha en gynnsam säkerhetsprofil [15] och breda medicinska funktioner för behandling av njurbrist etc. [16]. Enligt teorin om TCM användes TCM som har effekten av uppfriskande njurar vanligtvis för att behandlaosteoporos; fenyletanoidglykosider är de huvudsakliga bioaktiva beståndsdelarna i denna ört, vilket innebär att fenyletanoidglykosider som finns i C. deserticola kan ha en antiosteoporotisk egenskap. Det bevisades att C. deserticola-extrakt avsevärt kunde hämma minskningen av BMD och förhindra försämring av trabekulär mikroarkitektur orsakad av OVX [17]. I in vitro-experimentet ökade det också signifikant ALP, benmorfogenetiskt protein-2 och osteopontin-mRNA, såväl som benmineralisering av odlade osteoblaster [18]. Echinakosid, en bioaktiv huvudkomponent i C. deserticola officiellt registrerad i den kinesiska farmakopén [11], uppvisade antiosteoporotisk aktivitet med en hög dos på 30~270 mg/kg kroppsvikt/dag [19], och ytterligare in vitro-resultat visade att det skulle kunna främja benregenerering genom att öka OPG/RANKL-förhållandet i MC3T3-E1 Subclone 14-celler [20]. Cis A var en av de fenyletanoidglykosider som isolerades från C. deserticola, och flera rapporter visade att denna förening hade antioxidativ aktivitet [21] och antiinflammatoriska egenskaper [22,23]. En nyligen publicerad artikel upptäckte att Cis A uppvisade skyddande aktiviteter på både CCl4 och alkoholinducerad hepatotoxicitet hos möss, och det visade också en skyddande egenskap på etanolinducerad skada i primärodlade mushepatocyter in vitro [24]. I vår nuvarande studie visade resultaten att Cis A hade antiosteoporotisk aktivitet vid en låg dos (20~80 mg/kg kroppsvikt/dag) genom att använda en ovariektomiserad mössmodell, och denna bioaktivitet utövades genom att nedreglera nivån av TRAF6, undertrycka uttrycket av RANKL och NF-KB och stimulerande OPG, PI3K och Akt, vilket betyder att den terapeutiska effekten av Cis A i OVX-möss var genom mekanismen för TRAF6-förmedlad NF-kappaB-inaktivering och PI3K/Akt-aktivering.

Det är välkänt att ovariektomi kan orsakaosteoporosmed en uppenbar minskning av BMD, biomekanisk styrka, benkvalitet och trabekulär benmikroarkitektur, och ovanstående förändringar beror delvis på östrogenbrist [25]. Nu, i det nuvarande in vivo-experimentet, visar vår studie att ovariektomi-induceradosteoporosresulterade i en signifikant minskning av biomekanisk styrka och trabekulära strukturella parametrar, inklusive BMD, BMC, TMC och Tb. N, och ökande Tb. Sp; och behandling av Cis A förbättrade signifikant benmekaniska egenskaper inklusive maximal belastning och styvhet, förbättrade BMD och förbättrade de flesta av de strukturella parametrarna för bentrabekulär mikroarkitektur i jämförelse med mössen i OVX-gruppen, vilket indikerar att Cis A var effektivt för att förbättra benkvaliteten och trabekulär mikroarkitektur i OVX-möss.

Förutom den totala BMD kan trepunktsböjningstestet och mätningen av trabekulär benmikroarkitektur direkt diagnostiseraosteoporosbenbildningsmarkörerna, inklusive ALP och BGP, och benresorptionsindex, inklusive TRAP, DPD och cathepsin K, användes också för att klargöra de relaterade antiosteoporotiska mekanismerna för Cis A. I vår studie, ALP-aktivitet i OVX-gruppmössen visade en icke-signifikant ökande trend, vilket indikerar en ökad benomsättningshastighet [26,27] i postmenopausalaosteoporos; den höga (80 mg/kg kroppsvikt/dag) och låga (20 mg/kg kroppsvikt/dag) dosen av Cis A-behandlingar visade signifikant förbättring av ALP-aktiviteten jämfört med skengruppen, medan BGP-aktiviteten inte verkade påverkas av ovariektomi i alla behandlade grupper; TRAP, DPD och cathepsin K ökade signifikant i OVX-gruppen, och Cis A-administration minskade avsevärt alla tre benresorptionsmarkörerna. Ovanstående data antydde att Cis A hade potentiell antiosteoporotisk aktivitet, och denna effekt utövades genom reglering av benmetabolism, inklusive både undertryckande av benresorption och ökad benbildning.

Samordningen mellan osteoblast och osteoklast är en kritisk faktor för att upprätthålla skelettintegritet. Osteoklaster, som uttrycker TRAP, fäster vid benytan genom bildandet av aktinbundna tätningszoner, inom vilka proteolytiska enzymer, såsom cathepsin K, frigörs, vilket leder till bildandet av resorptionsgropar. Moduleringen av osteoklastogenes av omogna celler av osteoblastlinjen förmedlas av RANKL och OPG [28]. OPG är en lockbetereceptor som hämmar RANKL-aktivering av osteoklastogenes och därigenom minskar benresorptionen. RANKL, som ger en viktig signal till osteoklastfamiljer, är en membranbunden molekyl av tumörnekrosfaktorligandfamiljen som främjar bildningen av osteoklaster. Förhållandet mellan OPG/RANKL-uttryck tros vara en nyckelparameter för osteoklastogen aktivitet, och signaleringskaskader aktiverade av RANKL inkluderar NF-KB- och PI3K-vägarna [29]. Vikten av NF-KB-vägen till osteoklastogenes visas av det faktum att deletionen av NF-KB i möss resulterade i frånvaron av mogna osteoklaster [30]. TRAF6 visade sig vara ett lovande mål för nya anti-osteoporotiska läkemedel. TRAF6-defekta möss som uppvisar defekt osteoklastogenes och svår osteopetros visade alltså vikten av TRAF6 i benmetabolismen. Nya bevis pekar på en kritisk regulatorisk funktion för TRAF6 i RANKL/RANK-medierade signalkaskader [4,31]. Data från den aktuella studien indikerade att Cis A-behandling på OVX-möss resulterade i nedreglering av TRAF6-proteinuttrycksnivåer, minskade RANKL och ökade OPG-uttryck och därigenom förhindrade RANKL-aktivering av nedströms NF-KB och aktivera PI3K/Akt-signalvägarna , vilket tyder på att Cis A hämmar osteoklastdifferentiering genom TRAF6-medierad NF-kappaB-inaktivering och PI3K/Akt-aktivering och ökar OPG/RANKL-förhållandet, vilket därefter hämmar osteoklastogenes och främjar benbildning.

Referenser

1. Lane, NE Epidemiologi, etiologi och diagnos avosteoporos. Am. J. Obstet. Gynecol 2006, 194 (Suppl. S2), S3–S11. [CrossRef] [PubMed]

2. Kanis, JA; McCloskey, EV; Harvey, NC; Johansson, H.; Leslie, WD Interventionströsklar och diagnosen avOsteoporos. J. Bengruvarbetare. Res. 2015, 30, 1747–1753. [CrossRef] [PubMed]

3. Jiang, J.; Li, J.; Jia, X. Den antiosteoporotiska aktiviteten av central-icaridin (CIT) på benmetabolism hos ovariektomiserade råttor. Molecules 2014, 19, 18690–18704. [CrossRef] [PubMed]

4. Li, J.; Zeng, L.; Xie, J.; Yue, Z.; Deng, H.; Ma, X.; Zheng, C.; Wu, X.; Luo, J.; Liu, M. Inhibering av osteoklastogenes och benresorption in vitro och in vivo av en prenylflavonoid xanthohumol från humle. Sci. Rep. 2015, 5, 1–14.

5. Barzel, USA Östrogener i förebyggande och behandling av postmenopausalaosteoporos: En recension. Am. J. Med. 1988, 85, 847–850. [CrossRef]

6. Zhu, Z.; Xue, LM; Han, T.; Jiao, L.; Qin, LP; Li, YS; Zheng, HC; Zhang, QY Antiosteoporotiska effekter och proteomisk karakterisering av målet och mekanismen för ett Er-Xian-dekok på osteoblastisk UMR-106 och osteoklaster inducerade från RAW264.7. Molecules 2010, 15, 4695–4710. [CrossRef] [PubMed]

7. Wu, YB; Zheng, CJ; Qin, LP; Sun, LN; Han, T.; Jiao, L.; Zhang, QY; Wu, JZ Den antiosteoporotiska aktiviteten av antrakinoner från Morinda Officinalis på osteoblaster och osteoklaster. Molecules 2009, 14, 573–583. [CrossRef] [PubMed]

8. Bonewald, LF Den fantastiska osteocyten. J. Bengruvarbetare. Res. 2011, 26, 229–238. [CrossRef] [PubMed]

9. Banin Hirata, BK; Oda, JM; Losi Guembarovski, R.; Ariza, CB; de Oliveira, CE; Watanabe, MA Molekylära markörer för bröstcancer: förutsägelse om tumörbeteende. Dis. Markörer 2014, 2014, 1–12. [CrossRef] [PubMed]

10. Alipieva, K.; Korkina, L.; Orhan, IE; Georgiev, MI Verbascoside—En översikt av dess förekomst, (bio)syntes och farmakologisk betydelse. Biotechnol. Adv. 2014, 32, 1065–1076. [CrossRef] [PubMed]

11. Pharmacopoeia, redaktionell kommitté för kinesisk farmakopé. Folkrepubliken Kinas farmakopé; China Medical Science and Technology Press: Peking, Kina, 2015.

12. Zhang, H.; Xing, WW; Li, YS; Zhu, Z.; Wu, JZ; Zhang, QY; Zhang, W.; Qin, LP Effekter av ett traditionellt kinesiskt örtpreparat på osteoblaster och osteoklaster. Maturitas 2008, 61, 334–339. [CrossRef] [PubMed]

13. Ma, X.-Q.; Zheng, C.-J.; Zhang, Y.; Hu, C.-L.; Bing, L.; Fu, X.-Y.; Han, L.-Y.; Xu, L.-S.; Rahman, K.; Qin, L.-P. Antiosteoporotiska flflavonoider från Podocarpium podocarpum. Phytochem. Lett. 2013, 6, 118–122. [CrossRef]

14. Ja, Q.; Ma, XQ; Hu, CL; Lin, B.; Xu, LS; Zheng, CJ; Qin, LP Antiosteoporotisk aktivitet och beståndsdelar av Podocarpium podocarpus. Fytomedicin 2015, 22, 94–102. [CrossRef] [PubMed]

15. Gao, Y.; Qin, G.; Wen, P.; Wang, Y.; Fu, W.; Han Jag.; Yao, S.; Zhao, P. Säkerhetsbedömning av pulverCistanche deserticola YCMagenom ett 90-dagsmatningstest på Sprague-Dawley-råttor. Drug Chem. Toxicol. 2016, 1–7. [CrossRef] [PubMed]

16. Huang, ZX; Chen, GM; Zhao, KT; Chen, R.; Lin, CF Studie om toxiciteten avCistanche Deserticola. Haka. J. Health Lab. Technol. 2014, 24, 1098–1100.

17. Zhang, L.; Yue, X.; Zhang, L.; Zhao, J.; Chen, Y.; Cao, Z.; Liu, Y. Anti-osteoporos effekt avCistanche deserticola Ma-extrakthos ovarieektomerade råttor. Trop. J. Pharm. Res. 2016, 15, 1929–1933. [CrossRef]

18. Li, TM; Huang, HC; Su, CM; Hej, TY; Wu, CM; Chen, WC; Fong, YC; Tang, CHCistanche deserticola extraktökar benbildningen i osteoblaster. J. Pharm. Pharmacol. 2012, 64, 897–907. [CrossRef] [PubMed]

19. Li, F.; Yang, X.; Yang, Y.; Guo, C.; Zhang, C.; Yang, Z.; Li, P. Antiosteoporotisk aktivitet av echinakosid i ovariektomierade råttor. Fytomedicin 2013,

20, 549-557. [CrossRef] [PubMed] 20. Li, F.; Yang, Y.; Zhu, P.; Chen, W.; Qi, D.; Shi, X.; Zhang, C.; Yang, Z.; Li, P. Echinacoside främjar benregenerering genom att öka OPG/RANKL-förhållandet i MC3T3-E1-celler. Fitoterapia 2012, 83, 1443–1450. [CrossRef] [PubMed]

21. Xiong, Q.; Kadota, S.; Tani, T.; Namba, T. Antioxidativa effekter av fenyletanoider frånCistanche deserticola. Biol. Pharm. Tjur. 1996, 19, 1580–1585. [CrossRef] [PubMed]

22. Nan, ZD; Zeng, KW; Shi, SP; Zhao, MB; Jiang, Y.; Tu, PF Fenyletanoidglykosider med antiinflammatoriska aktiviteter från stjälkarna avCistanche deserticolaodlade i Tarimöknen. Fitoterapia 2013, 89, 167–174. [CrossRef] [PubMed]

23. Xiong, Q.; Tezuka, Y.; Kaneko, T.; Li, H.; Tran, LQ; Hase, K.; Namba, T.; Kadota, S. Hämning av kväveoxid av fenyletanoider i aktiverade makrofager. Eur. J. Pharmacol. 2000, 400, 137–144. [CrossRef]. Luo, H.; Cao, R.; Wang, L.; Zhu, L. Skyddande effekt av Cistanchis A på etanol-inducerad skada i primära odlade mushepatocyter. Biomed. Pharmacother. 2016, 83, 1071–1079. [CrossRef] [PubMed]

25. Nian, H.; Ma, MH; Nian, SS; Xu, LL Antiosteoporotisk aktivitet av icariin i ovariektomierade råttor. Fytomedicin 2009, 16, 320–326. [CrossRef] [PubMed]

26. Swaminathan, R. Biokemiska markörer för benomsättning. Clin. Chim. Acta 2001, 313, 95–105. [CrossRef]

27. Lim, DW; Kim, JG; Lee, Y.; Cha, SH; Kim, YT Förebyggande effekter av Eleutherococcus senticosus barkextrakt i OVX-induceradosteoporoshos råttor. Molecules 2013, 18, 7998–8008. [CrossRef] [PubMed]

28. Bord, S.; Irland, DC; Beavan, SR; Compston, JE Effekterna av östrogen på osteoprotegerin, RANKL och östrogenreceptoruttryck i mänskliga osteoblaster. Bone 2003, 32, 136–141. [CrossRef]

29. Takayanagi, H. Osteoimmunologi: delade mekanismer och överhörning mellan immun- och bensystemet. Nat. Rev. Immunol. 2007, 7, 292–304. [CrossRef] [PubMed]

30. Franzoso, G.; Carlson, L.; Xing, L.; Poljak, L.; Shores, EW; Brown, KD; Leonardi, A.; Tran, T.; Boyce, BF; Siebenlist, U. Krav på NF-kappaB vid osteoklast- och B-cellsutveckling. Gene Dev. 1997, 11, 3482–3496. [CrossRef] [PubMed]

31. Tan, EM; Li, L.; Indran, IR; Chew, N.; Yong, EL TRAF6 förmedlar undertryckande av osteoklastogenes och förhindrande av ovariektomi-inducerad benförlust av en ny prenylflavonoid. J. Bengruvarbetare. Res. 2016. [CrossRef] [PubMed]

32. Jiao, L.; Cao, DP; Qin, LP; Han, T.; Zhang, QY; Zhu, Z.; Yan, F. Antiosteoporotisk aktivitet av fenoliska föreningar från Curculigo orchioides. Phytomedicine 2009, 16, 874–881. [CrossRef] [PubMed]