Överföring av klassisk svinpestvirus hos samboende smågrisar med olika immunstatus efter försvagat levande vaccin

Enkel sammanfattning:

Klassisk svinpest är en mycket farlig patogen som drabbar tamsvin. Vaccination med det modifierade levande vaccinet är avgörande för att förebygga och kontrollera klassisk svinpest. Många faktorer, såsom antikroppar härrörande från modern via råmjölk, kan emellertid störa effekten av levande vaccin, vilket leder till ofullständigt skydd i kommersiella besättningar. I denna studie undersökte vi överföringen av klassisk svinpestvirus i experimentella smågrisar med olika immunstatus efter vaccination. En specifik patogenfri smågris infekterad med klassisk svinpestvirus fungerade som viral donator och primär inkräktare och var sambo med smågrisar med antikroppar från modern som hade eller inte hade genomgått vaccination. Enligt resultaten var de flesta av smågrisarna med antikroppar från modern som vaccinerades helt skyddade från kontaktöverföring från den virala donatorn och blockerade virusöverföringen till tredje part (de smågrisar som sekundärt exponerades genom samlevnad). Cellmedierad immunitet, representerad av specifika interferon- -utsöndrande celler, fungerade som nyckeln till viral clearance och återhämtning. Däremot hade de ovaccinerade smågrisarna med låga nivåer av moderligt härledda antikroppar påskyndat klassisk svinpestvirusinfektion efter virusinvasionen. Sammanfattningsvis inducerar vaccination fortfarande solid immunitet i kommersiella besättningar under antikroppsinterferens från modern och kan blockera virusöverföring i besättningar.

cistanche växthöjande immunförsvar

Abstrakt:

Klassisk svinpest (CSF) är en systemisk hemorragisk sjukdom som drabbar tamsvin och vildsvin. Det modifierade levande vaccinet (MLV) inducerar ett snabbt och stabilt skydd mot CSF-virus (CSFV)-infektion. Maternalt härledda antikroppar (MDA) via råmjölk kan störa MLV:s effektivitet, vilket leder till ofullständigt skydd mot CSFV-infektion hos grisar. Denna studie undersökte CSFV-överföring bland experimentella smågrisar med olika immunstatus efter MLV. Nitton smågrisar, 18 med MDA och 1 specifik patogenfri smågris infekterad med CSFV som fungerade som CSFV-donator, var samboende med smågrisar som hade eller inte hade administrerats MLV. Fem sjättedelar av smågrisarna med MDA som hade administrerats en dos MLV var helt skyddade från kontaktöverföring från CSFV-givaren och överförde inte CSFV till smågrisarna som exponerades sekundärt genom samlevnad. Cellmedierad immunitet, representerad av de anti-CSFV-specifika interferon- -utsöndrande cellerna, var nyckeln till virusclearance och återhämtning. Efter samlevnad med en CSFV-givare uppvisade de ovaccinerade smågrisarna med låga MDA-nivåer CSFV-infektion och spred CSFV till andra smågrisar genom kontakt; de med höga MDA-nivåer återhämtade sig men agerade som asymtomatiska bärare. Sammanfattningsvis inducerar MLV fortfarande solid immunitet i kommersiella besättningar under MDA-interferens och blockerar CSFV-överföring inom dessa besättningar.

Nyckelord:

klassisk svinpest; modifierat levande vaccin; antikropp härledd från modern; överföring

1. Introduktion

Klassisk svinpest (CSF) är en gränsöverskridande, mycket smittsam, hemorragisk sjukdom som drabbar tamsvin och vildsvin och orsakas av klassisk svinpestvirus (CSFV) [1,2]. CSF är en anmälningspliktig sjukdom av World Organization for Animal Health (WOAH), och CSF är fortfarande en endemisk sjukdom i Asien, Sydamerika, Centralamerika och Karibien. Endast nordamerikanska, oceaniska och västeuropeiska länder har framgångsrikt utrotat CSF [3–6].

CSFV är ett enveloped single-stam RNA-virus avPestivirussläktet av Flaviviridae-familjen som också omfattar det bovina virala diarréviruset och gränssjukdomsviruset [1,2]. Det virala genomet innehåller cirka 12,3 kb och kodar för 3898 aminosyror av polyprotein, som senare bearbetas till fyra strukturella (C, Erns, El och E2) och åtta icke-strukturella (Npro, p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, och NS5B) proteiner av virala och cellulära proteaser [7]. Baserat på E2- eller NS5B-sekvenserna klassificeras CSFV i tre genotyper med tre eller fyra subtyper (1.1, 1.2, 1.3; 2.1, 2.2, 2.3; 3.1, 3.2, 3.3, 3.4) [8]. Beroende på CSFV-virulens och grisfaktorer, inklusive ålder, ras, hälsotillstånd och immunstatus, kan CSFV-infekterade grisar uppvisa antingen akuta, subakuta eller kroniska kliniska tecken [9-11]. Grisar infekterade med högvirulens CSFV uppvisar akut feber och svåra hemorragiska lesioner och utsöndrar höga virusmängder i sin avföring, saliv och sekret under sina korta överlevnadsdagar. Däremot uppvisar grisar infekterade med måttlig virulens och lågvirulens CSFV subakuta och kroniska kliniska tecken och lindrigare lesioner och utsöndrar måttliga-låga nivåer av CSFV i sin avföring, saliv och sekret under sina relativt längre överlevnadsdagar [12,13 ]. På fältet kan primärt infekterade grisar spela en framträdande roll i den sekundära överföringen av CSFV till andra grisar med varierande immunitet mot CSFV. Överförbarheten av måttlig virulens och högvirulens CSFV är högre än för lågvirulens CSFV [12,13].

Vaccination är avgörande för att förebygga och kontrollera CSF i endemiska länder. Det modifierade levande vaccinet (MLV) är ett högeffektivt, säkert och prisvärt vaccin som är det mest använda bland kommersiella besättningar. MLV kan snabbt inducera immunitet för att ge partiellt skydd 3 dagar efter vaccination och fullständigt skydd 5 dagar efter vaccination [14-16]. Men många faktorer, inklusive vaccinkvalitetsgrisars hälsostatus och nivån av maternalt härledda antikroppar (MDA), kan minska MLV:s effektivitet, vilket leder till ofullständigt skydd av vaccinerade grisar [14–16]. I CSF-endemiska besättningar beror tidpunkten för MLV-vaccination på grisarnas MDA-nivåer; höga nivåer av MDA interfererar med MLV:s effekt, och låga MDA-nivåer ökar smågrisarnas risk för infektion [17,18]. Därför måste formuleringarna av MLV-vaccinationsprogram i besättningar baseras på minskningar av nivåerna av MDA. Ett regelbundet implementerat vaccinationsprogram mot CSF i Taiwan innebär att man vaccinerar dräktiga suggor för att ge MDA genom sin råmjölk till nyfödda och sedan administrera den första dosen av MLV till smågrisarna vid 3–12 veckors ålder. Enligt övervakning i Taiwan är de genomsnittliga titrarna av anti-CSFV-neutraliserande antikroppar (NA) av MDA hos smågrisar vid tidpunkten för deras första MLV-vaccination högre än 1:32 [19], vilket kan försämra MLV:s effektivitet och resultera i olika immunstatus i besättningar. Denna studie beskriver ett djurexperiment för att undersöka förmågan hos MLV att skydda smågrisar med olika nivåer av MDA efter samlevnad med en CSFV-infekterad smågris som agerade som en CSFV-donator (dvs. den "primära inkräktaren").

2. Material och metoder

2.1. Celler och virus

Porcin-circovirus-typ-1-fria porcina njure-15 (PK-15) celler odlades i minimalt essentiellt medium (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA) med 5 % fetalt bovint serum (FBS) och inkuberades vid 37 ◦C i 5 % CO2. PK-15-cellerna stödde CSFV-förökning, inklusive Lapinized Philippines Coronel (LPC)-vaccinstammen av genotyp 1.1 och TD/96-stammen av genotyp 2.1. Virustitrarna för LPC- och TD/96-stammarna var 107,71 respektive 105,87 vävnadsodlingsinfektiös dos 50 % (TCID50).

2.2. Experimentell design

Totalt {{0}}veckogamla smågrisar bestående av 1 specifik patogenfri (SPF) gris utan anti-CSFV NA (Grupp 1) och 18 friska smågrisar (Grupp 2–5) från LPC-vaccinerade suggor från en CSFV-fri besättning (Figur 1) användes i experimentet. De 18 friska smågrisarna delades slumpmässigt in i fyra grupper (grupp 2–5); medelvärdet för anti-LPC NA-titer (log2) bland grupp 2–5 var 3,7 ± 2,2, 3,7 ± 2,3, 4,3 ± 2,2 respektive 4,3 ± 1,3 log2-veck och var inte signifikant olika vid 0 dagar efter experimentet (DPE). SPF-grisen (Grupp 1) inokulerades ironiskt nog genom att använda 5 × 105 TCID50 TD/96-stammen vid 7 DPE och fungerade som den primära inkräktaren eller CSFV-donatorn när den var sambo i rum 12 med grupperna 2 och 3 (Figur 1). För att testa huruvida MDA minskade MLV:s effektivitet, vaccinerades grupp 2 (n=6) med en enkeldos LPC-vaccin (över 1 × 104 TCID50/dos) vid 0 DPE. För att testa MDA-skyddsförmågan vaccinerades inte grupp 3 (kontrollen för grupp 2; n=3) med LPC-vaccinet, och dessa smågrisar uppvisade således MDA-förfall efter 7 dagar efter första kontakt med den primära inkräktaren. Grupp 1 (primär inkräktare) samlevde med grupp 2 och 3 i 10 dagar (från 7 till 17 DPE). Grupp 2 överfördes sedan till rum 2 för att fungera som sekundära inkräktare genom samboende med grupp 4 (n=6) från 17 till 36 DPE. Grupp 3 flyttades till rum 4 för att sambo med grupp 5 (n=3). Grupperna 4 och 5 var således smågrisar med 17 dagars MDA-förfall efter första kontakt med de sekundära inkräktarna. Institutional Animal Care and Use Committee vid Animal Health Research Institute godkände detta djurförsök (godkännandenummer A09007).

Figur 1. Experimentell design.

Djuren övervakades dagligen för kliniska tecken, och varje parameter poängsattes från 0 till 3, vilket representerar normal till svår, enligt Mittelholzers metod [19]. Rektal temperatur mättes och blod-, saliv- och fekala prover togs två gånger i veckan till 35 DPE. Prover analyserades för CSFV-belastningar och anti-CSFV-antikroppar. En obduktion utfördes vid 18 DPE för grupp 1, vid 36 DPE för grupp 2 och 3 och vid 39 DPE för grupp 4 och 5. Miljöproverna (dvs. svabbar från staketet, avföring på golvet, foderhon, och dryckesfontänen) analyserades också för CSFV.

2.3. Kvantitativ omvänd transkription i realtid polymeraskedjereaktion (QRRT-PCR) av CSFV

Provernas virala RNA extraherades med QIAamp® Viral RNA Mini Kit (QIAGEN, Hilden, Tyskland) och detekterades genom kvantitativ omvänd transkriptionspolymeraskedjereaktion (QRRT-PCR) [20]. QRRT-PCR användes för att detektera de olika genotyperna och kvantitativt analysera CSFV-belastningarna av proverna.

cistanche fördelar för män stärker immunförsvaret

Klicka här för att se produkter från Cistanche Enhance Immunity

【Be om mer】 E-post:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2.4. Anti-CSFV NAs

Uppvärmning av smågrisarnas sera till 56 ◦C inaktiverat komplement möjliggjorde detektering av anti-LPC och TD/96 NA. I korthet, 2-faldigt serieutspädda serumprover, med början vid 1:4, blandades med lika volymer av 100 TCID50 av LPC- eller TD/96-stammen. Blandningarna inkuberades vid 37 ◦C under 1 timme och överfördes därefter till PK-15-celler i 96-brunnsplattor. Efter inkubation i 3 dagar fixerades cellerna och färgades för att detektera närvaron av CSFV-antigen genom indirekt fluorescensanalys. Antikroppens neutraliserande titer är log2 för utspädningsfaktorn för antikroppen (reciprok av utspädning) när 50 % av brunnarna är skyddade från infektion.

2.5. CSFV-specifikt interferon (IFN)- -Utsöndrar celler

För att utvärdera den anti-CSFV-cellmedierade immuniteten (CMI) hos smågrisarna, utfördes ett ex vivo CSFV-specifikt IFN-svarstest av perifera mononukleära blodceller (PBMC). PBMC från det EDTA-antikoagulerade blodet utsattes för centrifugering vid 400× g med hjälp av Histopaque-1077 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA). PBMC:erna suspenderades i RPMI 1640-medium (Thermo Fisher Scientific, Carlsbad, CA, USA) innehållande 10 % (vol/vol) värmeinaktiverad FBS, 100 enheter/ml penicillin G, 100 µg/ml streptomycin och 0,25 µg mL amfotericin B. Antalet CSFV-specifika IFN- -utsöndrande PBMC:er detekterades genom svin IFN-enfärgad enzymatisk ELISPOT-analys (CTL, Shaker Heights, OH, USA). I 96-brunnsplattor tilldelades PBMC:er vid 5 × 106 celler/ml vid 100 µL per brunn med IFN-infångningsantikropp från svin till skengruppen (inokulerad med RPMI 1640-medium), TD/96-gruppen (infekterad med 0,1 MOI), och ConA-gruppen (kompletterad med 5 µg/ml concanavalin A; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA), som tjänade som positiv kontroll. Duplexstimuleringar användes varje gång. Efter 48 timmars stimulering tvättades brunnarna, den IFN- -detekterade antikroppen bands och substratet såddes. Fläckarna i varje brunn screenades och analyserades med användning av CTL Analyzer.

2.6. Immunhistokemi

De lymfoida vävnaderna undersöktes genom immunhistokemisk analys med hjälp av Super Sensitive Polymer HRP IHC-detektionssystem (BioGenex, Haag, Nederländerna) och den monoklonala antikroppen 1C7A1 mot genotyp 2.1 CSFV-stammarna [21]. Utvecklingen av en brun färg indikerar närvaron av CSFV.

2.7. Statistik

En variansanalys och Duncans multipla intervalltest användes för att bestämma de statistiskt signifikanta skillnaderna mellan grupperna. Dataanalys utfördes med hjälp av SAS (SAS Institute, Cary, NC, USA). Ett p-värde på mindre än 0.05 indikerade statistisk signifikans.

3. Resultat

3.1. Kliniska tecken

Alla smågrisar var friska före experimentet (tabell 1). Grupp 1-grisen var CSFV-donatorn (primär inkräktare) och inokulerades med TD/96-stammen. De feber- och CSFV-associerade kliniska tecknen i grupp 1 upptäcktes vid 12 DPE respektive 13 DPE, med kontinuerligt ökande poäng från 13–18 DPE som toppade med en poäng på 20 vid 18 DPE. För smågrisarna i grupp 2 och 3 som bodde tillsammans med CSFV-donatorn, var grupp 2, som bestod av smågrisarna med MDA som hade vaccinerats med LPC-vaccinet, friska och uppvisade ingen feber eller några CSFV-associerade kliniska tecken under experimentet . De i grupp 3, som omfattade smågrisar med MDA som inte hade genomgått LPC-vaccination, uppvisade feber vid 23 DPE (16 dagar efter första kontakt, DP1C), och antalet febergrisar ökade från 23–36 DPE. Febern var korrelerad med CSFV-associerade kliniska tecken som manifesterades vid 24 DPE (17 DP1C). Även om en smågris (8138) uppvisade milda kliniska tecken (poäng under 5), försämrades de andra två smågrisarna kliniskt från 24–36 DPE, med sina poäng mellan 12 och 16. Gris 8136 i grupp 3 dog vid 29 DPE. Grupp 4-grisarna som var i kontakt (samlevde) med de i grupp 2 var också friska och hade inte feber eller CSFV-associerade kliniska tecken under försöksperioden. Grupp 5-grisarna som var i kontakt med de i grupp 3 uppvisade feber vid 27 DPE (10 dagar efter andra kontakten, DP2C) och CSFV-associerade kliniska tecken vid 30 DPE (13 DP2C). Antalet febrila smågrisar och de kliniska poängen i grupp 5 ökade med tiden; poängen vid 39 DPE var 21 ± 1,4, mellan 19 och 22.

Tabell 1. Andel febrila smågrisar i varje grupp under försöksperioden.

Enligt de kliniska parametrarna kunde närvaron av endast MDA (Grupp 3) inte skydda smågrisarna från kontaktöverföring inducerad av den primära inkräktaren (Grupp 1). En enstaka dos av LPC-vaccinet utöver MDA (Grupp 2; dvs. den allmänt tillämpade praxis) erbjöd skydd mot kontaktöverföring inducerad av den primära inkräktaren (Grupp 1; Tabell 1). Den allmänt tillämpade vaccinationspraxisen gynnade också de sekundärt invaderade smågrisarna (dvs grupp 4, som bara hade MDA men var fria från feber och kliniska tecken). Kliniskt sett rekapitulerade situationen i grupp 5 (grisarna med kontaktöverföring inducerad av de sekundära inkräktarna) situationen i grupp 3 (kontaktöverföring inducerad av den primära inkräktaren).

3.2. CSFV Viremia

CSFV TD/96-stammen detekterades inte i blodet hos någon av smågrisarna före experimentet (figur 2A och 3A). Efter TD/96-ympning upptäcktes TD/96-viremi i grisen grupp 1 först vid 10 DPE (3 dagar efter inokulering, POI) och detekterades kontinuerligt till 17 DPE. CSFV-belastningarna ökade från 101,2 TCID50/mL vid 10 DPE till 106,4 TCID50/mL vid 17 DPE. I grupp 2, bestående av smågrisar med LPC-vaccination som hade samlevt med den primära inkräktaren, upptäcktes TD/96-viremi hos endast en smågris (8134) från 21–35 DPE. CSFV-belastningarna i blodet från Piglet 8134 nådde sin topp (104,9 TCID50/mL) vid 24 DPE och minskade därefter till 101,7 TCID50/ml vid 35 DPE. I grupp 3, bestående av smågrisar utan LPC-vaccination som hade levt ihop med den primära inkräktaren, upptäcktes TD/96-viremi först hos 66,7 % (2/3) av smågrisarna vid 21 DPE (14 DP1C), och alla var positiva vid 24 DPE. Nisse 8138 var dock negativ för TD/96-viremi från 28–35 DPI (Figur 2A). I grupp 4, bestående av smågrisarna som samlevde med grupp 2 i rum 2, upptäcktes inte TD/96-viremi under försöksperioden. Alla smågrisar i grupp 5, som omfattade de smågrisar som hade varit i kontakt med grupp 3, var positiva för TD/96-viremi från 31–35 DPE. CSFV-belastningarna varierade mellan 105,1 och 106,7 TCID50/ml vid 35 DPE (Figur 3A). I grupp 2 och 3 fördröjde närvaron av MDA den första upptäckten av viremi till 10 DP1C (dvs. smågrisarna förblev symtomfria till 17 DPE; Tabell 1) med den primära inkräktaren, jämfört med dag 3 POI i grupp 1 i den akuta fas. Den ytterligare enkeldosen av LPC-vaccinet (Grupp 2) minskade andelen viremiska grisar med 83 % (Figur 2A). På liknande sätt minskade den extra enkeldosen av LPC-vaccinet virusbelastningen i blodet från 28–35 DPE (Figur 3A). LPC-vaccinationen av grupp 2 gynnade också de grupp 4-grisar som de sedan samlevde med (sekundärt invaderade), trots att en av grupp 2-grisarna hade övergående viremi (Figur 2A) och saliv (Figur 2B) och avföring (Figur 2C) av TD /96. Denna förändring i den viremiska statusen korrelerade med den som bestämts på basis av de kliniska parametrarna (avsnitt 3.2), även om laboratoriedetekteringen var mer känslig.

Figur 2. Antal (procent) av smågrisar som är positiva för TD/96 som detekterats genom QRRT-PCR [20] av (A) blod, (B) saliv och (C) avföring från smågrisarna i varje grupp under försöksperioden. Grupp 1-grisen inokulerades ironiskt nog med TD/96 vid 7 DPE och fungerade som CSFV-donator (dvs primär invaderare) för Grupp 2 och 3. Smågrisarna i Grupp 2 som genomgick LPC-vaccination vid 0 DPE och de i Grupp 3 som genomgick inte LPC-vaccination sambo med grupp 1-grisen från 7–17 DPE. Smågrisarna i grupp 4 och 5 samlevde med de i grupp 2 respektive 3 (dvs sekundära inkräktare), från 17–36 DPE.

Figur 3. CSFV-belastningar finns i (A) blod, (B) saliv och (C) avföring från smågrisarna i varje grupp.

3.3. CSFV fällning i saliv

CSFV TD/96-stammen detekterades inte i saliven hos någon av smågrisarna före experimentet (figur 2B och 3B). Saliven från grupp 1-grisen var först positiv för TD/96 vid 14 DPE (7 DP1C), vilket fortsatte till 17 DPE. CSFV-belastningarna ökade från 105,8 TCID50/mL vid 14 DPE till 107,6 TCID50/mL vid 17 DPE. I grupp 2 smågrisar som hade vaccinerats med LPC och hade bott tillsammans med CSFV-donatorn upptäcktes TD/96 först i 66,7 % (4/6) av salivproverna vid 14 DPE (7 DP1C), vilket blev negativt därefter. Senare tappade en annan smågris (1/6, smågris 8134 med TD/96-viremi; figur 2A), TD/96 i sin saliv från 21–24 DPE vid 101,2 och 102,7 TCID50/mL, en lägre nivå än de tidigare nämnda smågrisarna. . I grupp 3 med smågrisarna med endast MDA och utan LPC-vaccination som hade samlevt med CSFV-donatorn, upptäcktes initialt TD/96 i 66,7 % (2/3) av salivproverna vid 21 DPE, och alla salivprover var positiva av 24 DPE. I grupp 4 bestående av de smågrisar som levde tillsammans med de i grupp 2, upptäcktes inte TD/96 i salivproverna under försöket, medan i grupp 5, bestående av smågrisarna som levde ihop med de i grupp 3, var alla salivprover positiva för TD/96 från 24–35 DPE. CSFV-belastningarna ökade med tiden och varierade från 105,9 till 107,3 ​​TCID50/mL med 35 DPE. Totalt fyra sjättedelar av smågrisarna i grupp 2 (med singeldos LPC-vaccination) hade TD/96-positiv saliv vid 14 DPE före viremi. CSFV upptäcktes tidigare i smågrisar i grupp 2 som hade varit i kontakt med grupp 1 smågrisar under sin TD/96-utfällning. En smågris (Piglet 8134) i grupp 2 uppvisade senare övergående utsöndring från 21–24 DPE, vilket är mer troligt representativt för CSFV:s replikation i spottkörtlarna efter viremi. Enligt jämförelsen mellan grupp 2 och 3 minskade LPC-vaccinationen CSFV-utsöndringen.

3.4. CSFV utsöndring i avföring

CSFV TD/96-stammen detekterades inte i avföringen från någon av smågrisarna före experimentet (figur 2C och 3C). Avföringen från grupp 1-grisen var TD/96-positiv först vid 14 DPE (7 DPIC), vilket fortsatte till 17 DPE. CSFV-belastningarna ökade från 105,1 TCID50/g vid 14 DPE till 108,8 TCID50/mL vid 17 DPE. I grupp 2, omfattande smågrisarna med LPC-vaccination som samlevde med grupp 1 CSFV-donatorn, fälldes endast smågris 8134 tillfälligt vid 24 DPE (17 DPIC), medan alla andra smågrisar i grupp 2 var negativa. I grupp 3, bestående av smågrisar utan LPC-vaccination som samlevde med CSFV-donatorn, var två tredjedelar av smågrisarna (alla utom Gris 8138) positiva mellan 21 (14 DP1C) och 35 DPE, under vilken tid CSFV-belastningen ökade från 105,1 TCID50/g vid 21 DPE till 107,5 TCID50/mL vid 31 DPE. De fekala proverna av Piglet 8138 med övergående TD/96-viremi var dock inte positiva för TD/96. I grupp 4, bestående av smågrisarna som levde tillsammans med de i grupp 2, var alla fekala prover negativa för TD/96 under försöksperioden. I grupp 5, som omfattade smågrisarna som bodde tillsammans med grupp 3, ökade antalet TD/96-positiva fekala prover över tiden från 24–35 DPE, och belastningarna varierade från 105,7 till 107,2 TCID50/g vid 35 DPE . I grupp 5 inträffade den första detekteringen vid 24 DPE (7 DP2C), vilket liknade den i grupp 1 (14 DPE), och den övergripande profilen var parallell med viremin (Figur 2A), vilket tyder på att CSFV replikerades lokalt efter viremi . Som beskrivs i avsnitt 3.3 och 3.4 var avföring och saliv de primära vehiklerna för CSFV-kontaktöverföring.

cistanche tubulosa-förbättra immunförsvaret

3.5. CSFV-belastningar i vävnader erhållna genom obduktion

Vävnader från grupp 1 CSFV-donatorn och från smågrisarna i grupp 3 och 5 som den samlevde med var TD/96-positiva (tabell 2). TD/96-belastningarna i vävnaderna hos grisen grupp 1 varierade mellan 103,76 och 109,37 TCID50/g. I grupp 5, omfattande smågrisarna som var i kontakt med de i grupp 3, upptäcktes TD/96 i alla smågrisar och fördelade över alla vävnader, med högre belastningar i de hematolymfoida organen (tonsiller, lymfkörtlar och mjälte) och dessa organ med en mer riklig blodtillförsel (lever, lungor, hjärta och njurar), som presenteras i figur 2A, C. De högsta TD/96-belastningarna var i de lymfoida vävnaderna (över 109,0 TCID50/g). Däremot var de icke-hematolymfoida vävnaderna från de sammanboende smågrisarna i grupp 2 och 4, med undantag för smågris 8134 i grupp 2, som hade övergående TD/96-viremi, lågnivå TD/96-positiva endast i blodet, tonsillerna, inguinala lymfkörtlar , och submaxillära lymfkörtlar, med dessa nivåer mellan 101,65 och 103,78 TCID50/g. I grupp 3, omfattande smågrisarna utan LPC-vaccination som hade varit i kontakt med grupp 1 CSFV-donatorn, detekterades TD/96 i alla vävnader hos två av de tre smågrisarna (förutom smågris 8138). Gris 8138 i grupp 3, som hade övergående TD/96-viremi, hade TD/96 i sina tonsiller, submaxillära lymfkörtlar och bronkiella lymfkörtlar, även om virusbelastningen var lägre än genomsnittet och varierade mellan 103,08 och 104,69 TCID50/ml.

Tabell 2. CSFV-belastningar detekterade i olika vävnader hos smågrisarna genom CSFV QRRT-PCR

3.6. CSFV i försöksmiljön

Staketet, avföring på golvet, foderhon och dricksfontänen i varje experimentrum testades för TD/96 genom QRRT-PCR (tabell 3). TD/96 detekterades vid 14 och 17 DPE i avföringen på golvet i rum 12, där grupp 1 CSFV-donatorn bodde tillsammans med smågrisarna i grupp 2 och 3. Staketet, foderhon och dricksfontänen testade alla negativa. Proverna från rum 2 där grupp 2 och 4 var sambor var alla negativa från 21–35 DPE. TD/96 upptäcktes först i avföringen på golvet i rum 4 (Grupp 3 och 5) vid 24 DPE. Därefter upptäcktes TD/96 på staketet, foderhon och dryckesfontänen i rum 4 från 28–35 DPE. Dessa resultat indikerar att avföring (som potentiellt kan finnas i alla typer av miljöprover) och saliv (som med största sannolikhet skulle finnas i proverna i foderhon och dricksfontän) var de primära vehiklerna för kontaktöverföring. Den övergående virala utsöndringen av grisarna i grupp 2 (figur 2 och 3) infördes inte i rum 2, där de bodde tillsammans med grisarna i grupp 4.

Tabell 3. CSFV-laster av miljöprover från försöksrummen.

3.7. CSFV-specifik IFN- -Utsöndrar PBMC:er

CSFV-specifika IFN- -utsöndrande celler undersöktes i PBMC:erna för smågrisarna i grupperna 2 till 5 mellan 7 och 35 DPE (Figur 4). I grupp 2-grisarna var antalet IFN- -utsöndrande celler, även om det hade en frekvens på mindre än 0.1 % av PBMC:erna, signifikant högre än i grupp 3, 4 och 5 mellan 7 och 35 DPE. Antalet IFN- -utsöndrande celler i smågris 8134 i grupp 2, som hade övergående TD/96-viremi inom en liknande tidsram (Figur 2A), korrelerade med de betydligt lägre siffrorna 56 (21 DPE) och 62 (28) DPE, gruppgenomsnitt Större än eller lika med 116); dessa siffror nådde dock gruppgenomsnittet med 35 DPE. Antalet CSFV-specifika IFN- -utsöndrande celler i grupperna 3, 4 och 5 var inte signifikant olika.

Figur 4. CSFV-specifika IFN- -utsöndrande celler undersöktes i PBMC:erna hos smågrisar i grupp 2 till 5 mellan 7 och 35 DPE. Smågrisarna i grupp 2 med LPC-vaccination vid 0 DPE och de i grupp 3 utan LPC-vaccination samlevde med grupp 1 CSFV-donatorn från 7 till 17 DPE. Smågrisarna i grupp 4 och 5 samlevde med de i grupp 2 respektive 3, från 17 till 35 DPE. Värden med olika upphöjda bokstäver, a och b, indikerar en statistiskt signifikant skillnad (p < 0.05) från varandra. Det finns inga signifikanta skillnader mellan värden som innehåller samma bokstav

3.8. Anti-CSFV NAs

Anti-CSFV NA i smågrisserumet genererades som svar på antingen LPC-stammen (Figur 5A) eller TD/96-stammen (Figur 5B). Anti-CSFV NA detekterades inte i grupp 1 CSFV-donatorn mellan 7 och 17 DPE. Sera från smågrisarna i grupperna 2 till 5 vid {{10}} DPE uppvisade titrar mellan 5 och 7 log2 (mellan 32- och 128-faldigt). Efter att grupp 2-grisarna vaccinerats med LPC-vaccinet och samlevt med CSFV-donatorn, minskade inte den genomsnittliga titern mellan 0 och 28 DPE. På grund av ökningen av anti-LPC NAs i Piglet 8134 från 31–35 DPE, ökade den genomsnittliga titern för grupp 2 signifikant. I grupp 3 smågrisar utan LPC-vaccination som samlevde med CSFV-donatorn minskade den genomsnittliga titern gradvis mellan 0 och 28 DPE. När titern för smågris 8138 gradvis ökade mellan 21 och 35 DPE, ökade medeltitern för grupp 3 omvänt mellan 31 och 35 DPE. De genomsnittliga titrarna för grupperna 4 och 5 minskade med tiden. I allmänhet var anti-TD/96 NA-profilen för varje grupp parallell med anti-LPC NA-profilerna, även om anti-TD/96 NA-genomsnittet var mellan 1,3 och 3,7 log2 (ungefär 2–12-faldigt; Figur 5B), vilket var lägre än medelvärdet för anti-LPC NA.

Figur 5. Anti-LPC (A) eller TD/96 (B) NA i sera från smågrisarna i varje grupp under experimentperioden. Grupp 1-grisen ympades ironiskt nog med TD/96 vid 7 DPE och fungerade som CSFV-donator (dvs. primär inkräktare), och samlevde därefter med smågrisarna i grupperna 2 och 3 från 7 till 17 DPE. Grupp 2-grisarna LPC-vaccinerades vid 0 DPE och grupp 3-grisarna vaccinerades inte med LPC. Smågrisarna i grupp 4 och 5 samlevde med de i grupp 2 respektive 3, från 17 till 35 DPE.

Den uppskattade halveringstiden för MDA härledda från antikroppstitrarna för grisarna i grupp 4 överförda genom råmjölken från LPC-vaccinerade suggor var 10,7 dagar (Figur 5A). Denna uppskattning stöds av negativ feber och kliniska tecken (tabell 1), negativ viremi, saliv och fekal virusbelastning (figur 2 och 3) och vävnader (tabell 2; se avsnitt 3.9) och miljöprover (tabell 3) ) av grisarna i grupp 4, vilket indikerade att de inte hade infekterats med TD/96-viruset under försöksperioden.

3.9. Immunhistokemi detektering av CSFV-antigensignaler i obduktionsvävnadsprover

Signalerna för CSFV TD/96 detekterades i de lymfoida vävnaderna hos grupp 1 CSFV-donatorn (Figur 6I), från en smågris i grupp 2 (Gris 8134, som hade CSFV-belastningar i blodet som låg på den högsta nivån på 104,9 TCID50 /ml vid 24 DPE och som därefter minskade till 101,7 TCID50/ml vid 35 DPE), av tre smågrisar i grupp 3 och av tre smågrisar i grupp 5. Grupp 4-grisarna var inte positiva för TD/96 (Figur 6J). De starka CSFV TD/96-signalerna var brett distribuerade i tonsiller, mjältar och lymfkörtlar hos smågrisarna i grupp 1, 3 (förutom för smågris 8138) och 5. För smågris 8134 (grupp 2) med övergående TD/96-viremi , spridda TD/96-positiva signaler var mestadels lokaliserade i de parenkymala områdena i tonsillerna, medulla i inguinala lymfkörtlar och submaxillära lymfkörtlar (Figur 6A–D), vilket överensstämmer med resultaten av virusbelastningen kvantifiering av dessa vävnader (tabell 2). Morfologin och distributionen av de TD/96-positiva cellerna var starkt makrofagiska. I Piglet 8138 (Grupp 3) med transient TD/96-viremi var antalet och fördelningen av de TD/96--positiva signalerna (Figur 6E–H) liknande de i Piglet 8134.

Figur 6. CSFV-antigener i de lymfoida vävnaderna märktes av den monoklonala 1C7A1-antikroppen. En lymfkörtel (A, B) och tonsill (C, D) från Piglet 8134 (Grupp 2), som hade övergående TD/96-viremi, presenterar den bruna TD/96-positiva signalen. En lymfkörtel (E, F) och tonsill (G, H) från Piglet 8138 (Grupp 3), som hade övergående TD/96-viremi, presenterar den bruna TD/96-positiva signalen. En lymfkörtel (I) från Piglet 8150 (Grupp 1) visar en diffus brun TD/96-positiv signal i paracortex. En lymfkörtel (J) av Nasse 8146 (Grupp 4) var negativ för TD/96

I Piglet 8134 (Grupp 2) och Piglet 8138 (Grupp 3), båda med övergående lågnivåviremi (Figur 2A och 3A; Tabell 2), var CSFV-antigener fortfarande detekterbara i vävnadsmakrofagerna i tonsillerna (Figur 6A–H) , vilket återigen visade att tonsillerna är en idealisk vävnad för CSFV-diagnos.

4. Diskussion

Vaccination är avgörande för förebyggande och kontroll av CSF i CSF-endemiska områden. En allmänt använd praxis är att förse nyfödda med MDAs genom råmjölken från vaccinerade suggor och sedan administrera en engångsdos av MLV (såsom LPC) när smågrisarna är i åldern 3 till 6 veckor; denna procedur användes för grupp 2 i föreliggande studie (figur 1). Många faktorer, inklusive vaccinets kvalitet, vaccinationsprogramprocedurer (t.ex. scheman, typer och vägar), och grisars MDA-nivåer och hälsostatus (inklusive individuell variation), kan påverka effekten av CSFV-vaccination, vilket minskar skyddet mot infektion [14– 16]. I den aktuella studien, även om smågrisarna i grupp 2 och 3 hade höga MDA-nivåer vid 1:32–128- gånger vid 7 DPE (Figur 5A; dvs. 0 DP1C med grupp 1 CSFV-donatorn; Figur 1), fördröjde MDA:erna infektionens fortskridande, vilket indikeras av det sena uppträdandet av viremi vid 10 DP1C (Grupp 2 och 3; Figur 2A). Detta gjorde att smågrisarna var asymtomatiska (tabell 1), även om några av smågrisarna fortfarande släpper ut viruset i saliv och avföring (Figur 2B, C). Dessa tillfälliga virusutsöndringar i grupp 2 representerade individuella variationer i gruppens hälsostatus eller immunsvar som analyserades i denna studie. Enbart MDA kan endast erbjuda partiellt skydd innan virusreplikation sker i blodet och vävnaden. Anti-CSFV TD/96 NA-nivån omvandlades inte positivt efter LPC-vaccination (Figur 5B), även efter att smågrisarna levde tillsammans med den primära inkräktaren i grupp 1. Detta inträffade sannolikt eftersom MDA-nivån verkligen störde MLV:s effektivitet och på grund av den immunsuppressiva karaktären hos den invaderande CSFV TD/96.

cistanche tubulosa-förbättra immunförsvaret

Titrarna för anti-CSFV NA och CMI representerade av antalet CSFV-specifika IFN- -utsöndrande celler är nära relaterade till skyddet av grisar mot CSFV-infektion [17,22–24]. Gris 8134 (Grupp 2), med låga anti-CSFV NA-nivåer och låga antal CSFV-specifika IFN{10}}utsöndrande celler efter MLV-ympning (figur 4 och 5), uppvisade övergående CSFV-viremi och utsöndring efter kontakt med CSFV givare (figur 2 och 3). Däremot infekterades de andra smågrisarna i grupp 2, med låga anti-CSFV NA:er men relativt hög CSFV-specifika IFN- -utsöndrande celler efter MLV-inokulering, inte med CSFV, inte ens efter att ha varit sambo med CSFV-donatorn i 10 dagar . Dessutom, även om Piglet 8138 (Grupp 3) hade en hög anti-LPC NA-titer (över 128-faldigt) utan MLV-vaccination och med minimal CSFV-specifika IFN- -utsöndrande celler, uppvisade den också övergående CSFV viremia efter att ha varit sambo med TD/96-givaren men var CSFV-fri vid slutet av experimentperioden. De andra smågrisarna i grupp 3, med låga anti-LPC NA-nivåer (lägre än 64-faldigt) och utan MLV-vaccination, uppvisade allvarliga CSFV-associerade kliniska tecken, lesioner och hög CSFV-vävnadsbelastning, vilket resulterade i dödsfall. En jämförelse av resultaten från grupperna 2 och 3, som hade liknande anti-CSFV-titer och -profiler (Figur 5), indikerar att CMI är nyckelfaktorn för virusclearance och -återhämtning. Grupp 2-grisarna hade mer CMI (Figur 4), vilket överensstämmer med de fria kliniska poängen (Tabell 1) och alla testade parametrar (Figur 2, Figur 3 och Figur 6).

I grupp 2 och de andra grupperna ökade inte CMI-nivåerna markant (och endast med en frekvens lägre än 0,1 % av PBMCs) under experimentperioden (Figur 4), trots smågrisarnas konstant exponering för virusutsöndring från grupp 1 CSFV-donatorn och grupp 3 smågrisar från 7–17 DPE (figur 2 och 3). De låga frekvenserna av IFN{10}}utsöndrande celler återspeglar sannolikt följande: (1) den immunsuppressiva karaktären hos CSFV, (2) MDA-interferens och (3) den tekniska begränsningen av analysen som vi utförde. Därför är det viktigt att fastställa ett lämpligt fönster där MDA-nivån är tillräckligt låg för att undvika störningar och ändå tillräckligt hög för att ge initialt skydd och förbättra anti-CSFV CMI för att förbättra immuniteten hos besättningar.

För grisarna i grupp 2 som behandlats med det allmänt tillämpade vaccinationsförfarandet inträffade enstaka utsöndringar av CSFV i saliv och avföring under en kort period (Figur 2) vid låga CSFV-belastningar (Figur 3); sålunda blockerade smågrisarna i grupp 4 (endast med MDA) CSFV-överföring till grupp 4, vilket indikeras av de CSFV-negativa resultaten av miljöproverna som samlats in från rum 2 (tabell 3), avsaknaden av feber och kliniska tecken (tabell 1) ), och frånvaron av saliv och avföring och viremi (figur 2 och 3) under samlivet. De asymtomatiska CSFV-bärarna i grupp 2 kunde dock ha varit en oupptäckbar skuld i fältet.

Immunsvar kan snabbt och stadigt induceras hos SPF-grisar vaccinerade med MLV. De cellulära och humorala immunsvaren hos MLV-vaccinerade smågrisar avslöjas tidigast 5 respektive 12 dagar efter vaccination [14-16,22]. När MLV används i kommersiella besättningar minskar MDA:s MLV:s effektivitet. I den aktuella studien ökade CMI för grisar i grupp 2 med betydande MDA-nivåer snabbt vid 0 DP1C (7 DPE; figur 4; dvs. mycket snabbare än hos SPF-grisar utan MDA), även om varken antikroppen eller CMI profilerna förändrades dramatiskt (figur 4 och 5). En sådan snabb ökning vid 7 DPE (Figur 4) efter LPC-vaccination tyder på att råmjölken kan tillhandahålla andra immunologiska komponenter, förutom MDA, som inducerar ett anamnestiskt svar.

Anti-CSFV NA används vanligtvis för att utvärdera vaccinets effektivitet och för att kartlägga för CSFV-infektion i besättningar. Enligt CSFV-stammen är titern för anti-CSFV NA mot homologa stammar (t.ex. LPC av genotyp 1.1) högre än den mot heterogena stammar (t.ex. TD/96 av genotyp 2.1) och i denna studie, var log2 1.3 till 3.7 (Figur 5A) högre än mot TD/96-stammen (Figur 5B) [14]. En liknande NA-titerskillnad observerades också i olika stammar av porcina reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) och SARS-CoV-2 [25,26]. Eftersom MDA är en viktig interferensfaktor för MLV-effekt, är det optimala vaccinationsschemat för MLV-ympning hos smågrisar när MDA:erna för smågrisarna är lägre än 1:32-faldigt av anti-LPC NA-titern. Därför var den optimala MLV-vaccinationstiden i föreliggande studie vid 28 DPE, vilket överensstämmer med vår uppskattning att halveringstiden för MDA:erna var 10,7 dagar (Grupp 2; Figur 5A) och liknande analysresultaten för anti- LPC NA-titrar för grupperna 4 och 5. Paradoxalt nog anses den 32-faldiga nivån av anti-CSFV NA-titern (ungefär motsvarande 1:128-faldig anti-LPC NAs) som skyddsindex för CSFV-infektion [17]. De flesta av smågrisarna i grupp 4 och 5 hade mindre än 1:32-faldig anti-TD/96 NA-titer från 7 DPE och framåt. Således är fönsterperioden när MDA-nivåerna är lämpligt låga för att inte störa MLV-vaccination men tillräckligt höga för att vara skyddande, snäv, medan fönstret för risken för CSFV-infektion är brett. Den lämpliga perioden för MLV-vaccination kan förlängas endast om MLV produceras från homologa stammar, som vanligtvis inte är tillgängliga i de flesta CSFV-endemiska områden.

Flockimmunitet korrelerar negativt med patogenspridning vid förebyggande och kontroll av sjukdomar. Ökad flockimmunitet kan minska både känsligheten för infektion och omfattningen av patogenavfallet i besättningen [27,28]. Vaccination används ofta som ett direkt och snabbt verktyg för att öka flockimmuniteten. Att förbättra besättningens immunitetstäckning genom vaccinimmunisering för att minska patogenspridningen har visat sig vara effektiv för kontroll av PRRSV, svin circovirus typ 2, CSFV, pseudorabies virus och SARS-CoV -2 [29–36]. I CSFV-studier minskade administreringen av både MLV- och E2-subenhetsvacciner också CSFV-överföring i besättningar [14–16,22,32]. I den aktuella studien, även om ett fåtal MLV-vaccinerade smågrisar uppvisade övergående CSFV-viremi och utsöndring (Grupp 2 och 3; Figurerna 2 och 3), erbjöd MLV-ympning inte bara fullständigt skydd för de vaccinerade grisarna utan säkerställde också att TD/96-stammen överfördes inte från den primära invaderaren (Grupp 1) till den sekundärt invaderade gruppen (Grupp 4). Däremot spred sig TD/96 från grupp 1 CSFV-givaren till grupp 3 (utan MLV-vaccination) och över till grupp 5, vilket visar att MLV-vaccination mot CSFV kan blockera CSFV-överföring, vilket ökar sannolikheten för CSFV-utrotning genom att minska värdet av det grundläggande reproduktionsnumret (R0) för patogenen [28]. Mer omfattande vaccintäckning krävs för att utrota sjukdomar med hög-R0 patogener. R0 för CSFV är associerad med stamvirulensen och CSFV-ympningsdosen. R0-patogennivåerna för måttlig inokulering och höga inokuleringsdoser av en måttligt virulent stam och den låga inokuleringsdosen för en mycket virulent stam är avsevärt högre än för en hög-ympningsdos av en lågvirulens stam [13]. Dessa resultat indikerar att mer flockimmunitetstäckning krävs i CSF-endemiska områden med måttliga eller mycket virulenta CSFV-stammar.

Monocyt-makrofag härstamning celler är CSFV tropism celler som spelar en roll i CSFV överföring [37-39]. I den aktuella studien var de smågrisar som återhämtade sig friska och asymtomatiska; CSFV kan emellertid varaktigt infektera och gömma sig i lymfoida vävnader (Figur 6), och på så sätt undvika immunclearance; detta stöder också användningen av lymfoida vävnader som idealiska prover för diagnos. Ihållande virusinfektion har också observerats med CSFV, humant immunbristvirus typ 1 och respiratoriskt syncytialvirus [40-42]. CSFV har förmågan att förändra uttrycket av cytokiner, cytokinreceptorer, kemokiner, interferoner och tollliknande receptorer i makrofager, vilket återspeglar dess immunsuppressiva natur och den nära inaktiviteten hos antikroppen (Figur 5) och CMI (Figur 4) profilerna för försöksgrisar, trots deras kontinuerliga exponering för CSFV-utsöndring i saliv och avföring från de primära (Grupp 1) och sekundära (Grupp 3) inkräktare. Immunregleringen av grisarna efter CSFV-infektion involverade ökningar av proinflammatoriska (IL-1, IL-6, IL-8 och MCF) och antivirala faktorer (IFN- och ) [43]. De utvecklade mekanismerna och ihållande infektionen av CSFV förblir dock oklara.

cistanche fördelar för män stärker immunförsvaret

5. Slutsatser

MDA följt av MLV-vaccination kan inducera tillräcklig immunitet, särskilt CMI, vilket möjliggör virusclearance och återhämtning. Även om några få MLV-vaccinerade smågrisar hade övergående lågnivåviremi och virusutsöndring i saliv och avföring, kunde CSFV-överföring till tredje part (Grupp 4) blockeras genom MLV-vaccination, vilket minskade R0 av CSFV och öka möjligheten att utrota CSF.

Referenser

1. WOAH. Kapitel 15.2: Infektion med klassisk svinpestvirus. I Hälsokod för landdjur; WOAH: Paris, Frankrike, 2022.

2. Ganges, L.; Crooke, HR; Bohórquez, JA; Postel, A.; Sakoda, Y.; Becher, P.; Ruggli, N. Klassiskt svinpestvirus: Det förflutna, nuet och framtiden. Virus Res. 2020, 289, 198151. [CrossRef] [PubMed]

3. WOAH (World Animal Health Information System). Klassisk svinpest: Officiell sjukdomsstatus. Tillgänglig online: www.woah. org/en/disease/classical-swine-fever/#ui-id-2 (tillträde den 1 september 2022).

4. Sawai, K.; Nishi, T.; Fukai, K.; Kato, T.; Hayama, Y.; Yamamoto, T. Fylogenetisk och fylodynamisk analys av ett klassiskt svinpestvirusutbrott i Japan (2018–2020). Transbound. Emerg. Dis. 2022, 69, 1529–1538. [CrossRef] [PubMed]

5. De Oliveira, LG; Gatto, IRH; Mechler-Dreibi, ML; Almeida, HMS; Sonálio, K.; Storino, GY Prestationer och utmaningar för utrotning av klassisk svinpest i Brasilien. Virus 2022, 12, 1327. [CrossRef] [PubMed]

6. Zhu, X.; Liu, M.; Wu, X.; Ma, W.; Zhao, X. Fylogenetisk analys av isolat från klassisk svinpestvirus från Kina. Båge. Virol. 2021, 166, 2255–2261. [CrossRef] [PubMed]

7. Lindenbach, BD; Thiel, HJ; Rice, CM Flaviviridae: Virusen och deras replikation. In Fields Virology, 5:e upplagan; Knipe, DM, Howley, PM, Griffin, DE, Eds.; Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, USA, 2007; s. 1101–1152.

8. Paton, DJ; McGoldrick, A.; Greiser-Wilke, I.; Parchariyanon, S.; Sång, JY; Liou, PP; Stadejek, T.; Lowings, JP; Björklund, H.; Belak, S. Genetisk typning av klassisk svinpestvirus. Veterinär. Microbiol. 2000, 73, 137–157. [CrossRef] [PubMed]

9. Depner, KR; Hinrichs, U.; Bickhardt, K.; Greiser-Wilke, I.; Pohlenz, J.; Moennig, V.; Liess, B. Inverkan av rasrelaterade faktorer på förloppet av klassisk svinpestvirusinfektion. Veterinär. Rec. 1997, 140, 506–507. [CrossRef]

10. Floegel-Niesmann, G.; Bunzenthal, C.; Fischer, S.; Moennig, V. Virulens hos nya och tidigare isolat av klassisk svinpestvirus utvärderad av deras kliniska och patologiska tecken. J. Vet. Med. Ser. B 2003, 50, 214–220. [CrossRef]

11. Moennig, V.; Floegel-Niesmann, G.; Greiser-Wilke, I. Kliniska tecken och epidemiologi av klassisk svinpest: En översyn av ny kunskap. Veterinär. J. 2003, 165, 11–20. [CrossRef]

12. Durand, B.; Davila, S.; Cariolet, R.; Mespléde, A.; Le Potier, MF Jämförelse av viremi- och kliniskt baserade uppskattningar av överföring av klassisk svinpestvirus inom och mellan pennan från tre överföringsexperiment. Veterinär. Microbiol. 2009, 135, 196–204. [CrossRef]

13. Weesendorp, E.; Backer, J.; Stegeman, A.; Loeffen, W. Effekt av stam och inokuleringsdos av klassisk svinpestvirus på överföring inom pennan. Veterinär. Res. 2009, 40, 59. [CrossRef]

14. Huang, YL; Deng, MC; Wang, FI; Huang, CC; Chang, CY Utmaningarna för kontroll av klassisk svinpest: Modifierat liv och E2-subenhetsvacciner. Virus Res. 2014, 179, 1–11. [CrossRef] [PubMed]

15. Suradhat, S.; Damrongwatanapokin, S.; Thanawongnuwech, R. Faktorer som är avgörande för framgångsrik vaccination mot klassisk svinpest i endemiska områden. Veterinär. Microbiol. 2007, 119, 1–9. [CrossRef] [PubMed]

16. Van Oirschot, JT Vaccinologi av klassisk svinpest: Från labb till fält. Veterinär. Microbiol. 2003, 96, 367–384. [CrossRef]

17. Terpstra, C.; Wensvoort, G. Skyddsvärdet av vaccininducerade neutraliserande antikroppstitrar vid svinpest. Veterinär. Microbiol. 1988, 16, 123-128. [CrossRef]

18. Vandeputte, J.; Även HL; Ng, FK; Chen, C.; Chai, KK; Liao, GA Adsorption av kolostrala antikroppar mot klassisk svinpest, beständighet hos moderns antikroppar och effekt på svar på vaccination hos smågrisar. Am. J. Vet. Res. 2001, 62, 1805–1811. [CrossRef] [PubMed]

19. Ma, WJ; Chen, QL; Chang, CC Undersökning av antikroppsprestanda och närvaro av viralt RNA före och efter vaccination av klassisk svinpestvaccinstam i taiwanesiska grisfarmar. Taiwan Vet. J. 2010, 36, 45–54.

20. Mittelholzerl, C.; Moser, C.; Tratschin, JD; Hofmann, MA Analys av replikationskinetiken för klassisk svinpestvirus tillåter differentiering av mycket virulenta från avirulenta stammar. Veterinär. Microbiol. 2000, 74, 293–308. [CrossRef]

21. Huang, YL; Pang, VF; Pan, CH; Chen, TH; Jong, MH; Huang, TS; Jeng, CR Utveckling av en omvänd transkriptionsmultiplex realtids-PCR för detektion och genotypning av klassisk svinpestvirus. J. Virol. Metoder 2009, 160, 111–118. [CrossRef]

22. Huang, YL; Meyer, D.; Postel, A.; Tsai, KJ; Liu, HM; Yang, CH; Huang, YC; Berkley, N.; Deng, MC; Wang, FI; et al. Identifiering av en vanlig konformationsepitop på glykoproteinet E2 från klassisk svinpestvirus och gränssjukdomsvirus. Virus 2021, 13, 1655. [CrossRef]

23. Graham, SP; Everett, HE; Haines, FJ; Johns, HL; Sosan, OA; Salguero, FJ; Clifford, DJ; Steinbach, F.; Drew, TW; Crooke, H. Utmaning av grisar med klassisk svinpestvirus efter vaccinering av C-stam avslöjar anmärkningsvärt snabbt skydd och insikter om tidig immunitet. PLoS ONE 2012, 7, e29310. [CrossRef]

24. Graham, SP; Haines, FJ; Johns, HL; Sosan, O.; Rocca, SAL; Lampa, B.; Rumenapf, T.; Everett, H.; Crooke, H. Karakterisering av vaccininducerade, brett korsreaktiva IFN-utsöndrande T-cellssvar som korrelerar med snabbt skydd mot klassisk svinpestvirus. Vaccin 2012, 30, 2742–2748. [CrossRef] [PubMed]

25. Suradhat, S.; Intrakamhaeng, M.; Damrongwatanapokin, S. Korrelationen mellan virusspecifik interferon-gammaproduktion och skydd mot klassisk svinpestvirusinfektion. Veterinär. Immunol. Immunopatol. 2001, 83, 177–189. [CrossRef] [PubMed]

26. Planas, D.; Veyer, D.; Baidaliuk, A.; Staropoli, I.; Guivel-Benhassine, F.; Rajah, MM; Planchais, C.; Porrot, F.; Robillard, N.; Puech, J.; et al. Minskad känslighet hos SARS-CoV-2 variant delta för antikroppsneutralisering. Naturen 2021, 596, 276–280. [CrossRef]

27. Zhang, C.; Hu, J. Porcina reproduktions- och respiratoriska syndromvirusvacciner: Aktuell status och strategier för ett universellt vaccin. Transbound. Emerg. Dis. 2014, 61, 109–120.

28. Andre, FE; Booy, R.; Bock, HL; Clemens, J.; Datta, SK; John, TJ; Lee, BW; Lolekha, S.; Peltola, H.; Ruff, TA; et al. Vaccination minskar avsevärt sjukdomar, handikapp, dödsfall och orättvisor över hela världen. Tjur. Världshälsoorgan. 2008, 86, 140–146. [CrossRef] [PubMed]

29. Rose, N.; Andraud, M. Användningen av vacciner för att kontrollera patogenspridning i grispopulationer. Porcin Health Manag. 2017, 3, 8. [CrossRef] [PubMed]

30. Andraud, M.; Grasland, B.; Durand, B.; Cariolet, R.; Jestin, A.; Madec, F.; Rose, N. Kvantifiering av porcint circovirus typ 2 (PCV-2) inom- och mellan-facköverföring hos grisar. Veterinär. Res. 2008, 39, 43. [CrossRef]

31. Rose, N.; Andraud, M.; Bigault, L.; Jestin, A.; Grasland, B. Ett kommersiellt PCV2-baserat vaccin reducerar signifikant PCV2b-överföring under experimentella förhållanden. Vaccin 2016, 34, 3738–3745. [CrossRef]

32. Rose, N.; Renson, P.; Andraud, M.; Paboeuf, F.; Le Potier, MF; Bourry, O. Porcint reproduktivt och respiratoriskt syndromvirus (PRRSv) modifierat levande vaccin minskar virusöverföringen under experimentella förhållanden. Vaccin 2015, 33, 2493–2499. [CrossRef]

33. Bouma, A.; De Smit, AJ; De Jong, MCM; De Kluijver, EP; Moormann, RJM Bestämning av uppkomsten av flockimmunitet inducerad av E2-subenhetsvaccinet mot klassisk svinpestvirus. Vaccin 2000, 18, 1374–1381. [CrossRef]

34. De Smit, AJ; Bouma, A.; Van Gennip, HGP; De Kluijver, EP; Moormann, RJM Chimära (markör) C-stamvirus inducerar kliniskt skydd mot virulent klassisk svinpestvirus (CSFV) och minskar överföringen av CSFV mellan vaccinerade grisar. Vaccin 2001, 19, 1467–1476. [CrossRef] [PubMed]

35. Van Nes, A.; Stegeman, JA; De Jong, MCM; Loeffen, WLA; Kimman, TG; Verheijden, JHM Inga större utbrott av pseudorabiesvirus i välimmuniserade sugbesättningar. Vaccin 1996, 14, 1042–1044. [CrossRef] [PubMed]

36. Shrestha, NK; Burke, PC; Nowacki, AS; Terpeluk, P.; Gordon, SM Nödvändighet av vaccination mot coronavirus sjukdom 2019 (COVID-19) hos personer som redan har haft covid-19. Clin. Infektera. Dis. 2022, 75, e662–e671. [CrossRef] [PubMed]

37. Gómez-Villamandos, JC; Ruiz-Villamor, E.; Bautista, MJ; Sánchez, CP; Sánchez-Cordón, PJ; Salguero, FJ; Jover, A. Morfologiska och immunhistokemiska förändringar i mjältmakrofager hos grisar infekterade med klassisk svinpest. J. Comp. Patol. 2001, 125, 98–109. [CrossRef]

38. Sánchez-Cordón, PJ; Romanini, S.; Salguero, FJ; Ruiz-Villamor, E.; Carrasco, L.; Gómez-Villamandos, JC En histopatologisk, immunhistokemisk och ultrastrukturell studie av tarmen hos grisar inokulerade med klassisk svinpestvirus. Veterinär. Patol. 2003, 40, 254–262. [CrossRef]

39. Sah, V.; Kumar, A.; Dhar, P.; Upmanyu, V.; Tiwari, AK; Wani, SA; Sahu, AR; Kumar, A.; Badasara, SK; Pandey, A.; et al. Signatur för genomomfattande genuttryck i klassisk svinpestvirusinfekterade makrofager och PBMC från inhemska vis-a-vis korsningsgrisar. Gene 2020, 731, 144356. [CrossRef]

40. Coronado, L.; Bohórquez, JA; Muñoz-González, S.; Perez, LJ; Rosell, R.; Fonseca, O.; Delgado, L.; Perera, CL; Frías, MT; Ganges, L. Undersökning av kroniska och ihållande klassisk svinpestinfektioner under fältförhållanden och deras inverkan på vaccinets effektivitet. BMC Vet. Res. 2019, 15, 247. [CrossRef]

41. Rivera-Toledo, E.; Gómez, B. Respiratory syncytial virus persistens i makrofager förändrar profilen för cellulärt genuttryck. Virus 2012, 4, 3270–3280. [CrossRef]

42. Kruize, Z.; Kootstra, NA Makrofagernas roll i HIV-1 persistens och patogenes. Främre. Microbiol. 2019, 10, 2828. [CrossRef]

43. Borca, MV; Gudmundsdottir, I.; Fernandez-Sainz, IJ; Holinka, LG; Risatti, GR Mönster av cellulärt genuttryck i svinmakrofager infekterade med mycket virulent klassisk svinpestvirusstam Brescia. Virus Res. 2008, 138, 89–96. [CrossRef]