Akteosid i kinesisk naturlig växt-Cistanche för att lindra njursjukdom--Del I

Kontakt: emily.li@wecistanche.com

En naturlig produkt av akteosid förbättrar njurskador hos diabetes db/db möss och HK-2-celler via reglerande NADPH/oxidas-TGF-/Smad-signalväg

Qinwen Wang|Xinxin Dai et.al

Denna studie utformades för att undersöka de skyddande effekterna och mekanismerna avakteosidpå DKD i db/db-hanmöss med diabetes och högglukosinducerade HK-2-celler. Diabetes db/db mössen delades slumpmässigt in i modellgruppen, metformingruppen, irbesartangruppen ochakteosidgrupp. Vi observerade den naturliga produkten avakteosiduppvisar en betydande effekt injurskyddgenom analys av biokemiska indikatorer och endogena metaboliter, histopatologiska observationer och western blotting. HK-2-celler utsatta för hög glukos användes i in vitro-experiment. De molekylära mekanismerna undersöktes med RT-PCR och western blöt.Akteosidförhindrar högt glukosinducerade HK-2-celler och diabetes db/db-möss genom att hämma NADPH/oxidas-TGF-/Smad-signalvägen.Akteosidreglerade den störda metaboliska vägen för lipidmetabolism, glyoxylat- och dikarboxylatmetabolism och arakidonsyrametabolism. Vi upptäckte den naturliga produkten avakteosiduppvisar en betydande effekt pånjurskydd.Denna studie banade väg för ytterligare utforskning av patogenes, tidig diagnos och utveckling av ett nytt terapeutiskt medel för DKD.

NYCKELORD akteosid, diabetikernjursjukdom, metabolisk profilering, NADPH/oxidas-TGF-/Smad signalväg, ROS

Del I

Acteosid behandlar njursjukdom

1|INTRODUKTION

Akteosidär en representativ komponent av fenyletanoidglykosider, brett spridd i 79 växtsläkten, såsom Rehmannia glutinosa,Cistanche deserticolaoch andra medicinalväxter.Akteosidkännetecknas av koffeinsyra och hydroxityrosol bundna till en glukosdel genom ester- respektive glykosidbindningar med en ramnosenhet kopplad till glukosmolekylen (Zhao et al., 2015). Det rapporteras attakteosidbesitter vida farmakologiska aktiviteter, såsomnjureskydd (Gan et al., 2018), antioxidation (He et al., 2011), neuroskydd (Li, Zhou, Xu, Song, & Lu, 2018), leverskydd (Lee et al., 2004), anticancer (Ohno) , Inoue, Ogihara, & Saracoglu, 2002) och så vidare. Men de skyddande effekterna avakteosidhos diabetikernjurskadaär oklara.

Diabetes är en av de snabbast växande globala hälsokriserna under 2000-talet. År 2019 uppskattas det att 463 miljoner människor har diabetes och detta antal beräknas nå 578 miljoner år 2030 och 700 miljoner år 2045. Den globala prevalensen av diabetes växer snabbt, särskilt i utvecklingsländerna, och prevalensen av diabetikernjursjukdom(DKD) och slutskedenjursjukdom(ESRD) fortsätter att öka (Hu, 2011). DKD är en av de mest fruktade diabetiska kroniska mikrovaskulära komplikationerna och den främsta orsaken till ESRD. Dödligheten av alla orsaker hos individer med DKD är cirka 30 gånger högre än hos diabetespatienter utan nefropati. Nyligen genomförda studier tyder på detnjur-tubulär epitel-mesenkymal övergång (EMT) och extracytoplasmatisk matris (ECM) ackumulering injur-interstitium spelar nyckelfaktorer i patogenesen av DKD (He et al., 2015; Yao et al., 2014). Allt fler studier har rapporterat att utvecklingen avnjur-fibros vid diabetisk nefropati förmedlades av många signalvägar. TGF- har varit inblandad som en nyckelpatogen faktor i de flesta typer av kronisk nyreducerad sjukdom i samband med fibros, inklusive DKD (Lv & Zhang, 2019). Det heteromera signalkomplexet, som är ett resultat av bindningen av TGF- 1 till typ II-receptorn och i sin tur typ I-receptorn, transducerar signaler genom receptorreglerade Smads (Smad2/3) och common-partner Smad (Smad4), vilket leder till transkriptionell reglering av målgener (Sierra et al., 2015). ROS-ackumulering kan leda till oxidativ stress i cellen, vilket leder till skador på cellulära komponenter inklusive protein och DNA. I slutändan leder oxidativ stress tillnjur-fibros och en nedgång injurfunktion. NADPH-oxidaser (NOX) accepteras som viktiga källor till ROS-generering vid diabetisk nefropati och kronisknjursjukdom. Uppregleringen och hyperaktiveringen av NOX bidrar sannolikt också till oxidativ stress i patofysiologiska stadier. Höjd avnjur-ROS-nivå genom hyperglykemi-medierad NOX-aktivering resulterar i oxidativ stress, vilket inducerar skador pånjurvävnader, orsakar DKD (Lee, An, Kim, & Bae, 2020).

Metabolomics är en ny och viktig omics-teknologi för kvalitativ och kvantitativ analys av alla små molekylära metaboliter i levande celler, vävnader och kroppsvätskor. Som en ny disciplin för att identifiera de övergripande metaboliska förändringarna hos levande organismer, ger metabolomics nya insikter i studiet av diabetes och diabetiska komplikationer (Lu, Xie, Jia, & Jia, 2013).

Syftet med denna studie var att undersöka den skyddande effekten av naturliga produkterakteosidpå DKD av diabetiska db/db-möss av hankön och HK-2-celler inducerade av högt glukos in vitro och dess mekanism. Så i denna studie antogs db/db-möss för att utvärderanjur-skyddande effekter avakteosid, och regleringen av olika metaboliter i serum analyserades för att belysa mekanismerna förakteosid. Dessutom utvärderar den högglukosinducerade HK-2 in vitro-modellen effekten avakteosidpå db/db-möss genom bestämning av NADPH/oxidas-TGF-/Smad signalvägsexpressionsnivåer.

2|MATERIAL OCH METODER

2.1|Kemikalier och instrument

Acetonitril av UPLC-kvalitet köptes från Merck (Darmstadt, Tyskland); myrsyra köptes från Sigma-Aldrich (Sigma, St. Louis, Missouri).Akteosid(Renhet som är större än eller lika med 98 procent) köptes från National Institutes for Food and Drug Control (Peking, Kina). Strukturen avakteosidvisas i figur lA. Serum urea nitrogen (BUN) reagenskit, aspartataminotransferas (GOT) reagenskit, alanin aminotransferas (GPT) reagenskit, totalkolesterol (TCHO) reagenskit, triglycerid (TG) reagenskit, serumkreatinin (Scr) reagenskit, urinmikroalbumin (mALB) reagenskit och insulin (INS) reagenskit köptes från Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute (Nanjing, Kina). Metforminhydrokloridtabletter köptes från Sino American Shanghai Squib Pharmaceutical Ltd; Irbesartan köptes från Shenzhen Haibin Pharmaceutical Co., Ltd. DMEM och F12 köptes från GIBCO, Amerika; NOX1 (katalognummer: ab121009), NOX2 (katalognummer: ab129068), NOX4 (katalognummer: ab154244) och Smad7 (katalognummer: ab216428) köptes första antikroppen från Abcam (Cambridge, Storbritannien). -SMA (katalognummer: 19245), E-cadherin (katalognummer:3195), NF-κB p65 (katalognummer: 8242), TGF- 1 (katalognummer: 3711), Smad2 (katalognummer: 5339) , Smad3 (katalognummer: 9523), Smad4 (katalognummer: 46535) och PSmad2/3 (katalognummer: 8828) köptes den första antikroppen från CST. Alla andra kemikalier och reagens som användes i denna studie var av analytisk kvalitet och tillverkade i Kina.

Waters Acquity™ Ultra Performance LC-system (Waters) utrustat med en Quattro Micro MS-spektrometer och en Waters Xevo TM G2 QTof MS (Waters MS Technologies, Manchester, New Hampshire). Avjoniserat vatten renades på ett Milli-Q-system (Millipore, Bedford, Massachusetts). Mass Lynx v4.1 arbetsstation användes för att analysera data, och en ultrahöghastighetscentrifug vid låg temperatur (Thermo Scientific, Storbritannien) och DMI3000M-mikroskop (Leica, Tyskland) användes.

2.2|Djurförsöksförhållanden

Alla experimentella procedurer och protokoll som användes i denna studie granskades och godkändes av den institutionella djuretiska kommittén vid Nanjing University of Chinese Medicine (Nanjing, Kina). De protokoll som beskrivs i den föreliggande studien överensstämde med de institutionella riktlinjerna för vård och användning av försöksdjur. Mössen köptes från Animal Model Research Center vid Nanjing University (certifikat nr Su 2015–0001). Alla experiment utfördes med 8-veckogamla db/db-möss av hankön och åldersmatchade vildtyp-db/m-kullmöss med en initial kroppsvikt på 30 40 g. db/db diabetisk musmodell är en internationellt erkänd djurmodell för diabetes. Studier har visat att mekanismen för DKD i db/db-möss liknar den hos människor. Djuren hölls i burar med en konstant fuktighet (ca. 60 procent ± 2 procent) och temperatur (ca. 23 ± 2 grader) och med en ljus/mörker-cykel på 12 timmar. Djuren genomgick en anpassningsperiod på 3 veckor, under vilken de fick obegränsad tillgång till foder och kranvatten. Efter acklimatiseringsperioden delades db/db-mössen slumpmässigt in i fyra grupper med sex i varje grupp: modellgrupp (normal koksaltlösning, M), metformingrupp (250 mg kg)^-1 d^-1, EJSG), irbesartangrupp (50 mg kg^-1 d^-1, EBST),akteosidgrupp (70 mg kg^-1 d^-1, MRHTG), en gång om dagen (Gao, Peng, Huo, Liu, & Yan, 2015). I denna studie valdes dessutom metformin och irbesartan ut som positiva kontrollläkemedel. Det har rapporterats att irbesartan kan sänka blodtrycket, blodfetterna ochnjurlipid.Det har ingen effekt på blodsocker och leverlipider. Det kan förbättra funktionen och patologisk förändring avnjurarav db/db möss. Metformins skyddande effekt pånjureåterspeglas i minskningen av proteinuri hos diabetiska råttor och patienter med typ 2-diabetes. Djurdosen av metformin och irbesartan extrapolerades från den mänskliga dagliga dosen med hjälp av normaliseringsmetoden för kroppsyta. Därefter gavs mössen motsvarande läkemedel en gång om dagen genom magsköljning i 6 veckor, och db/m mössen användes som kontrollgrupp, som fick samma volym saltlösning samtidigt.

2.3|Samling av prover

Under experimentperioden registrerades kroppsvikter och fastande blodsockernivåer (FBG) varje vecka, FBG-nivåer mättes med ett One Touch Ultra II blodsockerövervakningssystem (Life Scan, Milpitas, Kalifornien) med svansvenen varje måndag (kl. 8.00). ). Efter 6 veckors administrering fastade mössen i metaboliska burar med fri tillgång till vatten för att samla upp 24 timmars urin. Alla urinprover centrifugerades omedelbart vid 3000 rpm under 10 minuter efter uppsamling, och supernatanterna separerades och lagrades vid -80 grad fram till analys. I slutet av studien avlivades möss under anestesi med 10 procent kloralhydrat (3 mg/kg), och blod samlades in för koncentrationen av biokemiska parametrar och metabolomikstudier. Därefter centrifugerades blodproverna vid 3000 rpm i 10 minuter, och serumproverna separerades och lagrades vid -80 grad fram till analys. Den högra njuren avlägsnades med ett stycke fixerat med 10 procent neutralt buffrat formalin för histologisk undersökning. Denjur-cortex isolerades från den andra biten och frystes i flytande kväve för western blotting.

Cistanche för behandling av njursvikt

2.4|Cellodling och behandling

Den humana RTEC-linjen HK{{0}} erhölls från Nanjing Keygen Biotechnology Development Co., Ltd. Det kompletta mediet var lågglukos-DMEM med 10 procent FBS och 1 procent penicillin-streptomycinlösning. HK-2-cellerna odlades i 37 grader, 5 procent CO2 och mättad luftfuktighet. Cellerna subodlades vid 80 procent konfluens, vilket avlägsnades från inkubatorn, och det ursprungliga mediet i skålen kasserades. Cellerna sköljdes med 0,5 ml fosfatbuffertsaltlösning (PBS) och spjälkades genom behandling med 0,5 ml trypsin i 1–2 minuter vid 37 grader. Digestion avslutades med användning av ett 2 ml DMEM-medium, och cellsuspensionen centrifugerades därefter vid 450 g under 5 minuter vid 4C. Supernatanten kasserades och cellerna återsuspenderades i 2 ml motsvarande DMEM-medium för att erhålla en encellssuspension. Celler såddes i olika skålar/mikroplattor vid olika densiteter för efterföljande experiment, såsom beskrivs nedan. HK-2-celler ströks ut på 96-brunnsplattor och skålar, förbehandlades med DMEM-lågglukos (5 mmol/L), inkuberades vid 37°C och 5 procent CO₂under 6 timmar och synkroniserades sedan. De experimentella grupperna delades in enligt följande: kontrollgrupp (C), utan interventionsfaktor; modellgrupp (M), i vilken celler odlades i DMEM-lösning med hög glukoshalt (30 mmol/L); kontrollgrupp för osmotiskt tryck (DMEM plus 24,5 mmol/L mannitol, GLC); irbesartangruppen (25 mmol/L) ochakteosid(MRHTG) grupp vid fem doser (5, 10, 25, 50 respektive 100 μmol/L).

2,5|Cellmorfologi

HK-2-cellerna tvättades två gånger med PBS och tittades under ett inverterat mikroskop (OLYMPUS IX51). Cellernas morfologi observerades under 100 förstoringar.

2.6|Biokemiska indikatorer mätningar

Den terapeutiska effekten avakteosidpå db/db möss utvärderades med avseende på nivåerna av mALB i urin och FBG, INS, T-CHO, TG, Scr, GOT, GPT och BUN i serum, vilka detekterades följt av beskrivningen som tillhandahålls av kitets tillverkare.

2.7|Patologisk analys

Del avnjur-cortex utfördes för hematoxylin-eosin (HE) och periodic acid-Schiff (PAS) färgning för att observera patologiska förändringar injurvävnad, grader av fibrosvävnadshyperplasi, strukturer av glomeruli och tubuli genom ett elektronmikroskop (400). När du tar ett fotografi, försök att fylla hela synfältet mednjurvävnadför att säkerställa att bakgrundsljuset för varje fotografi är detsamma. Programvaran Image-Pro Plus 6.0 användes för att välja samma rödlila färg som det enhetliga kriteriet för att bedöma det positiva av alla foton. Den ackumulerade optiska densiteten (IOD) för basalmembranets positiva uttryck och pixelarean för glomerulär vaskulär plexus (AREA) erhölls genom att analysera varje foto, och den genomsnittliga optiska densiteten (IOD/AREA) beräknades.

2.8|Western blotting

Njurvävnadoch celler extraherades med lysbuffert; lysaten centrifugerades. Efter fullständig pyrolys, centrifugera i 5 minuter vid 12000 rpm och ta supernatanten och supernatanterna samlades upp. Bicinchoninsyra (BCA) proteinkoncentrationskit användes för att bestämma proteinkoncentrationen. Efter kvantifiering löstes proteinet upp med 10 procent SDS-PAGE, överfördes till PVDF-membran, blockerades sedan i 5 procent BSA i TBST och inkuberades med primära antikroppar följt av motsvarande sekundära antikroppar. Antikroppsreaktiviteten detekterades sedan med ECL och kvantifierades med ImageJ-mjukvara.Njurvävnadprover analyserades med western blotting för att detektera expressionsnivåerna av -SMA, TGF- 1 (1:1300), Smad2 (1:3000), Smad3 (1:1000), P-Smad2/3 (1:500) ), Smad4 (1:1000) och Smad7 (1:1000) protein.

2.9|ELISA-analys

Utsöndringen av monocytkemoattraktant protein -1 (MCP-1), interleukin –1 (IL-1), tumörnekrosfaktor- (TNF-) och interleukin-6 (IL) -6) i supernatanten av varje cell mättes med ELISA-kit.

2,10|PCR i realtid

Dessutom förbereddes dessa celler för realtids-PCR för att undersöka expressionsnivåerna av NOX1, NOX2, NOX4, -SMA, E-cadherin, NF-KB p65, TGF- 1, Smad2, Smad3, Smad4 och Smad7 mRNA. Celler i varje grupp (cirka 1 107 celler) samlades in. Totalt RNA extraherades enligt Trizols enstegsmetod och dess renhet och koncentration bestämdes. Med GAPDH som intern referens var primersekvensen följande. TGF- 1, sense-primer: 5-ACACATCAGAGCTCCGAGAA-3, antisens-primer: 5-GAGGTATC GCCAGGAATTGT-3;E-cadherin, sense-primer: 5- ACGCATTGCCA CATACACTC-3, antisens-primer: 5-GGTGAATTCGGGCTTGTTGT-3; NF-KB p65, sense-primer: 5-CTTCCTGCCCTACAGAGGTC-3, antisens-primer: 5-AGAGCAAGGAAGTCCCAGAC-3;NOX1, sense-primer: 5-CCTAGAAGGGCTCCAAACCA{{33} }, antisens-primer: 5-GGAAGGCATCCACAAACAGG-3; NOX2, sense-primer: 5-ACCCTTCGCATCCATTCTCA-3, antisens-primer: 5-TCTGCAAACCACTCAAAGGC-3; NOX4, sense-primer: 5-CAAGCAGGAGAACCAGGAGA-3, antisens-primer: 5-AGTTGAGGGCATTCACCAGA-3; Smad2, sense-primer: 5-TGAGCACGTGAGGTGAGATT-3, antisens-primer: 5-CTCCATCACAGTGCACCAAG-3; Smad3, sense-primer: 5-CAGCCGGTTTGGATTACAGG-3, antisens-primer: 5-GAGTCAAAGTCCCTGCTCCT-3; Smad4, sense-primer: 5-CACTGCCAACTTTCCCAACA-3, antisens-primer: 5-ATCCATTCTGCTGCTGTCCT-3; Smad7, sense-primer: 5-AAGAGTCAGCTGGTGCAGAA-3, antisens-primer: 5-GCGGACTTGATGAAGATGGG-3; -SMA, sense-primer: 5-GGTGCTGTCTCTCTATGCCT-3, antisens-primer: 5-CAGATCCAGACGCATGATGG-3; GAPDH, sense-primer: 5-TGGTATCGTGGAAGGACTCA-3, antisens-primer: 5-CCAGTAGAGGCAGGGATGAT-3.

2.11|Statistisk analys

Data och statistisk analys överensstämmer med rekommendationerna för experimentell design och analys inom farmakologi. Alla experiment randomiserades och blindades. Resultaten uttrycks som M ± SD/SEM för det angivna antalet (n) oberoende experiment. Data i den aktuella studien presenteras som M ± SD/SEM från minst tre oberoende experiment. Betydelsen av skillnader analyserades med envägs ANOVA följt av Tukeys test (mer än två grupper) eller ett Students t-test (två grupper). Post hoc-testerna utförs endast när F uppnådde p < .05,="" och="" det="" fanns="" ingen="" signifikant="" variansinhomogenitet.="" alla="" tester="" var="" tvåsidiga="" och="" p="">< 0,05="" ansågs="" vara="" statistiskt="" signifikant.="" statistisk="" analys="" utfördes="" med="" hjälp="" av="" programvaran="" graphpad="" prism="">

Cistanche-akteosid för att förbättra njurarna

2.12|UPLC-QTOF/MS villkor och dataanalys

Alla serumprover tinades vid rumstemperatur före beredning. 300 ul acetonitril sattes till 100 ul serumprov till utfällt protein och blandades kraftigt i 60 s. Alla prover centrifugerades vid 13000 rpm i 10 minuter vid 4 grader. Slutligen injicerades supernatanten i UPLC-QTOF/MS-analys. Metabolitseparation utfördes med användning av ett Waters Acquity™ Ultra Performance LC-system (Waters) utrustat med en Waters Xevo™ G2 Q/TOF-MS (Waters MS Technologies). En alikvot på 2 ul provlösning injicerades på en Acquity UPLC BEH C18 (100 mm 2,1 mm, 1,7 μm, Waters Corporation, Milford, Connecticut) vid 35 grader och flödeshastigheten var 0,4 ml/min. Den optimala mobila fasen bestod av vatten (A) (innehållande 0,1 procent myrsyra) och acetonitril (B). De optimerade UPLC-elueringsförhållandena för serumanalys var 0 3 min, 95 procent 55 procent A; 4 13 min, 55 procent 5 procent A; 13 14 min, 5 procent A. Autosamplern hölls vid 4 grader .

Masspektrometri utfördes med användning av en Xevo™ G2 QTof (Waters MS Technologies), en kvadrupol och en ortogonal acceleration time-of-flight tandem masstrometer. Leucin-enkefalin användes som låsmassan som genererade en [M plus H]^plusjon (m/z 556,2771) och [MH]^-jon (m/z 554,2615) i positivt respektive negativt läge. Koncentrationen av leucin-enkefalin var 200 pg/ml och infusionsflödet var 100 ul/min för att säkerställa noggrannhet under MS-analysen via en sprutpump. Data samlades in i tyngdpunktsläge från 100 till 1,000 m/z. För både positiva och negativa elektrospraylägen sattes kapillär- och konspänningen till 3,0 kV respektive 30 V. Desolvationsgasen sattes till 600 L/h vid en temperatur av 350 grader, kongasen sattes till 50 L/h och källtemperaturen sattes till 120 grader. Datainsamlingshastigheten sattes till 30 ms, med en interscan-fördröjning på 0,02 s.

Dessutom valdes 10 serumprover slumpmässigt från varje grupp och blandades ihop som kvalitetskontrollprover (QC). QC-provet användes för att optimera tillståndet för UPLCQTOF/MS, eftersom det innehöll mest information om hela provet. QC-proverna injicerades sex gånger i början av körningen för att konditionera eller jämvikta systemet och sedan vart tionde prov för att ytterligare övervaka analysens stabilitet. Varje dag, efter att instrumentet kalibrerats, analyserades först QC-provet för att testa instrumentets stabilitet för att säkerställa systemets konsekventa prestanda.

All datainsamling och analyser av data kontrollerades av Waters MassLynx v4.1 programvara. Den multivariata datamatrisen analyserades av EZinfo programvara 2.0 (Waters Corp.). Huvudparametrarna inkluderar retentionstidsintervall 0 14 min; massförhållande m/z 100 1,000, masstoleransintervall 0.{{10}}1 Da, tröskel för toppintensitet 50, kvalitetsfönster 0,05 Da, retention tidsfönster 0,20 min, och automatisk detektering av 5 procent topphöjd och buller. Intensiteten för varje jon normaliserades med avseende på det totala jontalet för att generera en datamatris som bestod av retentionstiden, m/z-värdet och den normaliserade topparean.

De resulterande datamatriserna introducerades till programvaran EZinfo 2.0 för analys av huvudkomponenter, partiell minsta kvadraters diskriminantanalys (PLS-DA) och ortogonal projektion till latenta strukturer (OPLS-DA). Från OPLS-DA kunde olika metaboliter identifieras som ansvariga för separationen mellan kontrollgruppen och modellgruppen och sågs därför som potentiella markörer. Potentiella markörer av intresse extraherades från S-plots konstruerade efter analys med OPLS-DA, och variabler som hade signifikanta bidrag till diskriminering mellan grupper utsattes för ytterligare identifiering av molekylformeln.

Variabelvikten (VIP) i projektionsvärdet är en viktad summa av kvadrater av PLS-vikterna, och variablerna med VIP > 1 ansågs vara inflytelserika för separeringen av prover i poängplotterna genererade från OPLS-DA-analys. I alla experiment sattes konfidensnivån till 95 procent för att bestämma signifikansen av skillnaden (p < .05).="" dessa="" variabler="" valdes="" så="" småningom="" ut="" som="" potentiella="" biomarkörer.="" pls-da-poängplotterna="" beskrevs="" av="" korsvalideringsparametern="" r2y="" och="" q2,="" som="" representerar="" den="" totala="" förklarade="" variationen="" för="" x-matrisen="" respektive="" modellens="" förutsägbarhet.="" utmärkta="" modeller="" erhålls="" när="" de="" kumulativa="" värdena="" för="" r2y="" och="" q2="" är="" över="" 0,8.="" de="" relativa="" avstånden="" mellan="" administreringsgrupper="" och="" kontrollgruppen="" från="" pls-da-poängdiagrammet="" beräknades="" med="" medelvärdet="" (x-axeln="" och="" y-axeln)="" för="" alla="" prover="" från="" kontrollgruppen="" som="">

Potentiella utvalda metaboliter identifierades enligt bestämningen av den exakta m/z, retentionstiden och typiska MS/MS-fragment och mönster för de potentiella biomarkörerna ovan, som erhölls i positiva och negativa jonlägen. Konstruktionen av den metaboliska vägen utfördes med Metabo Analyst, som är ett webbaserat verktyg för visualisering av metabolomics (https://www. metaboanalyst.ca/) baserat på databaskällor inklusive KEGG (HTTP:// www.genome) .jp/kegg/) och HMDB-databaserna (http://www.hmdb. ca/) för sökning. Retentionstiden och det typiska MS/MS-fragmentet och mönstret hade stor nytta för att begränsa intervallet av möjliga molekyler.

Acteosid i Cistanche kan förbättra njurfunktionen

3|RESULTAT

Klicka här för information om del II (resultat) av denna artikel.

Utdrag ur: ' En naturprodukt avakteosidförbättranjurskadai diabetes db/db-möss och HK-2-celler via reglerande NADPH/oxidas-TGF-/Smad-signalväg' -----av Qinwen Wang|Xinxin Dai et.al

----Fytoterapiforskning. 2021;35:5227–5240. wileyonlinelibrary.com/journal/ptr © 2021 John Wiley & Sons Ltd. DOI: 10.1002/ptr.7196