Anti-aging -Klotho genaktiverad ställning främjar föryngrande sårläkningssvar i mänskliga fetthärledda stamceller

3. Diskussion

Denna studie syftade till att undersöka den funktionella effekten av en anti-aging -Klotho-genaktiverad ställning på mänskliga ADSC:er för förbättrad sårläkning. Sammantaget fann vi att den genaktiverade ställningen erbjuder kontrollerad aktivering av ADSC:s regenerativa förmågor som visas i figur5. Specifikt förbättrade den genaktiverade byggnadsställningen tillfälligt ADSCs stamness genom aktiveringen av transkriptionsfaktor okt-4. Den genaktiverade ställningen främjade också tidig aktivering av den antifibrotiska genen TGF- 3, en avgörande faktor för kontrollerad läkning med minskad ärrbildning. Vidare kontrollerade de aktiverade ADSCs temporärt endotelial angiogenes och stödde dermal fibroblastläkning genom parakrin signalering. Mot mognad kontrollerade ADSC:erna även aktiveringen av pro-fibrotisk respons i de dermala fibroblasterna. Samtidigt regenererade ADSCs på den genaktiverade ställningen effektivt det dermala basalmembranet genom att förbättra laminin och kollagen IV-avsättning. Detta svar var ytterligare associerat med minskat ärr-associerat -SMA-proteinuttryck och förbättrad kvalitativ elastinmatrisavsättning. Vår studie fastställde gemensamt att -Klotho-genaktiveradCistanchehar en enorm potential försårläkningoch kundeavancerad stamcellsbaserad terapi för föryngrande läkningstillämpningar.

Figur 5. Ett schema över den funktionella inverkan av B-Klotho genaktiverad byggnadsställning på mänskliga ADSCs för sårläkningstillämpningar. De viktigaste resultaten av denna studie är (1) övergående förbättring av stamcellspluripotens och anti-fibrotisk respons, (2) förbättrad parakrin kontroll mot angiogenes och pro-fibrotisk kollagenombyggnad i dermala fibroblaster och i slutändan (3) ökad mognad av basalmembranet med kontroll över ärrassocierat proteinuttryck. Prickade linjer för elastinmatris innebär förbättrad kvalitativ avsättning.

Klicka här för att veta hur CistancheSårläkningseffekter

I sårläkningsstrategier tillämpas plasmidbaserad genterapi för att tillfälligt förbättra cellulära svar tills sårreparationen är fullständig [37]. Vår genaktiverade ställning visar också att den terapeutiska -Klotho-genen är övergående reglerad under 14 dagar. Det markant förbättrade (170-faldiga) uttrycket för -Klotho mRNA på dag 3 kan tillskrivas den omedelbart-tidiga CMV-promotorn som är känd för att förbättra transkriptionell aktivering av den kodade transgenen [38]. Men i MSC:erna kan CMV genomgå DNA-metylering eller histondeacetylering som kan minska transgenexpressionen [39]. Dessutom är plasmiderna i allmänhet icke-replikerande episomer, vilket begränsar överföringen av transgen till delande celler och orsakar en minskning av transgenexpressionen över tiden [40]. Närvaron av heterokromatiska markörer som härrör från bakteriesekvenserna avplasmid kan ytterligare undertrycka transgenexpression [41], vilket totalt sett bidrar till ett övergående genuttryck.

En av vägarna för behandling av svårläkta sår är appliceringen av cellfröade bioaktiva byggnadsställningar. En anledning är deras förmåga att främja snabb sårreparation. Metaboliskt aktiva celler i transplantatet utsöndrar parakrina faktorer och genomgår differentiering, orkestrerar de komplexa signalhändelserna i sårmiljön [42]. Stamceller, i synnerhet, har en unik förmåga att känna av yttre stimuli och modulera deras svar för att återställa homeostas [43]. Men stamceller förlorar sin stamhet när de expanderas in vitro för att generera stora cellantal för transplantatet. Vår studie visar att stamheten tillfälligt kan förstärkas med en genaktiverad ställning som bär en anti-aging gen -Klotho. Specifikt noterade vi att den anti-aging-genaktiverade ställningen förbättrade uttrycket av stamness-genen Oct-4 i ADSC:erna. Okt-4 är en av de viktigaste transkriptionsfaktorerna i embryonala stamceller och är avgörande för kontrollerad embryonal utveckling [44]. I ADSC:erna kan aktiveringen av Oct-4-genen främja deras proliferation och differentieringspotential [45]. Således kan det ökade uttrycket av Oct-4 underlätta snabb differentiering av ADSC:erna på den genaktiverade ställningen till värdceller och hjälpa till i läkningsprocessen.

Efter att ha observerat aktiveringen av Oct-4-genen i ADSC:erna utvärderade vi sedan ADSC:s angiogena styrka. Angiogenes är avgörande för effektiv integration av transplantatet med värdvävnaden [46]. Celler i transplantatet utlöser angiogenes genom utsöndring av parakrina faktorer. Angiogenes är också en avgörande händelse för granulationsvävnadsutveckling och dess aktivitet minskar när granulationsvävnaden mognar [47]. Denna programmerade begränsning av den angiogena aktiviteten i läkningens senare stadier är väsentlig för att kontrollera ärrbildning och hypergranulering som kan hindra återepitelisering [48]. Vårt fynd visar också att ADSCs på den genaktiverade ställningen kan förbättra endotelial spiring och kontrollera deras tillväxt genom parakrin signalering. Dessutom visar de signifikanta ökningarna i endotelcellernas metaboliska aktivitet och spiring som svar på dag 3 CM potentialen hos den ADSC-laddade genaktiverade byggnadsställningen att snabbt integreras med värdvävnaden. Dessutom är användningen av stamceller CM ett vanligt antaget cellfritt tillvägagångssätt för att förbättra kvaliteten på sårläkning [49]. Som en begränsning erkänner vi att vuxna dermala endotelceller skulle tjäna en bättre cellmodell för att studera angiogenes; dock för att bibehålla överensstämmelse med våra tidigare studier och att HUVEC är allmänt accepterade som "guldstandard" cellkandidaten [50], antog vi HUVECs angiogenesanalys.

En ökning av aktiviteten för ombyggnad av fibroblaster är ett allmänt kännetecken för granulationsvävnadsmognad [51]. Under detta stadium ersätts kollagen III-matriserna gradvis av starkare kollagen I-fibrer [51]. Kollagenfibrer främjar sedan sårkontraktion [52], och sårkontraktion är oumbärlig för fullständig sårtillslutning [53]. En aggressiv ihållande ökning av kollagen I-deposition kan dock öka ärrbildningen [54]. Att kontrollera ärrbildning är avgörande eftersom det kan hämma utvecklingen av andra hudbihang som hårsäckar, talgkörtlar och svettkörtlar, till exempel i brännsår [54]. Vårt fynd visar att den åldrade (dag 14) CM från den genaktiverade ställningsgruppen kunde kontrollera uttrycket av pro-fibrotiskt kollagen I i vuxna dermala fibroblaster. Denna kontrollerade effekt på fibroblasterna inträffade utan ytterligare inverkan på fifibroblastens migration eller deras anti-fibrotiska kollagen III-uttryck i förhållande till den genfria ställningsgruppen. Därför föreslår vi att den ADSCs-laddade genaktiverade ställningen kan erbjuda bättre kontroll för att begränsa ärrbildning in vivo genom kontrollerat kollagen I-uttryck. Li et al., har också visat att ADSCs CM signifikant kan minska kollagen I-uttrycket i fibroblaster som härrör från hypertrofiska ärr [55]. En annan studie av Wang et al., visade en liknande minskning av kollagen I-uttryck i keloid-härledda fibroblaster [56], som tillsammans visar den anti-fibrotiska potentialen hos ADSCs CM.

Ett av de betydande fynden som vi noterade med tillämpningen av -Klotho genaktiverad byggnadsställning är den förbättrade regenereringen av basalmembranet i ADSC. Regenereringen av basalmembranet är avgörande för blodkärlsmognad och fullständig återepitelisering [57,58]. Viktigt, trenden där proteinerna laminin(2.1-faldigt) och kollagen IV (8.8-faldigt) är uppreglerade, vilket ytterligare indikerar ökad mognad av basalmembranet i den genaktiverade ställningsgruppen [59]. Förutom att fungera som en anti-aging faktor [60], fungerar betaklotho för att öka känsligheten för fibroblasttillväxtfaktor (FGF) av FGF-receptorer [61]. Dessutom har en ökning av FGF-signalering visat sig främja basalmembranmognad genom avsättning av laminin och kollagen IV [62]. Därför, med tanke på beta klothos roll som en co-receptor av FGF, är den ökade källarmognaden i den genaktiverade ställningsgruppen potentiellt medierad av en ökning av ADSCs FGF-signalering.

Basalmembrankomponenten som är anmärkningsvärt uppreglerad i den genaktiverade ställningsgruppen är kollagen IV-proteinet. Kollagen IV-proteinet representerar 50 procent av alla basalmembran [63] och ger strukturell stabilitet till basalmembranet [59]. Åldrande minskar dock avsevärt kollagen IV-uttrycket i den dermal-epidermala korsningen [58,64] och bristen på kollagen IV kan främja ärrpatogenes [65]. Sålunda tyder våra resultat på att den ökade basalmembranets regenerativa styrkan hos den ADSCs-laddade genaktiverade byggnadsställningen avsevärt kan hjälpa till med förbättrad läkning hos äldre patienter. Andra studier har också visat att fettvävnadshärledd ECM har den enorma terapeutiska potentialen för hudreparation [66]. Dessutom är vävnadskonstruerade transplantat rika på laminin och kollagen IV också av intresse för respiratorisk epitelreparation [67]. 

Förutom den pro-fibrotiska kontrollen mot fibroblasterna visar vår studie vidare att ADSC:erna i den genaktiverade ställningen också uttrycker ett 2-faldigt lägre uttryck av det ärrassocierade proteinet -SMA [68]. Även om vi inte utvärderade dess inverkan in vivo, minskningen av lokala -SMA-uttryck är avgörande för förbättrad kvalitativ läkning [69]. Använda fibrotiska medel som bleomycin [70] skulle kunna vara ett sätt att bättre utvärdera de anti-fibrotiska egenskaperna hos ADSCs/genaktiverade ställningskonstruktioner in vitro; vårt fokus var dock att fastställa konstruktionens provisoriska terapeutiska potential.

En annan indikator på att den ADSC-laddade genaktiverade byggnadsställningen kan förbättra kvalitativ läkning är avsättningen av fibrös elastinmatris istället för fläckiga extracellulära sekret i den genfria ställningsgruppen. Elastinavlagring är en av de huvudsakliga aktiviteterna som driver fostrets ärrfria sårläkning [71]. Men vuxen hud saknar avlagring av elastin [71]. Som sådant inkorporeras tropoelastin, en föregångare till elastin, ofta i biomaterialställningar för att kontrollera ärrbildning vid sårläkning [72]. Sammantaget antyder våra resultat att ADSCs/ -Klotho-genaktiverad ställningskonstruktion kan ge ett starkt antifibrotiskt svar in vivo.

4. Material och metoder

4.1. Förberedelse av genaktiverad ställning

Den genaktiverade ställningen utvecklades med en 2-stegsprocess. För det första tillverkades fasta porösa kollagen-kondroitinsulfat-ställningar av en frystorkningsslam av bovint sena typ 1-kollagen och kondroitin-6-sulfat härrörande från hajbrosk (Sigma, Storbritannien). En optimerad frystorkningsprocess utformad för att skapa enhetliga porer användes för att tillverka ställningarna [73]. Baserat på vårt publicerade protokoll [74], de frystorkade ställningarna behandlades sedan dehydrotermiskt (DHT) vid 105◦C under vakuum för sterilisering och mekanisk förbättring. De steriliserade ställningarna tvärbands sedan kemiskt med 14 mM N-(3-dimetylaminopropyl)-N'-etylkarbodiimidhydroklorid och 5,5 mM N-hydroxisuccinimid (2,5 molära förhållanden av EDC/NHS) (Sigma, Storbritannien) lösning till förbättra den mekaniska stabiliteten ytterligare [75]. De tvärbundna ställningarna tvättades sedan med PBS (Gibco, Paisley, Storbritannien) för att avlägsna kvarvarande kemikalier. När byggnadsställningarna var klara framställdes polyplex i ett N/P10-förhållande (kväve till fosfatförhållande) genom att blanda en förutbestämd volym av grenad polyetylenimin (PEI)-lösning med plasmid-DNA (pDNA) som kodar för den humana beta-Klotho-genen ( -Klotho), erhållen från SinoBiological, Peking, Kina. N/P10-förhållandet valdes baserat på våra tidigare studier som fann att polyplexer formulerade med ett N/P10-förhållande effektivt kunde bilda små, stabila katjoniska nanopartiklar med plasmider så stora som GLuc (5,76 kb) [21,23]. Före användning späddes plasmiderna i endotoxinfritt vatten för att erhålla en arbetskoncentrationav 0.5µg/µL. Plasmiden innehåller humant förstärkt omedelbart-tidigt cytomegalovirus(CMV3)-promotor för att främja stabilt och övergående uttryck på hög nivå av det kodadegen i däggdjursceller.

Plasmid/PEI-blandningen fick sedimentera i 30 minuter för att självmontera till polyplexnanopartiklar. Nanopartiklarna blötlades sedan på ställningarna genom pipetteringlika volymer av polyplexlösningen per sida av ställningen. Totalt 2µg pDNA varanvänds per ställning för att utveckla den genaktiverade ställningen.

4.2. Cellsådd på -Klotho genaktiverad ställning

Human ADSCs (iXCells Biotechnologies, San Diego, CA, USA) utökades till passage 4 i ADSCs tillväxtmedium (kat. nr. MD0003) som tillhandahålls av företaget. Totalt 5× 105 ADSC:er (2.5× 105 per sida) såddes sedan per genfri ställning (kontroll,n = 3) eller genaktiverad ställning (test,n = 3). Efter att ha låtit cellerna sedimentera i cirka 20 minuter tillsattes 2 ml transfektionsmedium OptiMEM (Gibco, Storbritannien) och de cellulära ställningarna inkuberades vid 37◦C i 24 timmar. Efter 24 timmars inkubation överfördes de cellulariserade genfria eller genaktiverade ställningarna till nya 12-brunnsplattor och matades med 2 mL ADSCs tillväxtmedium. Mediebyte utfördes sedan var 3-4 dag fram till dag 14 genom att samla upp 1 ml av det konditionerade mediet (CM) och ersätta det med lika volym färskt medium. Alla CM lagrades kl−80 ◦C tills analys.

4.3. qRT-PCR-analyser för att fastställa -Klotho-genöveruttryck och aktivering av funktionella gener

För att bestämma den övergående regleringen av målgenerna skördades celler vid dag 3 (tidigt) och 14 (sen) efter sådd på de genfria eller genaktiverade ställningarna. Cellerna lyserades först med användning av Qiazol-lysreagenset (Qiagen, Germantown, MD, USA). Kloroform tillsattes sedan för att separera cellysatet i protein-, DNA- och RNA-faser. Med användning av RNeasy Kit (Qiagen, Manchester, Storbritannien) extraherades RNA:t och deras kvalitet och kvantitet bestämdes med användning av en Multiskan Go plattläsare (Thermo Scientific, Storbritannien) med absorbansen inställd på 260 nm. Genomiskt DNA avlägsnades sedan genom att blanda RNA:t med en genomisk DNA wipeout-buffert (Qiagen, Manchester, Storbritannien) och värma till 42◦C i 2 min. Därefter utfördes omvänd transkription för att framställa cDNA. Dubletter av cDNA per replikat (n = 3) laddades i qRT-PCR-plattorna och sedan kördes analysen med primrarna som anges i tabell1. Vikförändring i mRNA-uttryck i förhållande till cellerna på den genfria byggnadsställningen beräknades med hjälp av 2−∆∆CTmetod från genomsnitt av tre replikat per grupp. Human GAPDH (Hs_GAPDH_1_SG, Kat. nr. QT00079247) användes som hushållsgenen.

4.4. Bioaktivitetsanalyser av utsöndrade faktorer från ADSCs på -Klotho genaktiverad ställning

4.4.1. Pro-angiogena bioaktivitetsanalyser

4.4.2. Dermala fibroblaster läknings- och mognadsanalyser

Efter angiogenesanalysen undersökte vi CM:s potens för dermal läkning genom att använda en skrapanalys av humana vuxna dermala fibroblaster (iXcells, Kat. nr. 10 HU-014). För denna studie valde vi specifikt den åldrade CM från dag 14 för att studera dess inverkan på fibroblastsårstängning under mognad. Totalt 1× 104 celler/brunn i en 96-brunnsplatta såddes och inkuberades över natten i fibroblasttillväxtmediet. Nästa dag skapades ett sår på monoskiktet genom att en 200 uL pipettspets horisontellt skrapas över brunnen. Monoskiktet sköljdes sedan med PBS för att avlägsna eventuellt skräp och matades med CM. Sårtillslutning registrerades mellan 12–16 timmar efter repan. Immunfärgning användes för att studera uttrycket av profibrotiskt kollagen I (1:100, Novusbio, Storbritannien) och antifibrotiskt kollagen III (1:100, Novusbio, Storbritannien) i fibroblasterna. Fibroblasterna motfärgades med rhodamin (1:800, Abcam, Storbritannien) för F-aktin-avbildning. Immunfärgning utfördes enligt beskrivning i avsnitt4.5, med undantag för vävnadsbearbetning och avparaffinering. Både HUVEC och fibroblasterna användes vid passage 4.

4.5. Immunofluorescensavbildning av extracellulära matrisproteiner

Efter 14 dagars odling skördades de cellulariserade genfria eller genaktiverade byggnadsställningarna för detektering av matrisavsättning med användning av immunfluorescens. Bearbetningen av proverna utfördes såsom beskrivits tidigare. Kortfattat tvättades byggnadsställningarna först med PBS och fixerades i 10 procent neutralt buffrat formalin under 20 minuter. De fixerade proverna bearbetades sedan med användning av standardprotokollet för avparaffinering. Blocken skars sedan i 7-µm tjocka skivor och samlas på laddade objektglas. Sektionerna avparaffinerades sedan med användning av xylen följt av rehydrering av sektionen med minskande gradienter av etanol. Därefter permeabiliserades cellerna med 0,2 procent Tween®20 (Sigma-Aldrich, Frankrike) lösning i PBS i 30 min (10 min tvätt× 3) och blockerad med 10 procent NGS (Normal Goat Serum, Invitrogen, Rockford, IL, USA)/5 procent BSA/0,3 M glycin (beredd i permeabiliserande lösning) under 1 timme. Efter blockering sköljdes objektglasen i PBS och inkuberades sedan vid 4◦C över natten med antikropparna mot målmatrisproteiner listade i tabell2. Nästa dag sköljdes objektglasen i PBS tre gånger i 2–3 minuter vardera för att avlägsna eventuella obundna primära antikroppar. Därefter inkuberades objektglasen i antingen Alexa 488-konjugerad get anti-mus IgG (A32723, Invitrogen, Storbritannien) eller Alexa 594-konjugerad get anti-kanin IgG (A11012, Invitrogen, Storbritannien) vid 1: 800 spädning vid rumstemperatur i 1 timme i mörker. Sköljningssteget utfördes som tidigare och motfärgades för kärnor med användning av monteringsmediet med DAPI (ab104139, Abcam, Storbritannien). Objektglasen avbildades sedan med ett fluorescensmikroskop (Olympus BX43, Japan) vid 20× mål. Prover inkuberade med endast sekundära antikroppar användes som kontroller.

Bildkvantifiering

Bild] programvara (Image, NIH, MD, USA) användes för att semikvantitativt bestämma mängden uttryckta proteiner. För varje markör bestämdes först ett konstant tröskelvärde genom preliminär avbildning av olika sektioner. Med användning av det inställda tröskelvärdet bestämdes integrerad densitet (färgat område x genomsnittligt gråvärde) av bilderna och normaliserades sedan till antalet celler (DAPI-räkning) för att ge en slutlig medelfluorescensdensitet per cell. Ett genomsnitt kvantifierades från 8-10 slumpmässiga bilder per replikat med minst tre replikat per grupp. De medelvärden som erhölls från de tre replikaten/gruppen användes sedan för att mäta det relativa uttrycket mellan grupperna.

4.6. Statistisk analys

Alla resultat uttrycks som medelvärde plus standardavvikelse. Oparat, tvåsidigt t-test användes i allmänhet för att beräkna den statistiska signifikansen mellan grupper, där p < 0.05 ansågs vara signifikant

Denna studie visade attanti-åldring -Klotho genaktiverad cistancheerbjudanden kontrollerade aktivering av den regenerativa kapaciteten hos ADSC. De viktigaste resultaten av denna studie är (1)övergående förbättring av stamcellspluripotens och antifibrotisk respons, (2)förbättrad parakrin kontroll mot angiogenesoch pro-fibrotisk kollagenremodelleringi dermala fibroblaster, och i slutändan, (3)ökad mognad av basalmembranetmed kontroll över ärrassocierade proteiners uttryck. Sammanfattningsvis tyder dessa resultat påatt ADSCs-laddade -Klotho genaktiverad ställning kan ha stor potentialbehandla ett brett spektrum av hudsår.

resurser, ALL, FJO och MBK; datakurering, ALL och MBK; skrift—originalutkast förberedelsertion, ALLA; skrivande—granskning och redigering, ALLA, FJO och MBK; visualisering, ALLA; övervakning,FJO och MBK; projektadministration, MBK; finansieringsförvärv, FJO och MBK Alla författarehar läst och samtyckt till den publicerade versionen av manuskriptet.

Intressekonflikt:Författarna förklarar att det inte föreligger någon intressekonflikt.

Referenser

1. Laiva, AL; O'Brien, FJ; Keogh, MB Innovationer i gen- och tillväxtfaktorleveranssystem för diabetisk sårläkning.J. Tissue Eng. Regen. Med.2018, 12, e296–e312. [CrossRef] [PubMed] 

2. Makrantonaki, E.; Wlaschek, M.; Scharffetter-Kochanek, K. Patogenes av sårläkningsstörningar hos äldre.JDDG J. Dtsch. Dermatol. Ges.2017, 15, 255–275. [CrossRef] [PubMed]

3. Ganguly, P.; El-Jawhari, JJ; Burska, AN; Ponchel, F.; Giannoudis, PV; Jones, EA Analysen av in vivo åldrande i mänskliga benmärgs mesenkymala stromaceller med användning av kolonibildande enhet-fibroblastanalys och fenotypen CD45lowCD271 plus.Stamceller Int.2019, 2019, 5197983. [CrossRef] 

4. Westerweel, PE; Teraa, M.; Rafifii, S.; Jaspers, JE; White, IA; Hooper, AT; Verhaar, MC Försämrad endotel-progenitorcellsmobilisering och dysfunktionell benmärgsstroma vid diabetes mellitus.PLoS ETT2013, 8, e60357. [CrossRef] 

5. Murray, RZ; West, ZE; Cowin, AJ; Farrugia, BL Utveckling och användning av biomaterial som sårläkningsterapier.Bränna. Trauma2019, 

6. [CrossRef] [PubMed] 6. Ebrahimian, TG; Pouzoulet, F.; Squiban, C.; Buard, V.; AndréM.; Kusin, B.; Tamarat, R. Cellterapi baserad på fettvävnadshärledda stromaceller främjar fysiologisk och patologisk sårläkning.Åderförkalkning. Thromb. Vasc. Biol.2009, 29, 503–510. [CrossRef] 

7. Wu, Y.; Chen, L.; Scott, PG; Tredget, EE Mesenkymala stamceller förbättrar sårläkning genom differentiering och angiogenes.Stamceller2007, 25, 2648–2659. [CrossRef] [PubMed] 

8. Foubert, P.; Gonzalez, AD; Teodosescu, S.; Berard, F.; Doyle-Eisele, M.; Yekkala, K.; Fraser, JK Fetthärledd regenerativ cellterapi för brännsårläkning: en jämförelse mellan två leveransmetoder.Adv. Sårvård2016, 5, 288–298. [CrossRef] [PubMed]

9. Assi, R.; Foster, TR; Han, H.; Stamati, K.; Bai, H.; Huang, Y.; Dardik, A. Leverans av mesenkymala stamceller i biomimetiskt framställda byggnadsställningar främjar läkning av diabetiska sår.Regen. Med.2016, 11, 245–260. [CrossRef] [PubMed] 

10. Jiang, Y.; Chen, B.; Liu, Y.; Zhufu, Z.; Yan, X.; Hou, X.; Tan, Q. Effekt av kollagenställning med fetthärledda stromala vaskulära fraktionsceller på diabetisk sårläkning: En studie i en diabetisk grismodell.Tissue Eng. Regen. Med.2013, 10, 192–199. [CrossRef] 

11. Falanga, V.; Sabolinski, M. En levande hudkonstruktion med två skikt (APLIGRAF®) påskyndar fullständig stängning av svårläkta venösa sår.Sårreparation Regen.1999, 7, 201–207. [CrossRef] 12. Hart, CE; Loewen-Rodriguez, A.; Lessem, J. Dermagraft: Används vid behandling av kroniska sår.Adv. Sårvård.2012, 1, 138–141. [CrossRef] [PubMed] 13. Dinh, TL; Veves, A. Effekten av Apligraf vid behandling av diabetiska fotsår.Plast. Reconstr. Surg.2006, 117, 152S–157S. [CrossRef] [PubMed]

14. Eaglestein, WH; Falanga, V. Vävnadsteknik och utvecklingen av Apligraf®, en mänsklig hudmotsvarighet.Clin. Ther.1997, 19, 894–905. [CrossRef] 

15. Jiang, T.; Xu, G.; Wang, Q.; Yang, L.; Zheng, L.; Zhao, J.; Zhang, X. In vitro, expansion försämrade stamness av tidig passage mesenkymala stamceller för behandling av broskdefekter.Celldöd Dis2017, 8, e2851. [CrossRef] [PubMed]

16. Liu, J.; Ding, Y.; Liu, Z.; Liang, X. Åldrande i mesenkymala stamceller: funktionella förändringar, molekylära mekanismer och strategier för föryngring.Främre. Cell Dev. Biol.2020, 8, 258. [CrossRef] [PubMed] 

17. Wang, W.; Xu, X; Li, Z.; Lendlein, A.; Ma, N. Genteknik av mesenkymala stamceller genom icke-viral genleverans.Clin. Hemorheol. Microcirc.2014, 58, 19–48. [CrossRef] 

18. Deveza, L.; Choi, J.; Lee, J.; Huang, N.; Cooke, J.; Yang, F. Polymer-DNA Nanopartikel-inducerad CXCR4-överuttryck förbättrar stamcellsimplantering och vävnadsregenerering i en ischemimodell för bakben hos mus.Teranostik2016, 6, 1176–1189. [CrossRef] [PubMed] 

19. O'Brien, FJ Biomaterial och ställningar för vävnadsteknik.Mater. I dag2011, 14, 88-95. 20. Yannas, I.; Tzeranis, D.; Harley, B.; Så, P. Biologiskt aktiva kollagenbaserade byggnadsställningar: Framsteg inom bearbetning och karakterisering.Philos. Trans. R. Soc. En matte. Phys. Eng. Sci.2010, 368, 2123–2139. [CrossRef] 

21. Laiva, AL; Raftery, RM; Keogh, MB; O'Brien, FJ Pro-angiogen inverkan av SDF-1 genaktiverade kollagenbaserade ställningar i stamcellsdriven angiogenes.Int. J. Pharm.2018, 544, 372–379. [CrossRef] [PubMed] 

22. Lackington, WA; Raftery, RM; O'Brien, FJ In vitro-effektivitet av en genaktiverad nervledningsledning som innehåller icke-virala PEI-pDNA-nanopartiklar som bär gener som kodar för NGF, GDNF och c-Jun.Acta Biomater.2018, 75, 115–128. [CrossRef] 

23. Tierney, EG; Duffy, GP; Hibbitts, AJ; Cryan, SA; O'Brien, FJ Utvecklingen av icke-virala genaktiverade matriser för benregenerering med användning av polyetylenimin (PEI) och kollagenbaserade byggnadsställningar.J. Kontroll. Släpp2012, 158, 304–311. [CrossRef] [PubMed] 24. Laiva, AL; O'Brien, FJ; Keogh, MB SDF-1 genaktiverad kollagenställning driver funktionell differentiering av mänskliga Schwann-celler för sårläkningstillämpningar.Biotechnol. Bioeng.2021, 118, 725–736. [CrossRef] [PubMed]