Anti-nociceptiv och antiinflammatorisk aktivitet orsakad av Cistanche Deserticola hos gnagare

Kontakt:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Li-Wei Lin, et al

Abstrakt

I föreliggande studie, rhizomer avCistanchedeserticola(Orobanchaceae, förkortat CD) extraherades med 50 % etanol och isolerades i ordning med etylacetat, n-butanol och vatten. Det smärtstillande ochanti-inflammatoriskeffekter av CD-extrakt och tre lager utvärderades i flera djurmodeller. CD(Cistanchedeserticola)extrakten hämmade effektivt vridningssvar inducerat av 1 procent ättiksyra och bifasiskt slickningssvar orsakat av 1 procent formalin, och minskade även ödem som inducerades av 1 procent karragenan men inte zymosan. Dessutom butan- och vattenskikten av CD(Cistanchedeserticola)extrakt minskade inte bara smärtan som inducerades av ättiksyra och formalin utan minskade också ödem som inducerades av karragenan. Effekter av det butaniska lagret på CD(Cistanchedeserticola)extrakt är bättre än vattenskiktet. Dessutom effekten av det butaniska lagret av CD(Cistanchedeserticola)extraktet avskaffades inte av naloxon. Dessa resultat visade att har smärtstillande ochanti-inflammatoriskeffekter, och butan- och vattenskikten är huvudsakligen aktiva beståndsdelar. Dessutom smärtstillande ochanti-inflammatoriskeffekter av det butaniska lagret på CD(Cistanchedeserticola)extrakt var inte relaterade till opioidreceptorer och immunsystemet.

Nyckelord:Cistanche deserticola; Analgetisk aktivitet; Antiinflammatorisk aktivitet

1. Introduktion

CistanchedeserticolaMa. (Orobanchaceae, förkortat CD), en inhemsk ört i Kina används i stor utsträckning inom traditionell medicin för olika terapeutiska behandlingar inklusive lugnande, smärtstillande och immunförstärkande indikationer (Lee, 1986). Moderna farmakologiska studier påpekade CD(Cistanchedeserticola)extraktet hade immunförstärkande (Chin och Su, 1993), friradikalfångande effekt (Hsu et al., 1995) och ökningen av SOD-aktivitet (Chang et al., 1995). I en nyligen genomförd studie spelade fria radikaler en betydande roll i inflammatoriska processer (Arrigoni-Martelli, 1985). Därför försökte den föreliggande studien undersöka de förmodade analgetiska effekterna av CD(Cistanchedeserticola)extrakt i möss med ättiksyra-inducerat vridningstest (Taber et al., 1969) och formalin-inducerat slicktest (Shibata et al., 1989). För det andra studerade vi också det möjligaanti-inflammatoriskCD-aktiviteter(Cistanchedeserticola)extrakt på den klassiska inflammatoriska processen med karragenan-inducerat ödemtest (Winter et al., 1962) och alternativ inflammatorisk process med zymosan-inducerat ödemtest (Tarayre et al., 1989). Slutligen undersökte vi aktiva lager av CD-extrakt separerade med olika lösningsmedel. '

2. Material och metoder

2.1. Växtmaterial och extrakt

Rhizomer av CD(Cistanchedeserticola)köptes från den taiwanesiska marknaden och bekräftades av professor MT Hsieh. Ett kupongprov (nr CMC-ICPS-000626) bevarades i herbariet hos Institute of Chinese Pharmaceutical Sciences, China Medical College för framtida referens. Extraktion och isolering av CD(Cistanchedeserticola)följdes som de tidigare rapporterna (Lu, 1998). CD(Cistanchedeserticola)extrakt (utbytet i 34,2 procent) och tre skikt*/etylacetatskikt, butanolskikt och vattenskikt (deras utbyte i 3,4, 10,2, 30,6 procent) (förkortat CDE, CDB respektive CDW)*/användes för framställning av extrakt.

2.2. Beredning av extrakt och läkemedel

CD(Cistanchedeserticola)extrakt ({{0}}.1, 0.3, 1 g/kg) och tre lager CD(Cistanchedeserticola)extrakt ({{0}}.03, 0.1, 0,3 g/kg) löstes i 0,5 procent karboximetylcellulosa och administrerades oralt 60 minuter innan till injektion av en inducerare. Acetylsalicylsyra (ASA) (100, 300 mg/kg) och indometacin (IN DOL) (10 mg/kg) framställdes som en suspension med 0,5 procent karboximetylcellulosa och administrerades intraperitonealt före injektionen av en inducerare. Naloxon (1 mg/kg) löstes med normal koksaltlösning.

2.3. Djur

Sprague-Dawley-hanråttor (200-250 g) användes för studien avanti-inflammatoriskaktiviteter. ICR-möss av hankön (20-25 g) användes för att testa de analgetiska effekterna. Alla djur användes i experimenten enligt de vägledande principerna med vård och användning av försöksdjur. De hölls i minst en vecka innan experimentet startade i en 239/1 8C temperatur och 60 procent fuktighetsreglerad miljö med fri tillgång till standardmat i pellets (levererad och designad av Fwusow Industry Co. LTD., Taiwan ) och kranvatten, varvid en 12-12 h ljus/mörkercykel (ljusfas: 08:00-20:00 h) upprätthölls. Sedan administrerades läkemedel och smärtstillande ochanti-inflammatoriskanalyser utfördes med den dubbelblinda metoden. Efter beteendemätning dödades alla djur av koldioxid.

2.4. Antinociceptiv studie

2.4.1. Ättiksyra-inducerat buksvridningssvar hos möss

Möss delades slumpmässigt in i flera grupper. Varje mus gavs intraperitonealt 1 procent ättiksyralösning (10 ml/kg kroppsvikt). Mössen placerades i de individuella observationslådorna. Symtomen på den ättiksyrainducerade buksvridningen liknade de som beskrivits av Taber et al. (1969). Kontrolldjur fick vehikellösningar i samma experiment. Fem minuter efter injektionen av ättiksyra, räknades antalet vridningssvar per mus under 10 minuter under ättiksyra-inducerad buksvridning. Slutligen tillät antalet vridningssvar oss att uttrycka procentandelen av skydd med hjälp av följande förhållande: (medelbehandlat medelvärde för kontroll) /100/ kontrollmedelvärde.

2.4.2. Formalin-inducerad slickrespons hos möss

Denna metod representerade en modifikation av den som beskrivs av Shibata et al. (1989). Varje mus placerades i observationskammaren på ett akryltransparent plattgolv i 5 minuter före formalininjektionen. Under golvet var en stor spegel lutad i 458 graders vinkel för att möjliggöra tydlig observation av djurets tassar. Djuren administrerades 25 ml 1 procent formalin i den högra subplantarn. Därefter återfördes varje djur till kammaren och de två distinkta perioderna av det intensiva slickningssvaret observerades. Den första perioden (tidig fas) registrerades 0 /5 minuter efter injektionen av formalin och den andra perioden (sen fas) registrerades 10 /35 minuter efter injektionen. Tiden (tiderna) som spenderades i slickningssvar av den injicerade tassen mättes som en indikator på smärtrespons.

2.5. Antiinflammatorisk studie på råttor

Deanti-inflammatoriskaktiviteten bestämdes hos råttor genom att mäta den genomsnittliga ökningen av baktassvolymen efter subplantarinjektionen av inflammatoriska medel såsom karragenan (Winter et al., 1962) eller zymosan (Tarayre et al., 1989). Djuren injicerades med 0,1 ml 1 procent karragenan eller 2 procent zymosan i höger bakfot under plantar aponeuros. Inflammationen kvantifierades i termer av milliliter med hjälp av en pletysmometer (7150 Ugo Basile), som registrerade små skillnader i vattennivån orsakade av volymförskjutning. Före någon behandling bestämdes medelvolymen av baktassarna hos varje djur (Vo) med tre mätningar som inte skilde sig från mer än 4 procent (apparatens noggrannhet). Sedan 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240 minuter efter injektionen av de inflammatoriska medlen bestämdes medelvolymen av baktassarna på varje djur (Vt) med tre mätningar som inte skilde sig från mer än 4 procent.

Procentandelen av ödem vid varje registrering beräknades genom att jämföra medelvolymen av baktassarna hos varje djur (Vt) efter injektionen av de inflammatoriska medlen med medelvolymen av baktassarna hos varje djur (Vo) före någon behandling (Palanichamy och Nagarajan, 1990). Procentandelar av hämning erhölls för varje grupp genom att använda följande förhållande: [(Vt-Vo)kontroll /(Vt-Vo)behandlad]-100/ (Vt-Vo)kontroll.

2.6. Statistisk analys

Alla data som erhållits under smärtstillande ochanti-inflammatoriskaktiviteten uttrycktes i termer av medelvärde och standardfel och analyserades vidare genom att använda ANOVA envägsanalys av varians, följt av Scheffs test. När sannolikheten (P) var mindre än 0.05 ansågs skillnaden vara signifikant.

3. Resultat och diskussion

Förbehandlingsdjuren med orala doser av CD(Cistanchedeserticola)extrakt (0.1-1 g/kg) resulterade i en dosberoende och signifikant hämning av ättiksyrainducerat vridningssvar (tabell 1) och de tvåfasiska faserna av formalin-inducerade slickningssvar hos möss ( Fig. 1(A)). Hämningen orsakad av CD(Cistanchedeserticola)extrakt vid 1 g/kg på ättiksyra-inducerad vridningsrespons och formalin-inducerad slickrespons var cirka 54 respektive 45 procent. Den positiva kontrollen acetylsalicylsyra vid 0.1-0,3 g/kg minskade också ättiksyra-inducerad vridningsrespons med hämning av 45-64 procent (tabell 1). Emellertid hämmade den andra positiva kontrollen indometacin vid 10 mg/kg endast den sena men inte tidiga fasen av formalin-inducerat slicksvar hos möss med den maximala hämningen på 32 procent (Fig. 1(A)). Dessutom endast butanol- och vattenskikt bland tre skikt av CD(Cistanchedeserticola)extrakt vid 0.1-0.3 g/kg gav också betydande antinociception, och dessa smärtstillande effekter av butanolskiktet var bättre än de för vattenskiktet (tabell 1 och fig. 1(B)) . För det andra bedömde vianti-inflammatoriskaktivitet av CD(Cistanchedeserticola)extrakt och tre lager mot klassisk (karragenan-inducerad) och alternativ (zymosan-inducerad) ödembildning. Vi hittade den CD:n(Cistanchedeserticola)extrakt vid 0.1-1g/kg hämmade också signifikant karragenan-inducerad ödembildning på ett dosrelaterat sätt och indometacin vid 10 mg/kg hämmade också effektivt karrageenan-inducerad ödembildning hos råttor (fig. 2). Emellertid hämmades inte zymosan-inducerad ödembildning av CD(Cistanchedeserticola)extrahera vid 0.1-1 g/kg hos råttor (data visas inte). Dessutom endast butanolskiktet bland tre skikt av CD(Cistanchedeserticola)extrakt vid 0.1-0,3 g/kg hämmade också signifikant karrageenan-inducerad ödembildning hos råttor (fig. 2). Enligt fytokemiska rapporter, akteosid och bärnstenssyra, tillhörande ingredienser i butanolskiktet av CD(Cistanchedeserticola)extrakt (Hsu et al., 1994, 1995), hadeanti-inflammatoriskaktivitet på kemikalieinducerad ödembildning (Murai et al., 1995; Kabachnyi et al., 1987). Från våra aktuella data och andra tidigare rapporter föreslog vi rhizomer av CD(Cistanchedeserticola)hade smärtstillande ochanti-inflammatoriskaktivitet hos gnagare, och de aktiva beståndsdelarna kommer huvudsakligen ut i det butanoliska lagret av CD(Cistanchedeserticola)extrahera. Om akteosid och bärnstenssyra är aktiva ingredienser i CD(Cistanchedeserticola), ska vi isolera och utvärdera deras smärtstillande ochanti-inflammatoriskverksamhet i framtiden.

Fig. 1. Effekt av CD(Cistanchedeserticola)extrakt ({{0}}.1, 0.3 och 1 g/kg), etylacetat, butanol och vattenhaltiga skikt av CD(Cistanchedeserticola)extrakt (CDE, CDB och CDW) ({{0}}.03, 0.1 och 0,3 g/kg) och indometacin (INDOL, 10 mg/kg) i tidig (0/5 min) och sen fas (10/35 min) av formalin-inducerad slickrespons hos möss. Varje värde representeras som medel9/SE (N /7). *PB/0,05, *** PB/0,001, jämfört med VEH-gruppen.

Fig. 2. Effekt av CD(Cistanchedeserticola)extrakt ({{0}}.1, 0.3 och 1 g/kg), etylacetat, butanol och vattenhaltiga skikt av CD(Cistanchedeserticola)extrakt (CDE, CDB och CDW) ({{0}}.03, {{10}}.1 och 0.3 g/kg) och indometacin (INDOL, 10 mg/kg) på det karragenaninducerade tassödem hos råttor. Varje värde representeras som medel9/SE (N /6). *PB/0,05, ** PB/0,01, jämfört med VEH-gruppen

Shibata et al. (1989) föreslår att den tidiga fasen av formalin-inducerad slickningsrespons var relaterad till bradykinin och substans P, och den sena fasen var relaterad till bradykinin, autokrint och prostaglandin. Våra nuvarande data påpekade att naloxon inte avskaffadeanti-inflammatoriskaktiviteten hos CD-butanolskiktet(Cistanchedeserticola)extrakt på båda faserna av formalin-inducerad slickrespons (Fig. 3) och den smärtstillande effekten på ättiksyra-inducerad vridningsrespons (Tabell 1). Därför smärtstillande ochanti-inflammatoriskeffekterna av butanolskiktet av CD-extrakt kanske inte är relaterade till opioidreceptorer. Dessutom CD(Cistanchedeserticola)extrakt och dess butanolskikt inhiberade endast karrageenan-inducerad ödembildning hos råttor. Karragenan-inducerat ödem via polymorfonukleär leukocytinfiltration och aktiverat kininsystem, särskilt bradykinin, skiljer sig från zymosan-inducerat ödem via monocytinflöde och aktiverat immunsystem (Damas et al., 1990; Dawson et al., 1991). Bärnstenssyra, en ingrediens i butanolskiktet av CD-extrakt, hämmade polymorfonukleär leukocytfunktion (Rotstein et al., 1985). Dessa resultat visade att smärtstillande ochanti-inflammatoriskeffekter av CD-butanolskiktet(Cistanchedeserticola)extrakt kan vara relaterat till kininsystemet men inte opioidreceptorer och immunsystem även om CD(Cistanchedeserticola)hade den immunförstärkande effekten (Chin och Su, 1993). För detaljerad mekanism av smärtstillande ochanti-inflammatoriskaktivitet, kommer vi att undersöka ytterligare med aktiva lager eller ingredienser av CD-extrakt.

Cistanchetubulosahar många effekter, klicka här för att veta mer

Referenser

Arrigoni-Martelli, E., 1985. Farmakologi för rensning av fria radikaler vid inflammation. International Journal of Tissue Reactions 7, 513/519.
Chang, Y., Wu, H., Wang, SN, Cheng, HC, 1995. Studie om de starka effekterna avCistanchedeserticolaMa., Cistanche salsa (CA Mey) G. Beck och Cistanche tubulosa (Schenk) R Wight. China Journal of Chinese Materials and Medicine 26, 143/146.
Chin, HL, Su, YC, 1993. Studie om farmakologiska effekter avCistanchedeserticolaMa. China Journal of Chinese Materials and Medicine 19, 143/146.
Damas, J., Bourdon, V., Remacle-Volon, G., Adam, A., 1990. Kininer och peritoneala exsudat inducerade av karrageenin och zymosan hos råttor. British Journal of Pharmacology 101, 418/422.

Dawson, J., Sedgwick, AD, Edwards, JC, Lees, P., 1991. En jämförande studie av de cellulära, exsudativa och histologiska svaren på karragenan, dextran och zymosan hos mus. International Journal of Tissue Reactions 13, 171/185.

Hsu, WH, Chu, SH, Chao, CH, Hsu, Y., Yuan, KW, Yen, CH, Chi, CY, Chan, C., 1994. Studie om de kemiska beståndsdelarna iCistanchedeserticolaMa. China Journal of Chinese Materials and Medicine 25, 509/513.
Hsu, WH, Chu, SH, Sheng, LC, Yuan, KW, Mao, CN, 1995. Studie om kemiska beståndsdelar och farmakologiska effekter avCistanchedeserticolaMa. och Cistanche salsa (CA Mey) G. Beck. Kinesiska traditionella örtläkemedel 26, 143/146.
Kabachnyi, VI, Chernykh, VP, Drogovoz, SM, Golubenko, Iu.A., Bogutskaia, EE, 1987. Sök efteranti-inflammatoriskpreparat bland derivaten av bärnstenssyraheterylamider. Farmakologiia i Toksikologiia 50, 94/97.
Lee, SL, 1986. Pen-Tsao-Kun-Mu. National Research Institute of Chinese Medicine Publications, Taipei, sid. 20.
Lu, MC, 1998. Studier om den lugnande effekten avCistanchedeserticola. Journal of Ethnopharmacology 59, 161/165.
Murai, M., Tamayama, Y., Nishibe, S., 1995. Fenyletanoider i örten av Plantago lanceolata och hämmande effekt på arakidonsyra-inducerat öronödem från mus. Planta Medica 61, 479/480.
Palanichamy, S., Nagarajan, S., 1990. Analgetisk aktivitet av Cassia alata leatextrakt och kemp Eerol 3-0-Sophoroside. Journal of Ethnopharmacology 29, 73/78.
Rotstein, OD, Pruett, TL, Fiegel, VD, Nelson, RD, Simmons, RL, 1985. Bärnstenssyra, en metabolisk biprodukt av Bacteroides-arter, hämmar polymorfonukleär leukocytfunktion. Infection and Immunity 48, 402/408.
Shibata, M., Ohkubo, T., Takahashi, H., Inoki, R., 1989. Det modifierade formalintestet: karakteristiskt bifasiskt smärtsvar. Smärta 38, 347/ 352.
Taber, RI, Greenhouse, DD, Rendell, JK, Irwin, S., 1969. Agonist- och antagonistinteraktioner av opioider på ättiksyrainducerad buksträckning hos möss. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 169, 29/38.
Tarayre, JP, Delhon, A., Aliaga, M., Barbara, M., Bruniquel, F., Caillol, V., Puech, L., Consul, N., Tisne-Versailles, J., 1989.
Farmakologiska studier på zymosaninflammation hos råttor och möss. 1: Zymosan-inducerat tassödem hos råttor och möss. Pharmacological Research 21, 375/384.
Winter, CA, Risley, EA, Nuss, GW, 1962. Karragenan-inducerat ödem i baktass på råttan som en analys föranti-inflammatoriskläkemedel. Proceedings Society of Experimental Biology and Medicine 111, 544/547.