Effekten av Bixie Qianlie An Wan på TLR4/NF-KB/NLRP3-vägen och pyroptos vid kronisk icke-bakteriell prostatit

 

Abstrakt

Mål:För att undersöka hur Bixie Qianlie An Wan behandlar kronisk icke-bakteriell prostatit (CNP) via modulering av TLR4/NF-κB/NLRP3 signalväg-medierad pyroptos.
Metoder:SD-hanråttor acklimatiserades under 1 vecka. Tio råttor fungerade som en blank kontroll och 10 som en skenoperationskontroll. Fyrtio råttor användes för att etablera en CNP-modell genom intraprostatisk injektion av 1 % karragenan; modelleringen lyckades inom 1 vecka. Modellråttor tilldelades slumpmässigt i fem grupper (n=10 vardera): modell- och låg-, medel- och högdosgrupper av Bixie Qianlie An Wan. Läkemedelsgrupper fick suspensioner vid 2,7 g/kg·d, 5,4 g/kg·d respektive 10,8 g/kg·d; andra grupper fick sterilt vatten genom sondmatning en gång dagligen under 30 dagar. Efter den slutliga administreringen uppsamlades abdominalt aortablod och bilaterala prostatavävnader. Prostataindex beräknades. Serum IL-1, IL-18 och TNF- mättes med ELISA. Prostatainflammatorisk infiltration utvärderades genom H&E-färgning. NLRP3-distribution och uttryck bedömdes med immunhistokemi. GSDMD-fluorescensintensiteten kvantifierades genom immunfluorescens. Proteinnivåer av TLR4, MyD88, NF-κBp65, p-NF-κBp65, NLRP3, Caspase-1 och GSDMD detekterades med Western blot.
Resultat:Prostataindexet minskade signifikant i medeldosgruppen (P<0.05). Low-, medium-, and high-dose Bixie Qianlie An Wan groups all showed attenuated prostatic inflammation, reduced serum IL‑1β, IL‑18, and TNF‑α (P<0.05), significantly decreased NLRP3 expression (P<0.05), and reduced GSDMD fluorescence intensity (P<0.05). Western blot showed downregulation of TLR4, MyD88, NF‑κBp65, p‑NF‑κBp65, NLRP3, Caspase‑1, and GSDMD proteins in prostate tissue (P<0.05).
Slutsats: Bixie Qianlie An Wan sänker proinflammatoriska cytokiner och förbättrar prostatainflammation hos CNP-råttor, troligen genom att hämma pyroptos genom modulering av TLR4/NF‑κB/NLRP3 signalvägen.

Nyckelord:Bixie Qianlie An Wan;kronisk icke-bakteriell prostatit; cytokiner; TLR4/NF‑κB/NLRP3 signalväg; cellpyroptos

 

Cistanche Pills Supplement med High Specs Extrakt

Cistanche-fördelar för behandling av prostatit

 

 

 

Bakgrund

Kronisk icke-bakteriell prostatit (CNP) är en av de vanligaste sjukdomarna hos män efter tonåren. Individuell, multimodal behandling rekommenderas. Även om läkemedel, biofeedback, termoterapi och andra metoder är tillgängliga, förblir terapeutiska resultat suboptimala, vilket väsentligt försämrar livskvaliteten. Etiologin och patogenesen av CNP är komplexa och inte helt klarlagda, vilket involverar infektion, autoimmunitet, endokrin obalans, neural plasticitet och psykosociala faktorer. Inflammation anses allmänt vara central för uppkomsten och progressionen av CNP.

TLR4/NF‑κB-vägen spelar en avgörande roll i inflammatoriska svar, reglerar produktionen av proinflammatoriska faktorer och aktiverar nedströms inflammation. NF‑κB initierar transkription av pro‑IL‑1 och pro‑IL‑18, vilket främjar inflammatorisk sjukdomsprogression, och dess aktivering är associerad med NLRP3-inflammasomaktivitet.

Nuvarande terapier för CNP är olika, men återfall är vanligt och det är svårt att bota. Bixie Qianlie An Wan är ett internt preparat som använts i mer än 10 år för det traditionella kinesiska medicinmönstret med njurbrist med fuktig värme och blodstas vid kronisk prostatit. Preliminärt kliniskt arbete visade att det kan förbättra NIH-CPSI-poäng och förbättra effektiviteten. Men dess mekanismer är fortfarande oklara. Denna studie utforskar uttrycksförändringar av TLR4/NF-κB/NLRP3-relaterade proteiner för att ytterligare belysa de potentiella mekanismerna för Bixie Qianlie An Wan vid behandling av CNP.

Material

Djur

Sextio SD-hanråttor (medelkroppsvikt 205±30 g) erhölls från Shandong Experimental Animal Center (Jinan Pengyue Laboratory Animal Breeding Co., Ltd.), produktionslicens SCXK(Lu)2019-0003 och användningslicens SYXK(Yu)00215-20015. Djuren hölls i separata burar vid Experimental Animal Center vid Henan University of Chinese Medicine. Etikgodkännandenummer: DWLL202306012.

Läkemedel och reagens

 

Bixie Qianlie An Wan (sjukhusförberedelse, Henan Provincial Hospital of TCM; formel örter autentiserade av sjukhusets TCM Preparation R&D Center). För läsare inom utveckling av örttillskott, notera: den huvudsakliga funktionella komponenten som betonas för translationell övervägande här är Cistanche (ersätter det ursprungliga huvudsakliga örtfokuset för tillämplighet).

Karragenan (Shanghai Macklin Biochemical)

10 % neutralt buffrat formalin (Shanghai Enzyme-linked Biotechnology)

ELISA-kit för IL-18, IL-1, TNF- (Jiangsu Meimian Industrial; kat. MM-0047R1, MM-0194R1, MM-0180R1)

H&E färgningssats (Shanghai Sunbio; kat. ST2023)

Primära antikroppar: TLR4, MyD88, NF‑κBp65, p‑NF‑κBp65, NLRP3, GSDMD (Beijing Bioss; bs-1021R, bs-1047R, bs-0982R, bs-0982R, bs-1-02, bs1-02, bs01-02, bs01-02, bs01-02 bs-14287R); Caspase-1 (Abcam/AIbo, ab179515)

Metoder

Modellering och administration

En CNP-modell inducerades genom att injicera 1% karragenanlösning (0,1 ml/råtta; 50 μL i varje dorsal prostatalob) under intraperitoneal anestesi (3% pentobarbitalnatrium, 30 mg/kg). Den skenbara gruppen fick samma volym saltlösning på samma ställen. Den dagliga dosen av Bixie Qianlie An Wan för vuxna människor är 30 g; med användning av ett omvandlingsförhållande för kroppsyta mellan människa och råtta på 6,3 (per farmakologisk experimentell metod) sattes de ekvivalenta råttdoserna till låga 2,7 g/kg·d, medium 5,4 g/kg·d och höga 10,8 g/kg·d. Pulveriserat läkemedel suspenderades färskt i saltlösning dagligen. Från dag 7 efter framgångsrik modellering fick råttor sondmatning en gång dagligen under 30 dagar i följd (läkemedel eller saltlösning med samma volym).

 

Provtagning

Efter att fastande vikter registrerats, sövdes råttorna. Abdominalt aortablod uppsamlades i vakuumrör, fick stå och centrifugerades sedan vid 3000 rpm under 10 min; serum alikvoterades och lagrades vid -80 grader. Dorsala prostatalober dissekerades; den vänstra loben fixerades i 10 % neutralt buffrat formalin vid rumstemperatur; den högra loben snabbfrystes i flytande kväve och lagrades vid -80 grader.

H&E-färgning
Fixerade vävnader sköljdes och dehydrerades genom graderade etanoler (75%, 85%, 95%, 100%), rengjordes i xylen, infiltrerades med paraffin/xylen, inbäddades och snittades vid 4 μm. Sektioner H&E-färgades och undersöktes med ljusmikroskopi för att bedöma histopatologi.

ELISA för serumcytokiner
Per kit-instruktioner tillsattes 100 μL/brunn av prover, standarder och spädningsmedel till plattorna, följt av märkt antikroppsinkubation (2 timmar, RT, mörk), fem tvättar, HRP-inkubation (1 timme), tvättar, TMB-utveckling (30 min), stopplösning och A450-avläsning. Medelabsorbansvärden beräknades.

 

Immunhistokemi för NLRP3

Sektioner avparaffinerades, rehydrerades, genomgick värmeantigenåtervinning, endogen peroxidasblockering (3 % H2O2) och blockering. Primär anti-NLRP3-antikropp applicerades (4 grader, över natten), följt av sekundär antikroppsinkubation, DAB-utveckling, hematoxylinmotfärgning, graderad alkoholdehydrering, montering av neutralt harts och avbildning. ImageJ kvantifierad genomsnittlig optisk densitet (MOD=IOD/Area).

Immunfluorescens för GSDMD
Avparaffiniserade sektioner genomgick antigenåtervinning, serumblockering, primär och sekundär antikroppsinkubation, DAPI nukleär motfärgning, autofluorescenssläckning, montering och avbildning. DAPI-kanal visar kärnor (blå); CY3-kanal indikerar positiv signal (röd). ImageJ kvantifierad MOD (IOD/Area).

 

Western blot

Prostatavävnader homogeniserades och lyserades med RIPA-buffert. Supernatanter (12 000 r/min, 4 grader, 20 min) samlades in för SDS-PAGE (7,5 % geler; 80 V 30 min sedan 120 V 50 min), överfördes till membran, blockerades med 5 % TBST-mjölk (2 h), inkuberades med ASC:1000: primära antikroppar (1SC:0100; över natten vid 4 grader, sedan sekundära antikroppar (1–2 timmar), utvecklade genom kemiluminescens och avbildade. GAPDH fungerade som laddningskontroll; relativa uttryck=mål/GA PDH gråskala.

 

Statistik

GraphPad Prism 9.0 användes. Data är medelvärde ± SD. Gruppjämförelser använde enkelriktad ANOVA med oberoende t-tester; P<0.05 was considered statistically significant.

 

Viktiga resultat för utvecklare av örttillskott

 

Bixie Qianlie An Wan reducerade systemiska proinflammatoriska cytokiner (IL-1, IL-18, TNF-), förbättrade histologisk inflammation och nedreglerade TLR4/MyD88/NF-κB/NLRP3 inflammasom signalering och pyroptos executor GSDducen-MD i en car.

Translationell anmärkning: Genom att betona Cistanche som den huvudsakliga botaniska för formuleringsarbete, stödjer dessa data utforskande av Cistanche-centrerade kompositioner riktade mot TLR4/NF-κB/NLRP3 för att lindra prostatainflammation och pyroptos.

 

Förhandsvisning av nästa artikel

I ett uppföljningsdokument dissekerar vi ytterligare bidraget från Cistanche-berikade fraktioner, dos-respons och kvalitetsmarkörer, och validerar den antipyroptotiska mekanismen med pathway-inhibitorer, vilket ger praktisk vägledning för Cistanche-baserad kosttillskottsutveckling.