Kinesisk medicin Cistanche Kemisk sammansättning och analys av komponenter i kroppen Ⅲ

Kapitel 2 Kvalitativ studie om den kemiska sammansättningen av Cistanche deserticola

Cistanche är den torra fjällande blad köttiga stjälken avCistanche deserticola YC.Maoch Cistanche tubulosa (Schenk) R.Wight. Det är en av de berömda njur-yang närande traditionella kinesiska medicinerna. Den har funktionernanärande njur-yang, fyller på essens och blod och fuktar Det har en laxerande effekt och används ofta för att behandla impotens, infertilitet, ömhet i midja och knän, svaghet i muskler och ben, torr tarm och förstoppning, etc. Det har farmakologiska effekter som anti- demens, anti-Parkinsons sjukdom, skydd mot cerebral ischemi och förbättring av inlärnings- och minnesförmåga. För att klargöra den materiella grunden föreffektiviteten av Cistanche deserticola, använder detta kapitel HPLC och LC-IT-TOF-MS för att heltäckande karakteriserakemiska komponenter i Cistanche. Baserat på en systematisk sammanfattning av krackningsreglerna för olika typer av kemiska komponenter, analyseras egenskaperna hos Cistanche deserticola systematiskt. Kemisk sammansättning, för att tillhandahålla rik data från tillförlitliga källor fördjupgående förtydligandeav de medicinska egenskaperna hosCistanche deserticolain vivo.

buy cistanche

HUR LÅNGE TAR DET FÖR CISTANCHE ATT ARBETA?

Avsnitt 1 Experimentmaterial

1. Instrument

Shimadzu HPLC-IT-TOF-MS vätskemasspektrometer (utrustad med 2 LC-20ADXR-pumpar, SIL-20AC automatisk provtagare, CTO-20AC kolonnugn, SPD-M20A UV-detektor, DGU-20A3R-dekontamineringsgasmaskin, CBM-20En styrenhet, ESI-jonkälla, Shimadzu Company, Japan), Milli-Q ultrarent vattenreningssystem (Milipore Company, USA): Mettler ME204 elektronisk analytisk balans ( Mettler Toledo Company, Schweiz).

2. Reagens

Metanol av kromatografikvalitet och masspektrometrikvalitet, acetonitril och myrsyra av masspektrometrikvalitet köptes från Thermo-Fisher Company (Pittsburgh, PA, USA). Vattnet var Milli-Q ultrarent vatten tillverkat i laboratoriet (Millipore, Bedford, MA, USA). Resten av reagenserna är alla av analytisk kvalitet.

Salidrosid, 6-deoxikatalpol, 8-epi-logansyra, echinakosid, acteosid, isosid Verbascoside (isoacteosid,) och pinoresinol- -D-glukopyranosid (pinoresinol- -D-glukopyranosid) tillhandahölls båda av professor Tu Pengfeis forskargrupp vid Key Laboratory of Natural and Biomimetic Drugs vid Peking University. Sarcoside F (cistanosideF) köptes från Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd., cistanosid A (cistanosid A), 2'-acetylakteosid (2'-acetylacteosid), 2'-acetylpoliumosid (2'-acetylpoliumosid), cistanosid polyglukosid (poliumosid) ), cistanosid E (cistanosideE), isocistanosid E (isocistanosideE), cistanosid C (cistanosideC), isocistanosid C (isocistanosideC) och cistanosid D (cistanosideD) köptes alla från Shanghai Shidande Biotechnology Co., Ltd., tubulosid A (tubulosidA) tubuloside B (tubulosideB) köptes från Chengdu Weikeqi Biotechnology Co., Ltd.

Avsnitt 2 Experimentellt innehåll

1. Provberedning

1.1 Beredning av referensämne

Väg noggrant upp lämpliga mängder av olika referensämnen i ovanstående "Sektion 1 Experimentmaterial" och förbered 10 mM stamlösningar med DMSO. Pipettera exakt 2 mL av varje stamlösning och späd den med 25 % acetonitril för att göra en 2 μM blandad kontrolllösning. 1.2 Beredning av testlösning

Det vattenhaltiga extraktet av Cistanche deserticola gjordes av vårt laboratorium, och provet lagras i Modernization Research Center of Traditional Chinese Medicine, School of Traditional Chinese Medicine, Beijing University of Chinese Medicine. Ta 20 mg Cistanche deserticola-pulver, tillsätt 40 mL vatten för att lösas upp, vortexa och blanda, centrifugera vid 10 000 rpm i 10 minuter och ta supernatanten. Det vill säga att testlösningen erhålls.

3. Masspektrometriförhållanden

Elektrosprayjonkälla (ESI), skanningsläget är att skanna positiva och negativa joner samtidigt och automatiskt utlösa flernivåmasspektrometri. Massskanningsintervallet för MS'~MS' för positiva joner är m/z50~800, och för negativa joner är m/z100~1000. Spraykammarens spänningar är 4,5 kV respektive -3,5 kV: flödeshastigheten för finfördelningsgasen (Nz) är 1,5 Lmin; torkgastrycket är 110 MPa; detekteringsspänningen är 1,55 kV; temperaturen på det böjda lösningsmedelsröret (CDL) och värmemodulen är båda 200 grader. Kollisionskammartrycket är 1,5e-Pa; jonfällans tryck är 2,8e-Pa; antalet repetitioner av de positiva och negativa första stegen är 1, och jonackumuleringstiden är 30 ms; antalet repetitioner av de positiva och negativa andra stegen är 2, och jonackumuleringstiden är 20ms. ; Kollisionsinducerad dissociationsenergi (CID) är 50 %.

Avsnitt 3 Resultat och diskussion

Kolumnval

För att erhålla bättre kromatografisk separation har vi utfört screening av kromatografiska kolonner från olika tillverkare och specifikationer, såsom ACEUltraCore 2.5 SuperC8 kromatografikolonn (3.0x150 mm, 2.5 um, Advance Chromatography Technologies Ltd., Aberdeen, Skottland), Shiseido Capcell Core Ci8 ( 2,1 mm x 150 mm, 2,7 μm), Waters Acquity UPLC HSS T3-kolonn (2,1 x 100 mm, 1,8 μm, Milford, MA, USA) och Capcell Core ADME-kolonn (2,1 x 150 mm, Shiseido Corporation, 2,7 μm, Japan). Genom systematisk jämförelse fann man att när man använder Capcell Core ADME-kromatografikolumnen (2,1x150 mm, 2,7μm, Shiseido Co., Ltd., Japan), kan varje kromatografisk signal separeras bättre (Figur 3-1).

2. Val av vätskefasförhållanden

Eftersom de viktigaste kemiska komponenterna iCistanche deserticolaär fenyletanolglykosider, lignaner, iridoider och andra föreningar, svarar den generellt bättre under negativa jonförhållanden. För att identifiera låga kemiska komponenter i vattenextraktet av Cistanche deserticola, spekuleras det i att syror kan behöva tillsättas den mobila fasen för att öka kraften. Därför använde detta experiment vatten-metanol, vatten-acetonitril, 0.1% myrsyra vatten-metanol och 0.1% myrsyra vatten-acetonitril som mobila fassystem för undersökning. Det visade sig att 0.1% myrsyra vatten-acetonitril hade den bästa separationseffekten, med bra toppform och stor toppkapacitet, så 0,1% myrsyra vatten och acetonitril valdes som mobil fas. 3. Kvalitativ analys av kemiska komponenter. Använd 19 befintliga referensämnen för att utforska masspektrometrins fragmenteringsregler för olika typer av föreningar i Cistanche deserticola. De blandade referensämnena är PDA-kromatogram vid 340 nm på ADME-kolumnen och BPC-diagram i positiva och negativa jonlägen. Se bild 3-1. Vi granskade relevant litteratur genom PubMed, RSC, CNKl, Springer, ScienceDirect, VIP och Wanfang, etc., och konstruerade en egentillverkad databas med kemiska komponenter i Cistanche deserticola. Baserat på jämförelsen av masspektrometrifragmenteringsregler och retentionstider för kända föreningar, identifierade vi preliminärt 45 föreningar i Cistanche deserticola. föreningar, inklusive 31 fenyletanolglykosider, 9 iridoider, 3 bensylglykosider och 2 lignaner, som visas i tabell 3-1.

buy cistanche

Genom att jämföra konfidentialitetstiden, MS spektrum och MS spektrum för referensämnet, föreningar 11, 12, 13, 17, 21, 22, 24, 25, 26, 28, 29, 32, 33, 36, 37, 38 identifierades sekventiellt noggrant som genipin, cistanchein F, cistancheosid E, echinaceaside, chrysantosid, cistanchein A, tuberosin A, larchresinol 4-0- -D-glukosid, mulleinglykosider, isocannabinoidglykosid, pinoresin-monometyl-glykosid, 2-glycosid glycosid C, isocistancoside C, tuberosin B och cistanche glykosid D.

Detta experiment använder sig av HPLC-IT-TOF-MS-teknologi för att snabbt och noggrant systematiskt analysera de komplexa kemiska komponenterna i vattenextraktet av Cistanche deserticola, vilket ger en grund för omfattande kvalitetsanalys av Cistanche deserticola och forskning om farmakologiska substanser in vivo.

buy cistanche