Interventionsforskning av fenyletylalkoholglykosider i cistanche på perimenopausalt syndrom Djurmodell Ⅱ

Experiment 1 Beredning av Cistanche fenyletanoid glykosid 1 Källa till medicinskt material

Cistanche tubulosa, Chengdu Wecistanche biotech Ltd.d, batchnummer: 20130501.

2 reagenser

95 % etanol (medicinsk kvalitet); AB-8 makroporöst adsorptionsharts, Tianjin Guangfu Fine Chemical Research Institute, batchnummer: 20130618.

Echinakosid-referenssubstans, tillhandahållen av China Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products, batchnummer: 111670-200503.3

HUR LÅNGE TAR DET FÖR CISTANCHE ATT ARBETA?

Beredningsmetod

Hänvisning gjordes till litteraturmetoden [19] och utfördes under ledning av professor Feng Suxiang från Institutionen för läkemedelsanalys vid Henan College of Traditional Chinese Medicine.Grind Cistanchetill ett grovt pulver, tillsätt 10 gånger mängden 70 % etanol för att återloppskoka och extrahera två gånger, 1,5 timmar varje gång, kombinera de två alkoholextrakten, koncentrera under reducerat tryck tills det inte finns någon alkohollukt och dispergera med destillerat vatten (koncentrationen är 0,5 g läkemedel/ml) som provlösning. Passera genom AB-8-harts (kolonnläkemedel: harts är 1:10), ladda provet i ett flöde och låt det stå i 5 timmar tills det är helt adsorberat. Tvätta först med 10 gånger kolonnvolymen destillerat vatten, kassera vattnet och använd sedan 10 gånger kolonnvolymen. Använd 10 % etanol för att avlägsna föroreningar och eluera slutligen med 7 gånger kolonnvolymen på 60 % etanol. Samla upp eluatet och indunsta till torrhet för att erhålla ett pulver. 4 Val av mätning av våglängd

Mät exakt {{0}}.5 ml av referenslösningen, tillsätt 1 ml 5 % natriumnitritlösning, skaka väl och låt stå i 6 minuter; tillsätt 1 ml 10 % aluminiumnitratlösning, skaka väl och låt stå i 6 minuter; tillsätt 10 % natriumhydroxidlösning 10 mL, späd till 25 mL med vatten, skaka väl och låt stå i 18 minuter för att fungera som referenslösning. 0,5 ml avCistanche fenyletanolglykosidlösningen framställdes på samma sätt som testlösningen. Använd det parallella provet utan att tillsätta referensämne och testa lösningen som blank, och bered blindlösningen på samma sätt. På UV-spektrofotometern utför du en fullvåglängdsskanning på ovanstående tre lösningar inom våglängdsområdet 200-800nm. Både referensämnet och testlösningen har maximala absorptionstoppar vid 507 nm, så 507 nm bestäms som absorptionsvåglängden.

Efter färgutveckling av Cistanche fenyletanolglykosidprov + färgutveckling av Echinacea tangerine referenssubstans (överlagd jämförelse), se figur 1.

Figur 1 Efter färgutveckling av Cistanche fenyletanoid glykosidprov + efter färgutveckling av Echinacea mandarin orange referenssubstans Figur 5 Metod för att detektera innehåll

Mät noggrant upp 1 mL av lösningen som ska testas, tillsätt 1 mL 5% natriumnitritlösning, skaka väl och låt stå i 6 minuter; tillsätt 1 ml 10 % aluminiumnitratlösning, skaka väl och låt stå i 6 minuter; tillsätt 10 % natriumhydroxid. Lösningen är 10 ml, späd till 25 ml med vatten, skaka väl och låt stå i 18 minuter. Använd det parallella provet utan att tillsätta provlösning som ett blankprov och förbered en blindlösning på samma sätt. Uppmätt med UV-spektrofotometer vid 507nm. 6 Metodologisk översyn

6.1 Beredning av referenslösning och provlösning

Beredning av referenslösningen: Väg noggrant 3.06 mg av echinakosid-referensstandarden som har torkats till konstant vikt, placera den i en 25 ml mätkolv, tillsätt 70 % lösning för att lösa upp och späd till märket, skaka väl och ställ åt sidan. Standardkoncentrationen är 0,1224 mg/ml.

Beredning av provlösning: Väg exakt 5 mg avCistanche fenyletanoid glykosid extraherai en 10 ml mätkolv, lös den med 70 % etanol och späd till volym.

6.2 Framställning av standardkurva

Rita noggrant {{0}}, 1.0, 2.0, 3.0, 4.{{10}}, 5.0 , 6,0 mL referenslösning, framkalla färg och späd till volym enligt metoden i 4.2, och mät absorbansvärdet vid 507 nm. Om man använder koncentration mot absorbans för att göra en regressionskurva är regressionsekvationen: Y=20.296X-0.0015 (r=0.9994), och det linjära området är 4.{{ 23}},4 ug/ml.

6.3 Precisionstest

Ta provlösningen och mät den sex gånger parallellt enligt punkten "Content Deermination Method". Beräkna den relativa standardavvikelsen för absorbansen. Absorbanserna är {{0}}.299, 0.299, 0.298, 0.297, 0.297 respektive 0,297. Den genomsnittliga absorbansen=0.298, RSD=0.330 % (n =6).

6.4 Stabilitetstest

Ta en lämplig mängd av provlösningen och mät absorbansvärdena vid {{0}}, 15, 30, 50 enligt avsnittet "Content Deermination Method". , och 60 minuter efter att lösningen är helt färgad och beräkna den relativa standardavvikelsen. Absorbanserna är 0,304, 0,303, 0,300 respektive 0,296. , 0,295, 0,295, genomsnittlig absorbans=0.299, RSD=1.362 % (n=5).

6.5 Repeterbarhetstest

Ta ett prov, förbered 6 provlösningar enligt "Förberedelse av provlösning" och mät absorbansvärdet enligt "Content Deermination Method" och beräkna innehållet. Innehållet är 65,2 %, 65,6 %, 66,7 %, 67,2 % respektive 66,5 %. , 65,8 %, genomsnittligt innehåll 66,2 %, RSD=1.142 % (n=6).

6.6 Provåtervinningstest

Dra exakt upp 0,5 mL av provlösningen med känt innehåll, totalt 9 delar, och tillsätt 200, 250 respektive 300 ul av standardlösningen. Mät och beräkna återvinningsgraden och den relativa standardavvikelsen för Cistanche fenyletanolglykosid. Återvinningsgraden är 101,45 % respektive 99,26 %. , 98,94 %, 101,83 %, 99,05 %, 99,47 %, 98,72 %, 99,17 %, 100,64 %, den genomsnittliga återhämtningsgraden är 99,84 %, RSD=1.164 % (n=9).

7 Exempel på innehållsbestämning

Tabell 1 Bestämningsresultat av fenyletanoidglykosidhalt i Cistanche