Förändringar i antioxidantaktivitet under enzymfermentering

Kapitel 4 Förändringar i antioxidantaktivitet under enzymfermentering

Frukter är rika på näringsämnen och finns i många sorter. Produktionen av ämnen under jäsning är komplex och varierad, och det finns många studier på derasantioxidantaktivitet. Människor utforskar och upptäcker alltid och letar efter livsmedel som är fördelaktiga förmänniskohälsa, så enzymer har blivit ett hett ämne de senaste åren. Den traditionella enzymproduktionsprocessen är att erhålla enzymer genom naturlig jäsning av frukt och grönsaker. Baserat på tidigare forskning lägger denna artikel till fyra gynnsamma jäsningsbakterier. Dessa bakterier i sig finns också i enzymet. Efter ytterligare tillsats av bakterier ändras antalet och typen av mikroorganismer i jäsningsprocessen. Vilken effekt kommer denna förändring att ha på sin antioxidantaktivitet? I föregående kapitel tog vi äpplen som ett exempel för en detaljerad förklaring. Jämförelsen av antioxidantaktiviteten hos experimentgruppen och kontrollgruppen vid olika enzymkoncentrationer visade att antioxidantaktiviteten hos enzymet i experimentgruppen var större än för kontrollgruppen. Intensiteten av antioxidantaktivitet återspeglar också enzymets tillförlitlighet på ett visst sätt.

Nya örter Cistanche med stark antioxidantkraft

 

Stödjande tjänst för Wecistanche den största cistanche-exportören i Kina:
E -post: wallence.suen@wecistanche.com
Whatsapp/tel: +86 15292862950

 

Detta kapitel lägger till vanliga frukter päron och citrus till det ursprungliga experimentet och spårar och upptäcker förändringarna i derasantioxidantaktivitetunder jäsning. På grundval av att minska kostnaderna, genom experiment, hoppas vi mer omfattande återspegla den biologiska aktiviteten hos enzymer efter tillsats av bakterier och ge en viss teoretisk grund och datastöd för produktion av mikrobiella enzymer By konstgjord inokulation av stammar.

 

 

 

4.1 Material och metoder

4.1.1 Material

(1) Experimentella material

Tvätta färska äpplen, päron och citrusfrukter med sterilt vatten under sterila förhållanden, torka dem naturligt på ett sterilt operationsbord, skala dem och skiva dem för senare användning. Tillsätt vitt socker och frukt i en steriliserad glasburk i ett massförhållande på 1: 1. Aktivera de bakterier som krävs för experimentet och ympa dem i enzymet enligt det optimala schemat (detta operationssteg utelämnas för kontrollgruppen), försegla den och placera den på en sval och torr plats. Ta prover vid olika tidsperioder med jäsning vid rumstemperatur för att erhålla all enzymvätska som innehåller fruktmassa och filtrera den. Ta supernatanten som det experimentella provet och använd det för att mäta relevant data efter centrifugering av dem vid 10, 000 rpm i en höghastighetscentrifug i 15 minuter. Det är värt att notera att alla våra operationer genomförs under sterila förhållanden i processen att göra enzymer för att undvika onödig förorening.

(2) Huvudinstrument

De instrument som krävs för experimentet är desamma som 3.1.1 (2).

 

4.1.2 Metoder

(1) Förändringar i totalt fenolinnehåll under jäsning

450 ul provlösning tillsattes med destillerat vatten för att göra volymen 46 ml, och sedan tillsattes 1 ml folin-fenolreagens. Blanda väl och reagera i 3 min. Därefter tillsattes 3 ml 20% NACO3. Blandningen skakades i ett konstant temperaturvattenbad vid 25 grader för 2 timmar. Destillerat vatten användes som tom kontroll. Absorbans A mättes vid 760 nm med spektrofotometer. Tre replikat utfördes för varje behandling. Det totala fenolinnehållet beräknades enligt standardkurvanekvationen.

(2) Förändringar i reducerande kraft under jäsningen

Add 450μL of sample to 2.5mL of phosphate buffer with a concentration of 0.2mol/L and a pH value of 6.6, then add 2.5mL of potassium ferricyanide (w/v) with a mass concentration of 1%, react at 50 degree for 30 minutes, add 2.5mL of trichloroacetic acid (vikt/volym) Med en masskoncentration på 10%, centrifug vid 3000 rpm under 10 minuter, ta ut och rita omedelbart 2,5 ml supernatant till en volymetrisk kolv, tillsätt 2,5 ml destillerat vatten och 0,5 ml järnklorid (vikt/volym) med en masskoncentration av 0,1%. Använd destillerat vatten som en tom kontroll och mät absorbansen A vid en våglängd av 700 nm med en spektrofotometer. Utför 3 replikat för varje behandling. Styrkan i att minska kraften bestäms baserat på absorbansvärdet.

 

(3) Förändringar i superoxidanjonradikal rensningsförmåga under jäsning
Placera 4,5 ml 0. {{1 0}} 5 mol/l pH 8,2 Tris-HCl-buffert i ett konstant temperaturvattenbad och justerar temperaturen till 25 grader. Efter 20 minuter tillsätt 1 ml enzymprovlösning och 0,4 ml pyrogallollösning med en molkoncentration av 25 mmol/L. Blanda väl och placera i ett 25 graders vattenbad i 5 minuter. Tillsätt 1,0 ml 8 mol/L HCl för att avsluta reaktionen. Använd TRIS-HCL-buffert som referens och använd en spektrofotometer för att mäta absorbansen A vid 299 nm för att beräkna rensningshastigheten. Den tomma kontrollgruppen använder 1 ml lösningsmedel istället för prov. Superoxid -anjonens radikala rensningshastighet beräknas enligt formel 4.1: Superoxide -anjon Radikal rensningshastighet (%)=(A 1- A2)/A1 × 100 (4.1) där: A1 är absorbansen för den tomma kontrollgruppen; A2 är absorbansen av enzymprovlösningen i den experimentella gruppen.

 

(4) Förändringar i hydroxylradikal rensningsförmåga under jäsning

 

Add water to 450μL sample solution to 2mL, then add it to 1.4mL of hydrogen peroxide with a molar mass concentration of 6mmol/L, then add 0.6mL of sodium salicylate with a molar mass concentration of 20mmol/L and 2mL of ferrous sulfate with a molar mass concentration of 1.5mmol/L, and heat in a constant temperature water bath at 37 degree for 1h. Noll med destillerat vatten och mät absorbansen A vid en våglängd av 562 nm med en spektrofotometer. Tre replikat utfördes för varje behandling. Den hydroxylradikala rensningshastigheten beräknades enligt formel 4.2: Hydroxylradikal rensningshastighet (%)=[(A 1- A2)/A1] × 100 (4.2) där: A1 är den genomsnittliga absorbansen för det tomma; A2 är den genomsnittliga absorbansen för provlösningen.

 

(5) Förändringar i DPPH -fria radikala rensningsförmåga under jäsning
Överför exakt 2 ml enzymprovlösning till en 1 0 ml volymetrisk kolv, tillsätt sedan 2 ml 80% DPPH etanolvattenlösning till den volymetriska kolven, med en molmasskoncentration av 2 × 10-4 mol/L. Blanda väl och låt stå vid rumstemperatur i 30 minuter. Ta 80% etanollösning som referens och mät absorbansen för provet vid en våglängd av 517 nm, som registreras som A1. Blanda 2 ml DPPH -lösning och 2 ml 80% etanollösning och mät deras absorbans vid samma våglängd, som registreras som A0. Blanda 2 ml enzymlösning och 2 ml 80% etanollösning och mät deras absorbans vid samma våglängd, som registreras som A2. Tre replikat utfördes för varje behandling. Beräkna DPPH -fria radikala rensningshastighet enligt formel 4.3:
DPPH Free Radical Scavenging Rate (%) {{0}} [1- (A 1- A2)/A {{16}] × 100 (4.3) där: A1 är den genomsnittliga absorbansen av 2 Ml dpph 80% ethanol aque -lösning och 2 ML -prov; A2 är absorbansen av 2 ml enzymlösning och 2 ml 80% etanolblandad lösning; A0 är absorbansen av 2 ml DPPH -lösning och 2 ml 80% etanolblandad lösning.

(6) Förändringar i ABTS Free Radical Scavenging -förmåga under jäsning
8 ul provlösning kompletterades till 10 ul med fosfatbuffert (5 mmol/L pH 7,4) och blandades sedan jämnt med 10 ml kaliumsulfat och ABTS blandad lösning för att reagera vid en reaktionstemperatur på 30 grader och en reaktionstid på 5 minuter. Noll lösningen med destillerat vatten och mät absorbansen A vid en våglängd av 734 nm med användning av en spektrofotometer. Tre replikat utfördes för varje behandling. ABTS Free Radical Scavenging Rate beräknades enligt formel 4.4:
ABTS Free Radical Scavenging Rate (%)=[(A 1- A2)/A1] × 100 (4.4) där: A1 är absorbansen för den tomma kontrollgruppen; A2 är absorbansen för provets experimentgrupp.